Дубовой Б.Л., Полякова О.Н. ГНУ СКЗНИВИ, г. Новочеркасск
Туберкулез причиняет огромный экономический ущерб и представляет большую опасность для здоровья людей. Пер-востепенной задачей в противотуберкулезных мероприяти-ях является своевременная диагностика, ранее выявление источника возбудителя инфекции.
Прижизненная диагностика аллергическими исследованиями запоздалая и не выявляет животных в первые дни, и даже месяцы после их заражения. Поэтому, требуются более чувствительные мето-ды, которые позволяют выявить этиологию аллергического процесса при туберкулезе.
Для дифференциации неспецифических туберкулиновых реак-ций используют симультанную пробу с аллергенами - ППД для млеко-питающих и КАМ, изготовленных из нескольких штаммов атипичных микобактерий. Симультанную аллергическую пробу применя-ют при первичной постановке диагноза на туберкулин в благополуч-ных хозяйствах и в случае, если реакции на туберкулин обусловлены атипичными микобактериями и кислотоустойчивыми сапрофитами. Также прибегают к комиссионному контрольно-диагностическому убою животных с реакцией на внутрикожное введение туберкулина, для уточнения диагноза патологоанатомическими, бактериологичес-кими исследованиями и биопробой.
Однако владельцы высокоудойных коров оспаривают право-мерность контрольно-диагностического убоя животных, давших по-ложительную реакцию на туберкулиновую пробу, и требуют прижиз-ненных способов диагностики для дополнительного исследования высокопродуктивных животных на туберкулез. Поэтому кроме симультанной аллергической пробы, патологоанатомических осмотров и лабораторных исследований, эпизоотологического обследования хозяйств, анализа динамики проявления аллергических реакций у различных групп животных, для изучения неспецифических туберку-линовых реакций у крупного рогатого скота и дифференциации их от специфических используют клеточные реакции ин витро - реакцию бласттрансформации лимфоцитов и специфического лизиса лейкоци-тов и другие реакции.
В нашем исследовании для выявления причин неспецифичес-ких туберкулиновых реакций использовали реакцию специфического лизиса лейкоцитов в сопоставлении с патологоанатомическими изме-нениями.
Постановку РСЛЛ выполняли в модификации Б.Л. Дубового.
Целью исследований явилось выявление причин неспецифичес-ких реакций, связанных с дифференциальной диагностикой туберку-леза, вызванного разными видами микобактерий, что имеет большое ветеринарно-санитарное, эпизоотическое и хозяйственное значение.
Выявление инфицированных микобактериями и больных ту-беркулезом животных реакцией специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) in vitro основана на явлении немедленно появляющейся повы-шенной чувствительности лейкоцитов к повторному контакту с антиге-ном (аллергеном) вне организма .
В производственных условиях испытания РСЛЛ для возможной диагностики туберкулеза выполняли в базовых хозяйствах Ростовской области. Так на ранее благополучной ферме восемь коров реагирова-ли на туберкулин. Их подвергли контрольно-диагностическому убою. При ветеринарно-санитарной экспертизе патологоанатомических из-менений во внутренних органах и лимфатических узлах визуально не обнаружили. Бактериологические исследования патматериала в Рос-товской областной лаборатории были отрицательными.
Перед убоем у коров взяли кровь для проведения реакции спе-цифического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ). Результаты исследований по количеству лейкоцитов и показателям РСЛЛ в пробах крови представ-лены в таблице.
Таблица. Количество лейкоцитов, показатели РОЛЛ и патологоанатомические изменения у прореагировавших на туберкулин коров.
Как видно из таблицы, во всех пробах крови с ППД-туберкулином для млекопитающих реакция специфического лизиса лейкоцитов была отрицательной, что свидетельствует об отсутствии инфицирова-ния их M. bovis.
В пробах крови четырех убитых коров реакция специфического лизиса лейкоцитов была положительна с ППД-туберкулином для птиц. Лизис лейкоцитов в пробах был 11%, 20%, 22%, 26%, что указывает на инфицирование животных M. avium.
В пробах крови четырех животных получен положительный ре-зультат РСЛЛ с КАМ. Процент лизиса лейкоцитов составил 11%, 13%, 15%, 20%, что связано с инфицированием животных при жизни ати-пичными микобактериями.
Таким образом, выполненные исследования крови с туберкулинами вне организма от животных с положительными туберкулиновы-ми пробами позволяют в короткие сроки выявить истинные причины, вызвавшие сенсибилизацию организма к туберкулину, и, главное, делают возможным исключить необоснованный убой высокопродук-тивных животных. Возможность применения способа диагностики in vitro неспецифически туберкулиновых реакций непосредственно в условиях хозяйств будет способствовать широкому применению ал-лергенов различной природы в качестве средств дифференциальной диагностики специфических и неспецифических туберкулиновых ре-акций.
Предлагаемый способ диагностики неспецифических туберкули-новых реакций рекомендуем использовать в бла-гополучных по туберкулезу хозяйствах. Для этого от всех животных, давших положительную реакцию на внутрикожное введение туберкулина, берут кровь и исследуют ее вне организма с имеющимися туберкулинами, что позволяет выявить этиологию туберкулиновых реакций, вызванных микобактериями различных видов.
Список литературы
- Верховский, О.А. Диагностическое значе-ние реакций клеточного иммунитета при туберкуле-зе крупного рогатого скота / О.А. Верховский, А.Х. Найманов, О.А. Савицкая // Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии живот-ных. Материалы международной научно-практи-ческой конференции Москва, 16-17 мая, 2006. - М.; ИзографЪ, 2006. - С.180-186.
- Дубовой, Б.Л. Новое в дифференциальной диагностике туберкулеза сельскохозяйственных животных / Б.Л. Дубовой, О.Н. Соловьева, Н.В. Улько // Сборник научных трудов "Диагностика, про-филактика и лечение при инфекционных болезнях сельскохозяйственных животных".- Персиановский, 2000. - С.8-12.
- Дубовой, Б.Л. Исследования специфичности и активности РСЛЛ при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота / Б.Л. Ду-бовой, О.Н. Полякова // Инновационный путь развития АПК-магист-ральное направление научных исследований для сельского хозяйства. - Персиановский, 2007. - С.67-69.
- Найманов, А.Х. Дифференциация аллергических реакций на туберкулин / А.Х. Найманов // Ветеринария. - 2002. - N°3.- С.10-12.
- Наставление по проведению симультанной пробы с примене-нием туберкулина комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) при диагностике туберкулеза животных. Ветеринарное законодательство. Т. 3, М.: "Колос", 1981.- С.220-224
- Эпизоотологический контроль и постановка диагноза на тубер-кулез у животных разных видов. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Сборник санитарных и ветеринарных правил. Изд. Официальное. Госкомсанэпиднадзор Рос-сии. Минсельхозпром России. Москва, 1996.- С. 164 - 167.
Реферат
Требуются более чувствительные методы, которые позволяют выявить этиологию аллергического процесса при туберкулезе. Для определения этиологии неспецифических туберкулиновых реакций в благополучных хозяйствах использовали ППД-туберкулин для птиц и КАМ вне организма с кровью животных, реагирующих на тубер-кулин для млекопитающих. Показано, что РСЛЛ можно использовать для дифференциации специфических и неспецифических реакций на туберкулин.
Ключевые слова: диагностика, туберкулез, реакция специфи-ческого лизиса лейкоцитов (РСЛЛ).
UDC 619.616.002.5
DIAGNOSTICS OF UNSPECIFIC REACTIONS TO TUBERCULINE CAUSED BY ATYPICAL AND AVIAN MYCOBACTERIES Dubovoi B.L., Polyakova O.N. Summary
More sensitive methods that can detect the etiology of allergic process at tuberculosis are required. PPD-tuberculin for birds and CAM outside the body with the blood of animals, reacting to tuberculin for mammals, were used to determine the etiology of nonspecific tuberculin reactions in wealthy economies. It is founded the RSLL can be used for the differentiation both of specific and unspecific reactions to tuberculine.
Key words: diagnostics, tuberculosis, reaction of specific lysis of leucocytes (RSLL).
About the authors
Dubovoy Boris L. - D. Sc. in Veterinary Medicine, professsor, chief of infectious diseases of farming animals and poultry research laboratory of the State scientific establishment "North Caucasian zonal veterinary research institute" of Russian Academy of agricultural sciences; 6/4. Veterinarnaya st., Novocherkassk, Rostov region, 394400; Tel.89281360864.
Responsible for correspondence with the editorial board: Polyakova Olga N.- post-graduate student of the State scientific establishment "North Caucasian zonal veterinary research institute" of Russian Academy of agricultural sciences; 28, Sadovaya st., Novocherkassk, Rostov region, 394406; Tel.89287549422
Дубовой Борис Лаврентьевич, доктор ветеринарных наук, про-фессор, заведующий лабораторией по изучению инфекционных болезней сельскохозяйственных животных и птицы ГНУ "Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт" Российской академии сельскохозяйственных наук; 394400, Ростовская область, г. Новочеркасск, ул. Ветеринарная, д.4, кв.6; тел.: 89281360864.
Ответственный за переписку с редакцией : Полякова Ольга Николаевна, аспирант ГНУ "Северо-Кавказский зональный науч-но-исследовательский ветеринарный институт" Российской ака-демии сельскохозяйственных наук; 394406, Ростовская область, г. Новочеркасск, ул. Садовая, д.28; тел.: 89287549422.
Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использован для экспресс-диагностики миксоматоза кроликов. Сущность способа состоит в том, что проводят реакцию специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) с использованием противомиксоматозной вакцины из штамма В-82, рассчитывают показатель РСЛЛ и при его значении 10% и более диагностируют миксоматоз. Техническим результатом является разработка способа, позволяющего провести ускоренную диагностику на ранней стадии заболевания, а также выявить бессимптомное течение миксоматоза. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к экспресс-методам диагностики миксоматоза.
Известны различные способы диагностики миксоматоза кроликов, в том числе обнаружение антигенов в пораженной коже с помощью флуоресцирующих антител, выявление антител, циркулирующих иммунных комплексов с использованием реакций связывания комплемента, реакции иммунодиффузии, реакции нейтрализации и иммуноферментного анализа (Гуненко В.В. и др. О диагностике и профилактике миксоматоза кроликов. Ветеринария, 1987, т.12, с.44-45). Недостатками известных способов являются трудоемкость, наличие дорогостоящего оборудования, невозможность определения наличия вируса в первые дни после заражения.
Целью изобретения является сокращение сроков обнаружения в организме животного возбудителя миксоматоза. Обнаружение возможно начиная с трех-шести часов после заражения.
Достижение поставленной цели основано на феномене немедленной активации, повышенной чувствительности и перенапряжении иммунокомпетентных клеток крови - лейкоцитов - на повторное воздействие вне организма того же антигена, который до этого внедрился в организм.
Способ диагностики миксоматоза кроликов осуществляется следующим образом. У исследуемого животного берут пробу крови. В опытную пробирку, содержащую 0,05 мл 3,8%-ного раствора цитрата натрия, вносят 0,1 мл исследуемой крови и рабочую дозу антигена - 0,05 мл вакцины против миксоматоза кроликов сухой живой культуральной из штамма "В-82" в разведении одна иммунизирующая доза на один мл физиологического раствора. Контрольную пробирку заполняют в том же объеме, но физиологический раствор - без антигена.
Пробирки инкубируют в термостате в течение двух часов при температуре +37°С, встряхивая через каждые 30 минут. Затем для разрушения эритроцитов из контрольной и опытной пробирки по 0,02 мл крови переносят в пробирки с 0,4 мл 3%-ного раствора уксусной кислоты и подкрашивают генцианвиолетом. Подсчитывают число лейкоцитов в обеих пробах в камере Горяева и рассчитывают показатель реакции специфического лизиса лейкоцитов (в процентах) по формуле:
РСЛЛ считают положительной при показателе 10% и выше.
В случае сильного лейкоцитоза, когда затруднительно провести подсчет лейкоцитов, исследуемые контрольные и опытные пробы крови, дополнительно разводят физиологическим раствором в соотношении 1:1 или 1:2.
Для определения рабочей дозы антигена (вакцины против миксоматоза кроликов сухой живой культуральной из штамма "В-82") отобрали десять здоровых кроликов. Кровь от каждого кролика разделили на три пробы. В три пробирки с 0,05 мл 3%-ного раствора цитрата натрия внесли по 0,1 мл исследуемой крови. Затем в первую пробирку внесли 0,05 мл антигена - вакцины против миксоматоза кроликов сухой живой культуральной из штамма "В-82" в разведении четыре иммунизирующих дозы препарата на один мл физиологического раствора, во вторую - 0,05 мл вакцины в разведении две иммунизирующих дозы на один мл физиологического раствора, в третью - 0,05 мл вакцины в разведении одна иммунизирующая доза на один мл физиологического раствора.
Пробирки инкубировали в течение двух часов при температуре +37°, встряхивая через каждые 30 минут. Затем для разрушения эритроцитов из контрольных и опытных пробирок по 0,02 мл крови перенесли в пробирки с 0,4 мл 3%-ного раствора уксусной кислоты и подкрасили генцианвиолетом. Далее подсчитали число лейкоцитов во всех пробирках в камере Горяева и рассчитали показатель реакции специфического лизиса лейкоцитов (в процентах) по формуле:
где Лк и Ло - абсолютное количество лейкоцитов в контрольной и опытной пробе.
РСЛЛ для здоровых кроликов должна быть ниже 10%. Результаты представлены в табл. 1.
Как видно из таблицы 1 РСЛЛ во всех пробах не превышала 10%, поэтому рациональнее в качестве рабочей дозы антигена взять разведение вакцины против миксоматоза кроликов, сухой живой культуральной из штамма "В-82" из расчета одна иммунизирующая доза на один мл физиологического раствора.
Для ретроспективной диагностики миксоматоза в неблагополучном хозяйстве исследовали кровь кроликов.
На основании результатов клинического состояния кроликов были сформированы 4 группы животных по 5 голов в каждой (табл.2).
Первая группа - кролики-вирусоносители, со скрытой формой миксоматоза - находились в контакте с больными, но без клинических изменений. У отдельных были заметны бесшерстные участки, свидетельствующие об миксомных узлах в прошлом.
Во вторую группу - клинически больные миксоматозом - отобрали больных кроликов с отеками век, оснований ушных раковин, аногенетальной области, спины, с узелковыми ограниченными образованиями в коже ушей, головы и век.
Кролики третьей группы были вакцинированы с целью установления динамики лизиса лейкоцитов с момента внедрения миксоматозного антигена в организм животного, и для выявления особенностей реакции лизиса лейкоцитов у вакцинированных по сравнению с вирусоносителями.
Кролики четвертой группы - клинически здоровы и не инфицированы вирусом миксоматоза, служат контролем.
У животных всех групп определяли показатель реакции специфического лизиса лейкоцитов. Для этого у животных брали пробы крови. Каждую пробу делили на опытную и контрольную. В опытную пробирку, содержащую 0,05 мл 3,8%-ного раствора цитрата натрия, вносили 0,1 мл исследуемой крови и рабочую дозу антигена - 0,05 мл вакцины против миксоматоза кроликов сухой живой культуральной из штамма "В-82" в разведении одна иммунизирующая доза на один мл физиологического раствора. Контрольную пробирку заполняли в том же объеме, но физиологический раствор - без антигена.
Пробирки инкубировали в термостате в течение двух часов при температуре +37°С, встряхивая через каждые 30 минут. Затем для разрушения эритроцитов из контрольной и опытной пробирки по 0,02 мл крови перенесли в пробирки с 0,4 мл 3%-ного раствора уксусной кислоты и подкрасили генцианвиолетом. Подсчитали число лейкоцитов в обеих пробах в камере Горяева и рассчитали показатель реакции специфического лизиса лейкоцитов (в процентах) по формуле:
где Лк и Ло - абсолютное количество лейкоцитов в контрольной и опытной пробе.
РСЛЛ считали положительной при показателе 10% и выше.
Результаты представлены в таблице 2.
| Таблица 2 Показатели РСЛЛ у кроликов, больных миксоматозом, вакцинированных и здоровых |
||||
| Группы подопытных кроликов | РСЛЛ, в % | Продолжительность наблюдений в сутках | Снижение % лизиса в среднем в сутки (%) | |
| в начале исследования | в конце исследования | |||
| 1. Скрытая форма, вирусоносители. | 30-42 | 29-38 | 10 | 0,25 |
| 2. Клинически больные миксоматозом | 62-77 | 60-71 | 10 | 0,40 |
| 3. Вакцинированные противомиксоматозной вакциной | 29-36 | 21-28 | 10 | 0,80 |
| 4. Интактные контрольные | 4-9 | 4-9 | 10 | 0 |
Как видно из таблицы 2, скорость снижения процента лизиса лейкоцитов у вакцинированных кроликов в 3,2 раза больше, чем у кроликов-вирусоносителей со скрытой формой миксоматоза, и 2 раза больше, чем у клинически больных. У больных с клинической формой миксоматоза процент лизиса лейкоцитов за весь период наблюдений был очень высокий, достигал 60-77%.
В группе вакцинированных кроликов обнаруживали резкое увеличение процента лизиса лейкоцитов на третьи сутки. Это свидетельство того, что вакцины против миксоматоза кроликов сухой живой культуральной из штамма "В-82" вызывает состояние сенсибилизации лейкоцитов крови (ответственных за иммунитет) до образования в организме специфических антител.
Лизис лейкоцитов у интактных кроликов за весь период опыта не превышал 10%, т.е. находился в пределах нормы.
Исследование РСЛЛ позволяет диагнозцировать бессимптомное течение миксоматоза.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ диагностики миксоматоза кроликов, отличающийся тем, что проводят реакцию специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) с использованием противомиксоматозной вакцины из штамма В-82, рассчитывают показатель РСЛЛ и при его значении 10% и более диагностируют миксоматоз.
2. Способ диагностики миксоматоза кроликов по п.1, отличающийся тем, что при лейкоцитозе пробы крови перед подсчетом лейкоцитов разводят физиологическим раствором в соотношении 1:1 или 1:2.
Доброго времени суток! Меня зовут Эльвира. Основная проблема в лекарствах. Например, парацетамол, принимаю при температуре - начинается отек Квинке, первый раз подумала ошибка, пробовала при последующей болезни без дополнительных лекарств и провокационной пищи (мед, малина и т.п) -результат тот же отек. Делаю анализ на аллерген - результат отрицателльный, а сдаю аналицы на лизис лейкоцитов - превышет норму в два-три раза (20-30% вместо...до 10%). И так с огромным списком лекарств начиная с витаминов, антибиотиков, обезболивающих и успокаительных в том цисле. Если вводят лекарство реакции всегда разные от тошноты до потери сознания и низком давлении 80/40. Объясните, пожалуйста, в чем разница между анализами на аллерген и лизисом?! Я почти в отчаянии, у сына такая же ситуация. Мы уже ощутили на себе все возможные побочные эффекты, начиная с легких недомоганий и крапивницы, заканчивая анафелактическим шоком (спасибо Преднизалону - всегда выручает). Болеем давно уже таким образом: само пройдет или в больницу с нашим ограниченным списком разрешенных анализами препаратов. Но он настолько ограничен что врачи теряются, а объяснить разницу между двумя анализами мне не могут. Если напишите ответ,я буду очень признательна, или ссылку на энциклопедию, где можно найти ответ. Даже была мысль пробовать дозы меньше чем положено....
размер шрифта
ПРОФИЛАКТИКА И ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА ЛЮДЕЙ- МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ- МУ 3-1-7-1189-03 (утв- Главным государственным... Актуально в 2018 году
5.3.2. Реакция лизиса лейкоцитов
Введение специфического антигена в сенсибилизированный организм небезразлично для обследуемого. В этой связи заслуживает внимания эффективный метод выявления гиперчувствительности замедленного типа методом in vitro с помощью реакции лизиса лейкоцитов (РЛЛ). РЛЛ основана на учете разрушения лейкоцитов сенсибилизированного организма под влиянием специфического антигена, регистрируемого методом in vitro. РЛЛ обладает строгой специфичностью, дает возможность количественного учета степени сенсибилизации организма, позволяет получить ответ через 3 - 4 часа после взятия крови.
Техника постановки РЛЛ.
РЛЛ проводится в пробирках из химически чистого стекла. В качестве антигена используется взвесь убитых нагреванием бруцелл (может быть использован вакцинный штамм В.abortus 19BA) в
7 концентрации 1 x 10 мкл/мл.
Кровь для исследования берется в количестве 1 мл и вносится в колбочку с гепарином из расчета 75 - 80 ме гепарина на 1 мл крови. По 0,4 мл гепаринизированной крови помещается в 2 пробирки. В первую пробирку добавляют 0,1 мл бруцеллезного антигена (опытная пробирка), во вторую - 0,1 мл физраствора для установления неспецифического лизиса лейкоцитов (контрольная пробирка). Пробирки встряхивают в течение 2 - 3 мин., после чего проводят подсчет лейкоцитов в камере Горяева по принятому в гематологии методу. Затем пробирки помещают в термостат на 2 часа при 37 °C и периодически встряхивают их через 15 - 20 мин. После инкубации пробирки вновь встряхивают в течение 2 - 3 мин. и проводят подсчет лейкоцитов. Подсчет производится не менее 2 - 3 раз для каждой пробирки, а затем выводится среднее их количество. Наличие лейкоцитов после инкубации в опытной и контрольной пробирках подсчитывается по формуле: количество лейкоцитов после инкубации x 100% количество лейкоцитов до инкубации.
Показатель специфического лизиса лейкоцитов (ПСЛ) подсчитывается путем определения разницы - процент уменьшения лейкоцитов в опытной пробирке минус процент уменьшения лейкоцитов в контроле. ПСЛ выражается отрицательной величиной и колеблется в пределах от -10 до -30%. ПСЛ меньше -10% свидетельствует о неспецифическом лизисе.
Изобретение относится к области биотехнологии. Способ включает выявление в благополучных хозяйствах и дворах плановыми аллергическими исследованиями реагирующих на туберкулин животных. От положительно реагирующих на туберкулин животных исследуют кровь реакцией специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) с использованием в качестве диагностикума туберкулинов ППД для млекопитающих, ППД для птиц и КАМ. Способ позволяет провести дифференциацию специфических и неспецифических положительных реакций на туберкулиновую пробу и диагностировать туберкулез на ранней стадии заболевания. 4 з.п. ф-лы, 7 табл.
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к экспресс-способам дифференциальной диагностики туберкулеза, вызываемого микобактериями разных видов.
Известно, что в благополучных хозяйствах первичный диагноз на туберкулез устанавливают комплексным способом - эпизоотологическим, клиническим, аллергическим, патологоанатомическим и лабораторным (1.)
Перечисленные способы диагностики во многих случаях не позволяют в короткие сроки исследования поставить окончательный диагноз на туберкулез.
Для массовых прижизненных исследований на туберкулез используют аллергическую диагностическую пробу (2). Однако появление массовых неспецифических реакций на туберкулин у нетуберкулезных животных не позволяет поставить в благополучных хозяйствах диагноз на туберкулез по положительной туберкулиновой пробе (1; 2).
Для дифференциации неспецифических туберкулиновых реакций ставят симультанную пробу (прототип) с двумя аллергенами - ППД для млекопитающих и аллергеном КАМ, изготовленным из нескольких штаммов атипичных микобактерий (2; 3; 4).
Симультанную аллергическую пробу применяют при первичной постановке диагноза на туберкулез крупного и мелкого рогатого скота и кур в благополучных хозяйствах и в случае, если реакции на туберкулин обусловлены атипичными микобактериями и кислотоустойчивыми сапрофитами (3).
Владельцы высокоудойных коров оспаривают правомерность контрольно-диагностического убоя животных, давших положительную реакцию на туберкулиновую пробу, и требуют прижизненных способов диагностики для переисследования высокопродуктивных животных на туберкулез. Использование предлагаемого нами «Способа ранней диагностики туберкулеза животных» вносит ясность в этот спорный вопрос, так как позволяет установить однозначно специфичность или неспецифичность реакции организма животного на внутрикожное введение туберкулина и окончательно поставить диагноз.
Более того, проведение симультанной пробы допускается через 30 и более дней после последней туберкулинизации животных, что не отвечает требованиям ранней (доклинической) диагностики туберкулеза в короткие сроки исследования.
Таким образом, недостатками известных способов постановки диагноза на туберкулез являются трудоемкость, продолжительные сроки исследования и невозможность определения вида микобактерий в первые дни после заражения.
Способ основан на немедленно появляющейся повышенной чувствительности лейкоцитов к повторному контакту с антигеном (аллергеном) вне организма. Целью изобретения является разработка нового способа. Поставленная задача достигается использованием реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ).
Способ осуществляется путем исследования крови РСЛЛ от положительно реагирующих на туберкулин животных, выявленных в благополучных хозяйствах и дворах плановыми аллергическими исследованиями, с использованием в качестве диагностикума туберкулинов (ППД для млекопитающих, ППД для птиц и КАМ).
Причем при диагностике туберкулеза у крупного рогатого скота РСЛЛ проводится с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и КАМ - комплексным аллергеном из атипичных микобактерий.
Диагностику туберкулеза у свиней выполняют с ППД-туберкулином для млекопитающих и ППД-туберкулином для птиц.
При диагностике туберкулеза у собак и плотоядных РСЛЛ используют ППД-туберкулин для млекопитающих.
Диагностику туберкулеза у кроликов и пушных зверей РСЛЛ проводят с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и КАМ.
Организация исследований на туберкулез РСЛЛ
В опытах на кроликах, собаках, свиньях и телятах для сенсибилизации организма животных использовали живые микобактерии вакцинного штамма БЦЖ-1 в прививочных дозах: одна (0,05 мг), две (0,1 мг), три (0,15 мг), пять (0,25 мг) и десять (0,50 мг).
Исследования проводили в экспериментальных условиях на лейкоцитах крови интактных вакцинированных БЦЖ животных и в производственных условиях - коровах, дважды давших положительную реакцию на внутрикожное введение ППД-туберкулина для млекопитающих, в СПК « Рассвет» Матвеево-Курганского района.
Основная цель исследований - использовать результаты РСЛЛ для дифференциальной диагностики и определения:
1) сенсибилизации лейкоцитов организма животных микобактериями вакцины БЦЖ;
2) инфицирования коров, давших дважды положительную туберкулиновую реакцию;
3) неспецифических реакций на туберкулин при его внутрикожном введении.
В опыт отобрали клинически здоровых интактных животных, которые служили фоновым контролем. Группы формировали животными, у которых при 3-кратном исследовании проб крови получены стабильные величины значений гематологических показателей (количество лейкоцитов,% лизиса и др.).
В каждую опытную группу брали не менее трех животных. От каждого животного брали кровь, которую делили на контрольную и опытные пробы. В контрольной пробе к крови добавляли 0,9% физиологический раствор натрия хлорида, а в опытных пробах крови - туберкулины - ППД для млекопитающих, ППД для птиц и КАМ.
Для исключения ошибок внимания техники подсчета форменных элементов и получения достоверных средних величин значений показателей реакции крови каждую пробу (контрольную и опытные) исследовали в трех повторах.
Порядок проведения исследования на туберкулез РСЛЛ
Исследование животных на туберкулез вначале проводят методом туберкулинизации в порядке и сроки, предусмотренные «Эпизоотическим контролем и постановкой диагноза на туберкулез у животных разных видов» (2).
В качестве диагностикумов берут ППД-туберкулин для млекопитающих, ППД-туберкулин для птиц и комплексный аллерген из атипичных микобактерий (КАМ).
В благополучных по туберкулезу гуртах, группах и отдельных животных основным методом исследования является внутрикожная туберкулиновая проба. В случае выявления животных, реагирующих на туберкулин, то положительно реагирующих изолируют, ставят на привязь и берут от них кровь для исследования в реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) со следующими диагностикумами:
У крупного рогатого скота антикоагулянтную кровь в РСЛЛ берут с
а) физиологическим раствором хлористого натрия (контрольная проба);
г) ППД-туберкулином для птиц.
При этом животных, давших положительные результаты исследования РСЛЛ с ППД-туберкулином для млекопитающих, считают туберкулезными
У свиней антикоагулянтную кровь в РСЛЛ берут с
а) физиологическим раствором поваренной соли;
б) ППД-туберкулином для млекопитающих;
в) ППД-туберкулином для птиц.
Свиней, у которых РСЛЛ с ППД-туберкулином для млекопитающих оказалась положительной, признают туберкулезными, а животных, у которых РСЛЛ положительна с ППД-туберкулином для птиц, считают инфицированными микобактериями птичьего вида;
У собак и др. мелких животных РСЛЛ берут с
а) физиологическим раствором;
б) ППД-туберкулином для млекопитающих;
У кроликов антикоагулянтную кровь в РСЛЛ берут с
а) физиологическим раствором натрия хлорида;
б) ППД-туберкулином для млекопитающих;
в) ППД-туберкулином для птиц;
При этом кролики, давшие положительную РСЛЛ с ППД-туберкулином для млекопитающих, считаются инфицированными бычьим видом возбудителя туберкулеза, а с ППД-туберкулином для птиц - зараженными птичьим видом возбудителя, с КАМ - сенсибилизированными атипичными нетуберкулезными микобактериями.
Целью изобретения является сокращение сроков обнаружения в организме животных возбудителя туберкулеза и определение вида микобактерий, вызвавшего сенсибилизацию.
Достижение поставленной цели основано на явлении немедленного приобретения после внедрения возбудителя иммунокомпетентными клетками повышенной чувствительности организма, выявляемой при повторном воздействии вне организма того же антигена на лейкоциты крови. Повышенная чувствительность после инфицирования представляет собой клеточный феномен, в котором клетками-эффекторами, вступающими во взаимодействие с туберкулином вне организма, являются сенсибилизированные лейкоциты крови, что отличается от повышенной чувствительности замедленного типа (ПЧЗТ) организма, которая развивается у животных через 2-3 недели после заражения их возбудителем туберкулеза.
Осуществления способа
Способ ранней диагностики туберкулеза животных осуществляется следующим образом. В лунку планшета, содержащую 0,05 мл 3,8%-ного раствора цитрата натрия (гепарина, трилона Б или любой другой антикоагулянт) вносят 0,1 мл исследуемой крови и рабочую дозу туберкулина в объеме 0,05 мл (опытные пробирки). Контрольные пробирки заполняют в том же объеме физиологическим раствором без туберкулина. Кровь в лунках планшета инкубируют в течение 2 часов при t=37°C, встряхивая через каждые 30 минут. Затем из контрольной и опытной лунок по 0,02 мл крови переносят в лунку с 0,4 мл жидкостью Тюрка (3-5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный несколькими каплями раствора метиленового синего) для разрушения эритроцитов и окраски ядер лейкоцитов. Подсчитывают число лейкоцитов (в камере Горяева) во всех лунках и рассчитывают показатели реакции специфического лизиса лейкоцитов (в процентах) по формуле
где Л к и Л о - абсолютное количество лейкоцитов в контрольной и опытной пробе. РСЛЛ считают положительной при показателе 10% и выше.
Пример 1. Рабочая доза туберкулинов
Схема опытов по определению рабочей дозы туберкулинов (соотношения антикоагулянта, крови и туберкулина)
В схеме опытов по определению рабочей дозы туберкулинов показано, что объемные соотношения антикоагулянта и крови в пробах оставались одинаковыми, а дозы туберкулинов возрастали: 0,05; 0,1 и 0,15 мл
| Таблица 1 Определение рабочей дозы туберкулинов (в среднем по группам) для КРС и свиней в РСЛЛ |
||||||||||||
| Доза антигена | КРУПНЫЙ РОГАТЫЙ СКОТ | СВИНЬИ | ||||||||||
| Количество лейкоцитов при взаимодействии «in vitro» (10 9// л) | РСЛЛ в % | Количество лейкоцитов при взаимодействии «in vitro» (10 9/ л) | РСЛЛ в % | |||||||||
| Физ.р-р | ППД, мл. | КАМ | ППД птиц | ППД, мл. | КАМ | ППД птиц | Физ. р-р | ППД мл. | ППД птиц | ППД мл. | ППД птиц | |
| 0,05 | 9,5 | 9,6 | 9,4 | 9,5 | -1% | 1% | 0 | 9,3 | 9,2 | 9,4 | 1% | 1% |
| 0,1 | 9,5 | 9,5 | 9,4 | 9,4 | 0% | 1% | 1 | 8,6 | 8,7 | 8,7 | 1% | 1% |
| 0,15 | 9,3 | 9,0 | 9,1 | 9,2 | 3% | 2% | 1 | 8,7 | 8,4 | 8,8 | 3% | 2% |
Как видно из табл.1 и 2, РСЛЛ во всех пробах не превышает 3% у крупного рогатого скота, свиней, 7,4% у собак и 2% у кроликов, поэтому экономнее в качестве рабочей дозы использовать дозу 0,05 мл туберкулина, т.к. РСЛЛ у нее оказалась ниже, чем при дозе 0,15. И величина ее была практически одинаковой для ППД млекопитающих, ППД птиц и КАМ.
Таким образом, рабочая доза туберкулинов определена величиной 0,05 мл для РСЛЛ.
Пример 2. Специфичность и активность РСЛЛ крови бычков, вакцинированных БЦЖ-1
В опытах на 4-6-месячных бычках изучали специфичность и активность РСЛЛ. Для этого животным вводили живые микобактерии вакцинного штамма БЦЖ-1 в прививочных дозах: 0,05 мг, 0,15 мг, 0,25 мг и 0,50 мг (одна, три, пять, десять доз), а затем исследовали кровь в РСЛЛ в день вакцинации и через каждые 24 часа в течение 10 суток (240 часов).
Количество лейкоцитов в пробах крови с ППД для млекопитающих колебалось от 8,2 до 9,1·10 9 /л. Отличительно, что в пробах крови от бычков, вакцинированных БЦЖ, при взаимодействии с ППД для млекопитающих отмечали снижение количества лейкоцитов через 48-120 часов после введения вакцины по сравнению с другими пробами, однако число их было в границах нормы.
В эти же часы после введения живых микобактерий в пробах крови с физиологическим раствором ППД для птиц и КАМ количество лейкоцитов практически было одинаковым и колебалось от 9,2 до 11,3·10 9 /л, т.е. обнаруживали лейкоцитоз, который был тем сильнее, чем больше была прививочная доза микобактерий вакцинного шт. БЦЖ-1.
Как видно из табл.3, в пробах крови с ППД для млекопитающих положительная РСЛЛ обнаруживалась уже через 24 часа после сенсибилизации КРС вакциной БЦЖ, в пробах крови с ППД для птиц и КАМ показатели РСЛЛ были отрицательными.
| Таблица 3 Показатели РСЛЛ у крупного рогатого скота сенсибилизированного вакциной БЦЖ с туберкулинами: ППД для млекопитающих, ППД для птиц и КАМ |
||||||||||||
| Время после вакцинации, ч | ||||||||||||
| Одна (0,05 мг) | Три (0,15 мг) | Пять (0,25 мг) | Десять (0,50 мг) | |||||||||
| ППД мл. | ППД пт. | КАМ | ППД мл. | ППД пт. | КАМ | ППД мл. | ППД пт. | КАМ | ППД мл. | ППД пт. | КАМ | |
| в день сенсибилизации | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1,2 | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 |
| 24 | 14 | 0 | 1 | 14,3 | 0 | 0 | 16,2 | 1 | 1 | 34,3 | 1 | 1 |
| 48 | 27 | 0 | 0 | 32,5 | 0 | 0 | 28,6 | 1 | 0 | 48,3 | 0 | 0 |
| 72 | 23 | 0 | 1 | 25,5 | 0 | 1 | 21,6 | -1 | 1 | 41,3 | -1 | 1 |
| 96 | 17 | 0 | 0 | 10,8 | 0 | 0 | 19,5 | 0 | 0 | 35 | 0 | 1 |
| 120 | 13 | 0 | 0 | 5 | 1 | 0 | 10,3 | 0 | 0 | 24,2 | 0 | 1 |
| 144 | 7 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | 6,3 | 0 | 1 | 20 | 1 | 1 |
| 168 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 2,4 | 0 | 1 | 15,1 | 0 | 1 |
| 192 | 1 | 0 | 0 | 1,2 | 0 | 1 | 8,6 | 0 | 1 | |||
| 216 | 0 | 0 | 0 | 6 | -1 | 1 | ||||||
| 240 | 0 | 0 | 0 | |||||||||
| - ППД пт. - ППД для птиц |
Полученные результаты исследований свидетельствуют о специфичности РСЛЛ. РСЛЛ может быть использована для выявления животных, сенсибилизированных микобактериями с антигенами, родственными туберкулину.
Активность РСЛЛ характеризуется тем, что с повышением дозы живых микобактерий вакцинного шт. БЦЖ-1 с 0,05 мг до 0,50 мг на животное возрастает показатель РСЛЛ.
Так, установлено, что при вакцинации одной прививочной дозой БЦЖ-1 наибольший показатель РСЛЛ с ППД для млекопитающих был через 48-72 ч после инъекции (27-23%)
При сенсибилизации крупного рогатого скота тремя прививочными дозами положительные показатели РСЛЛ также наблюдаются в это же время. Максимальный процент лизиса достигает 32,5% после введения вакцины БЦЖ.
При введении животным пяти прививочных доз лизис лейкоцитов был более продолжительным и имел тенденцию к увеличению показателя. Особенно четко эта тенденция наблюдалась при введении животным 10 прививочных доз вакцины БЦЖ, когда лизис лейкоцитов через 48 часов после инъекции вакцины достигал 48,3% и был более продолжительным, т.е. с увеличением количества прививочных доз процент сенсибилизированных лейкоцитов возрастал и это сказывалось на показателях РСЛЛ (табл.3).
Результаты показателей РСЛЛ в зависимости от количества прививочных доз вакцины БЦЖ-1 свидетельствуют о выраженной активности РСЛЛ.
Так, среднесуточный показатель РСЛЛ с ППД для млекопитающих за 120 часов при одной прививочной дозе микобактерии БЦЖ составил 18,8%, трех - 20,8%, пяти - 19,24% и десяти - 32,2%. При десяти прививочных дозах БЦЖ положительные показатели РСЛЛ с ППД для млекопитающих удлиняются до семи суток.
Выполненные исследования с инъекциями живых микобактерии вакцинного шт. БЦЖ позволили установить специфичность и активность РСЛЛ, что необходимо для дифференциальной диагностики специфических и неспецифических реакций на туберкулин.
Пример 3. Исследование по определению у свиней сенсибилизации, вызванной введением живых микобактерий вакцинного шт. БЦЖ-1
Опыты выполняли на поросятах-отъемышах трех групп, которым инъекцировали по одной, три и пять прививочных доз вакцины БЦЖ. Количество лейкоцитов у сенсибилизированных свиней одной дозой вакцины БЦЖ с ППД для млекопитающих колебалось от 7,2 до 8,8·10 9 /л, а с физиологическим раствором ППД для птиц колебания составляли от 8,7 до 14,3·10 9 /л. Наибольшее количество лейкоцитов было через 48 часов после вакцинации. Та же закономерность отмечалась при введении трех и пяти прививочных доз вакцины БЦЖ, где количество лейкоцитов с физиологическим раствором и ППД для птиц через 48 часов достигало 15,4 и 18,6·10 9 /л соответственно. В результате показатель РСЛЛ с ППД для млекопитающих у сенсибилизированных свиней через 24 часа при одной прививочной дозе составил 26,9%, трех - 28,9%, пяти - 38,1%. Наибольший показатель РСЛЛ был через 48-72 часов после сенсибилизации и составил 46,6-49,7%; 41,5-46,7%; 49,7-55,4% соответственно дозам (табл.4).
| Таблица 4 Показатели РСЛЛ у свиней, сенсибилизированных вакциной БЦЖ с туберкулинами: ППД для млекопитающих, ППД для птиц |
||||||
| Время после вакцинации, ч | Количество прививочных доз вакцины БЦЖ | |||||
| Одна (0,05 мг) | Три (0,15 мг) | Пять (0,25 мг) | ||||
| ППД мл. | ППД птиц | ППД мл. | ППД птиц | ППД мл. | ППД птиц | |
| в день сенсибилизации | -1 | 0 | 0,9≈1 | 0 | 0 | 1 |
| 24 | 26,9 | 1 | 28,9 | 1 | 38,1 | 0 |
| 48 | 49,65 | 1 | 46,7 | 1 | 55,4 | 0 |
| 72 | 46,61 | 0 | 41,5 | 1 | 49,7 | 1 |
| 96 | 34,45 | 0 | 26,9 | 1 | 19 | 0 |
| 120 | 17,82 | 0 | 20,9 | 1 | 13 | 0 |
| 144 | 1,15 | -1 | 7,8 | 0 | 6,4 | 1 |
| 168 | 0 | 0 | 1,8 | 1 | 1,8 | -1 |
| 192 | 0 | 1 | ||||
| - ППД мл. - ППД для млекопитающих | ||||||
| - ППД пт. - ППД для птиц |
У вакцинированных поросят положительные показатели РСЛЛ обнаруживали через 24-120 часов после введения одной, трех и пяти прививочных доз вакцины БЦЖ.
РСЛЛ с ППД для птиц была отрицательной, что подтверждает специфичность РСЛЛ с ППД для млекопитающих.
Пример 4. Исследование по определению у собак сенсибилизации, вызванной введением живых микобактерий вакцинного шт. БЦЖ-1
В опытах на собаках после введения одной, трех, пяти прививочных доз вакцины БЦЖ установлено, что через 24-72 часа при взаимодействии крови с физиологическим раствором численность лейкоцитов составила 5,2-6,2 10 9 /л, а с ППД для млекопитающих 3,4-4,7 10 9 /л, т.е. отмечалась лейкопения.
Количество лейкоцитов с физиологическим раствором было увеличено по сравнению с нормой в два и более раз. В результате показатели РСЛЛ составили при одной дозе 14-25%, при трех 20,8-60,6%, при пяти 22-68%. Наибольший показатель РСЛЛ был через 48 часов после вакцинации. Положительные показатели РСЛЛ отмечали при одной дозе через 24-96 часов, при трех через 24-120 часов, при пяти через 24-240 часов, т.е. с увеличением дозы вакцины увеличивалась продолжительность сенсибилизации лейкоцитов и возрастала активность - показатели РСЛЛ (табл.5).
| Таблица 5 Показатели РСЛЛ у собак и кроликов, сенсибилизированных вакциной БЦЖ |
|||||||||
| Время после вакцинации (час) | Количество прививочных доз вакцины БЦЖ | ||||||||
| СОБАКИ | КРОЛИКИ | ||||||||
| одна (0,05 мг) | три (0,15 мг) | пять (0,25 мг) | пять (0,25 мг) | десять (0,50 мг) | |||||
| ППД мл. | ППД мл. | ППД мл. | ППД мл. | ППД птиц | КАМ | ППД мл. | ППД птиц | КАМ | |
| В день сенсибилизации | 1 | 0 | 0,7 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 |
| 24 | 24 | 45,9 | 60,5 | 58 | 1 | 0 | 56 | 1 | 0 |
| 48 | 25 | 60,6 | 68 | 71 | 0 | 0 | 72 | 0 | 0 |
| 72 | 23 | 50 | 63,8 | 71 | 0 | 1 | 41 | 1 | 0 |
| 96 | 14 | 43,6 | 62,6 | 36 | 1 | 0 | 26 | 1 | 0 |
| 120 | 1,9 | 20,8 | 57,4 | 2 | 0 | 1 | 30 | 0 | 1 |
| 144 | 1 | 3,4 | 54,9 | 0 | 1 | 0 | 25 | 0 | 0 |
| 168 | 1 | 1 | 41,2 | 0 | 0 | 0 | 19 | 0 | 1 |
| 192 | 0 | 0 | 0 | 0 | 17 | 1 | 1 | ||
| 216 | 32 | 0 | 0 | 1 | 17 | 0 | 0 | ||
| 240 | 22 | 0 | 1 | 0 | 13,7 | 0 | 0 | ||
| 264 | 0 | 0 | 1 | 1 | 16,0 | 1 | 0 | ||
| 288 | 1,4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | ||
| 336 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | |||
| 408 | 23 | 1 | 1 | ||||||
| 672 | 1 | 0 | 0 | ||||||
| - ППД мл. - ППД для млекопитающих | |||||||||
| - ППД пт. - ППД для птиц |
Пример 5. Исследование по определению у кроликов сенсибилизации, вызванной введением живых микобактерий вакцинного шт. БЦЖ-1
При вакцинации кроликов пятью прививочными дозами вакцины БЦЖ самое низкое содержание лейкоцитов в крови при взаимодействии с ППД для млекопитающих обнаруживали через 24 и 72 часа (4,6-4,7 10 9 /л), а при десяти дозах наименьшее количество лейкоцитов при взаимодействии с ППД для млекопитающих было через 24 часов (3,8 10 9 /л) и 48 часов (4, 7 10 9 /л). Особенностью является то, что при взаимодействии крови с ППД для млекопитающих через 72-264 часа и через 408 часов после вакцинации количество лейкоцитов было в несколько раз выше, чем в норме, и составляло 11-28,5 10 9 /л, т.е. вместо лейкопении отмечался лейкоцитоз. И в это же время количество лейкоцитов в пробах с физиологическим раствором (контрольные пробы) значительно превышало численность их в опытных пробах и составляло 25,0-38,7 10 9 /л. Установлено, что на фоне лейкоцитоза, вызванного введением больших доз вакцины БЦЖ, РСЛЛ у кроликов была положительной и составляла от 13,7 до 72% (табл.5).
Пример 6. Исследование проб крови РСЛЛ коров, давших дважды положительную реакцию на туберкулин
Диагностику туберкулеза реакций специфического лизиса лейкоцитов РСЛЛ в производственных условиях выполняли в СПК « Рассвет» Матвеево-Курганского района.
В октябре 2006 г. на ранее благополучной ферме положительно прореагировали на туберкулин семь коров из 198 исследованных. При повторной туберкулинизации через 45 дней они вновь дали положительную реакцию. При внутрикожном введении туберкулина образовывались тестоватой консистенции разлитые припухлости, кожная складка утолщалась на 5-10 мм.
Перед убоем коров взяли кровь для исследования в реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ). Результаты исследований по количеству лейкоцитов и показателям РСЛЛ у коров, с выраженной реакцией на туберкулин, представлены в табл.6.
| Таблица 6 РСЛЛ и патологоанатомические данные у коров, положительно прореагировавших на туберкулин |
|||||||
| Инвентарные номера коров | Кол-во лейкоцитов и показатель РСЛЛ крови при взаимодействии с | ||||||
| Физиологич. раствор | ППД для мл. | ППД для птиц | КАМ | ||||
| кол-во лейк. | кол-во лейк. | РСЛЛ% | кол-во лейк. | РСЛЛ% | кол-во лейк. | РСЛЛ% | |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 6827 | 7,7 | 5,5 | 29 | 7,6 | 1 | 7,55 | 2 |
| 071 | 11,0 | 7,1 | 36 | 11,0 | 0 | 10,5 | 1 |
| 4006 | 5,05 | 5,0 | 1 | 5,0 | 1 | 5,05 | 1 |
| 4018 | 9,5 | 2,75 | 71 | 9,35 | 2 | 9,4 | 1 |
| 162 | 5,0 | 4,8 | 4 | 4,9 | 1 | 4,9 | 1 |
| 109 | 5,0 | 4,9 | 2 | 5,0 | 0 | 4,9 | 1 |
| 148 | 5,75 | 4,2 | 27 | 5,7 | 1 | 5,7 | 1 |
Как видно из табл.6, из семи коров, реагировавших на внутрикожное введение туберкулина, только у четырех РСЛЛ была положительна (инвен. №6827; №071; №4018; №148) при взаимодействии проб крови с ППД-туберкулином для млекопитающих. Пробы крови с ППД-туберкулином для птиц и КАМ дали отрицательные показатели РСЛЛ.
Ветеринарная экспертиза контрольно-диагностического убоя положительно реагирующих на туберкулин коров показала, что из четырех животных с положительными показателями РСЛЛ только у двух обнаружены в лимфатических узлах изменения, характерные для туберкулеза: у одной туши в подчелюстных и заглоточных, а у второй средостенных и брыжеечных лимфатических узлах. В тушах двух коров с положительной реакцией на туберкулиновую пробу и положительными показателями РСЛЛ патологоанатомических изменений, характерных для туберкулеза, во внутренних органах и лимфатических узлах визуально не обнаружено. Это, вероятно, связано с недавним инфицированием животных возбудителем туберкулеза, и патологоанатомические изменения еще не успели сформироваться. Кроме этого, при послеубойной контрольно-диагностической экспертизе было установлено, что положительные реакции на внутрикожное введение туберкулина дали две глубокостельные (7-8,5 мес. беременности) коровы и одна с острым эндометритом при стрептококковой инфекции. Патологоанатомические изменения у положительно прореагировавших на туберкулин коров показаны в табл.7.
| Таблица 7 Патологоанатомические изменения у положительно прореагировавших на туберкулин коров |
|
| Номер коров | Патологоанатомические изменения |
| 6827 | Патологоанатомических изменений во внутренних органах и лимфатических узлах не обнаружено |
| 071 | Надартериальный лимфатический узел гиперимирован, печеночный лимфатический узел на разрезе имеет саловидные фокусы, других патологоанатомических изменений во внутренних органах и лимфатических узлах не обнаружено |
| 4006 | Послеродовой эндометрит, других патологоанатомических изменений во внутренних органах и лимфатических узлах не обнаружено |
| 4018 | Подчелюсной левый лимфатический узел на разрезе имел некротические фокусы серо-белого цвета, других патологоанатомических изменений во внутренних органах и лимфатических узлах не обнаружено |
| 162 | Патологоанатомических изменений во внутренних органах и лимфатических узлах не обнаружено, стельность 7 месяцев |
| 109 | Патологоанатомических изменений во внутренних органах и лимфатических узлах не обнаружено, стельность 7,5 месяцев |
| 148 | Патологоанатомических изменений во внутренних органах и лимфатических узлах не обнаружено, стельность 8 месяцев |
Контрольно-диагностическая экспертиза убитых коров, реагировавших положительно на туберкулин, показала, что в четырех случаях из семи положительная туберкулиновая проба совпадала с положительной РСЛЛ (В=4:7=0,57); в одном случае (В=1:7=0,14) из трех коров с беременностью 7-8 мес. положительная туберкулиновая проба совпала с глубокостельностью (8 мес.; В=1:3=0,33); в одном случае - со стрептококковой инфекцией (острый эндометрит; В=1:7=0,14).
РСЛЛ в двух случаях из четырех положительных показателей совпадала с обнаружением патологоанатомических изменений, характерных для туберкулеза (В=2:4=0,5), и в двух случаях из четырех (В=2:4=0,5) визуальных патологоанатомических данных не обнаружено, что не может быть основанием для исключения раннего инфицирования микобактериями, когда еще патологоанатомические изменения не сформировались.
Литература
1. Диагностика туберкулеза. // В.П.Урбан, М.А.Сафин, А.А..Сидорчук, М.В.Харитонов, Р.С.Сигбатулин, Ф.Г. Акберов. // Практикум по эпизоотологии и инфекционным болезням с ветеринарной санитарией. Учебник. Москва: «Колос», 2003, с.82-86.
2. Эпизоотологический контроль и постановка диагноза на туберкулез у животных разных видов. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Сборник санитарных и ветеринарных правил. Изд. официальное. Госкомсанэпиднадзор России. Минсельхозпром России. Москва. 1996, с.164-167.
3. Наставление по проведению симультанной пробы с применением туберкулина и комплексного Аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) при диагностике туберкулеза животных. Ветеринарное законодательство. Том 3. Москва: «Колос», 1981, с.220-224.
4. Шаров А.Н. Туберкулез «Ветеринарные препараты» Справочник (под ред. д.б.н. Д.Ф.Осидзе). Москва: «Колос», 1981, с.192-201.
1. Способ ранней диагностики туберкулеза животных, включающий выявление в благополучных хозяйствах и дворах плановыми аллергическими исследованиями реагирующих на туберкулин животных, отличающийся тем, что от положительно реагирующих на туберкулин животных исследуют кровь реакцией специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) с использованием в качестве диагностикума туберкулинов ППД для млекопитающих, ППД для птиц и КАМ.
2. Способ ранней диагностики туберкулеза по п.1, отличающийся тем, что при диагностике туберкулеза у крупного рогатого скота РСЛЛ проводят с ППД-туберкулином для млекопитающих, ППД-туберкулином для птиц и КАМ-комплексным аллергеном из атипичных микобактерий.
3. Способ ранней диагностики туберкулеза по п.1, отличающийся тем, что при диагностике туберкулеза у свиней РСЛЛ выполняют с ППД-туберкулином для млекопитающих и ППД-туберкулином для птиц.
// 2341288 // 2443428
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии
Изобретение относится к области биотехнологии
