МОТИВАЦИОННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТЕМЫ
Рациональное питание человека требует сбалансированности не только по содержанию белков, жиров, углеводов, но и по содержанию микронутриентов. Результаты изучения фактического питания различных групп населения свидетельствуют о значительной распространенности полигиповитаминозов, недостаточности основных минеральных веществ и пищевых волокон. Устранение недостаточностей микронутриентов не может быть достигнуто простым увеличением потребления продуктов питания. Современные условия жизни и труда большинства населения приводят к уменьшению энергетических затрат, что обусловливает необходимость снижения количества потребляемой пищи и влечет за собой недостаточное потребление содержащихся в ней микронутриентов. Знания клинических проявлений недостаточностей микронутриентов, источников витаминов, минеральных веществ и пищевых волокон в питании, способах сохранения витаминной ценности продуктов, приемах профилактической витаминизации позволяют врачу оптимизировать статус питания пациентов.
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: ознакомить с биологической ролью, нормированием и источниками в питании микронутриентов и пищевых волокон; научить определению химического состава рациона питания по содержанию витаминов, минеральных веществ, пищевых волокон расчетным методом (на примере анализа меню-раскладки суточного рациона питания студента-медика), витаминосберегающим способам хранения и кулинарной обработки продуктов, профилактической витаминизацией.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ НА ЗАНЯТИИ
1. Определение качественного состава суточного рациона питания студента по содержанию витаминов, минеральных веществ, пищевых волокон расчетным методом (по меню-раскладке, составленной к теме 3.2.) с использованием «Таблиц химического состава и энергетической ценности пищевых продуктов».
2. Решение ситуационных профессионально ориентированных задач двух типов, оформление решения в протоколе.
3. Лабораторная работа по определению содержания витамина С в овощах. 3.1. Определение содержания витамина С в сыром и вареном картофеле; расчет процента потери витамина С при кулинарной обработке.
3.2. Определение содержания витамина С в капусте; расчет процента потери витамина С при хранении.
4. Заслушивание и обсуждение рефератов, подготовленных студентами
по индивидуальному заданию преподавателя.
ЗАДАНИЕ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ
1.Биологическая роль, нормирование, источники в питании водорастворимых витаминов.
2.Биологическая роль, нормирование, источники в питании жирорастворимых витаминов.
3. Виды витаминных недостаточностей.
4. Причины гиповитаминозов, их проявления.
5.Приемы сохранения и повышения витаминной ценности рационов питания, профилактика гиповитаминозов.
6.Биологическая роль, нормирование, источники в питании минеральных веществ.
7.Биологическая роль, нормирование, источники в питании пищевых волокон.
ПРОТОКОЛ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
"_____"___________20___г.
Таблица 46
Качественный состав суточного рациона питания студента
| Наименования блюд меню, набор продуктов на порцию | Масса, г | Витамины | Минеральные вещества | Пище-вые волок- на, г | ||||||||
| С мг | В мг | В мг | А мкг | D мкг | Ca мг | P мг | К мг | Fe мг | J мкг | |||
| ЗАВТРАК: | ||||||||||||
| 2-ой ЗАВТРАК: | ||||||||||||
| ОБЕД: | ||||||||||||
| УЖИН: | ||||||||||||
| ВСЕГО ЗА СУТКИ: |
2. Решение ситуационной задачи (тип 1) №____
__________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Решение ситуационной задачи (тип2) №___
__________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
3. Определение содержания витамина С в овощах:
вид продукта _____________, навеска продукта ____________г,
количество 0,0001н. раствора иодноватокислого калия, пошедшего на тит-
рование пробы _____мл;
Формула для расчета:
а) сырой картофель _______ м, вареный картофель _______ мг,
потеря витамина С при кулинарной обработке _________%
б) капуста ______ мг, среднее содержание в капусте _____ мг,
потеря витамина С при хранении _____ %.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Работу выполнил __________________
Подпись преподавателя _____________
СПРАВОЧНЫЙ МАТЕРИАЛ
Дефиниции темы
АВИТАМИНОЗ - полное истощение витаминных ресурсов организма.
АНТИВИТАМИНЫ - соединения, частью или полностью выключающие витамины из обменных реакций организма путем их разрушения, инактивации или препятствуя их ассимиляции. Антивитамины делятся на 2 группы:
а) структуроподобные соединения (конкурентные ингибиторы; вступают с витаминами или их производными в конкурирующие отношения в соответствующих биохимических реакциях обмена веществ), к ним относятся сульфаниламиды, дикумарин, мегафен, изониазид и др.
б) структуроразличные соединения (природные антивитамины; вещества,
которые путем изменения молекулы или комплексного соединения с метаболитами частично или полностью лишают витамин его действия), к ним относятся тиаминаза, аскорбиназа, авидин и др.
ВИТАМИНЫ - необходимые для нормальной жизнедеятельности низкомолекулярные органические соединения с высокой биологической активностью, которые не синтезируются (или синтезируются в недостаточном количестве) в организме и поступают в организм с пищей. Биологическая роль водорастворимых витаминов определяется их участием в построении различных коферментов, жирорастворимых витаминов - в контроле функционального состояния мембран клетки и субклеточных структур.
ВИТАМИНЫ-АНТАГОНИСТЫ: В 1 и В 2 ; А и Д; никотиновая кислота и холин; тиамин и холин (при длительном введении с лечебными целями одного витамина обнаруживаются симптомы недостаточности другого).
ВИТАМИНЫ-СИНЕРГИСТЫ: С и Р; Р, С, К; В 12 и фолиевая кислота; С, К, В 2 ; А и Е; Е и инозит (при комплексном применении в поливитаминных препаратах могут усиливать биологический эффект друг друга). ГИПОВИТАМИНОЗ - резкое снижение обеспеченности организма тем или иным витамином.
СКРЫТАЯ (ЛАТЕНТНАЯ) ФОРМА ВИТАМИННОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ не имеет каких-либо внешних проявлений и симптомов, однако, оказывает отрицательное влияние на работоспособность, устойчивость организма к различным неблагоприятным факторам, удлиняет выздоровление после перенесенного заболевания.
ПИЩЕВЫЕ ВОЛОКНА – высокомолекулярные углеводы (целлюлоза, гемицеллюлоза, пектины, лигнин, хитин и др.) главным образом растительного происхождения, устойчивые к перевариванию и усвоению в тонком кишечнике, но подвергающиеся полной или частичной ферментации в толстом кишечнике.
ВАЖНЕЙШИЕ ПРИЧИНЫ ГИПОВИТАМИНОЗОВ И АВИТАМИНОЗОВ
1. Недостаточное поступление витаминов с пищей.
1.1. Низкое содержание витаминов в рационе.
1.2. Снижение общего количества потребляемой пищи в связи с низкими энерготратами.
1.3. Потеря и разрушение витаминов в процессе технологической переработки продуктов питания, их хранения и нерациональной кулинарной
обработки.
1.4. Отклонения от сбалансированной формулы питания (преимущественно углеводное питание требует дополнительного количества тиамина;
при недостаточном введении полноценных белков витамины С, РР, В 1 быстро выводятся с мочой, не участвуют в обменных процессах, задерживается превращение каротина в витамин А).
1.5. Анорексия.
1.6. Присутствие витаминов в некоторых продуктах в неутилизируемой форме (инозит в виде фитина зерновых продуктов).
2. Угнетение кишечной микрофлоры, продуцирующей некоторые витамины (В 6 , К).
2.1. Болезни желудочно-кишечного тракта.
2.2. Последствия химиотерапии (дисбактериозы).
3. Нарушение ассимиляции витаминов.
3.1. Нарушение всасывания витаминов в желудочно-кишечном тракте
при заболеваниях желудка, кишечника, поражениях гепатобилиарной системы, а также в пожилом возрасте (нарушение секреции желчи, необходимое для всасывания жирорастворимых витаминов).
3.3. Нарушение обмена витаминов и образования их биологически активных (коферментных) форм при различных заболеваниях, действии токсических и инфекционных агентов, химиотерапии, в пожилом возрасте.
4. Повышенная потребность в витаминах.
4.1. Особые физиологические состояния организма (интенсивный рост, беременность, лактация).
4.2. Особые климатические условия (потребность в витаминах повышается на 30-60% в связи с повышенными энерготратами при низкой температуре воздуха в климатической зоне Севера).
4.4. Значительная нервно-психическая нагрузка, стрессовые состояния.
4.5. Воздействие вредных факторов производства (Рабочим горячих цехов в условиях воздействия высоких температур /32 градуса/ при одновременной физической нагрузке требуется вдвое больше витаминов С, В 1 , В 6 , пантотеновой кислоты, чем при 18 градусах).
4.6. Инфекционные заболевания и интоксикации (При тяжелых септических процессах потребность организма в витамине С достигает 300-500 мг в сутки).
4.7. Заболевания внутренних органов и эндокринных желез.
4.8. Повышенная экскреция витаминов.
5. Врожденные, генетически обусловленные нарушения обмена и функций витаминов.
5.1. Врожденные нарушения всасывания витаминов.
5.2. Врожденные нарушения транспорта витаминов кровью и через клеточные мембраны.
5.3. Врожденные нарушения биосинтеза витаминов (никотиновой кислоты из триптофана).
5.4. Врожденные нарушения превращения витаминов в коферментные
формы, простетические группы и активные метаболиты.
5.5. Нарушение включения витаминов в состав активного центра фермента.
5.6. Нарушение структуры апофермента, затрудняющее его взаимодействие с коферментом.
5.7. Нарушение структуры апофермента, приводящее к полной или частичной утрате ферментативной активности вне зависимости от взаимодействия с коферментом.
5.8. Усиление катаболизма витаминов.
5.9. Врожденные нарушения реабсорбции витаминов в почках.
Таблица 47
(в 100 г съедобной части)
| Продукты | В 1 | В 2 | РР | В 6 | С | Е | А | В-ка-ро-тин | D | В 12 | Фо-лие-вая кисл. | ||||
| Мг/100г | Мкг/100 г | ||||||||||||||
| Хлеб ржаной | 0,18 | 0,11 | 0,67 | 0,17 | - | 2,2 | - | - | - | - | |||||
| Хлеб пшенич. | 0,21 | 0,12 | 2,81 | 0,3 | - | 3,8 | - | - | - | - | |||||
| Крупа овсян. | 0,49 | 0,11 | 1,1 | 0,27 | - | 3,4 | - | - | - | - | |||||
| Крупа манная | 0,14 | 0,07 | 1,0 | 0,17 | - | 2,5 | - | - | - | - | |||||
| Крупа рисовая | 0,08 | 0,04 | 1,6 | 0,18 | - | 0,4 | - | - | - | - | |||||
| Крупа гречнев. | 0,53 | 0,2 | 4,19 | 0,4 | - | 6,6 | - | - | - | - | |||||
| Пшено | 0,62 | 0,04 | 1,55 | 0,52 | - | 2,6 | - | 0,15 | - | - | |||||
| Макароны | 0,17 | 0,08 | 1,21 | 0,16 | - | 2,1 | - | - | - | - | |||||
| Говядина | 0,07 | 0,18 | 3,0 | 0,39 | Сл | - | - | - | - | 2,8 | 8,9 | ||||
| Свинина | 0,52 | 0,14 | 2,4 | 0,33 | Сл | - | - | - | - | - | 5,5 | ||||
| Печень говяж. | 0,3 | 2,19 | 6,8 | 0,7 | 1,3 | 3,8 | 1,0 | - | |||||||
| Колбаса варен. | 0,25 | 0,18 | 2,47 | 0,19 | - | - | - | - | - | - | |||||
| Куры | 0,07 | 0,15 | 3,6 | 0,61 | - | - | 0,1 | - | - | - | 5,8 | ||||
| Яйца куриные | 0,07 | 0,44 | 0,2 | 0,14 | - | 0,3 | - | 4,7 | 0,1 | 7,5 | |||||
| Треска | 0,09 | 0,16 | 2,3 | 0,17 | Сл. | 0,9 | Сл. | - | - | 1,6 | 11,3 | ||||
| Икра осетр. | 0,3 | 0,36 | 1,5 | 0,29 | 7,8 | - | 0,2 | - | - | ||||||
| Молоко Пастер. | 0,03 | 0,13 | 0,1 | - | 1,0 | - | Сл. | 0,01 | - | - | - | ||||
| Кефир | 0,03 | 0,17 | 0,14 | 0,06 | 0,7 | 0,1 | Сл. | 0,01 | - | 0,4 | 7,8 | ||||
| Сметана | 0,02 | 0,1 | 0,07 | 0,07 | 0,2 | 0,5 | 0,2 | 0,1 | 0,1 | 0,36 | 8,5 | ||||
| Творог | 0,04 | 0,27 | 0,4 | 0,11 | 0,5 | 0,4 | 0,1 | 0,03 | - | 1,0 | 35,0 | ||||
| Сыры твердые | 0,02 | 0,3 | 0,3 | 0,1 | 1,6 | 0,5 | 0,2 | 0,1 | - | 2,5 | 10-45 | ||||
| Масло сливоч. | Сл | 0,01 | 0,1 | - | - | - | 0,5 | 0,34 | - | - | - | ||||
| Масло подсолнечное рафинирован. | _ | - | - | - | - | - | - | - | - | - | |||||
| Горох | 0,81 | 0,15 | 2,2 | 0,27 | - | 9,1 | - | 0,07 | - | - | |||||
| Картофель | 0,12 | 0,05 | 0,9 | 0,3 | 0,1 | - | 0,02 | - | - | ||||||
| Капуста белокачанная | 0,06 | 0,05 | 0,4 | 0,14 | 0,1 | - | 0,02 | - | - | ||||||
| Лук зеленый | 0,02 | 0,1 | 0,3 | 0,15 | - | - | - | ||||||||
| Томаты | 0,06 | 0,04 | 0,53 | 0,1 | 0,4 | - | 1,2 | - | - | ||||||
| Огурцы | 0,03 | 0,04 | 0,2 | 0,04 | 0,1 | - | 0,06 | - | - | ||||||
| Свекла | 0,02 | 0,04 | 0,2 | 0,07 | 0,1 | - | 0,01 | - | - | ||||||
| Морковь | 0,06 | 0,07 | 0,13 | 0,6 | - | - | - | ||||||||
| Грибы белые | 0,02 | 0,3 | 4,6 | 0,07 | 0,6 | - | - | - | - | ||||||
| Яблоки | 0,01 | 0,03 | 0,3 | 0,08 | 0,6 | - | 0,03 | - | - | 1,6 | |||||
| Абрикосы | 0,03 | 0,06 | 0,07 | 0,05 | 0,9 | - | 1,6 | - | - | ||||||
| Вишни | 0,03 | 0,3 | 0,4 | 0,05 | 0,3 | - | 0,1 | - | - | ||||||
| Малина | 0,02 | 0,05 | 0,6 | 0,07 | 0,6 | - | 0,2 | - | - | ||||||
| Земляника | 0,03 | 0,05 | 0,3 | 0,06 | 0,5 | - | 0,03 | - | - | ||||||
| Смородина чер. | 0,02 | 0,02 | 0,3 | 0,13 | 0,7 | - | 0,1 | - | - | ||||||
| Облепиха | 0,1 | 0,05 | 0,6 | 0,11 | - | - | - | ||||||||
| Шиповник сух. | 0,15 | 0,84 | 1,5 | - | - | - | 6,7 | - | - | - | |||||
| Виноград | 0,05 | 0,02 | 0,3 | 0,09 | - | - | Сл. | - | - | ||||||
| Лимоны | 0,04 | 0,02 | 0,1 | 0,06 | - | - | 0,01 | - | - | ||||||
| Апельсины | 0,04 | 0,03 | 0,2 | 0,06 | 0,2 | - | 0,05 | - | - | ||||||
| Пирожные, торты | 0,75 | 0,1 | 0,7 | - | - | - | 0,1 | 0,14 | - | - | - | ||||
| Дрожжи прессован. | 0,6 | 0,68 | 11,4 | 0,58 | - | - | - | - | - | - | |||||
ГОСТ Р 54635-2011
Группа Н59
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ
Метод определения витамина А
Functional food products. Method of vitamin A determination
ОКС 67.050
ОКСТУ 9109
Дата введения 2013-01-01
Предисловие
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом N 184-ФЗ "О техническом регулировании" от 27 декабря 2002 г. , а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Учреждением Российской академии медицинских наук Научно-исследовательским институтом питания
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 36 "Функциональные пищевые продукты"
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 декабря 2011 г. N 784-ст
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1 Область применения
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на функциональные пищевые продукты и устанавливает метод определения массовой доли витамина А в виде ретинола, ацетата ретинола, пальмитата ретинола с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ).
Диапазон измерений массовой доли витамина А составляет от 0,5 до 10,0 млн.
Примечание - Настоящий стандарт допускается распространять на пищевые продукты при условии соблюдения диапазона измерений.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р 8.563-2009 Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений
ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике
ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006 * Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий
________________
ГОСТ ИСО/МЭК 17025-2009
ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
ГОСТ Р 52062-2003 Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ Р 52179-2003 Маргарины, жиры для кулинарии, кондитерской, хлебопекарной и молочной промышленности. Правила приемки и методы контроля
ГОСТ Р 52349-2005 Продукты пищевые. Продукты пищевые функциональные. Термины и определения
ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4517-87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9293-74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 13496.0-80 * Комбикорма, сырье. Методы отбора проб
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р ИСО 6497-2011 , здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.
ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия
ГОСТ 19627-74 Гидрохинон (парадиоксибензол). Технические условия
ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб канализу
ГОСТ 27025-86 Реактивы. Общие указания по проведению испытаний
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52349 , а также следующий термин с соответствующим определением:
4 Сущность метода
Определение витамина А в экстракте, полученном из анализируемой пробы, проводят разделением методом ВЭЖХ с последующим фотометрическим или флуориметрическим детектированием. При необходимости экстракт получают после щелочного гидролиза анализируемой пробы.
Количественный анализ проводят методом внешнего стандарта с использованием площади или высоты пиков ретинола, ацетата ретинола, пальмитата ретинола.
5 Требования безопасности
5.1 Условия безопасного проведения работ
При выполнении испытаний необходимо соблюдать требования пожарной безопасности, установленные ГОСТ 12.1.004 , электробезопасности - ГОСТ Р 12.1.019 , техники безопасности при работе с реактивами - ГОСТ 12.1.007 , а также требования, изложенные в технической документации на спектрофотометр, хроматограф, другие приборы и оборудование.
Помещение, в котором проводят испытания, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Контроль за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны следует проводить в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005 .
При работе с газовыми баллонами необходимо руководствоваться .
5.2 Требования к квалификации оператора
К выполнению испытаний и обработке результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием по профессиям: химик, инженер-химик, техник, лаборант, с опытом работы в химической лаборатории. Первое применение метода в лаборатории следует проводить под наблюдением квалифицированного специалиста в области ВЭЖХ.
6 Условия выполнения испытания
6.1 Общие условия
Испытания проводят в нормальных лабораторных условиях: температура окружающей среды - (25±5) °С; относительная влажность - (65±15)%; частота переменного тока - (50±5) Гц; напряжение в сети - (220±10) В.
При приготовлении и хранении растворов следует выполнять требования ГОСТ 27025 , ГОСТ 4517 .
Для предотвращения разрушения витамина А анализ испытуемого материала и стандартов проводят в присутствии антиоксиданта (аскорбиновой кислоты, гидрохинона, пирогаллола), предохраняя пробы от попадания на них прямого солнечного света.
6.2 Условия фотометрических измерений
Условия фотометрических измерений приведены в таблице 1.
Таблица 1 - Условия фотометрических измерений
Витамин А | Растворитель | Длина волны, нм | Удельный коэффициент поглощения |
Ретинол | |||
Ретинола ацетат | |||
Ретинола пальмитат | 2-пропанол |
6.3 Условия хроматографического анализа
Температура хроматографической колонки: 25 °С или температура окружающей среды.
Скорость потока подвижной фазы: 0,7 см/мин (ориентировочное значение).
Объем вводимой пробы: 50·10 см.
Подвижная фаза: смесь ацетонитрила, метилового спирта, метилена хлористого в объемном соотношении 50:45:5.
Проверку оптимальности условий хроматографического разделения осуществляют путем хроматографического анализа смешанного раствора ретинола, ацетата ретинола, пальмитата ретинола с массовой концентрацией каждого вещества не менее 0,4 мкг/см. Данный смешанный раствор готовят из основных растворов ретинола, ацетата ретинола, пальмитата ретинола по аналогии с методикой приготовления рабочих растворов по 8.1.2. Эффективность хроматографического разделения признается удовлетворительной, если коэффициент разделения соседних пиков ретинола, ацетата ретинола, пальмитата ретинола составляет не менее 1,3. В противном случае для достижения требуемой эффективности разделения экспериментальным путем подбирают скорость потока подвижной фазы или проводят испытания других колонок.
7 Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
7.1 Для определения содержания массовой доли витамина А применяют следующие средства измерений, вспомогательное оборудование и материалы:
- весы по ГОСТ Р 53228 , обеспечивающие точность взвешивания с пределами допускаемой абсолютной погрешности ±0,1 мг;
- спектрофотометр со спектральным диапазоном работы от 190 до 1100 нм, основной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%;
- кюветы кварцевые с длиной оптического пути 1 см;
- хроматограф высокоэффективный жидкостный, включающий следующие элементы: насос; устройство для ввода проб; флуориметрический детектор (длины волн, нм: возбуждения - 325 нм, эмиссии - 470 нм) или спектрофотометрический детектор (длина волны детектирования - 325 нм) с уровнем шумов не более 10 единиц оптической плотности и относительной погрешностью измерений не более 10%; колонку аналитическую для ВЭЖХ диаметром 0,30-0,46 см, длиной 10-25 см, заполненную октадецилсиликагелем с размером частиц 5 мкм; регистрирующее устройство - интегратор или самописец, позволяющий проводить измерение площади (или высоты) пика с погрешностью не более 1%; программное обеспечение для обработки полученных результатов измерений;
- фильтры для фильтрования подвижной фазы и анализируемых растворов (например, с размером пор 0,45 мкм);
- микрошприц типа "Гамильтон" вместимостью 0,1 см для ввода проб в жидкостный хроматограф;
- пипетки градуированные 1(2,3)-1(2)-1-0,5(1,2,5,10,25) по ГОСТ 29227 или дозаторы автоматические с аналогичными или изменяемыми объемами доз с относительной погрешностью дозирования не более ±1%;
- цилиндры 1-50(100,250)-1(2) по ГОСТ 1770 ;
- колбы мерные 2-50(100,250,500,1000)-2 по ГОСТ 1770 ;
- пробирки мерные с притертыми пробками П-2-5(10,15,20,25)-0,1(0,2)ХС по ГОСТ 1770 ;
- стаканы В(Н)-1-50(100,150,250)ТХС по ГОСТ 25336 ;
- колбы круглодонные К-1-100(250,500)-29/32ТС по ГОСТ 25336 ;
- воронки В-36(56)-80ХС, В-75-110(140)ХС, В-100-150ХС по ГОСТ 25336 ;
- линейка металлическая с ценой деления 1 мм по ГОСТ 427 ;
- встряхиватель для колб и пробирок с диапазоном частот колебаний платформ 100-150 колебаний в минуту;
- центрифуга, обеспечивающая 4-6 тыс. об/мин;
- баня водяная с регулятором нагрева, поддерживающая температуру от 40 ° до 100 °С;
- баня ультразвуковая лабораторная рабочим объемом не менее 2 дм;
- испаритель ротационный с диапазоном рабочего давления от 7 мм рт.ст. до 760 мм рт.ст. (от 9·10 Па до 10·10 Па) или насос водоструйный по ГОСТ 25336 ;
- холодильники стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336 ;
- термометр лабораторный жидкостный диапазоном температур от 0 °С до 100 °С, ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498 ;
- баллон с газообразным азотом по ГОСТ 9293 , ос.ч., и по ;
- бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026 ;
- плитка электрическая закрытого типа по ГОСТ 14919 ;
- мельница лабораторная электрическая;
- холодильник бытовой по ГОСТ 16317 .
7.2 При выполнении измерений применяют следующие реактивы и материалы:
- спирт этиловый абсолютный () массовой долей основного вещества не менее 99,9%;
- спирт этиловый ректификованный () массовой долей основного вещества не менее 96% или по ГОСТ Р 51652 , ГОСТ 18300 ;
- спирт метиловый () массовой долей основного вещества не менее 99,9%;
- ацетонитрил () массовой долей основного вещества не менее 99,8%;
- метилен хлористый () массовой долей основного вещества не менее 99,8%;
- н-гексан () массовой долей основного вещества не менее 99%;
- этилацетан () массовой долей основного вещества не менее 99% или по ГОСТ 8981 ;
- пропанол-2 () массовой долей основного вещества не менее 99%;
- эфир петролейный, перегнанный при температуре (50±10) °С, очищенный от перекисей;
- эфир диэтиловый, очищенный от перекисей, содержащий 0,1% пирогаллола, по ;
- калия гидроокись (КОН) по ГОСТ 24363 , х.ч. или ч.д.а., раствор КОН массовой долей 50%;
- натрий сернокислый () безводный массовой долей основного вещества не менее 99,5% или по ГОСТ 4166 , х.ч.;
- воду дистиллированную по ГОСТ 6709 ;
- кислоту аскорбиновую () по или , х.ч.;
- гидрохинон () массовой долей основного вещества не менее 99% или по ГОСТ 19627 ;
- пирогаллол () массовой долей основного вещества не менее 99%;
- бутилгидрокситолуол () массовой долей основного вещества не менее 99%;
- ретинол ()=286,5 г/моль, массовой долей основного вещества не менее 90%;
- ретинола ацетат ()=328,5 г/моль, массовой долей основного вещества не менее 90% или по ;
- ретинола пальмитат ()=524,9 г/моль, массовой долей основного вещества не менее 90% или по .
7.3 Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.
8 Подготовка к выполнению измерений
8.1 Приготовление растворов
8.1.1 Основные стандартные растворы
Растворяют около 50 мг ретинола (или ретинола ацетата, или ретинола пальмитата) в 50 см абсолютного этилового спирта. Массовая концентрация ретинола (или ретинола ацетата, или ретинола пальмитата) в растворе составляет примерно 1,0 мг/см. Далее 2 см раствора ретинола (или ретинола ацетата, или ретинола пальмитата) с помощью пипетки помещают в мерную колбу объемом 50 см и доводят до метки спиртом этиловым абсолютным. Массовая концентрация соединений в полученных основных стандартных растворах составляет примерно 40 мкг/см.
8.1.2 Градуировочные растворы
Из основных стандартных растворов готовят не менее четырех градуировочных растворов ретинола (или ретинола ацетата, или ретинола пальмитата) в диапазоне массовых концентраций 0,4-4,0 мкг/см путем точного разведения основных стандартных растворов спиртом этиловым абсолютным в мерной колбе вместимостью 50 см.
Определение массовой концентрации ретинола (или ретинола ацетата, или ретинола пальмитата), (мкг/см) проводят после измерения оптической плотности градуировочных растворов в кварцевой кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см на спектрофотометре при оптимальной длине волны и вычисляют по формуле
где - значение оптической плотности градуировочного раствора;
- значение оптической плотности градуировочного раствора в абсолютном этиловом спирте или 2-пропаноле массовой концентрации 1 г в 100 см при толщине поглощающего слоя 1 см, приведенное в таблице 1;
10 - коэффициент пересчета;
- коэффициент, учитывающий поглощение сопутствующих компонентов при измерении , вычисляемый по формуле
где - площадь пика стандартного вещества при проведении ВЭЖХ анализа, mAU·с (AU·с);
- сумма площадей пиков сопутствующих компонентов при проведении ВЭЖХ анализа стандартного вещества, mAU·с (AU·с).
Все растворы в ходе приготовления и анализа тщательно защищают от воздействия ультрафиолетового излучения. Растворы ретинола хранят при температуре ниже 4 °С в течение 2 мес. Свежеприготовленные растворы ретинола ацетата или ретинола пальмитата используют для измерений в течение 2-3 ч при комнатной температуре.
8.2 Отбор и подготовка проб
8.2.1 Отбор проб проводят по ГОСТ 13496.0 , ГОСТ 26809 , ГОСТ Р 52062 , ГОСТ Р 52179 .
8.2.2 Крупные частицы средней пробы, выделенной методом квартования из лабораторной пробы, измельчают с использованием подходящего оборудования (например, лабораторной мельницы) до такого состояния, чтобы весь продукт проходил через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Размолотую пробу тщательно перемешивают.
Анализируемые пробы гомогенизируют, избегая воздействия повышенной температуры.
8.2.3 Пищевые продукты на масложировой основе с массовой долей воды 1% и менее, обогащенные ацетатом ретинола или пальмитатом ретинола
2-5 г анализируемой пробы переносят в мерную колбу вместимостью 25 см, растворяют в 10-15 см н-гексана, используя ультразвуковую баню для ускорения растворения. Раствор доводят до метки н-гексаном. При необходимости раствор можно использовать для последующего разведения н-гексаном. Затем аликвоту гексанового раствора упаривают в токе азота и сухой остаток перерастворяют в элюенте.
8.2.4 Пищевые продукты на масложировой основе с массовой долей воды не более 20%, обогащенные ацетатом ретинола или пальмитатом ретинола
2-5 г анализируемой пробы растворяют при интенсивном перемешивании в 10-15 см н-гексана, используя ультразвуковую баню для ускорения растворения. Удаляют избыток воды добавлением безводного сульфата натрия. Содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр для отделения нерастворившегося осадка. Колбу промывают дважды 5 см н-гексана. Фильтраты собирают в мерную колбу вместимостью 25 см. Раствор доводят до метки н-гексаном. Затем аликвоту гексанового раствора упаривают в токе азота и сухой остаток перерастворяют в элюенте.
8.2.5 Другие пищевые продукты, обогащенные ацетатом ретинола или пальмитатом ретинола
Для проведения щелочного гидролиза 1-30 г анализируемой пробы сухого или жидкого материала помещают в круглодонную колбу вместимостью 100-500 см. К сухому материалу добавляют 5-20 см воды и нагревают на водяной бане при температуре 60 °С - 70 °С при перемешивании в течение 5 мин. Затем прибавляют 50-150 см этилового ректификованного спирта (или метилового спирта), 0,2-1,0 г антиоксиданта (аскорбиновой кислоты, гидрохинона, бутилгидрокситолуола), 4-40 см 50%-ного раствора гидроокиси калия и нагревают в течение 15-45 мин на водяной бане с обратным холодильником при температуре 80 °С-100 °С.
Рекомендуемые соотношения испытуемого материала и реактивов приведены в таблице 2.
Таблица 2 - Рекомендуемые соотношения испытуемого материала и реактивов
Массовая доля витамина А, млн | Навеска испытуемого материала, г | Объем этанола, см | Объем 50%-ного раствора KОН, см |
От 0,1-1,0 включ. | |||
Св. 1,0-5,0 включ. | |||
Св. 5,0-10,0 включ. |
При проведении щелочного гидролиза при комнатной температуре в течение не менее 16 ч используют вышеуказанные соотношения материала и реактивов.
Если после охлаждения на поверхности смеси остается слой масла или жира, то объем добавленного раствора KОН и время проведения щелочного гидролиза увеличивают.
После окончания гидролиза содержимое колбы быстро охлаждают до (20±5) °С и количественно переносят в делительную воронку. Колбу ополаскивают водой, объем которой равен объему добавленного этилового спирта (или метилового), и воду сливают в ту же воронку. Витамин А экстрагируют диэтиловым (или петролейным) эфиром, н-гексаном, н-гексаном с добавкой диэтилового (или петролейного) эфира в объемном соотношении 1:1 в течение двух минут. Для учета возможной неполной экстракции витамина А следует использовать метод добавок стандартов.
Экстракцию повторяют три-четыре раза порциями экстрагента 50-100 см. Объединенный экстракт отмывают от щелочи три-четыре раза порциями воды 50-150 см до исчезновения щелочной реакции промывных вод (по универсальной индикаторной бумаге).
Для удаления воды экстракт фильтруют через фильтр с 2-5 г безводного сульфата натрия. Далее экстракт упаривают досуха, используя роторный испаритель при температуре не выше 50 °С и затем перерастворяют в элюенте. При необходимости раствор можно использовать для последующего разведения.
Раствор, полученный по 8.2.3 (8.2.4, 8.2.5), анализируют методом ВЭЖХ. Массу анализируемой пробы и объем растворителя подбирают таким образом, чтобы концентрация определяемых веществ в анализируемом растворе находилась в диапазоне от 0,4 до 4,0 мкг/см.
8.3 Подготовка жидкостного хроматографа
Подготовку жидкостного хроматографа к работе осуществляют в соответствии с инструкцией по эксплуатации оборудования. Перед началом работы колонку промывают элюентом.
8.4 Построение градуировочной зависимости
Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования. Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов, приготовленных по 8.1.2.
Градуировочный график строят в координатах "аналитический сигнал" - "массовая концентрация витамина в градуировочном растворе, мкг/см". Для каждого анализируемого градуировочного раствора проводят два параллельных измерения и находят среднеарифметическое значение. Различие между измеренными значениями аналитических сигналов и значениями времени удерживания не должно превышать 5% от средних значений. Линейные участки градуировочного графика должны соответствовать всему диапазону определяемых массовых концентраций витамина А.
Коэффициент градуировочного графика , мкг/см/(mAU·с) или мкг/см/(AU·с) определяют как среднеарифметическое значение коэффициентов , вычисляемых по формуле
где - массовая концентрация стандартных веществ в -м градуировочном растворе, мкг/см;
- площадь (высота) аналитического сигнала при анализе -го градуировочного раствора, mAU·с (AU·с) или высота пика, мм.
Правильность построения градуировочной зависимости контролируется значением достоверной аппроксимации 0,997.
Градуировка проводится в следующих случаях: на этапе освоения метода, при изменении условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.
9 Выполнение измерений
В колонку хроматографа последовательно вводят равные объемы испытуемого и градуировочного растворов. В качестве градуировочного выбирают раствор, высота пика которого наименее отличается от высоты пика испытуемого раствора. Концентрацию витамина А () в растворе, используемом для градуировки, уточняют в день его использования по 8.1.2.
Для идентификации пиков сопоставляют время удерживания ретинола (или ретинола ацетата или ретинола пальмитата) испытуемого раствора и раствора стандарта, а также добавляют к испытуемому раствору раствор стандарта с близким содержанием витамина А.
10 Обработка и оформление результатов
Массовую долю витамина А , млн, вычисляют по формулам:
где - коэффициент градуировочного графика по 8.4;
- объем разведения, см;
- масса анализируемой пробы, г.
С использованием градуировочного раствора
где - массовая концентрация градуировочного раствора, мкг/см;
- объем разведения, см;
- среднеарифметическое значение результатов измерений площади (высоты) пика анализируемого компонента для двух параллельных хроматографических анализов испытуемого раствора, mAU·с (AU·с) или высота пика, мм;
- масса анализируемой пробы, г;
- среднеарифметическое значение результатов измерений площади (высоты) пика анализируемого компонента для двух параллельных хроматографических анализов градуировочного раствора, mAU·с (AU·с) или высота пика, мм.
Результат вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго десятичного знака.
При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения, начиная со взятия навески испытуемой пробы.
Расхождение между результатами двух параллельных измерений , (в процентах от среднего значения ), выполненными одним оператором с использованием идентичных реактивов и оборудования и в минимально возможный промежуток времени, не должно превышать (предел повторяемости приведен в таблице 3) с доверительной вероятностью 95%.
При соблюдении этого условия за окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое значение .
Границы относительной погрешности определения массовой доли витамина А (), в процентах от результата испытания, и при доверительной вероятности 95% не должны превышать значений, указанных в таблице 3.
Результат определения витамина А представляют в следующем виде:
Млн при 95%, (6)
где - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, млн;
- значение границы абсолютной погрешности определений, млн, вычисляемое по формуле
Результаты испытаний заносят в протокол, в котором указывают:
- ссылку на настоящий стандарт;
- вид, происхождение и название пробы;
- способ и дату отбора пробы;
- дату поступления и испытания пробы;
- результаты исследования;
- причины отклонений в процедуре определения от установленных условий.
Введение……………………………………………………………2
1. Общий обзор методов определения витаминов…………………3
2. Хроматографические методы определения витаминов…………5
3. Электрохимические методы определения витаминов…………10
4. Инверсионно вольтамперометрический метод определения
водорасторимых витаминов B 1 B 2 в пищевых продуктах………..13
Заключение………………………………………………………...18
Введение
В настоящее время на рынке появилось огромное количество витаминизированных продуктов питания для человека и кормов для животных, представляющих собой сухие многокомпонентные смеси. Ассортимент таких продуктов представлен достаточно широко. Это, прежде всего, биологически активные добавки к пище, премиксы, комбикорма для животных и птиц, поливитаминные препараты. Критерием качества таких продуктов может являться их анализ на содержание витаминов и, особенно, таких жизненно необходимых, как водорастворимые и жирорастворимые витамины, количество которых регламентируется нормативными документами и санитарными нормами качества.
Для определения витаминов применяют различные методы. Широко используемые оптические методы анализа трудоемки, требуют больших затрат времени и дорогостоящих реактивов, применение хроматографических методов осложнено использованием дорогостоящего оборудования. С каждым годом расширяется ассортимент и увеличивается производство продуктов питания, совершенствуется рецептура детского питания. Это в свою очередь предъявляет повышенные требования к контролю за качеством выпускаемой продукции и совершенствованию методов определения витаминов. Медико-биологические требования и санитарные нормы качества продовольственного сырья и пищевых продуктов характеризуют пищевую ценность большинства видов и групп продуктов детского питания различного назначения.
1. Общий обзор методов определения витаминов
Почти все витамины легко подвергаются окислению, изомеризации и разрушаются под воздействием высокой температуры, света, кислорода воздуха, влаги и других факторов.
Из существующих методов определения витамина С (аскорбиновой кислоты) наиболее широко применяют метод визуального и потенциометрического титрования раствором 2,6-ди-хлорфенолиндофенола по ГОСТ 24556-81, основанный на редуцирующих свойствах аскорбиновой кислоты и ее способности восстанавливать 2,6-ДХФИФ. Темно-синяя окраска этого индикатора при добавлении аскорбиновой кислоты переходит в бесцветную. Важное значение имеет приготовление экстракта исследуемого продукта. Наилучшим экстрагентом является 6 %-ный раствор метафосфорной кислоты, который инактивирует аскорбинотоксидазу и осаждает белки.
Каротин в растительном сырье, концентратах и безалкогольных напитках контролируют физико-химическим методом по ГОСТ 8756.22-80. Метод основан на фотометрическом определении массовой доли каротина в растворе, полученном в процессе экстрагирования из продуктов органическим растворителем. Предварительно раствор очищают от сопутствующих красящих веществ с помощью колоночной хроматографии. Каротин легко растворяется в органических растворителях (эфир, бензин и др.) и придает им желтую окраску. Для количественного определения каротина используют адсорбционную хроматографию на колонках с окисью алюминия и магния. Такое определение пигментов на колонке зависит от активности адсорбента, количества пигментов, а также присутствия других компонентов в разделяемой смеси. Сухая смесь окиси алюминия задерживает каротин, а влажная пропускает в раствор другие красящие вещества.
Тиамин в основном находится в связанном состоянии в виде дифосфорного эфира - кокарбоксилазы, которая является активной группой ряда ферментов. С помощью кислотного гидролиза и под воздействием ферментов тиамин освобождается из связанного состояния. Этим способом определяют количество тиамина. Для расчета содержания витамина B1 используют флюрометрический метод, который применяют для определения тиамина в пищевых продуктах. Он основан на способности тиамина образовывать в щелочной среде с феррнцианндом калня тиохром, который дает интенсивную флюоресценцию в бутиловом спирте. Интенсивность процесса контролируют на флюорометре ЭФ-ЗМ.
В продуктах питания и напитках рибофлавин присутствует в связанном состоянии, т. е. в форме фосфорных эфиров, связанных с белком. Чтобы определить количество рибофлавина в продуктах, необходимо освободить его из связанного состояния путем кислотного гидролиза и обработки ферментными препаратами. Витамин B1 в безалкогольных напитках рассчитывают с помощью химического метода для определения количества легкогидролизуемых и прочно связанных форм рибофлавина в тканях. Метод основан на способности рибофлавина к флюоресценции до и после восстановления его гипосульфитом натрия. Определение общего содержания фенольных соединений. Для этого используют колориметрический метод Фолина - Дениса, который основан на образовании голубых комплексов при восстановлении вольфрамовой кислоты под действием полифенолов с реагентом в щелочной среде. Фенольные соединения определяют по хлорогеновой кислоте методом пламенной фотометрии на приборе ЕКФ-2.
2. Хроматографические методы определения витаминов
В последнее время за рубежом бурное развитие переживает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Это связано, прежде всего, с появлением прецизионных жидкостных хроматографов, совершенствованием техники выполнения анализа. Широкое использование метода ВЭЖХ при определении витаминов нашло отражение и в числе публикаций. На сегодняшний день более половины всех опубликованных работ по анализу как водо- так и жирорастворимых витаминов посвящено применению этого метода.Широкое распространение при определении витаминов получили различные варианты хроматографии.
Для очистки токоферола от посторонних примесей используют метод тонкослойной хроматографии В сочетании со спектрофотометрическими и флуориметрическими методами этим способом проводят и количественное определение витамина Е. При разделении используют пластинки с силуфолом, кизельгелем
Анализ изомеров токоферола в оливковом масле проводится методом газо-жидкостной хроматографии. Методики анализа ГХ и ГЖХ требуют получения летучих производных, что крайне затруднительно при анализе жирорастворимых витаминов. По этой причине данные способы определения не получили большого распространения. Определение витамина Е в пищевых продуктах, фармпрепаратах и биологических объектах проводят в градиентном и изократическом режимах как в нормально-фазовых, так и в обращенно-фазовых условиях. В качестве адсорбентов используют силикагель (СГ), кизельгур, силасорб, ODS-Гиперсил и другие носители. Для непрерывного контроля состава элюата в жидкостной хроматографии при анализе витаминов и увеличения чувствительности определения используют УФ (А,=292 нм), спектрофотометрический (Х=295нм), флуоресцентный (Х,=280/325нм), электрохимический, ПМР- и масс-спектроскопический детекторы.
Большинство исследователей для разделения смесей всех восьми изомеров токоферолов и их ацетатов предпочитают использовать адсорбционную хроматографию. В этих случаях подвижной фазой обычно служат углеводороды, содержащие незначительные количества какого-либо простого эфира. Перечисленные методики определения витамина Е, как правило, не предусматривают предварительного омыления образцов, что существенно сокращает время выполнения анализа.
Разделение с одновременным количественным определением содержания жирорастворимых витаминов (А, Д, Е, К) при их совместном присутствии в поливитаминных препаратах проводят как на прямой, так и на обращенной фазах. При этом большинство исследователей предпочитают использовать обращенно-фазовый вариант ВЭЖХ. Метод ВЭЖХ позволяет анализировать водорастворимые витамины В1 и В2 как одновременно, так и отдельно. Для разделения витаминов используют обращенно-фазный, ион-парный и ионообменный варианты ВЭЖХ. Применяют как изократический, так и градиентный режимы хроматографирования. Предварительное отделение определяемых веществ от матрицы осуществляют путем ферментативного и кислотного гидролиза пробы.
Преимущества метода жидкостной хроматографии:
Одновременное определение нескольких компонентов
Устранение влияния мешающих компонентов
Комплекс можно быстро перестроить на выполнение других анализов.
Состав и характеристика оборудования и программного обеспечения для жидкостного хроматографа "Хромос ЖХ-301":
Таблица 1
Термин «Витамины» в переводе означает «амины жизни». Ныне таких веществ насчитывается более 30, и все они жизненно необходимы человеческому организму, входя в состав всех тканей и клеток, активизируя и определяя ход многих процессов.
Потребность в витаминах неодинакова и разнится в зависимости от возрастного периода жизни человека, заболевания, погодных условий. Повышается потребность в витаминах во время беременности, при физической и умственной нагрузках, при гиперфункции щитовидной железы, надпочечной недостаточности, стрессовых ситуациях.
Следует отметить, что гипервитаминизация, то есть повышенное поступление витаминов в организм человека, также неблагоприятна для обменных функций. Передозировка витаминов происходит в основном при использовании концентрированных препаратов. Большая часть витаминов поступает в организм человека из растений и незначительная часть – из продуктов животного происхождения. Более 20 витаминных веществ не могут быть синтезированы в организме человека, а другие синтезируются во внутренних органах, причем доминирующее значение в таких процессах имеет печень.
Поэтому мы выбираем данную тему для своего исследования.
Ведь в наше время все больше приоритетным становиться здоровье человека, здоровый образ жизни. Сейчас выпускается много различных биологических добавок (БАД), стимулирующих и лекарственных препаратов, помогающих укреплению здоровья.
Но, к сожалению, приходиться признать, что в аптечную сеть попадает и много фальсифицированной, некачественной продукции. После торговли оружием, наркотиками, фальсификация лекарственных препаратов занимает постыдное третье место. Следует отметить, что витаминные препараты и витаминные комплексы отнюдь не дешевая продукция, стоят они дорого. Интересно было узнать, что скрывается за этикетками лекарственных препаратов, продаваемых в аптеках нашего города. Провести качественный анализ всех абсолютно препаратов мы не можем, нужны определенные реактивы, средства, методики. В основу своей исследовательской деятельности мы использовали методики качественного анализа Кучеренко Н. Е. , Северина С. Е. по определению витаминов.
Гипотеза: предполагаем, что за этикетками лекарственных витаминных препаратов скрываются, не фальсифицированные витамины, а натуральные препараты, так как здоровье человека и наших амурчан – наивысшая ценность.
Объект исследования: витаминные препараты, приобретенные в аптеках города.
Цель нашей работы: провести качественный анализ витаминов, купленных в аптеках г. Амурска и Комсомольска – на – Амуре.
Соответственно теме были поставлены следующие задачи:
1. Познакомиться с характеристикой основных витаминов.
2. Провести качественный анализ препаратов.
3. Сопоставить полученные результаты с ходом исследования.
4. Сделать выводы.
Материалы и оборудование: набор витаминов, химические реактивы, методики качественного анализа Кучеренко Н. Е. , Северина С. Е. по определению витаминов.
1. Характеристика витаминов.
Чтобы человек был сильным и здоровым, ему нужны витамины. Это все мы знаем с раннего детства. Но вот что это за вещества такие – витамины, редко задумываемся. А когда о них идет речь, просто представляем себе коробочку с цветными драже или вазу с фруктами. Нужно ли человеку, далекому от медицины, знать о витаминах больше? Да, нужно – хотя бы для того, чтобы
Еще раз осознать, насколько важно разнообразное питание. Сегодня даже врачи призывают делать ставку не на аптечные витаминные препараты, а на богатые витаминами натуральными продукты (в первую очередь это овощи и фрукты, но не только). Итак, что же такое витамины, и откуда их черпать для нужд организма?
Витамины образуются путём биосинтеза в растительных клетках и тканях. Большинство из них связано с белковыми носителями. Обычно в растениях они находятся не в активной, но высокоорганизованной форме и, по данным исследований, в самой подходящей форме для использования организмом, а именно – в виде провитаминов.
Витамины обеспечивают экономичное и оптимальное использование организмом основных питательных веществ.
Недостаток витаминов вызывает тяжёлые расстройства. Скрытые формы витаминной недостаточности не имеют ярких внешних проявлений и симптомов. Часто все, на что жалуется человек,- это быстрая утомляемость, снижение работоспособности, общая слабость. Также при гиповитаминозе
Организм мене устойчив к воздействию всевозможных неблагоприятных факторов. Он дольше восстанавливает нормальные функции после перенесенных заболеваний и более подвержен разного рода осложнениям.
Все витамины делят на две большие группы: водорастворимые и жирорастворимые. К водорастворимым относятся все витамины группы B , витамины PP, H, C, P, а также в жирорастворимым – витамины A, E, K, D.
А теперь поближе познакомимся с наиболее известными витаминами.
Рибофлавин(B2)
Рибофлавин – витамин для «кожи». Он отвечает за то, чтобы кожа была здоровой, мягкой гладкой. Кроме того, этот витамин необходим глазам (например, при воспалении глаз рекомендуют принимать по 3 мг рибофлавина 3 раза в день перед едой).
Дефицит рибофлавина вызывает не только кожные болезни, но также расстройства пищеварения, хронические колиты и гастриты, заболевания нервной системы и общую слабость, приводит к снижению сопротивляемости организма инфекциям.
Пиридоксин (B6)
Этот витамин очень важен для организма, поскольку способствует лучшему усвоению ненасыщенных жирных кислот.
Кроме того, пиридоксин необходим для работы мышц: совместно с кальцием он способствует их эффективному функционированию и полноценному расслаблению. Установлено, что дефицит пиридоксина может стать фактором, провоцирующим развитие отита.
Аскорбиновая кислота (витамин С)
Этот витамин выполняет в организме множество разных функций. Без его участия не обходятся окислительно-восстановительные процессы, он повышает эластичность и прочность кровеносных сосудов, вместе с витамином А защищает организм от инфекций, блокирует токсичные вещества в крови, необходим для укрепления зубов и десен.
Кроме того, достаточное поступление аскорбиновой кислоты необходимо и для увеличения продолжительности жизни, поскольку она участвует в создании и оздоровлении соединительных тканей.
Нетрудно понять, что дефицит витамина С очень опасен. А между тем, организм не имеет возможности запастись им впрок, поэтому принимать аскорбиновую кислоту (в составе пищи и даже в виде аптечного препарата) нужно регулярно. Не бойтесь передозировки: витамин не токсичен, и избыток его легко выводится и организмов.
Никотиновая кислота (РР)
Этот витамин участвует во многих окислительных реакциях. Его недостаток, часто связанный с однообразием рациона (например, при питании исключительно зерновыми культурами), способствует развитию пеллагры.
Ретинол (витамин А)
Витамин А продлевает молодость, нормализует обмен веществ, участвует в процессе роста, предохраняет от поражений кожу и слизистые оболочки. В организме животных и человека образуется из каротина (так называемого провитамина А).
При дефиците этого витамина ухудшается зрение, изменяется состояние кожи (она становится сухой, может появиться мелкая сыпь), начинается интенсивное выпадение волос.
Кальциферол (витамин D)
Основные задачи витамина D в организме – способствовать усвоению кальция и регулировать фосфорно-кальциевый баланс. Он активно участвует в процессе образования и роста костной ткани.
Кроме того, витамин D необходим для нормальной свертываемости крови и работы сердца. Также он участвует в регуляции возбудимости нервной системы.
Несмотря на то, что витамин D содержат очень немногие продукты питания, да и то в небольшом количестве, его дефицит встречается не так уж часто. Дело в том, что организм умеет производить его самостоятельно под воздействием ультрафиолета (поэтому витамин D называют также «солнечным витамином»). Причем, для этого совсем не нужно часами загорать под палящими лучами солнца, достаточно всего лишь на несколько минут в день выбираться на улицу в светлое время суток.
Кстати, в организме светлокожих людей витамин D образуется в 2 раза быстрее, чем у людей со смуглой кожей.
Токоферол (витамин E)
Витамин Е известен как «витамин плодовитости», поскольку необходим для воспроизведения потомства. Кроме того, он обеспечивает нормальное функционирование сердечной мышцы и препятствует образованию тромбов в кровеносных сосудах.
С недавнего времени токоферол эффективно используется при лечении диабета и астмы.
Витамин Е нетоксичен, однако избыточное его содержание в организме приводит к повышению артериального давления.
Принимать токоферол следует только в сочетании с ретинолом (витамином А).
Укрепляет проницаемость стенок сосудов, снижает окисление аскорбиновой кислоты, способствует лучшей переносимости стрессовых ситуаций.
Теперь, когда мы многое узнали о том, какова роль витаминов и насколько они полезны, у нас возникает вопрос: «А откуда их можно получить?» Вопрос этот далеко не праздный. Можно потреблять аптечные синтетические витамины, но специалисты предупреждают: такие витамины усваиваются далеко не всегда. И потом, зачем прибегать к искусственным средствам, если можно получать витамины непосредственно с пищей.
2. Описание лекарственных препаратов.
Витамины – это незаменимые для организма вещества, присутствие которых имеет принципиальное значение для нормального обмена веществ и поддержания жизнедеятельности вообще. Это низкомолекулярные соединения органической природы. Большинство витаминов не синтезируется в организме человека, а потому исключительно важно их поступления с пищей. (Исключение составляет витамин D). По сравнению с основными питательными веществами, витамины должны поступать в ничтожно малых дозах. В то же время дефицит или отсутствие того или иного витамина вызывает различные заболевания и физиологические расстройства.
1. Витамин В 1 (тиамин)
а) с диазореактивом
Принцип метода. Сначала образуется диазобензолсульфат (диазобензолсульфокислота):
Раствор тиамина при добавлении диазобензолсульфата и щелочи дает окрашенное соединение.
Ход работы. В пробирку последовательно добавляют:
б) окисления в тиохром
Принцип метода. При действии K 3 Fe(CN) 6 в щелочной среде тиамин окисляется в желтый тиохром, обладающий голубой флуоресценцией в УФ-свете.
Ход работы. 10 мг порошка тиаминбромида или тиаминхлорида растворяют в 5 мл воды, прибавляют 1мл 5%-го раствора железосинеродистого калия K 3 Fe(CN) 6 (феррицианид калия) и 1 мл 10%-го раствора едкого натра, и перемешивают. Половину получившегося объема нагревают и наблюдают окрашивание в желтый цвет в результате превращения тиамина в тиохром. К другой половине добавляют 3 мл бутилового или изоамилового спирта, хорошо встряхивают и оставляют на несколько минут. Верхний, спиртовой слой дозатором отбирают в емкость из нефлуоресцирующего стекла и рассматривают в УФ-свете (можно – в лучах ртутно-кварцевой лампы в темном посещении). Хорошо заметна голубая флуоресценция.
в) снять спектр поглощения (модуль “спектральный”, диапазон от 350 до 220нм) и наблюдать максимум при λ=250-260 нм. График сохранить, перевести в Paint, затем вставить в файл “Графики” (документ Word), подписать и вклеить в отчет. ВНИМАНИЕ! Спектры всех витаминов сниматьодновременно
, чтобы включать и прогревать спектрофотометр только один раз. 
УФ-спектр тиамина гидрохлорида (8 мкг/мл) в растворе HCl 0,9%. Максимум при 246 нм.
2. Витамин В 2 (рибофлавин)
а) с металлическим цинком
Принцип метода. Рибофлавин восстанавливается выделяющимся водородом в бесцветный лейкофлавин. Наблюдается изменение окраски из желтой в зеленоватую, позже в малиновую, розовую, а затем – цвет исчезает.
Ход работы. В пробирку наливают 1мл взвеси рибофлавина в воде (0,015 - 0,025% раствор), добавляют 10 капель концентрированной HCl и опускают кусочек металическо-го цинка. Начинается бурное выделение пузырьков водорода, и жидкость постепенно окрашивается в розовый или красный цвет, затем окраска жидкости начинает бледнеть и обесцвечиваться (обратное окисление лейкофлавина в рибофлавин).
б) с азотнокислым серебром
Принцип метода. Нейтральные или слабокислые растворы рибофлавина (рН 6,5-7,2), реагируя с AgNO 3 , дают соединение розово-красных тонов. Интенсивность окраски зависит от концентрации витамина.
Ход работы. К 1 мл р-ра рибофлавина (0,015 - 0,025%) добавляют 0,5 мл р-ра AgNO 3 (0,1%). Появляется розовое окрашивание.
в) флуоресценция в УФ + ее тушение после добавления SnCl 2 +Na 2 S 2 O 4 , которые тушат флуоресценцию самого витамина, но не примесей. Флуоресценция рибофлавина максимальна при рН 3,5-7,5. Снять спектр в растворе ацетата натрия.
УФ-спектр рибофлавина (35 мкг/мл) в растворе ацетата натрия CH 3 COONa
0,01%. Максимум при 266,5 нм. Дополнительные пики при 223,0 нм, 373,5 нм и 444,5 нм.
3. Витамин В 5 (РР, никотиновая кислота)
а) с ацетатом меди
Принцип метода. При нагревании никотиновой кислоты с уксуснокислой медью образуется осадок медной соли никотиновой кислоты.
Ход работы. 5-10 мг никотиновой кислоты растворяют при нагревании в 10-20 каплях 10%-го раствора уксусной кислоты (или готовят 0,75% р-р никотиновой кислоты в горячей воде, а затем к 2 мл этого р-ра добавляют 1 мл 15%-ного р-ра уксусной к-ты). К нагретому до начала кипения раствору добавить равный объем 5%-го раствора уксуснокислой меди. Жидкость становится голубоватой мутной, а при стоянии и охлаждении выпадает осадок никотината меди синего цвета.
б) на запах пиридина
Принцип метода. При нагревании никотиновой кислоты с безводным Na 2 CO 3 ощущается неприятный запах пиридина.
Ход работы. В небольшом сухом фарфоровом тигле смешивают 0,05 г никотиновой к-ты с 0,1-0,15 г безводного углекислого натрия и подогревают. Появляется резкий запах пиридина.
4. Витамин В 6 (пиридоксин)
а) с хлорным железом
Принцип метода. Витамин В 6 образует с хлорным железом комплекс кроваво-красного цвета.
Ход работы. 4 мл 0,5-1% р-ра пиридоксина + 0,5мл 1%-ного FeCl 3 → встряхнуть и наблюдать красный цвет.
б) ДОПОЛНИТЕЛЬНО –
в) снять спектр в 0,1М NaOH (наблюдать максимумы при λ=245 и 308 нм) или воде (см.рис).
УФ-спектр пиридоксина гидрохлорида (15мкг/мл) в воде (рН≈6,0). Максимум при 291 нм.
5. Витамин В 12 – оформить в отчете, на практике не делаем в связи с высокой токсичностью действующего реактива.
Витамин В 12 реагирует с цианидом при рН=10 с образованием пурпурного дицианкобаламина, так как Со окисляется до 3х-валентного и 5’-дезоксиаденозин замещается на анион CN.
6. Витамин Р (на примере рутина)
К веществам Р-витаминного действия относится ряд соединений фенольной природы, основное физиологическое действие которых – уменьшение проницаемости и повышение прочности капилляров. Они способствуют усвояемости вит.С в организме человека и животных, активно участвуют в окислительно-восстановительных процессах, обладают антиокислительными свойствами, залерживая, среди прочего, и окисление адреналина. Они также инактивируют фермент гиалуронидазу, тем самым тормозя распад гиалуроновой кислоты – гетерополисахарида в основном веществе соединительных тканей. Вит. Р угнетают активность холинэстеразы, сукцинатдегидрогеназы и ряда других ферментов.
Витаминными свойствами обладает ряд флавонолов (рутин, кверцетин), флаванонов, катехинов, кумаринов, галловая кислота и ее производные, антоцианы (красящие вещества из плодов, ягод, цветков).
Многие вещества Р-витаминного действия – это гликозиды флавонолов и флаванонов или агликоны (неуглеводные компоненты гликозидов). Например, рутин – это гликозид, в котором к дисахариду рутинозе присоединен агликон фенольного строения флавонол кверцетин.
а) с хлорным железом
б) с серной кислотой
Принцип: Конц серная к-та образует с флавонами (рутином) оксониевые соли, обладающие в растворе желтой окраской. Флаваноны (например, гесперидин) дают с серной к-той малиновое окрашивание.
7. Витамин С
а) качественно - с K 3 Fe(CN) 6
Принцип метода: восстановление феррицианида калия витамином С с изменением окраски до синей из-за образования берлинской лазури.
Ход работы. В двух пробирках смешивают 5 капель 5%-го раствора К 3 Fe(CN) 6 c 5 каплями 1%-го раствора FeCl 3 . В одну из пробирок к зеленовато-бурой жидкости прибавляют 20 капель 1%-го раствора аскорбиновой кислоты или сока капусты, а в другую - столько же дистиллированной воды. Жидкость в первой пробирке приобретает зеленовато-синюю окраску, выпадает синий осадок берлинской лазури; во второй пробирке (контроль) зеленовато-бурая окраска жидкости остается без изменения.
