Библиотека Дерматология Что такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследований

Что такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследований

Мазки-отпечатки - это метод цитологического исследования, применяемый с диагностической целью. Особенно ценным этот метод может оказаться при диагностике пузырчатки, злокачественных новообразований.

Мазки-отпечатки берут со дна эрозий, язв или свежих пузырей после удаления покрышки. При наличии фибринозного налета или корок на поверхности язв и эрозий, последние удаляют тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором или дистиллированной водой.

На очищенную эрозивно-язвенную поверхность легко прижимают кусочек стерильной резинки, на котором остаются клеточные элементы, в том числе дегенерирующие, эпителиальные и аконтолитические клетки. Материал на кусочке резинки переносят на обезжиренное предметное стекло (по 4-6 отпечатков на каждые 3-4 стекла), фиксируют метиловым спиртом и высушивают при комнатной температуре. Окраска производится по методу Романовского-Гимзы. Препарат исследуется под микроскопом - сначала с малым увеличением, а затем под иммерсией.

Ред. проф. В.С. Маята

«Что такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследований» раздел

Задание 1 . Цитологический анализ гнойного экссудата.

Оснащение : предметные стекла, микроскопы; стерильные ватные тампоны; термостат; спирт-ректификат (65 мл); спирт метиловый абсолютный (65 мл); краска Романовского-Гимзы (120 мл); иммерсионное масло (6 мл); подопытные животные с гнойной раной.

Постановка опыта . Цитологическую картину воспалительного экссудата изучают при получении раневых отпечатков по М. П. Покровской и М. С. Макарову. В хирургической клинике заранее подбирают больное животное с раневой поверхностью, покрытой гнойным экссудатом.

Обычным способом, так же как и для гематологических исследований, подготавливают предметные стекла. Во время проведения лабораторных занятий хорошо вымытые и обезжиренные предметные стекла опускают в спирт (96%-ный), затем вынимают, остатки спирта поджигают. После охлаждения стекло готово к использованию для приготовления раневых отпечатков. При большом количестве гноя, покрывающего рану, его удаляют с помощью стерильных влажных ватных тампончиков. После этого поверхность стекла, отступив 1 см от узкого края, прикладывают к воспаленной ткани. Передвигая стекло, последовательно наносят несколько мазков-отпечатков. На стекле остаются тканевые клетки, клетки экссудата и микроорганизмы. При получении мазков не следует проводить стеклом по поверхности раны и тем самым предупреждать возможность повреждения клеточных элементов экссудата. Чтобы не исказить картины взаиморасположения фагоцитов и микроорганизмов, иногда располагающихся гнездами, нужно слегка прикоснуться стеклом к избранному участку раны и тотчас же отнять его в положении, строго перпендикулярном к раневой поверхности. Для полноты характеристики раневого процесса отпечатки лучше делать с разных участков очага повреждения, например от центра к периферии.

Полученные раневые мазки-отпечатки сушат, затем фиксируют в течение 5 мин метиловым спиртом (этиловым спиртом в равной смеси с этиловым эфиром в течение 15 мин). Фиксированные и высушенные в термостате или на воздухе препараты окрашивают по методу Романовского-Гимзы.

При микроскопировании окрашенных мазков-отпечатков обращают внимание на наличие нейтрофилов разной степени зрелости, микро — и макрофагов, фагоцитирующих возбудителей воспалительного процесса. Устанавливают активность фагоцитов в разных участках раны.

По цитограммам раневых отпечатков можно определить активность защитных и регенераторных реакций организма, степень бактериальной обсемененности и патогенности микроорганизмов, инфицирующих рану. Перечисленные факторы обусловливают динамику заживления ран. Обнаружение полиморфно-ядерных нейтрофильных лейкоцитов, активно фагоцитирующих возбудителей инфекционного процесса, свидетельствует о высокой активности фагоцитарной реакции. В более позднем периоде заживления раны хорошим признаком считается выявление большого числа макрофагов - моноцитарных клеток.

Оформление протокола опыта . Записывают методику приготовления мазков-отпечатков. Отмечают результаты цитологического анализа испытуемого экссудата, обсуждают их и делают выводы.

Вопросы для контроля знаний:

1. Воспаление. Определение понятия. 2. Этиологические факторы, вызывающие воспаление. 3. Внешние признаки воспаления и их характеристика. 4. Расстройства кровообращения и микроциркуляции в зоне воспаления. 5. Характеристика нарушений обмена веществ в очаге воспаления. 6. Роль биологически активных веществ в патогенезе воспаления. 7. Классификация воспалений. 8. Виды экссудата. 9. Виды гнойного воспаления. 10. Эмиграция лейкоцитов при воспалении, основные теории, объясняющие это явление. 11. Учение о фагоцитозе. Завершенный и незавершенный фагоцитоз. 12. Свойства экссудата. 13. Классификация воспалений по преобладанию альтерации, экссудации и пролиферации. 14.Воспаление как реакция целостного организма на повреждение. 15. Патогенез воспаления. Характеристика стадий альтерации, экссудации и пролиферации. 16. Исходы воспаления. 17. Биологическая роль воспаления. 18. Особенности течения воспаления у основных видов сельскохозяйственных животных (лошадей, крупного рогатого скота, свиней и птиц).

Мазок-отпечаток может быть использован для диагностики инфекционных поражений половых органов. Они назначаются при подозрении на специфические или неспецифические инфекции.

Большинство инфекционных процессов мочеполовой системы локализованы в уретре. Поэтому врач берет соскоб из мочеиспускательного канала и проверяет его теми или иными методами ( , ПЦР, бак посев). Но не для всех инфекций основной зоной поражения становится уретра.

Венерические заболевания, при которых входными воротами может быть слизистая оболочка половых органов:

сифилис;
генитальный герпес.

Кроме того, при тяжелом течении герпеса с образованием изъязвлений может быть взят мазок-отпечаток. Он позволяет отдифференцировать эту инфекцию от других патологий: аутоиммунных, онкологических и других патологий.

Мазок-отпечаток головки члена

Неспецифические инфекционные процессы тоже могут быть поводом для назначения исследования.

Мазок-отпечаток головки берется при баланите или баланопостите. Это воспаление головки члена и крайней плоти.

Мазок-отпечаток окрашивают и изучают под микроскопом. Таким способом можно обнаружить некоторых патогенов: кокковую флору, кишечную палочку, грибки рода кандида.

При подозрении на герпетическое происхождение баланопостита из образовавшихся везикул могут быть взяты мазки-отпечатки. Их исследуют с целью выявления клеток Тцанка. Это гигантские многоядерные клетки, образующиеся при генитальном герпесе.

Проведение исследования возможно только при везикулярной форме инфекции.

Мазок-отпечаток для цитологического исследования

Цитологическое исследование предполагает определение в клиническом материале атипичных клеток, указывающих на рак. Для этого используется клинический материал, полученный непосредственно из очага онкологического процесса.

Врач может взять мазок-отпечаток с опухоли половых органов или кожи. Он исследуется под микроскопом.

Цель диагностики: морфологическая оценка клеточного состава. Проводится определение количества ядер, размера и формы клеток, ядро-цитоплазматического соотношения и других критериев. Основное показание к проведению цитологического исследования – это подозрение на рак.

Но диагностика также позволяет выявить и другие, неопухолевые патологические процессы.

Подготовка к исследованию мазка отпечатка

Подготовка к взятию мазка зависит от цели диагностики. Если есть подозрение на инфекционные процессы, обычно врач требует не использовать антисептики и антибактериальные препараты. Они могут уменьшить концентрацию возбудителя в клиническом материале, что приведет к ложноотрицательному результату исследования.

Место, откуда будет браться мазок, не следует мыть. Если это необходимо, не нужно использовать мыло и другие средства гигиены.

Непосредственно перед взятием мазка-отпечатка может потребоваться удаление фибринозных налетов, вскрытие везикул или других морфологических элементов кожи. Как изучают мазок-отпечаток на наличие бактерий?

Мазок-отпечаток из половых органов изучают под микроскопом.

На обезжиренное предметное стекло помещается клинический материал. Высушивают его при комнатной температуре.

Фиксация препарата проводится разными методами, например:

жаром (наименее эффективный метод);
спиртом с формалином;
95% этиловым спиртом;
метиловым спиртом;
парами уксусной кислоты и формалина;
сулемовым спиртом и др.

В разных лабораториях применяются разные методики.

Разработаны специальные растворы для фиксации, представляющие собой смеси нескольких химических соединений. Чем более качественный раствор, тем лучше удается сохранить структуру и расположение всех клеток в мазке, включая бактериальные клетки. После фиксации проводится окрашивание. Для этого используются разные методы, в зависимости от цели исследования.

Окраска бывает ориентировочной и дифференциальной. Среди дифференциальных окрасок чаще окрашивают по Грамму.

Где сдать анализы?

При необходимости проведения исследований обращайтесь в нашу клинику. У нас доступны все современные методы диагностики патологических процессов. Применяются анализы на инфекции и цитологию.

Мазок-отпечаток возьмет опытный специалист с соблюдением всех правил асептики и антисептики, чтобы не занести инфекцию.

Медицинский работник сделает все возможное, чтобы процедура доставила минимум дискомфорта. Анализы будут проведены в кратчайшие сроки. После их выполнения вы получите консультацию опытного дерматолога, венеролога или другого специалиста.

Если вам необходимо безболезненно сдать мазок отпечаток, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с 15 летним опытом работы.

Для работы необходимо иметь чистые и обезжиренные предметные и покровные стекла. Новые стекла кипятят 15-20 мин в 2-5% растворе соды или мыльной воде, споласкивают водой и помещают в слабую хлороводородную кислоту, затем тщательно промывают водой.

Стекла, бывшие в употреблении и загрязненные красителями или иммерсионным маслом, можно обработать двумя способами: 1) погрузить на 2 ч в концентрированную серную кислоту или хромовую смесь, а затем тщательно промыть; 2) кипятить 30-40 мин в 5% растворе соды или щелочи. Необработанные стекла можно обезжирить, натерев их мылом, а затем очистить от него сухой тканью.

Внимание! Если стекло хорошо обезжирено, то капля воды растекается на нем равномерно, не распадаясь на мелкие капли.

Хранят стекла в сосудах с притертыми пробками в смеси Никифорова (равные объемы спирта и эфира) или в 96% спирте. Из растворов стекла извлекают пинцетом.

Внимание! При работе стекла держат пальцами за грани.

Материал для исследования наносят на предметное стекло бактериальной петлей, иглой или пастеровской пипеткой. Чаще всего применяют бактериальную петлю (рис. 7), сделанную из платиновой или нихромовой нити длиной 5-6 см. Петлю закрепляют в петледержателе или впаивают в стеклянную палочку. Конец проволоки сгибают в виде кольца размером 1×1,5 или 2×3 мкм.

Рис. 7. Игла и петли для посева. 1 - игла; бактериальные петли: 2, 3 - петли приготовлены неправильно; 4 - петля приготовлена правильно

Внимание! Правильно приготовленная петля при погружении в воду и извлечении оттуда сохраняет водную пленку.

Перед приготовлением мазка рабочую часть петли прожигают в пламени горелки в вертикальном положении: сначала саму петлю, а затем металлический стержень. Эту манипуляцию проводят и после окончания посева.

Приготовление мазка из культуры, выращенной на жидкой питательной среде . Обезжиренное предметное стекло прожигают в пламени горелки и охлаждают. На предметное стекло, помещенное на подставку (чашку Петри, штатив), наносят культуру. Пробирку с культурой держат большим и указательным пальцами левой руки. Петлю держат в правой руке. Не выпуская петли, мизинцем правой руки прижимают пробку к ладони и осторожно вынимают ее из пробирки. Движения должны быть плавными и спокойными. Горло пробирки обжигают в пламени горелки. Вводят петлю в пробирку. Охлаждают петлю о стенку пробирки и затем погружают ее в культуру. Вынимают петлю, не касаясь ею стенок пробирки. Закрывают пробку, предварительно проведя ее через пламя горелки. Ставят пробирку в штатив. Петлей наносят культуру на предметное стекло, круговыми движениями равномерно распределяя ее. Затем петлю прожигают в пламени горелки. Мазок оставляют для высыхания.

Внимание! Мазок должен быть равномерно растертым, тонким и небольшим (с двухкопеечную монету).

Приготовление мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде . На подготовленное предметное стекло наносят пастеровской пипеткой или петлей каплю изотонического раствора натрия хлорида (0,9%). Культуру осторожно снимают петлей с агара в пробирке или чашке Петри и эмульгируют в капле на стекле. Приготовленный мазок должен быть равномерным и не густым. При его высыхании на предметном стекле остается слабый налет.

Приготовление мазка из гноя или мокроты . Материал забирают стерильной пипеткой или петлей и наносят на середину предметного стекла. Вторым предметным стеклом покрывают первое так, чтобы свободными остались треть первого и второго стекол. Стекла с усилием раздвигают в стороны. Получают два больших мазка.

Приготовление мазка из крови . Каплю крови наносят на предметное стекло на расстоянии одной трети от левого края. Затем краем специально отшлифованного стекла, наклонив его под углом 45°, прикасаются к капле крови. Прижимая отшлифованное стекло к предметному продвигают его вперед. Правильно приготовленный мазок имеет желтоватый цвет и просвечивает.

Приготовление мазков-отпечатков из внутренних органов трупов и пищевых продуктов твердой консистенции . Поверхность органа или пищевого продукта прижигают раскаленным скальпелем и из этого участка вырезают кусочек материала. Пинцетом осторожно захватывают этот кусочек и поверхностью среза прикасаются к предметному стеклу в двух - трех местах, делая ряд мазков-отпечатков.

Высушивание мазка

Мазок высушивают на воздухе при комнатной температуре. В случае необходимости его можно высушить около пламени горелки, держа стекло в горизонтальном положении за края большим и указательным пальцами мазком вверх.

Внимание! При высокой температуре может произойти нарушение структуры клеток.

Фиксация мазка

Мазки фиксируют после полного высыхания с целью: 1) закрепить микроорганизмы на стекле; 2) обезвредить материал; 3) убитые микроорганизмы лучше воспринимают окраску. Фиксированный мазок называется препаратом.

Способы фиксации. 1. Физический - в пламени горелки: стекло берут пинцетом или большим и указательным пальцами и троекратно проводят через верхнюю часть пламени горелки в течение 6 с.

2. Химический - в жидкости: клеточные элементы в мазках из крови и мазках-отпечатках при действии высоких температур разрушаются, поэтому их обрабатывают одной из фиксирующих жидкостей: а) метиловым спиртом- 5 мин; б) этиловым спиртом - 10 мин; в) смесью Никифорова - 10-15 мин; г) ацетоном - 5 мин; д) парами кислоты и формалина - несколько секунд.

Окраска препаратов

После фиксации приступают к окраске препарата.

Окраску препаратов производят на специально оборудованном столе, покрытом линолеумом, пластиком, стеклом и т. д. На столе необходимы сосуд с дистиллированной водой; подставка из двух трубочек или палочек, соединенных резиновыми трубками с обеих сторон (для размещения препаратов); пинцеты, цилиндры, пипетки, фильтровальная бумага, набор красителей, емкость для их слива. Стол для окраски должен находиться рядом с водопроводным краном.

Отношение микроорганизмов к красителям называется их тинкториальными свойствами. В микробиологии широко используют анилиновые красители. Большинство микроорганизмов лучше воспринимает основные красители.

Наиболее употребительны следующие красители: красные (фуксин основной, фуксин кислый, конго красный, нейтральный красный); синие (метиленовый и толуидиновый); фиолетовые (генциановый, метиловый, кристаллический); коричнево-желтые (везувин, хризоидин); зеленые (бриллиантовый, малахитовый).

Все красители выпускают в виде аморфных или кристаллических порошков. Из них готовят насыщенные спиртовые и феноловые растворы, а затем для работы используют водно-спиртовые или водно-феноловые растворы красителей. Если при окраске используют концентрированные растворы красителей, то препарат предварительно накрывают фильтровальной бумагой, на которую наносят краситель. При этом кусочки красителя остаются на бумаге.

Внимание! Каплю красителя наносят пипеткой так, чтобы он покрыл весь препарат.

Рецепты красителей

1. Насыщенные спиртовые растворы (исходные):

Красителя - 1 г спирта 96% - 10 мл

Смесь помещают в термостат до полного растворения на несколько дней. Взбалтывают ежедневно. Хранят в склянках с притертыми пробками.

2. Карболовый фуксин Циля (для окраски кислотоустойчивых микроорганизмов, спор и капсул):

Насыщенного спиртового раствора основного фуксина - 10 мл раствора карболовой кислоты 5% - 90 мл

Внимание! Карболовую кислоту вливают в краситель, а не наоборот.

Смесь в течение нескольких минут энергично встряхивают, фильтруют и сливают во флакон для хранения.

3. Фуксин Пфейффера (для окраски по Граму и для простого метода окраски):

Фуксина Циля - 1 мл воды дистиллированной - 9 мл

Краситель готовят непосредственно перед применением.

4. Карболовый генциановый фиолетовый (для окраски по Граму):

насыщенного спиртового раствора

генцианового фиолетового - 10 мл

карболовой кислоты 5% - 100 мл

Растворы смешивают и фильтруют через бумажный фильтр.

5. Раствор Люголя (для окраски по Граму и реактив на крахмал):

Йодида калия - 2 г кристаллического йода - 1 г дистиллированной воды - 10 мл

Смесь помещают в бутыль матового стекла, хорошо закупоривают и ставят на сутки в термостат, затем добавляют 300 мл дистиллированной воды.

6. Щелочной раствор метиленового синего Леффлера:

Насыщенного спиртового раствора метиленового синего - 30 мл раствора гидроксида калия 1% - 1 мл дистиллированной воды - 100 мл

7. Бумажки по Синеву (для окраски по Граму):

1% спиртовой раствор кристаллического фиолетового

Полоски фильтровальной бумаги пропитывают раствором и высушивают.

Методы окраски делят на ориентировочные (простые) и дифференциальные (сложные), выявляющие химические и структурные особенности бактериальной клетки.

Автор (ы): Ян Рыбничек, MVDr, Diplomate European College of Veterinary Dermatology
Организация(и): Dermatology and Dermatopathology Service, Czech Republic
Журнал: №2 - 2013

Большинство болезней кожи имеют сходную клиническую картину, однако можно выделить девять основных групп характерных дерматологических нарушений:

– алопеция

– образование чешуек/корок/себорея

– макулы/папулы/вскрывающиеся пустулы

– узлы/опухоли

– изменения пигментации

Как только врач-клиницист начнет относить каждого пациента к какой-либо из перечисленных выше категорий, ему станет намного проще формировать список дифференциальных диагнозов и разрабатывать диагностический план. Необходимо помнить, что у пациента могут быть сопутствующие болезни в настоящий момент времени, которые затрудняют постановку основного диагноза.

Быстрая постановка диагноза часто представляет значительные трудности для практикующего врача, поэтому далее речь пойдёт о доступных методах лабораторного исследования, требующих минимальных затрат времени и средств. Наиболее простые и быстрые диагностические тесты, используемые на практике:

– Соскобы кожи

– Трихоскопия

– Вычёсывание гребнем или щёткой

– Скотч-тест

– Исследование на дерматофиты

– Цитология кожи

Кожные соскобы

Данное исследование должно проводиться во всех случаях! Для проведения кожных соскобов необходимо следующее оборудование и материалы: минеральное масло, предметные стёкла, лезвие скальпеля или шпатель (кюретка), микроскоп.

Исследование в лучах лампы Вуда – крайне неспецифично, однако при выявлении флюоресценции, пораженные волоски выщипываются и подвергаются дальнейшему исследованию (микроскопии после обработки препарата раствором щёлочи, посев для выявления культуры дерматофитов). На предметное стекло наносят 10% раствор КОН, размещают удалённую шерсть, нагревают над пламенем, проводят микроскопию, предварительно накрыв покровным стеклом, сначала под малым увеличением (объектив 10х), затем под большим (объектив 40х). Для лучшей визуализации можно использовать окраску хлорлактофенолом.

Скотч-тест

Для получения материала для цитологии необходимо коротко подстричь шерсть с выбранного участка, плотно прижать полоску скотча, затем её поочерёдно опускают в растворы красителей, приклеивают на предметное стекло и проводят микроскопию. Этим методом легко выявляются дрожжевые грибы рода Malassezia в форме «матрёшки», бактерии рода Simonsiella (свидетельствует о попадании слюны при вылизывании) и др.

Трихоскопия

При микроскопии обращают внимание на структуру и пигментацию стержней волос, осматривают кончики волос, оценивают трихограмму (соотношение волос в разных фазах цикла фолликула: анаген/телоген). Анаген – стадия роста, корень удалённого волоса мягкий, приобретают округлую форму («ручки от зонта»). Катаген – промежуточная стадия, рост волоса прекращается, корень имеет форму кисти, окруженной стекловидной оболочкой. Телоген – стадия покоя волосяного фолликула, корень волоса теряет пигмент, сужается к концу в форме «художественной кисти», приобретает вид «копья». Различают первичные и вторичные волосы (в норме). Утрата первичных волос может быть одним из диагностических критериев при некоторых алопециях (например, при алопеции Х). Стержни первичных волос большего диаметра, мозговое вещество всегда толще коркового. Вторичные волосы меньшего диаметра, часто волнистые, мозговое вещество тоньше коркового.

Строгих норм для трихограммы не существует, однако есть наблюдения, описывающие соотношение анаген/телоген 1:9 зимой и 1:1 летом у некоторых собак. Существуют породные особенности - у собак с постоянно отрастающей шерстью (например, пудели) преобладают фолликулы в стадии анагена независимо от времени года, а у собак северных пород может наблюдаться выраженная телогенизация луковиц.

Наличие всех 100% волос в стадии телогена в большинстве случаев не является нормой, может быть обусловлено неправильным взятием пробы, гормональными нарушениями, алопецией Х, телогеновой алопецией. Гормональные факторы оказывают влияние на цикл волосяного фолликула и сопровождаются телогенизацией, из-за задержки в цикле волосяного фолликула волосы постепенно подвергаются процессу старения (чёрная шерсть приобретает красноватый оттенок, рыжая – обесцвечивается, кончики могут расщепляться). Первичный волос исчезает, задержавшийся подшерсток имеет вид щенячьей шерсти. Эндокринными причинами таких алопеций могут быть гипотиреоз, гиперэстрогенизм, гиперкортицизм. Неэндокринной причиной является синхронизация всех волос в телогене, вызванная тяжёлой болезнью или стрессом. Как только волос возобновляет свой рост, через 1-2 месяца наступает ремиссия. Алопеция Х является болезнью с невыясненной до конца этиологией.

Структурные нарушения корней волос возникают вследствие фолликулярной дистрофии или дисплазии. В редких случаях это может быть связано с повреждением гранулами пигмента. Также корни волос повреждаются при очаговой алопеции и воздействии цитотоксических лекарств (редко).

Обращают внимание на кончики волос: в норме они имеют заострённую форму, а при алопеции вследствие вылизывания наблюдаются признаки травматизации кончиков волос (они могут быть обломанными). Кончики волос могут повреждаться из-за повышенной хрупкости, вызванной структурными изменениями. Например, отмечено появление раздвоенных кончиков волос при трихофитозе у гольден-ретриверов. Патологические изменения кончиков волос могут быть следствием чрезвычайно агрессивного мытья и расчёсывания шерсти, а также механического повреждения в местах повышенного трения.

При оценке стержня волоса можно обнаружить споры дерматофитов. При правильном выполнении трихоскопия даёт положительный результат в 60-70% случаев дерматофитоза. Предпочтительнее исследовать волосы, флюоресцирующие в лучах лампы Вуда. Структура стержня волоса нарушается не только при дерматофитозе, но и в ряде других случаев, например, химиотерапии (редко), механической и химической травме (агрессивный уход), недостатке питательных веществ, наследственных болезнях (узловой трихорексис и др.). Характерные изменения структуры стержня волоса наблюдаются при медуллярной трихомаляции немецких овчарок, проявляющейся у взрослых собак. Шерсть выглядит подстриженной на теле, хвосте, плече-лопаточной области. При трихоскопии в стержнях волос наблюдаются продольные трещины, разрывы. Характерные изменения отмечаются при алопециях, связанных с нарушением продукции меланина – алопеции «ослабленного» окраса и фолликулярной дисплазии чёрных волос. «Обесцвечивающей алопеции» подвержены собаки с голубым и светло-коричневым окрасами. При данной болезни в волосе с ослабленным цветом обнаруживаются крупные гранулы пигмента, которые вызывают повышенную ломкость волоса, что приводит к алопеции. Фолликулярная дисплазия чёрных волос наблюдается у двух- и трёхцветных собак, при этом поражаются только фолликулы чёрных волос. Щенки рождаются нормальными, но впоследствии зоны тёмных волос постепенно подвергаются алопеции. При трихоскопии выявляются аномальные глыбки меланина в стержне волоса.

При трихоскопии можно легко обнаружить агрегаты кератина в виде слепков волосяных фолликулов на стержне волос. Они возникают вследствие дефектов кератинизации (первичная себорея кокер-спаниелей, дерматоз при недостатке витамина А, аденит сальных желёз, лейшманиоз, демодекоз), а также при других фолликулярных болезнях, например, бактериальном фолликулите.

Цитология кожи

Цитология кожи – быстрый, неинвазивный метод, имеющий большую диагностическую ценность. Данный вид исследования особенно ценен для диагностики нодулярных, экссудативных, гнойничковых поражений, при образовании корок и себорее, а также при отитах. При нодулярных поражениях предпочтительнее получение материала путём тонкоигольной аспирации при помощи шприца объёмом 10 мл с иглами 21G, 24G. При мокнущих поражениях можно проводить исследование мазков-отпечатков. Также цитологическому исследованию подвергают скотч-препараты, и, конечно, глубокие соскобы. Препараты высушивают на воздухе, можно использовать фиксацию метанолом. Я использую модифицированный краситель Райта (Diff-Qick), в лабораториях также проводят окраску специальными красителями, иммуноцитохимию. Просмотр препаратов проводят последовательно с использованием объективов 4х, 10х, 40х, 100х (с иммерсионным маслом).

В соскобе с нормальной кожи преобладают корнеоциты, присутствуют также другие кератиноциты, единичные фибробласты. При цитологическом исследовании материала с воспалённых участков обращают внимание на следующие клетки:

– Нейтрофилы (дегенеративные и недегенеративные);

– Макрофаги;

– Лимфоциты/плазматические клетки;

– Эозинофилы и тучные клетки;

– Акантолитические клетки (округлённые кератиноциты, лишённые отростков);

– Неопластические клетки.

Также можно обнаружить микроорганизмы (палочки, кокки, малассезию, другие грибы, лейшмании и др.).

Я использую следующие основные критерии цитологической дифференциальной диагностики:

– Бактерии и эпителиальные клетки – бактериальный перерост;

– Дегенеративные нейтрофилы и бактерии – пиодермия;

– Недегенеративные нейтрофилы в большом количестве + акантолитические клетки – листовидная пузырчатка, эритематозная пузырчатка и др. (дополнительно + гистопатология);

– Нейтрофилы + макрофаги – пиогранулёма/гранулёма (грибковая, атипичная бактериальная инфекция);

– Лимфоциты, плазматические клетки – хроническое воспаление, плазмацитарный пододерматит, лимфома (дополнительно + лимфобласты);

– Malassezia sp. и эпителиальные клетки – малассезиозный дерматит.

При оценке морфологии клеток принято оценивать следующие признаки злокачественности:

– Цитоплазматические критерии (анизоцитоз, макроцитоз, разная интенсивность окраски (степень базофилии), атипичные включения /вакуолизация, отсутствие специфичных гранул, большое ядерно-цитоплазматическое соотношение, а также наличие в препарате клеток, значительно различающихся по этому параметру);

– Ядерные критерии (анизокариоз, макрокариоз, изменение формы ядер, разреженный хроматин или гиперхромазия, анизохромазия, высокий митотический индекс, неправильные митозы, множественные ядрышки, гигантские ядрышки, патологическая форма ядрышек).

При исследовании цитологических препаратов нодулярных поражений надо ответить на следующие вопросы:

– Воспаление/опухоль;

– Неоплазия – доброкачественная/злокачественная;

– Источник неоплазии;

– Происхождение ткани: эпителиальные, мезенхимальные, гемопоэтические (круглоклеточные) опухоли.

Наиболее частыми цитологическими дифференциальными диагнозами опухолевых поражений кожи в практике являются:

– Эпителиальные опухоли (кератоакантома, плоскоклеточный рак и другие);

– Мезенхимальные опухоли (фибросаркома, меланома и др.);

– Круглоклеточные опухоли (мастоцитома, гистиоцитома, лимфома);

В связи с ростом доступности гистопатологии в последние годы значительно выросла возможность диагностики различных дерматологических патологий. Несмотря на это, пока достаточно редко прибегают к взятию гистобиоптатов ввиду возможности получения малоинформативных результатов. Поэтому дальнейшая информация посвящается оценке необходимости взятия гистобиопсии кожи, правильному выбору участка кожи для гистологического исследования, корректному забору образца, выбору патогистолога и интерпретации гистологического заключения. Только при соблюдении всех этих условий, можно получить точный диагноз.

1) Гистобиопсия обычно не применяется для диагностики у собак с хроническим зудом. В большинстве случаев, результаты биопсии не дадут той информации, которую может получить специалист-дерматолог при клиническом обследовании.

2) Гистобиопсия кожи может быть полезна в следующих случаях:

– Алопеция, когда не удается поставить диагноз с использованием «быстрых» методов диагностики (т.е трихоскопии, кожных соскобов, цитологии…)

– Шелушение, когда не удается поставить диагноз с использованием «быстрых» тестов

– Пятна, папулы, вскрывающиеся пустулы, когда не удается поставить диагноз с использованием «быстрых» тестов

– Незаживающие эрозии, язвы, свищи

– Длительно существующие узлы, уплотнения, опухоли

– Депигментация и необычная гиперпигментация

– Подозрение на аутоиммунные болезни

– Подозрение на болезни кожи, при которых подтверждение диагноза возможно только гистологически (например, аденит сальных желёз)

– Случаи, когда подозревается опасный для жизни диагноз (дерматомиозит и др.)

– Случаи, когда отсутствует ответ на вполне рациональное лечение

Как получить качественные гистобиоптаты кожи

Чтобы получить понятный правильный гистологический диагноз, следует выполнять следующие действия:

1) Выбор участка для биопсии

Необходимо представить патологу соответствующие образцы, поэтому клиницист должен уделить внимание выбору нужного участка кожи. В большинстве случаев, для более вероятного получения правильного диагноза необходимо взять как минимум 3-5 образцов кожи от одного пациента. Выбор места для биопсии зависит от типа обнаруженных поражений:

– Алопеция: биоптаты должны быть получены с участка полностью облысевшей кожи (желательно 2), на границе нормальной кожи и области алопеции (1) и с кожи, покрытой нормальной шерстью (если такой имеется), чтобы патолог мог сопоставить физиологические волосяные фолликулы и фолликулы из области патологического процесса данного пациента.

– Шелушащиеся поражения («себорейная» кожа): берётся 2-3 биоптата с поражённого участка и образец нормальной кожи (1), чтобы была возможность сравнить эпидермис, особенно роговой слой в этих участках. Можно использовать биопсийную иглу для получения образцов.

– Макулы, папулы, пустулы: в результате биопсии должны быть получены образцы как минимум с трёх участков первичных поражений, которые должны располагаться в центре биоптата. Можно использовать биопсийную иглу для получения образцов.

– Изъязвлённые участки: это наиболее сложный для биопсии тип поражений. Основной ошибкой является направление патологу биоптата из центра язвы с последующим получением ответа «язва» без какого-либо специфического диагноза. В ситуации, когда материал получен из центра большой язвы, гистологическая картина будет характерна для инфекционного процесса. Приходится также брать несколько образцов, чтобы патолог мог связать процессы, происходящие в язве, и в нормальной коже. Если присутствуют небольшие язвы, можно отправить на исследование всю эту зону целиком, включая ободок здоровой ткани.

– Свищи: обычно патологический процесс расположен глубоко в дерме, а зачастую и под кожей, поэтому нужна очень глубокая биопсия для выяснения природы патологического процесса. В таких случаях лезвием скальпеля проводят иссечение клиновидного биоптата, с помощью биопсийной иглы при таком типе поражений невозможно получить информативный образец. В то же время, имеет смысл биопсийный материал направить на бактериологическое, микологическое исследование.

– Уплотнения и узлы: опять хирургическая эксцизия всего узла с прилегающими нормальными тканями является методом выбора. Согласно установленным правилам, эта процедура может проводиться только после исключения мастоцитомы путем проведения тонкоигольной аспирации и цитологического исследования.

– Депигментация: гистобиоптаты получают с полностью депигментированных участков (минимум 2), с пограничной зоны между нормальной и лишенной пигмента кожи (1), а также один образец с нормальной кожи.

– Гиперпигментация: гистобиоптаты получают с пигментированных участков (минимум 2), а также один образец с нормальной кожи.

2) Интерпретация гистологического заключения

Обычно дерматогистопатолог выдаёт заключение, которое должно содержать следующие разделы:

1. Описание образца тканей

2. Морфологический диагноз

3. Этиологический диагноз (при возможности определения причины)

4. Комментарии

Гистологическое описание представляет собой информацию, которую видит патолог в препаратах. Гистологическое описание содержит ценную информацию с использованием множества терминов, что имеет огромное значение в диагностике. Однако требуется значительный опыт для объяснения этих увиденных изменений, поэтому клиницисту не всегда стоит доверять интерпретации заключения патолога. Знание базовой терминологии крайне необходимо для корректной интерпретации заключений лаборатории. К сожалению, большинство клиницистов вообще не читают описательную часть.

Морфологический диагноз представляет собой краткое изложение патологических изменений в гистологическом образце в одном предложении (что-то подобное: выраженная гиперплазия с образованием корок и периваскулярной эозинофильной инфильтрацией с чесоточными клещами в роговом слое). Морфологический диагноз основывается на терминах, использованных в описании гистопатологического образца.

Этиологический диагноз возможен, когда гистопатология специфична для какой-либо болезни. Например, в описанном выше случае, этиологический диагноз – «саркоптоз». Если этиологический диагноз установить не представляется возможным, патолог предлагает список дифференциальных диагнозов и, возможно, рекомендации по дальнейшей диагностике.

Клиницист никогда не должен вслепую полагаться на заключение, очень важно, чтобы врач связывал воедино клиническую картину и гистопатологическую информацию. Существует большое число болезней, диагноз которых может быть установлен гистологически, но многие из них можно подозревать по характерным признакам.

Наиболее частые гистопатологические заключения будут приведены ниже.

Эпидермальные нарушения

2. Гиперплазия – это неспецифический ответ эпидермиса на хроническое воспаление или травму, наблюдается при многих воспалительных процессах, сопровождающихся зудом.

3. Субкорнеальные и интраэпидермальные пустулы – как правило, встречаются при поверхностной пиодермии, а также при листовидной пузырчатке и некоторых редких стерильных пустулярных болезнях.

4. Субэпидермальные пустулы и везикулы – это очень редкий признак, встречается при наследственных и аутоиммунных болезнях, например, при обыкновенной пузырчатке.

5. Некрозы и язвы – обычно наблюдаются при ожогах, контактном дерматите, пиотравматическом дерматите («горячие пятна»), синдроме зуда в области головы и шеи у кошек, эозинофильном комплексе у кошек. Более редкими причинами является гепато-кожный синдром, мультиформная эритема/ токсический эпидермальный некролиз, некоторые лекарственные реакции, вирусные болезни кошек (вирус коровьей оспы, герпес-вирус), тимома у кошек. Язвы могут быть вторичными поражениями вследствие серьёзных болезней кожи, таких как васкулит.

Поражения дермы

1. Поверхностные поражения дермы – достаточно редки, могут наблюдаться при пиодермии кожно-слизистых зон, волчанке, мультиформной эритеме, эпителиотропной лимфоме, тимоме (у кошек), дерматомиозите.

3. Фолликулит/фурункулёз – в большинстве случаев указывает на поражение кожи инфекционной природы, вызванное, например, стафилококками, дерматофитами или демодексами. Другими причинами могут быть эозинофильный фурункулёз, листовидная пузырчатка, эпителиотропная лимфома.

5. Панникулит – этот признак можно наблюдать при глубоких подкожных бактериальных, микобактериальных и грибковых инфекциях, при стерильном нодулярном, идиопатическом панникулите, панстеатите, волчанке, также при местной реакции на инъекции, травмы. Может быть следствием панкреатита.

6. Васкулит - этот признак говорит о непосредственном повреждении кровеносных сосудов. Васкулит может присутствовать при весьма разнообразных процессах, таких как септический васкулит, иммуноопосредованные болезни, а также вследствие воздействия лекарств.

7. Атрофия – наблюдается при эндокринных болезнях, некоторых специфических алопециях, таких как сезонная алопеция боковой поверхности тела, паранеопластический синдром и ишемическая дерматопатия.

Подводя итог, можно сказать, что если у животных с признаками алопеции, шелушением и корочками, макулами, папулами, пустулами мне не удаётся установить диагноз путём проведения всех вышеперечисленных быстрых тестов, я прибегаю к проведению гистобиопсии. Нужно помнить, что в ряде случаев гистологическое исследование малоинформативно (например, у животных с хроническим зудом), поэтому хочу отметить крайнюю важность быстрых тестов у этих пациентов, а также необходимость клинической оценки и тщательного анализа анамнестических данных ветеринарным специалистом.