Иммуноферментный анализ (или сокращенно ИФА) – это лабораторное исследование, которое помогает поставить точный диагноз, выявить скрытые болезни, определить предрасположенность к тем или иным заболеваниям, а также контролировать эффективность назначенной терапии. Во время исследования в сыворотке крови пациента выявляются антигены, характерные для конкретных возбудителей, и антитела к ним.
В чем суть
Для того чтобы понять принцип проведения ИФА, необходимо вспомнить, как работает иммунная система организма, что такое «антиген» и «антитела», и какие функции они выполняют.
Антиген – это молекула, которая несет определенную информацию о клетке. Если в организм попадает чужеродный антиген, антитела (или иммуноглобулины (Ig) в ответ на появление в организме чужеродного микроорганизма связываются с ним и опознают, свой это или чужой. При сигнале «чужой», антитела начинают уничтожать потенциально опасный объект. Такое взаимодействие «антиген-антитело» называется иммунным комплексом . На нем и основан метод ИФА.
Показания
Анализ широко применяется для диагностики различного рода заболеваний. И что особенно ценно, это исследование достаточно точно диагностирует заболевания, которые протекают в организме скрыто, без симптомов.
С его помощью можно выявить:
- инфекционные заболевания, передающиеся половым путем (хламидиоз, уреаплазмоз, микоплазмоз, сифилис, герпес, ВИЧ и т.д.);
- токсоплазмоз, туберкулез, гепатиты, корь и т.д.;
- аутоиммунные проблемы;
- онкологию;
- половые гормоны;
- гормоны щитовидной железы;
- аллергию.
ИФА позволяет выявить даже маркеры заболеваний сердца. Кроме того, его назначают и для оценки эффективности проводимого курса лечения, а также перед некоторыми видами хирургических вмешательств.
Подготовка
Кровь для исследования берется из вены натощак, желательно, в утренние часы.
Накануне следует воздержаться от алкоголя, сладких напитков, кофе и обильного ужина. Кроме того, на результаты показателей может повлиять прием определенных лекарственных средств, поэтому необходима консультация с лечащим врачом.
За 4 часа до проведения необходимо исключить курение.
Иммуноферментный анализ крови в ОН КЛИНИК
Международный медицинский центр ОН КЛИНИК оснащен собственной лабораторией, имеющей международный сертификат контроля качества. Здесь опытные и квалифицированные специалисты проводят различного рода анализы (более 1000 наименований).
Среди преимуществ данного метода можно выделить то, что он уже на самых ранних этапах развития болезни выявляет ее. Чувствительность теста составляет 90%. Исследование точно показывает динамику инфекционного процесса, что позволяет специалисту отслеживать эффективность терапии. Весь процесс проведения полностью автоматизирован, что исключает влияние так называемого «человеческого фактора».
Дополнительно к тому, высокоточное оборудование позволяет получить достоверные результаты исследования в минимально короткий промежуток времени.
Расшифровать результаты Вы сможете в тот же день с врачом. На основе их врач выберет тактику лечения, которая подходит именно Вам.
ОН КЛИНИК: За более чем 25 лет работы нас выбрали миллионы людей. Присоединяйтесь!
Врачи
Администратор свяжется с Вами для подтверждения записи. ММЦ «ОН КЛИНИК» гарантирует полную конфиденциальность Вашего обращения.
Как проводится исследование методом ИФА
Механизм реакции
В основе иммуноферментного анализа лежит иммунная реакция антигена с антителом,а присоединение к антителам ферментной метки позволяет учитывать результат реакции антиген-антитело по появлению ферментативной активности или по изменению ее уровня.В упращенном виде механизм реакции можно представитьследующим образом:
|
Первая реакция происходит между определяемым Ig (Ab) и очищенным антигеном возбудителя (Ag), фиксированным к поверхности лунок иммунологического планшета |
|
|
|
Для выявления образовавшихся иммунных комплексов проводят вторую иммунологичесую реакцию, в которой в качестве антигена выступает связавшийся специфический Ig, а в качестве антител к нему - коньюгат, представляющий собой Ig (Ab) к соответствующему Ig человека, меченный ферментом -пероксидазой (K) |
|
|
Далее происходит ферментативная
реакция, катализируемая ферментной частью молекулы коньюгата.Субстратом данной реакции служит бесцветное вещество - хромоген, который в ходе реакции образует окрашенное вещество. Интенсивность окраски в лунке определенным образом зависит от количества содержащихся в пробе иммуноглобулинов. |
Подсчет результатов
Проведение иммуноферментного анализа
Для серодиагностике используются 96 луночные полистирольные планшеты, на стенках ячеек которых заранее адсорбируется антиген. Исследуемая сыворотка вносится в ячейку планшета. При этом гомологичные антигену антитела прикрепляются к нему. Не прикрепившиеся антитела удаляются промыванием. Далее в ячейки вносят антитела против иммуноглобулинов (антител) человека, меченные ферментом. Если в исследуемой сыворотке присутствовали определяемые антитела, то они на этом этапе выступят в роли антигенов, с которыми прореагируют меченные антитела. Добавление после промывки хромогенного вещества (красителя) позволит учесть реакцию по развивающемуся окрашиванию в ячейках. Интенсивность окраски при этом пропорциональна количеству фермента, а следовательно количеству антител.При измерении оптическую плотности (ОП) жидкости в ячейке и сравнивании ее с контрольным образцом подсчитывается концентрация антител в единицах объема.Наиболее часто применяется подсчет результатов в единицах оптической плотности.Надо учитывать,что для каждой тест-системы есть свои показатели учета результатов и показатели нормы и патологии на которые надо ориентироваться при интерпретации результатов.
Какие инфекции можно выявить методом ИФА
В основном в современной венерологии применяется для диагностики сифилиса (в комплексе с другими реакциями),ВИЧ-инфекции ,вирусных гепатитов .Имеет ограниченное значение для диагностики хламидийной инфекции ,цитомегаловирусной инфекции и других герпетических инфекций .Метод ИФА используется также для определения антител при различных инфекционных заболеваниях,уровня гормонов,аутоантител и различных маркеров онкологических заболеваний.
Как интерпретировать результаты ИФА
Исследование наличия и уровня антител различных классов в некторых случаях помогает определить стадии инфекционного процесса
|
Стадия заболевания |
IgM |
IgA |
IgG |
|
Первичная фаза |
|||
|
Первичная фаза |
|||
|
Первичная фаза |
|||
|
Обострение хронической фазы |
|||
|
Хроническая фаза |
|||
|
Прошедшая (излеченная инфекция) |
|||
|
Выздоровление |
снижение титра в 2-4 раза после успешного лечения |
снижение титра в 4-8 раз через 1-1.5 мес после успешного лечения |
|
|
Отрицательный результат |
К сожалению,такое важное преимущество ИФА, как количественное определение антител не имеет большого значения в практической работе - т.е. не позволяет точно установить диагноз и не влияет на дозировку и сроки назначения лекарственных средств.
Какая роль метод ИФА в диагностике сифилиса
Метод ИФА в диагностике сифилиса был впервые применен в 1975 год.В настоящее время он широко применяется для серологической диагностики сифилиса в России и используется как потверждающий тест на сифилис.Обычно проводят исследование,выявляющее так называемые суммарные антитела к антигенам бледной трепонемы (IgM и IgG),хотя в отдельных случаях возможно и определение только "ранних" антител класса М.ИФА при сифилисе становится положительным после 3 недели с момента инфицирования и остается положительным довольно длительное время даже после лечения (иногда всю жизнь).Поэтому как тест,подтверждающий излечение сифилиса,ИФА не используется.В большинстве случаев проводится только качественное определение ИФА - т.е. только положительный или отрицательный результат,хотя возможно и количественное определение.
Анализ ИФА – что это такое? Полное наименование этого метода диагностики называется иммуноферментный анализ крови, и он основан на определении в периферической крови антител различных классов, или иммуноглобулинов, которые вырабатывает человеческий организм.
В практике врача ИФА – анализ занимает очень важное место, когда нужно диагностировать какую – либо инфекционную патологию. Этот анализ показывает не только факт наличия инфекционного заболевания, но так же и стадии патологического процесса. Также не только в отношении возбудителя метод ИФА показан к применению: он используется для диагностики аллергических состояний. Этот тест позволяет выявить проблемы в системе иммунитета, при многих заболеваниях кроветворной системы, аутоиммунных и других расстройствах.
Зачем нужен ИФА?
Все исследователи склоняются к тому, что название «антитело» выбрано слишком неудачно. Но все-таки оно отражает одну важную особенность иммуноглобулинов: они способны связывать и нейтрализовывать вредные вещества, подходя к ним как «ключик» к «замочку». Количество антител в крови отражает не только общую способность организма к защите от инфекций, но так же и способность к образованию циркулирующих иммунных комплексов, которые могут возникнуть при различных аутоиммунных болезнях, например, при ревматоидном артрите или болезни Бехтерева.
Комплексы антител с антигеном (вредным фактором инфекционной природы) – это результат ответной реакции организма на внедрение «чужаков». Поэтому иммунитет учится распознавать их, с помощью лимфоцитов обучает иммунокомпетентные клетки, и они способны продуцировать высокоспецифичные антитела. Так, антитела к вирусу Эпштейна устроены иначе, чем антитела к вирусному гепатиту С, или к кишечной палочке, а anti-HAV, или антитела к вирусу гепатита А – иначе, чем аутоантитела к хрящевой ткани. Именно высокая специфичность, и соответствие иммуноглобулинов инфекционному возбудителю и делает высокую ценность такому лабораторному исследованию, как иммуноферментный анализ крови.
После прочной связи антител и антигенов в единый комплекс (антиген-антитело) вредные факторы утрачивают свою способность к повреждению тканей организма, и затем эти комплексы или нейтрализуются, или лизируются с помощью фагоцитоза нейтрофилами, и, «перевариваясь», покидают организм.
Анализ крови ИФА может показать, с каким определенным болезнетворным фактором сталкивается наш организм, на какой стадии находится процесс взаимодействия организма с инфекцией. После проведенного исследования врач может с высокой степенью уверенности сделать прогноз, назначить определенные виды лечения, а в некоторых случаях даже может определить продолжительность жизни пациента, особенно при хронических вирусных инфекциях, например, при вирусном гепатите С.
Но в некотором случае, в организме вообще нет никаких инфекционных агентов, и антитела по «ошибке» набрасываются на собственные органы и ткани, поскольку иммунокомпетентные клетки получили ложную информацию. Такие заболевания называют аутоиммунными, и иммуноферментный анализ крови также помогает распознать эту хроническую патологию, и помочь в диагностике.
Подробнее об иммуноглобулинах
Всего человеческий организм вырабатывает 5 известных классов антител, которые обозначаются Ig (что расшифровывается как иммуноглобулины), которые принадлежат классам A, M, G, E, и D. Все они имеют большое значение в интерпретации результатов ИФА – анализа. Конечно, комплексов значительно больше, и далеко не все они еще открыты. Но в диагностике разных болезней наиболее ценны первые три типа антител. Анализ крови на ИФА использует максимум информации: момент появления антител в крови, изменение их концентрации в зависимости от времени, срок исчезновения, а также тип специфических антител.
Так, участниками первичного, острого инфекционного процесса являются иммуноглобулины класса М, которые всегда свидетельствуют об острой фазе, даже в том случае, когда клинически болезнь протекает стерто. Характерный пример – безжелтушная форма острого вирусного гепатита В или С. Иммуноферментный анализ крови на гепатиты покажет, что у человека есть острый гепатит, и такие симптомы, как боли в подреберье, сухость во рту, ломота в суставах и другие неспецифические симптомы становятся легко понятными.
Спустя несколько недель эти антитела обнаруживаются во все более исчезающей концентрации, уступая иммуноглобулинам класса G. Они определяются в крови долгие месяцы, и даже годы, и свидетельствуют или о выздоровлении, и тогда могут оставаться пожизненно, формируя прочный иммунитет. Это свидетельствует о мощной защите от антигенов возбудителей. Так, именно антитела этого класса делают человека невосприимчивым к повторным случаям заболевания сибирской язвой и чумой. Но бывают случаи, когда эти антитела не препятствуют при наличии антигенов их вредному влиянию. В таком случае речь может идти о повышении активности хронического процесса.
Прежде всего, нужно понять, что нет такого анализа – «просто кровь на ИФА». Бывает анализ на гепатиты, бывает – на уреаплазму, или на сифилис. Таким образом, сдавать кровь на ИФА можно только прицельно, «заказав» поиск нужной инфекции. Просто так непонятно, зачем сдавать кровь из вены, не зная, что нужно искать. Вот почему метод иммуноферментного анализа – это мощный инструмент, который важен в диагностическом поиске. Только врач может назначить этот анализ, поскольку он целенаправленно ищет инфекцию, для которой характерны данные симптомы. Обычный человек, конечно, может заказать 150 анализов крови методом ИФА на «все инфекции», но это будет неразумным и затратным подходом к диагностике, сдавая анализы на все подряд.
Наиболее востребовано назначение этих анализов при следующих заболеваниях и состояниях:
Различные микробные и вирусные инфекции, симптомы инфекционных заболеваний – сыпь, лихорадка, желтуха, увеличение лимфоузлов, синдром диареи, подозрения на заболевания, передающиеся половым путем.
Помогает методика ИФА при определении уреаплазмы и микоплазмы, сифилиса и хламидиоза, туберкулеза и цитомегаловирусной инфекции, герпеса, вирусных гепатитов и вируса Эпштейн-Барра. В настоящее время около 500 различных инфекций можно верифицировать с помощью метода иммуноферментного анализа,
При подозрении на глистные инвазии, и наличии таких симптомов, как аллергия, эозинофилия в крови, кожный зуд, диспепсия и похудение,
При выявлении аллергенов, которые вызывают отек Квинке, крапивницу, одышку и приступы астматического удушья.
В этом случае выявляются конкретные Ig E, и существуют целые аллергопанели, которые помогут точно определить аллерген – кальмары или креветки, сухой корм для рыбок, содержащий дафнии, домашнюю пыль. При поллинозе этот метод позволяет найти точно тот злак, кустарник или дерево, который вызывает весеннее чихание и слезотечение,
- Показан этот метод при подозрении на аутоиммунные заболевания, которые лечат врачи-ревматологи,
- При подозрении на опухолевый рост и активность,
- В комплексной диагностике иммунодефицитных состояний и ВИЧ – инфекции,
- При заболеваниях крови и в трансплантологии, для комплексной оценки иммунитета, например, перед пересадкой печени или почек.
Теперь мы знаем, зачем нужно сдавать кровь на ИФА. Выясним, как проводится это исследование.
Как выполняется анализ?
Классический материал – это венозная кровь пациента. Но при необходимости, можно исследовать самую разную жидкость и ткань: слизь, слюну, цервикальный секрет, цереброспинальную жидкость, стекловидное тело глаза, содержимое пупочного канатика и околоплодные воды. Важно помнить, что прием различных лекарств, избыточная физическая активность, злоупотребление алкоголем, может сильно исказить результаты анализов.
Существуют несколько методов, которые позволяют проводить этот анализ. Чаще всего в клинических лабораториях используют фотометрический способ. При этом используют меченые краской вещества, после реакции которых, и маркировки комплекса антиген-антитело изменяется их окраска. В результате изменяется и оптическая плотность раствора, и это изменение прямо пропорционально концентрации обнаруженных антител. Лабораторные спектрофотометры успешно используются для измерения этих отклонений.
Также для проведения ИФА используется флуориметрический метод, основой которого является флуоресценция. Здесь тоже высчитывается интенсивность флуоресцирующих веществ, которые осели на исследуемых образцах.
Наконец, в иммунологическом анализе используют электрохимические способы определения активности ферментов, которые являются особыми метками для антигенов и антител. Сам иммуноферментный метод чаще всего подразумевает использование таких ферментов, как щелочная фосфатаза, пероксидаза хрена и галактозидаза. Эти ферменты способны связываться с антителами или антигенами и маркировать их вследствие своей активности.
Минусы метода и его плюсы
К очевидным «плюсам» можно отнести демократичную себестоимость анализа, возможность его скринингового использования у широких групп населения, например, при обследовании беременных на ВИЧ. Метод иммуноферментного анализа достаточно спецефичен, и может применяться для контроля качества лечения многих заболеваний. Немаловажно, что анализ готовится быстро, и является простым и безопасным для пациента.
Существует, однако, много «подводных камней». Так, если иммуноглобулины не выявлены, то это еще не говорит о 100% отсутствии заболевания. Ведь на фоне иммунодефицита у организма просто может не «быть сил» на синтез антител. Если у пациента тяжелая печеночная недостаточность, то печень просто не в силах синтезировать белок – строительный материал для антител. В таком случае результат называют серонегативным, и требуется подтверждение инфекции уже прямым и самым совершенным методом исследования – ПЦР, или полимеразной цепной реакцией. В отличие от иммуноферментного анализа, при этом методе выявляется не реакция организма на инфекционный процесс (которая может быть дефектной, или отсутствовать вовсе), при ПЦР определяется непосредственно наследственный материал, или находится сам возбудитель.
В лаборатории гемостаза МЖЦ используют новый, высокочувствительный метод ИФА - ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), гетерогенный твердофазный иммунный анализ. В ходе исследования определяют наличие антител в крови пациента к возбудителям различных болезней.
Стоимость ИФА анализа*
Для чего сдают иммуноферментный анализ
ИФА используют во многих сферах медицины. У людей с ишемической болезнью сердца, атеросклерозом и гипертонией выявляют антитела к белкам системы гемостаза - тромбину, а2 макроглобулину и антитромбину 3, а также пептидным биорегуляторам свертывающей системы - ангеотензину 2 и брадикинину.
ИФА доказал свою эффективность в пренатальной диагностике и при определении фертильности - это АФП-тест (диагностика расщелины позвоночника, трисомии у плода), тесты на стероидные гормоны эстадиол, эстриол, прогестерон.
Множественные осложнения беременности, бесплодие и тромбофлебит провоцирует тяжелое аутоиммунное заболевание - антифосфолипидный синдром. Диагностику АФС в Медицинском Женском Центре также проводят методом иммуноферментного анализа: определяют антитела к кардиолипину, b2-гликопротеину, протромбину и аннексину 5.
