وسائل التشخيص التفريقي عبارة عن مخاليط خاصة من العناصر الغذائية تستخدم لتحديد أنواع الميكروبات ودراسة خصائصها. عندما تنمو البكتيريا على وسائط التشخيص التفريقي، تحدث عمليات كيميائية بسبب وجود بكتيريا مختلفة في الخلية الميكروبية. بعضها قادر على التحلل، والبعض الآخر - والبعض الآخر - يسبب تفاعلات الأكسدة والاختزال، وما إلى ذلك. بفضل عمل الإنزيمات، تحدث التغييرات المقابلة في بيئة التشخيص التفاضلي.
يمكن تقسيم بيئات التشخيص التفاضلي إلى أربع مجموعات رئيسية.
أرز. 1-6. أشكال مختلفة من انهيار الجيلاتين. أرز. 7 - 9. وسط سائل به كربوهيدرات ومؤشر أندرادي: شكل. 7 - لا تخمير. أرز. 8 - التخمير بتكوين الحمض. أرز. 9- التخمر مع تكوين الحمض والغازات. أرز. 10 - 12. وسط شبه سائل يحتوي على كربوهيدرات ومؤشر ضغط الدم (من وسط مغذي جاف): شكل. 10 - لا تخمير. أرز. 11 - التخمير بتكوين الحمض. أرز. 12- التخمر مع تكوين الحمض والغازات. أرز. 13-15. سيتز مصل عباد الشمس الاصطناعي: الشكل. 13 - لا تخمير. أرز. 14 - التخمير بتكوين الحمض. أرز. 15- التخمير بالتشكيل . أرز. 16 و 17. الحليب مع الميثيلين الأزرق: الشكل. 16 - عدم التخفيض؛ أرز. 17- التخفيض. أرز. 18 و 19. وسيلة سيمونز: الشكل. 18 - عدم استيعاب السترات. أرز. 19- استيعاب السيترات. أرز. 20 - 24. لبن تباع الشمس: الأرز. 20 - لا تخمير. أرز. 21 - التخمير بتكوين الحمض. أرز. 22- التخمير بتكوين القلويات. أرز. 23 - الببتونة. أرز. 24- التخفيض. أرز. 25. تسييل منتج مطوي (في الضوء المنقول). أرز. 26. انحلال الدم على أجار الدم (في الضوء المنقول). أرز. 27. وسط الدم مع تيلوريت البوتاسيوم.
1. الوسائط التي تحتوي على البروتين وتكشف عن قدرة الميكروبات على تحطيم البروتينات (خصائص التحلل البروتيني): "عمود" ببتون اللحم، مصل الحصان أو البقر المتخثر، الحليب، أجار الدم. عند تلقيح البكتيريا عن طريق ثقب جيلاتين ببتون اللحم، في "عمود"، في حالة انهيار البروتين، تتم ملاحظة تسييل الوسط. عند تلقيحه على وسط يحتوي على مصل اللبن المتخثر، يتم تحديد انهيار البروتين من خلال تسييل الوسط وتكوين المنخفضات على سطحه. يتم الكشف عن تحلل الحليب بواسطة الميكروب من خلال تصفية أو إذابة الحليب الرائب في البداية. يتم التحقق من وجود النشاط الانحلالي لمزرعة الاختبار عن طريق تطعيمها على أجار دم خاص. نتيجة للتدمير حول المستعمرات (على سبيل المثال، الانحلالي أو) يتم تشكيل مناطق المقاصة.
2. وسائط التعرف على قدرة الميكروبات على تكسير الكربوهيدرات وعالية الذرة (وسط إندو، وسط ليفين، وسط راسل، وسط دريجالسكي - كونرادي، وسط رابوبورت - وينتراوب، وسط شوستوف). لتحديد خصائص الكائنات الحية الدقيقة هذه، يتم أيضًا استخدام سلسلة "متنوعة"، أي سلسلة من أنابيب الاختبار التي تحتوي على كربوهيدرات مختلفة وكحول متعدد الهيدرات ومؤشر. تستخدم صبغة عباد الشمس أو أزرق البروموثيمول كمؤشرات. يتم الكشف عن تحلل أي من الكربوهيدرات مع تكوين الحمض عن طريق تغيير لون المؤشر، ويتم الكشف عن تكوين الغاز عن طريق ملء الغاز وتعويم عوامة زجاجية خاصة في وسط سائل. أو استخدم وسائط Hiss شبه السائلة (انظر) مع أجار 0.5% مع السكريات المناسبة ومؤشر أندرادي. بعد تلقيح الميكروب على هذه الأوساط، يتم الكشف عن تكوين الحمض عن طريق احمرار الوسط، وتكوين الغاز عن طريق ظهور فقاعاته في الأجار أو عن طريق تمزق عمود الأجار وتحوله لأعلى. تشمل وسائط التشخيص التفريقي للمجموعة الثانية أيضًا أجار النشا، والذي يستخدم لتحديد قدرة الميكروبات على تحلل النشا، ووسط كلارك، وما إلى ذلك.
3. الوسائط التي يتم من خلالها الكشف عن قدرة الميكروبات على إزالة لون الأصباغ المضافة إلى المرق: أزرق الميثيلين، الثيونين، عباد الشمس، الأحمر المحايد أو غيرها (وسط روثبيرجر، وسط أوميليانسكي). وتشمل المجموعة الثالثة أيضًا الوسائط المحتوية على النترات، والتي تستخدم لتحديد قدرة الميكروبات على اختزال أملاح حمض النيتريك (النترات) إلى أملاح حمض النيتروز (النتريت) ثم إلى الأمونيا أو النيتروجين الحر.
4. الوسائط التي تكشف عن قدرة الميكروبات على استيعاب المواد غير القابلة للهضم من قبل الميكروبات الأخرى، على سبيل المثال، وسط يحتوي على سترات الصوديوم (Simons citrate agar) لتمييز الإشريكية القولونية، التي تفتقر إلى القدرة على استيعاب هذا الوسط، عن غيرها من البكتيريا من المجموعة المعوية، أو وسط يحتوي على حمض أوليك الصوديوم لتمييز عصية الخناق عن الخناق الكاذب والخناق (أجار إنجيرنج).
تشتمل وسائط التشخيص التفريقي أيضًا على وسائط للتمييز بين اللاهوائيات، ووسائط تيلوريت لتمييز بكتيريا الخناق، ووسائط تحتوي على اليوريا، ووسائط قلوية (Dieudonne agar) لزراعة ضمة الكوليرا، وما إلى ذلك. انظر أيضًا تحديد الميكروبات.
وسائل التشخيص التفريقي عبارة عن مخاليط خاصة من العناصر الغذائية تستخدم لتحديد أنواع الميكروبات ودراسة خصائصها. عندما تنمو البكتيريا على وسائط التشخيص التفريقي، تحدث عمليات كيميائية بسبب وجود إنزيمات مختلفة في الخلية الميكروبية. بعضها قادر على تحطيم البروتينات، والبعض الآخر - الكربوهيدرات، والبعض الآخر - يسبب تفاعلات الأكسدة والاختزال، وما إلى ذلك. بفضل عمل الإنزيمات، تحدث التغييرات المقابلة في بيئة التشخيص التفاضلي.
يمكن تقسيم بيئات التشخيص التفاضلي إلى أربع مجموعات رئيسية.
أرز. 1-6. أشكال مختلفة من انهيار الجيلاتين. أرز. 7 - 9. وسط سائل به كربوهيدرات ومؤشر أندرادي: شكل. 7 - لا تخمير. أرز. 8 - التخمير بتكوين الحمض. أرز. 9- التخمر مع تكوين الحمض والغازات. أرز. 10 - 12. وسط شبه سائل يحتوي على كربوهيدرات ومؤشر ضغط الدم (من وسط مغذي جاف): شكل. 10 - لا تخمير. أرز. 11 - التخمير بتكوين الحمض. أرز. 12- التخمر مع تكوين الحمض والغازات. أرز. 13-15. سيتز مصل عباد الشمس الاصطناعي: الشكل. 13 - لا تخمير. أرز. 14 - التخمير بتكوين الحمض. أرز. 15- التخمر مع تكوين القلويات . أرز. 16 و 17. الحليب مع الميثيلين الأزرق: الشكل. 16 - عدم التخفيض؛ أرز. 17- التخفيض. أرز. 18 و 19. وسيلة سيمونز: الشكل. 18 - عدم استيعاب السيترات. أرز. 19- استيعاب السيترات. أرز. 20 - 24. لبن تباع الشمس: الأرز. 20 - لا تخمير. أرز. 21 - التخمير بتكوين الحمض. أرز. 22 - التخمير بتكوين القلويات. أرز. 23 - الببتونة. أرز. 24- التخفيض. أرز. 25. تسييل مصل اللبن المتخثر (في الضوء المنقول). أرز. 26. انحلال الدم على أجار الدم (في الضوء المنقول). أرز. 27. وسط الدم مع تيلوريت البوتاسيوم.
1. الوسائط التي تحتوي على البروتين وتكشف عن قدرة الميكروبات على تحطيم البروتينات (خصائص التحلل البروتيني): "عمود" جيلاتين ببتون اللحم، مصل الحصان أو البقر المتخثر، الحليب، أجار الدم. عند تلقيح البكتيريا عن طريق ثقب جيلاتين ببتون اللحم، في "عمود"، في حالة انهيار البروتين، تتم ملاحظة تسييل الوسط. عند تلقيحه على وسط يحتوي على مصل اللبن المتخثر، يتم تحديد انهيار البروتين من خلال تسييل الوسط وتكوين المنخفضات على سطحه. يتم الكشف عن تحلل الحليب بواسطة الميكروب من خلال تصفية أو إذابة الحليب الرائب في البداية. يتم التحقق من وجود النشاط الانحلالي لمزرعة الاختبار عن طريق تلقيحها في طبق بتري على أجار دم خاص. نتيجة لتدمير خلايا الدم الحمراء حول المستعمرات (على سبيل المثال، العقدية الانحلالية أو المكورات العنقودية)، يتم تشكيل مناطق المقاصة.
2. وسائط التعرف على قدرة الميكروبات على تحلل الكربوهيدرات والكحولات عالية الذرة (وسط إندو، وسط ليفين، وسط راسل، وسط دريجالسكي - وسط كونرادي، وسط رابوبورت - وينتراوب، وسط شوستوف). لتحديد خصائص الكائنات الحية الدقيقة هذه، يتم أيضًا استخدام سلسلة "متنوعة"، أي سلسلة من أنابيب الاختبار التي تحتوي على وسائط مغذية، بما في ذلك الكربوهيدرات المختلفة والكحوليات المتعددة الهيدرات ومؤشر. تستخدم صبغة عباد الشمس أو أزرق البروموثيمول كمؤشرات. يتم الكشف عن تحلل أي من الكربوهيدرات مع تكوين الحمض عن طريق تغيير لون المؤشر، ويتم الكشف عن تكوين الغاز عن طريق ملء الغاز وتعويم عوامة زجاجية خاصة في وسط سائل. أو استخدم وسائط Hiss شبه السائلة (انظر) مع أجار 0.5% مع السكريات المناسبة ومؤشر أندرادي. بعد تلقيح الميكروب على هذه الأوساط، يتم الكشف عن تكوين الحمض عن طريق احمرار الوسط، وتكوين الغاز عن طريق ظهور فقاعاته في الأجار أو عن طريق تمزق عمود الأجار وتحوله لأعلى. تشمل وسائط التشخيص التفريقي للمجموعة الثانية أيضًا أجار النشا، والذي يستخدم لتحديد قدرة الميكروبات على تحلل النشا، ووسط كلارك، وما إلى ذلك.
3. الوسائط التي يتم من خلالها الكشف عن قدرة الميكروبات على تبييض الأصباغ المضافة إلى المرق: الميثيلين الأزرق، الثيونين، عباد الشمس، القرمزي النيلي، الأحمر المحايد أو غيرها (وسط روثبيرجر، وسط أوميليانسكي). وتشمل المجموعة الثالثة أيضًا الوسائط المحتوية على النترات، والتي تستخدم لتحديد قدرة الميكروبات على اختزال أملاح حمض النيتريك (النترات) إلى أملاح حمض النيتروز (النتريت) ثم إلى الأمونيا أو النيتروجين الحر.
4. الوسائط التي تكشف عن قدرة الميكروبات على استيعاب المواد غير القابلة للهضم من قبل الميكروبات الأخرى، على سبيل المثال، وسط يحتوي على سترات الصوديوم (Simons citrate agar) لتمييز الإشريكية القولونية، التي تفتقر إلى القدرة على استيعاب هذا الوسط، عن غيرها من البكتيريا من المجموعة المعوية، أو وسط يحتوي على حمض أوليك الصوديوم لتمييز عصية الخناق عن الخناق الكاذب والخناق (أجار إنجيرنج).
تشتمل وسائط التشخيص التفريقي أيضًا على وسائط للتمييز بين اللاهوائيات، ووسائط تيلوريت لتمييز بكتيريا الخناق، ووسائط تحتوي على اليوريا، ووسائط قلوية (Dieudonne agar) لزراعة ضمة الكوليرا، وما إلى ذلك. انظر أيضًا تحديد الميكروبات.
يتم استخدامها للتمييز بين الأنواع الفردية أو مجموعات الكائنات الحية الدقيقة. يعتمد مبدأ بناء هذه الوسائط على حقيقة أن الأنواع المختلفة من الكائنات الحية الدقيقة تختلف عن بعضها البعض في النشاط الكيميائي الحيوي بسبب مجموعة مختلفة من الإنزيمات.
يتضمن نظام DDS ما يلي:
1. الأساس الغذائي الذي يضمن تكاثر الكائنات الحية الدقيقة
2. بعض الكربوهيدرات - اللاكتوز
3. مؤشر يشير تغير لونه إلى تحول الرقم الهيدروجيني للوسط نحو الجانب الحمضي بسبب تخمر الكربوهيدرات المقابلة.
يستخدم DDS بنشاط للتمييز بين أنواع الكائنات الحية الدقيقة في العائلة المعوية.
وسائل الإعلام الثقافية الاختيارية
مصمم للعزل الانتقائي وتراكم الكائنات الحية الدقيقة من نوع معين (أو مجموعة) من مواد تحتوي على مجموعة متنوعة من النباتات الدقيقة الأجنبية. عند إنشاء هذه البيئات، فإنها تعتمد على الخصائص البيولوجية التي تميز الكائنات الحية الدقيقة عن معظم الكائنات الأخرى. على سبيل المثال، لوحظ النمو الانتقائي للمكورات العنقودية مع زيادة تركيز الملح، وضمة الكوليرا - في بيئة قلوية.
انسكاب الوسائط
1. وسائط أجار في أطباق بيتري:
أ) تذوب في حمام مائي، تبرد إلى 45-50 درجة مئوية مع MPA
ب) ضع الكوب مع الغطاء لأعلى
ج) خذ الإناء بيدك اليمنى وامسكه بالقرب من النار
د) قم بإزالة القابس بيدك اليسرى، ممسكًا إياه بإصبعك الصغير وراحة يدك
هـ) احرق عنق الزجاجة بالوسيط وافتح الغطاء قليلاً بإصبعين من يدك اليسرى
و) أدخل عنق الزجاجة تحتها دون لمس حافة الكوب، ثم صب 15-20 مل. بيئة.
إذا تم البذر في يوم انسكاب الوسط، فيجب تجفيفه في منظم الحرارة لمدة 20-30 دقيقة بشكل مفكك، مع الجانب المفتوح لأسفل. إذا تم البذر في اليوم التالي، يتم لف الأكواب، دون تجفيفها، في نفس الورقة التي تم تعقيمها فيها ووضعها في الثلاجة.
2. وسط الآجار في أنابيب الاختبار:
أ) خذ وعاء منصهرًا ومبردًا إلى درجة حرارة 45 درجة مئوية
ب) خذ أنبوب الاختبار بيدك اليسرى
ج) قم بإزالة السدادة من أنبوب الاختبار بيدك اليمنى، وبيدك اليسرى من الوعاء الذي يحتوي على الوسيط، ممسكًا إياه بإصبعك الصغير وراحة يدك
د) احرق حواف أنبوب الاختبار ووعاء الوسط، ثم أضف 3-5 مل من الوسط إلى أنبوب الاختبار
هـ) حرق أعناق الأوعية مرة أخرى وإغلاقها بالسدادات
يمكن لوسط الأجار أن يتصلب في أنابيب الاختبار على شكل:
1. عمود مشطوف
2. العمود المشترك
3. العمود
للحصول على عمود مشطوف ومدمج، يتم وضع أنابيب الاختبار ذات كتلة الأجار المنصهرة في وضع مائل على حامل خاص بحيث لا يمتد الوسط إلى ثلثي أنبوب الاختبار ولا يبلل السدادة. بعد أن يتصلب الوسط، توضع أنابيب الاختبار عموديًا في حامل ويُسمح للمكثفات بالتصريف إلى الأسفل. من المستحيل استخدام البيئة دون التكثيف. يجب أن يذوب مرة أخرى في حمام مائي ويقص.
أجار ببتون اللحم
بناءً على الغرض المقصود منها، يتم تقسيم الوسائط المغذية إلى الفئات الرئيسية التالية.
عالمي- الوسائط التي تنمو فيها أنواع كثيرة من البكتيريا المسببة للأمراض وغير المسببة للأمراض بشكل جيد. وتشمل هذه: مرق ببتون اللحم (MPB = ماء اللحم + 1% ببتون + 0.5% كلوريد الصوديوم)، أجار ببتون اللحم (MPA = MPB + أجار 2-3%).
التشخيص التفريقي- الوسائط التي تجعل من الممكن تمييز نوع واحد من البكتيريا عن الأنواع الأخرى من خلال نشاطها الأنزيمي أو مظاهرها الثقافية. وتشمل هذه إندو، ليفين، بلوسكيرف، جيسا وغيرها الكثير.
انتقائي(مرادفات: انتقائية، اختيارية، إثرائية) - الوسائط التي تحتوي على مواد تستخدمها الكائنات الحية الدقيقة من أنواع معينة ولا تساعد أو حتى تمنع نمو الكائنات الحية الدقيقة الأخرى. تتيح الوسائط الانتقائية إمكانية اختيار أنواع معينة من البكتيريا على وجه التحديد من المادة قيد الدراسة. وهذا يشمل مولر، سيلينيت، رابوبورت، 1٪ ماء الببتون، الخ.
تفاضلي انتقائي- البيئات التي تجمع بين خصائص البيئات التشخيصية التفاضلية والانتقائية. يتم استخدامها، على وجه الخصوص، لتسريع اكتشاف وتحديد البكتيريا التي تنتمي إلى عدد كبير من الأنواع المنتشرة على نطاق واسع من البكتيريا المعوية والزائفة (بيئة سيفولودسكي).
خاص- الوسائط المعدة خصيصًا للحصول على نمو تلك البكتيريا التي لا تنمو أو تنمو بشكل سيء للغاية على الوسائط العالمية. وتشمل هذه الوسائط McCoy-Chapin (للحصول على نمو العامل المسبب لمرض التوليميا)، وMPA في الدم (للحصول على نمو العقديات المسببة للأمراض)، ووسط Lowenstein-Jensen (لعزل العامل المسبب لمرض السل)، وما إلى ذلك.
الاصطناعية- الوسائط ذات التركيب الكيميائي المحدد بدقة، وهي عبارة عن محاليل للأملاح غير العضوية مع إضافة مركبات كيميائية تعمل كمصدر للكربون أو النيتروجين. مثال على هذا الوسط الاصطناعي هو الوسط الأدنى M-9، حيث يكون مصدر الطاقة والكربون هو الجلوكوز، والنيتروجين هو NH4C1. يمكن أن تكون الوسائط الاصطناعية ذات تركيبة أكثر تعقيدًا مع تضمين العديد من الأحماض الأمينية والقواعد والفيتامينات.
شبه الاصطناعية- الوسائط الاصطناعية التي يضاف إليها بعض المنتجات ذات الأصل الطبيعي، مثل مصل الدم. هناك العديد من خيارات وسائط الثقافة المختلفة المصممة لتناسب احتياجات الأنواع البكتيرية ذات الصلة وأغراض التشخيص.
تم تصميم المحرك الكهربائي غير المتزامن a4 لتشغيل الآليات التي لا تتطلب تعديل السرعة (المراوح، عوادم الدخان، المضخات). يمكنك التعرف على السمات المميزة لمحركات سلسلة A4 وخصائصها على
يضاف أجار 3-4٪ إلى مرق ببتون اللحم، ويتم ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.6، ويُسكب في زجاجات سعة 100 مل ويتم تعقيمها، كالعادة، في الأوتوكلاف، ويُحفظ بهذا الشكل حتى يتم تحضير أجار كبريتيت الفوكسين. يتم تحضير أجار كبريتيت الفوشين في يوم الاستخدام. لا يمكن تحضير هذه الوسيلة أو تخزينها لاستخدامها في المستقبل، لأنها تتحول بسرعة إلى اللون الأحمر.
إلى 100 مل من أجار الببتون اللحمي 3-4% المذاب والمبرد إلى 70 درجة مئوية، يضاف بشكل تعقيم 1 جم من اللاكتوز، بعد إذابته وغليه مسبقًا في 5 مل من الماء المعقم. بالإضافة إلى ذلك، تتم إضافة 0.5 مل من محلول كحول مشبع مفلتر من الفوكسين الأساسي و 2.5 مل من محلول 10٪ طازج من كبريتيد الصوديوم. يذوب كبريتيد الصودا (Na2SO3) بكمية 0.5 جم في 5 مل من الماء ويتم تعقيمه بالغليان قبل الاستخدام.
يمكنك أن تفعل ذلك بشكل مختلف قليلا. يتم أولاً خلط الفوكسين وكبريتيت الصوديوم في أنبوب اختبار: يضاف محلول كبريتيت الصوديوم إلى 0.5 مل من محلول الفوكسين مع الرج حتى يصبح السائل الموجود في أنبوب الاختبار عديم اللون أو وردي قليلاً. ويسكب هذا الخليط في الأجار المذاب والمبرد قليلاً. يتم رج القارورة التي تحتوي على الوسط جيدًا حتى تمتزج، ويُسكب الوسط في أطباق بيتري. بعد أن يتصلب الوسط، يجفف في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
عندما يكون الوسط ساخنًا، يجب أن يكون لونه ورديًا قليلاً، وبعد التبريد يكون عديم اللون تمامًا. يحدث تغير لون الفوكسين في وسط إندو بسبب إدخال كبريتيد الصوديوم.
سيمونز الاربعاء
عند تحديد ميكروبات مجموعة القولونيات (لتمييز أنواع التربة الإشريكية القولونية aеrogenes عن الأنواع البرازية Escherichia coli commune)، يتم استخدام وسط سيترات سيمونز. في 1 لتر من الماء المقطر، قم بإذابة 1.5 جرام من فوسفات الصوديوم (أو فوسفات الأمونيوم أحادي الاستبدال)، و1 جرام من فوسفات البوتاسيوم أحادي الاستبدال (KH2PO4)، و0.2 جرام من كبريتات المغنيسيوم، و2.5-3 جرام من سترات الصوديوم البلورية، واضبط الرقم الهيدروجيني على 7.0. -7.2، أضف 2٪ أجار، وبعد إذابة الوسط، اسكبه في قوارير سعة 100 مل. تعقيم في الأوتوكلاف لمدة 15 دقيقة عند 120 درجة مئوية.
قبل الاستخدام، يجب إضافة مؤشر إلى الوسط. يمكنك استخدام إما بروموثيمول بلو أو الفينولروت. يضاف المؤشر إلى 100 مل من الوسط المنصهر. يؤخذ برومثيمول بلو بكمية 1 مل من محلول كحول 1.5٪. يتحول الوسط إلى اللون الأخضر الزيتوني. يضاف الفينولروت بكمية 2 مل من محلول كحول 1.5٪. يتحول الوسط إلى اللون الأصفر. بعد إضافة المؤشر، يُسكب الوسط في أنابيب الاختبار ويُعقم في الأوتوكلاف عند درجة حرارة 120 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
سلسلة متنوعة من الكربوهيدرات، أو وسط الهسهسة
لتحديد القدرة الأنزيمية للكائنات الحية الدقيقة، يتم استخدام وسائل الإعلام هيس. اعتمادًا على وجود إنزيم معين في الخلية الميكروبية، فهو قادر على تحلل أي من الكربوهيدرات مع تكوين منتجات تحلل معينة، لذلك يتم إدخال أي كربوهيدرات في الوسط: اللاكتوز، الجلوكوز، المانيتول، السكروز، إلخ. حصلت مجموعة من هذه الوسائط على اسم "السلسلة المتنوعة من الكربوهيدرات".
أولاً، قم بتحضير ماء الببتون: خذ 10 جم من الببتون و5 جم من ملح الطعام النقي كيميائيًا لكل 1 لتر من الماء المقطر، واغليه حتى يذوب الببتون، ثم قم بالتصفية من خلال مرشح ورقي (يجب أن يكون المرشح شفافًا تمامًا) واضبط الرقم الهيدروجيني على 7.2-7.4. ثم يضاف 0.5 جرام من إحدى الكربوهيدرات المستخدمة و1 مل من مؤشر أندريدي إلى 100 مل من ماء الببتون.
يتضمن تكوين مؤشر Andrede: 0.5 جم من حمض الفوكسين، 16 مل من 1 ن. محلول هيدروكسيد الصوديوم (NaOH) و 100 مل من الماء المقطر. إذا لزم الأمر، يمكن تحضير المؤشر مسبقًا وتخزينه في مكان مظلم، بعد غليه عند درجة حرارة 100 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. بعد إدخال المؤشر، يسكب الوسط في أنابيب اختبار ذات عوامات ويعقم في غلاية كوخ ثلاث مرات لمدة 30 دقيقة. في نهاية التعقيم، يجب غمر العوامات في الوسط، وإلا لا يمكن استخدام الأنبوب. تحتوي وسائط Hiss مع كاشف Andrede على لون أصفر قش بدون صبغة وردية. عندما تتطور الكائنات الحية الدقيقة في البيئة، فإن الأخيرة، التي تتحلل السكر لتكوين حمض، تسبب تغييرا في التفاعل. وبما أن مؤشر أندريدي يتحول إلى اللون الأحمر في البيئة الحمضية، فهذا دليل على أن الكائنات الحية الدقيقة تستخدم هذا السكر في وظائفها الحيوية. وعلى العكس من ذلك، يشير غياب الاحمرار إلى عدم وجود إنزيم يفكك الكربوهيدرات الموجودة في الوسط في المجمع الأنزيمي للميكروب قيد الدراسة.
