اختبار Intravital للحيوانات لداء الكلب. اختبار داء الكلب

داء الكلب(السعار) مرض معدٍ خطير على الحيوانات والإنسان. ويحدث هذا المرض في جميع دول العالم. تتميز بنتيجة قاتلة بنسبة 100٪.

العوامل الممرضة– فيروس RNA ينتمي إلى عائلة Rhabdovirus. هذا الفيروس لديه ميل للأنسجة العصبية. ويوجد في أعلى التتر في دماغ الحيوانات المريضة. بالإضافة إلى ذلك، توجد الفيروسات أيضًا في النخاع الشوكي والغدد اللعابية والدمعية.
هناك:

1. وهو فيروس "بري" ينتشر في الظروف الطبيعية وهو شديد الإمراض للإنسان والحيوان.
2. و "الثابت" الذي تم الحصول عليه في ظروف المختبر لا يسبب الأمراض للحيوانات والبشر عند تناوله خارج العصب.

فيروس داء الكلب ليس مقاومًا لدرجات الحرارة المرتفعة: عند درجة حرارة 60 درجة مئوية يتم تعطيله بعد 10 دقائق، وعند درجة حرارة 100 درجة مئوية يتم تعطيله على الفور تقريبًا. لكن الدماغ المتجمد يمكن أن يظل قابلاً للحياة لمدة تصل إلى عدة أشهر. كما يستمر لعدة أشهر في الأنسجة المتعفنة. مقاومة لمحاليل اليود. ولكن يتم تعطيله بسرعة بواسطة المحاليل المطهرة المعتمدة على الفورمالديهايد والكلورامين والقلويات.

البيانات الوبائية.

جميع الحيوانات ذوات الدم الحار معرضة للإصابة بفيروس داء الكلب. الحيوانات الأكثر حساسية هي الكلاب البرية (مثل الثعالب، والثعالب القطبية الشمالية، والذئاب، وكلاب الراكون، وابن آوى)، والقوارض القططية. الطيور أقل عرضة للإصابة.

في البرية، خزانات فيروس داء الكلب هي الحيوانات المفترسة والخفافيش، في المدينة - الكلاب الضالة.
مصدر العدوى هو الحيوانات المريضة التي تفرز الفيروس في لعابها. ويلاحظ وجود الفيروس في اللعاب بالفعل قبل 8-10 أيام من ظهور علامات المرض. تحدث العدوى من خلال اللدغة عندما يصل اللعاب إلى الأغشية المخاطية أو المناطق المتضررة من الجلد.

طريقة تطور المرض .

بعد دخول الجسم، يبدأ الفيروس في التكاثر في مكان الإدخال. وبعد 24 ساعة يبدأ في اختراق الأنسجة العصبية. ويتحرك في الأعصاب نحو الحبل الشوكي والدماغ بمعدل 7 سم/يوم. بعد أن وصل إلى الدماغ، يبدأ الفيروس في التكاثر بشكل مكثف، ثم ينتقل الفيروس عبر الأعصاب إلى جميع الأعضاء، وقبل كل شيء، إلى الغدد اللعابية والعينين. تتراوح فترة الحضانة (من لحظة الإصابة حتى ظهور العلامات السريرية) في المتوسط ​​من 14 إلى 60 يومًا، وقد تصل أحيانًا إلى 6-12 شهرًا.
علامات طبيه.

هناك 3 أنواع من تطور المرض.

1. دورة كلاسيكية ثلاثية المراحل أو شكل عنيف. في البداية، يلاحظ تغيير في سلوك الحيوان (المرحلة 1)، يصبح حنونًا جدًا أو على العكس من ذلك، خجولًا وغير متواصل. يمكن أن تستمر هذه المرحلة من عدة ساعات إلى 4 أيام. ثم تأتي المرحلة التالية وهي الإثارة (المرحلة الثانية) والتي تستمر من 1-4 أيام. تصبح الحيوانات عدوانية وعرضة للتجول ومهاجمة الحيوانات والناس. يتطور فقدان الشهية والقلق وسيلان اللعاب. وقبل 3-4 أيام من الوفاة، تتطور مرحلة الشلل أو الاكتئاب، والتي تتميز بالشلل التدريجي.
2. شكل مشلول أو صامت.تتميز بتطور الشلل دون مرحلة سابقة من الإثارة. مع هذا الشكل، يلاحظ سيلان اللعاب، وترهل الفك السفلي، وصعوبة البلع، وفقدان الشهية. ثم يتطور شلل عضلات الجذع والأطراف. وفاة الحيوان يحدث بعد 3-4 أيام.
3. "داء الكلب غير النمطي".هذا هو مسار مزمن تحت الإكلينيكي (دون ظهور الأعراض) للمرض، والذي يمكن أن يستمر لمدة تصل إلى 3 أشهر.

تشخبص.

يتم التشخيص الأولي على أساس التاريخ والأعراض السريرية. في حالة الاشتباه في داء الكلب بعد وفاة الحيوان، يتم إرسال جثة الحيوان إلى المختبر. إذا لم يكن ذلك ممكنا، استخدم الرأس أو الدماغ. يجب اتخاذ احتياطات صارمة عند تناول المواد!
يشمل التشخيص المختبري لداء الكلب عدة طرق بحثية.

1. الكشف عن جثث الاطفال الزنجي. لتشخيص داء الكلب، يتم إجراء فحص نسيجي لدماغ الحيوان المتوفى في المختبر. ويلاحظ وجود عقيدات داء الكلب في هياكل الجزء السفلي من البطين الرابع للدماغ ووجود أجسام بابيس-نيجري (شوائب اليوزينيات السيتوبلازمية التي تتكون من جزيئات فيروس داء الكلب) في الدماغ. يمكن العثور عليها في الحصين والهياكل القشرية والجذعية للدماغ، وفي المخيخ والعقد الظهرية للحبل الشوكي وظهارة القرنية للعين. ومع ذلك، إذا لم يتم الكشف عن جثث الأطفال الزنجي، فلا يمكن استبعاد الإصابة بداء الكلب.
2. اكتشاف المستضد باستخدام الأجسام المضادة الفلورية (MFA) أو تحليل التألق المناعي (ELISA). بالإضافة إلى هذه التفاعلات، يجري حاليًا تطوير طريقة تشخيصية جديدة باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).
3. اختبار بيولوجي لإصابة الفئران حديثي الولادة بفيروس من معلقات الدماغ والغدد اللعابية.

وفقًا لتشريعات الاتحاد الروسي، في حالات عضات الكلاب أو الحيوانات الأخرى (باستثناء أولئك الذين يعانون بشكل واضح من داء الكلب)، يجب على الضحايا الاتصال فورًا بالمؤسسات الطبية. ويجب نقل الحيوانات التي عضتها إلى أقرب مؤسسة بيطرية حكومية لفحصها من قبل المتخصصين والحجر الصحي لمدة 10 أيام.

لمنع انتشار داء الكلب، يتم توفير التطعيم الإلزامي السنوي للكلاب والقطط بلقاحات داء الكلب.

وفي الوقت الحالي، لاستيراد الحيوانات إلى عدد من البلدان، يلزم تقديم وثيقة تؤكد عدد الأجسام المضادة الصالحة لفيروس داء الكلب. للحصول على حماية فعالة ضد داء الكلب، يجب أن يكون الحد الأدنى لمستوى الأجسام المضادة المحايدة للفيروس في الدم 0.5 وحدة دولية/مل على الأقل. هذا النوع من الدراسات ليس تشخيصيًا ويهدف فقط إلى تحديد قوة المناعة ضد داء الكلب.
في موسكو، يمكنك التبرع بالدم لتحديد عيار الأجسام المضادة لفيروس داء الكلب في مركز التشخيص الجزيئي الواقع في Zvenigorodskoye Shosse، 5. وقد حصل مركز السيطرة على الأمراض على اعتماد دولي لإجراء هذا الاختبار ويصدر شهادات دولية صالحة طوال حياة الحيوان، بشرط الالتزام بالمواعيد النهائية لإعادة التطعيم.

يتم تحديد عيار الأجسام المضادة في موعد لا يتجاوز 30 يومًا بعد التطعيم. لذلك، إذا كنت تخطط للسفر مع حيواناتك الأليفة إلى الاتحاد الأوروبي أو بلدان أخرى، فيجب عليك الاهتمام مسبقًا بالتطعيم والتبرع بالدم لهذا الاختبار (تصدر النتائج خلال 7-14 يومًا).

مساعد مختبر في مختبر بيطري
"BioVetLab" لازاريفا إن.في.

داء الكلب(السعار) مرض معدٍ خطير على الحيوانات والإنسان. ويحدث هذا المرض في جميع دول العالم. تتميز بنتيجة قاتلة بنسبة 100٪.

العوامل الممرضة– فيروس RNA ينتمي إلى عائلة Rhabdovirus. هذا الفيروس لديه ميل للأنسجة العصبية. ويوجد في أعلى التتر في دماغ الحيوانات المريضة. بالإضافة إلى ذلك، توجد الفيروسات أيضًا في النخاع الشوكي والغدد اللعابية والدمعية.
هناك:

1. وهو فيروس "بري" ينتشر في الظروف الطبيعية وهو شديد الإمراض للإنسان والحيوان.
2. و "الثابت" الذي تم الحصول عليه في ظروف المختبر لا يسبب الأمراض للحيوانات والبشر عند تناوله خارج العصب.

فيروس داء الكلب ليس مقاومًا لدرجات الحرارة المرتفعة: عند درجة حرارة 60 درجة مئوية يتم تعطيله بعد 10 دقائق، وعند درجة حرارة 100 درجة مئوية يتم تعطيله على الفور تقريبًا. لكن الدماغ المتجمد يمكن أن يظل قابلاً للحياة لمدة تصل إلى عدة أشهر. كما يستمر لعدة أشهر في الأنسجة المتعفنة. مقاومة لمحاليل اليود. ولكن يتم تعطيله بسرعة بواسطة المحاليل المطهرة المعتمدة على الفورمالديهايد والكلورامين والقلويات.

البيانات الوبائية.

جميع الحيوانات ذوات الدم الحار معرضة للإصابة بفيروس داء الكلب. الحيوانات الأكثر حساسية هي الكلاب البرية (مثل الثعالب، والثعالب القطبية الشمالية، والذئاب، وكلاب الراكون، وابن آوى)، والقوارض القططية. الطيور أقل عرضة للإصابة.

في البرية، خزانات فيروس داء الكلب هي الحيوانات المفترسة والخفافيش، في المدينة - الكلاب الضالة.
مصدر العدوى هو الحيوانات المريضة التي تفرز الفيروس في لعابها. ويلاحظ وجود الفيروس في اللعاب بالفعل قبل 8-10 أيام من ظهور علامات المرض. تحدث العدوى من خلال اللدغة عندما يصل اللعاب إلى الأغشية المخاطية أو المناطق المتضررة من الجلد.

طريقة تطور المرض .

بعد دخول الجسم، يبدأ الفيروس في التكاثر في مكان الإدخال. وبعد 24 ساعة يبدأ في اختراق الأنسجة العصبية. ويتحرك في الأعصاب نحو الحبل الشوكي والدماغ بمعدل 7 سم/يوم. بعد أن وصل إلى الدماغ، يبدأ الفيروس في التكاثر بشكل مكثف، ثم ينتقل الفيروس عبر الأعصاب إلى جميع الأعضاء، وقبل كل شيء، إلى الغدد اللعابية والعينين. تتراوح فترة الحضانة (من لحظة الإصابة حتى ظهور العلامات السريرية) في المتوسط ​​من 14 إلى 60 يومًا، وقد تصل أحيانًا إلى 6-12 شهرًا.
علامات طبيه.

هناك 3 أنواع من تطور المرض.

1. دورة كلاسيكية ثلاثية المراحل أو شكل عنيف. في البداية، يلاحظ تغيير في سلوك الحيوان (المرحلة 1)، يصبح حنونًا جدًا أو على العكس من ذلك، خجولًا وغير متواصل. يمكن أن تستمر هذه المرحلة من عدة ساعات إلى 4 أيام. ثم تأتي المرحلة التالية وهي الإثارة (المرحلة الثانية) والتي تستمر من 1-4 أيام. تصبح الحيوانات عدوانية وعرضة للتجول ومهاجمة الحيوانات والناس. يتطور فقدان الشهية والقلق وسيلان اللعاب. وقبل 3-4 أيام من الوفاة، تتطور مرحلة الشلل أو الاكتئاب، والتي تتميز بالشلل التدريجي.
2. شكل مشلول أو صامت.تتميز بتطور الشلل دون مرحلة سابقة من الإثارة. مع هذا الشكل، يلاحظ سيلان اللعاب، وترهل الفك السفلي، وصعوبة البلع، وفقدان الشهية. ثم يتطور شلل عضلات الجذع والأطراف. وفاة الحيوان يحدث بعد 3-4 أيام.
3. "داء الكلب غير النمطي".هذا هو مسار مزمن تحت الإكلينيكي (دون ظهور الأعراض) للمرض، والذي يمكن أن يستمر لمدة تصل إلى 3 أشهر.

تشخبص.

يتم التشخيص الأولي على أساس التاريخ والأعراض السريرية. في حالة الاشتباه في داء الكلب بعد وفاة الحيوان، يتم إرسال جثة الحيوان إلى المختبر. إذا لم يكن ذلك ممكنا، استخدم الرأس أو الدماغ. يجب اتخاذ احتياطات صارمة عند تناول المواد!
يشمل التشخيص المختبري لداء الكلب عدة طرق بحثية.

1. الكشف عن جثث الاطفال الزنجي. لتشخيص داء الكلب، يتم إجراء فحص نسيجي لدماغ الحيوان المتوفى في المختبر. ويلاحظ وجود عقيدات داء الكلب في هياكل الجزء السفلي من البطين الرابع للدماغ ووجود أجسام بابيس-نيجري (شوائب اليوزينيات السيتوبلازمية التي تتكون من جزيئات فيروس داء الكلب) في الدماغ. يمكن العثور عليها في الحصين والهياكل القشرية والجذعية للدماغ، وفي المخيخ والعقد الظهرية للحبل الشوكي وظهارة القرنية للعين. ومع ذلك، إذا لم يتم الكشف عن جثث الأطفال الزنجي، فلا يمكن استبعاد الإصابة بداء الكلب.
2. اكتشاف المستضد باستخدام الأجسام المضادة الفلورية (MFA) أو تحليل التألق المناعي (ELISA). بالإضافة إلى هذه التفاعلات، يجري حاليًا تطوير طريقة تشخيصية جديدة باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).
3. اختبار بيولوجي لإصابة الفئران حديثي الولادة بفيروس من معلقات الدماغ والغدد اللعابية.

وفقًا لتشريعات الاتحاد الروسي، في حالات عضات الكلاب أو الحيوانات الأخرى (باستثناء أولئك الذين يعانون بشكل واضح من داء الكلب)، يجب على الضحايا الاتصال فورًا بالمؤسسات الطبية. ويجب نقل الحيوانات التي عضتها إلى أقرب مؤسسة بيطرية حكومية لفحصها من قبل المتخصصين والحجر الصحي لمدة 10 أيام.

لمنع انتشار داء الكلب، يتم توفير التطعيم الإلزامي السنوي للكلاب والقطط بلقاحات داء الكلب.

وفي الوقت الحالي، لاستيراد الحيوانات إلى عدد من البلدان، يلزم تقديم وثيقة تؤكد عدد الأجسام المضادة الصالحة لفيروس داء الكلب. للحصول على حماية فعالة ضد داء الكلب، يجب أن يكون الحد الأدنى لمستوى الأجسام المضادة المحايدة للفيروس في الدم 0.5 وحدة دولية/مل على الأقل. هذا النوع من الدراسات ليس تشخيصيًا ويهدف فقط إلى تحديد قوة المناعة ضد داء الكلب.
في موسكو، يمكنك التبرع بالدم لتحديد عيار الأجسام المضادة لفيروس داء الكلب في مركز التشخيص الجزيئي الواقع في Zvenigorodskoye Shosse، 5. وقد حصل مركز السيطرة على الأمراض على اعتماد دولي لإجراء هذا الاختبار ويصدر شهادات دولية صالحة طوال حياة الحيوان، بشرط الالتزام بالمواعيد النهائية لإعادة التطعيم.

يتم تحديد عيار الأجسام المضادة في موعد لا يتجاوز 30 يومًا بعد التطعيم. لذلك، إذا كنت تخطط للسفر مع حيواناتك الأليفة إلى الاتحاد الأوروبي أو بلدان أخرى، فيجب عليك الاهتمام مسبقًا بالتطعيم والتبرع بالدم لهذا الاختبار (تصدر النتائج خلال 7-14 يومًا).

مساعد مختبر في مختبر بيطري
"BioVetLab" لازاريفا إن.في.

تعليمات منهجية
حول التشخيص المختبري لداء الكلب

1. يتم تشخيص داء الكلب على أساس مجموعة معقدة من البيانات الوبائية والسريرية والمرضية وعلى أساس الاختبارات المعملية بشكل رئيسي.

2. للبحث، يتم إرسالها إلى المختبر مع تسليم خاص: جثة جديدة أو رأس كلب (قطة، ثعلب، ثعلب قطبي، خروف، عجل، إلخ)، من حيوانات كبيرة - رأس أو دماغ (طازج أو يحفظ في محلول جلسرين 30 - 50%). فقط العقول غير المحفوظة هي المناسبة للدراسات المصلية.

3. يتكون التشخيص المختبري لداء الكلب من فحص مجهري للدماغ (للكشف عن أجسام الأطفال الزنجية)، والأمصال (الكشف عن مستضد محدد لداء الكلب)، بالإضافة إلى اختبار بيولوجي على الفئران البيضاء أو الأرانب.

أمر البحث.

4. يتم تلقيح الدماغ الذي يتم تلقيه للبحث أولاً بالوسائط المغذية. يتم وضع جزء الدماغ على الفور في الثلاجة وتخزينه في حالة الحاجة إلى إعادة الفحص. ومن الجزء المتبقي من الدماغ، يتم أخذ المواد للفحص المجهري والتفاعلات المصلية والعينات البيولوجية.

ملحوظة. يتم إجراء تشريح الجثة وإزالة الدماغ وغيرها من الأعمال في ظروف معقمة مع الالتزام الصارم بالتدابير الوقائية الشخصية (التثبيت الثابت لرأس الحيوان، وحماية اليدين بزوجين من القفازات: الجراحية والتشريحية؛ ويتم ارتداء نظارات واقية حماية العينين، ويتم تغطية الأنف والفم بضمادة الشاش).

I. الدراسات المجهرية

5. للفحص المجهري يتم عمل بصمات ومسحات من أجزاء مختلفة من الدماغ.

6. لتحضير البصمة، توضع قطع من الدماغ (قرن الأمون، القشرة الدماغية، المخيخ، النخاع المستطيل) على ورق ترشيح مطوي في 4-6 طبقات. يتم لمس سطح القطع عدة مرات (3 - 4) على التوالي بشريحة زجاجية نظيفة، مع الضغط عليه بخفة، بحيث يتم عمل بصمة رقيقة على الزجاج.

7. يتم عمل المسحات من نفس مناطق الدماغ. للقيام بذلك، يتم طحن قطع من الدماغ في هاون ومدقة من الخزف أو في أنبوب اختبار بقضيب زجاجي حتى يتم تشكيل كتلة متجانسة، والتي يتم من خلالها عمل مسحات خشنة على شريحة زجاجية خالية من الدهون.

يمكنك عمل المسحات بطريقة أخرى. وللقيام بذلك، يتم وضع قطعة صغيرة من الدماغ على حافة شريحة زجاجية، وبواسطة كوب آخر يتم سحقها وتلطيخها من حافة إلى أخرى، مما ينتج عنه مسحة رقيقة وموحدة على سطح الزجاج.

8. يتم تلوين الخطوط أو المطبوعات الناتجة بإحدى الطرق التالية:

أ) تلطيخ وفقا لمورومتسيف. يتم تثبيت المسحات أو المطبوعات المحضرة والتي لا تزال مبللة على الفور في كحول الإيثيل أو الميثيل أو في خليط من الكحول إلى النصف مع الأثير أو الأسيتون (نقي كيميائيًا) لمدة 1-2 ساعة ثم يتم غسلها بالماء. يجب أن تكون الحاوية التي تحتوي على المثبت مغلقة جيدًا لمنع تبخر سائل التثبيت. بعد الغسيل بالماء، يتم وضع المسحات المبللة لمدة 5 - 10 دقائق في محلول طلاء مونسون المخفف بالماء بنسبة 1:40. ثم يتم تجفيف الطلاء وغمر المسحات على الفور في محلول مائي 10٪ من التانين لمدة 8 - 10 دقائق حتى يظهر لون مزرق. بعد ذلك، يتم غسل المسحات بالماء، وتجفيفها بورق الترشيح، وتمريرها عبر خليط من أجزاء متساوية من الكحول مع الأسيتون (النقي كيميائيًا) أو الكحول مع الزيلين، وتجفيفها مرة أخرى باستخدام ورق الترشيح. يجب أن يكون للطاخة الملطخة خلفية زرقاء فاتحة، في حين أن نواة الخلايا العصبية مطلية باللون الأزرق، وتكون أجسام Babes-Negri أرجوانية شاحبة مع شوائب داكنة؛

ب) تلطيخ البائعين. يتم تطبيق خليط من الكاشف "A" (أزرق الميثيلين - 2 جم، كحول الميثيل بدون الأسيتون - 100 مل) والكاشف "B" (الفوشسين الأساسي - 0.5 جم، الكحول الإيثيلي بدون آثار للأسيتون) على الطباعة أو اللطاخة المبللة المُجهزة لمدة 4 - ق - 100 مل). يتكون محلول الصبغة العاملة من 15 مل من الكاشف "A"، و2 - 4 مل من الكاشف "B" و25 مل من كحول الميثيل. بعد الصباغة، يتم غسل المستحضر بالماء الجاري وتجفيفه. في اللطاخة الملطخة، يكون سيتوبلازم الخلايا العصبية أزرق فاتح، والنواة زرقاء داكنة، وكريات الدم الحمراء حمراء قرميدية، وأجسام Babes-Negri حمراء أرجوانية مع بنية قاعدية مرئية بوضوح للأجسام؛

ج) تلطيخ حسب ميخين. يتم تثبيت المسحات أو المطبوعات في خليط من الكحول والأثير (أجزاء متساوية) لمدة 5 - 10 دقائق، وبعد ذلك يتم تجفيفها بورق الترشيح وصبغها لمدة 30 - 40 دقيقة باستخدام طلاء جيمسا (1 - 2 قطرة لكل 1 مل من المقطر). ماء)، يتم غسله بسرعة بالكحول المحمض (قطرة واحدة من حمض الأسيتيك الجليدي لكل 30 مل من كحول 96 درجة)، ثم الماء، وتجفيفه بورق الترشيح وفحصه. إذا كانت المادة في الجلسرين، يتم أولاً شطفها جيداً في الماء وتجفيفها بورق الترشيح.

في العينة الملطخة، عند الفحص المجهري، يجب أن تكون الخلفية الرئيسية حمراء مع صبغة أرجوانية. إذا سادت النغمة الزرقاء، يتم غسل اللطاخة مرة أخرى بالكحول المحمض وغسلها بالماء. تكون الخلايا العصبية الهرمية مزرقة اللون مع نواة شديدة السواد، وتكون جسيمات Babes-Negri ذات لون أحمر وردي مع شوائب زرقاء داكنة منقط؛

د) تلطيخ وفقا لبورمان جينولينا. يتم تثبيت السكتات الدماغية أو المطبوعات الرفيعة لمدة 5 دقائق في خليط من التركيبة التالية: الكحول والأثير (أجزاء متساوية) - 98 مل، حمض الأسيتيك الجليدي - 2 مل؛ بعد التثبيت، يتم غمرها لمدة 5 دقائق في محلول 10٪ من الصودا البلورية، ثم يتم غسلها بالماء وتجفيفها في الهواء. يتم تلطيخ المسحات الثابتة لمدة دقيقتين بالطلاء المحضر قبل الاستخدام (محلول مائي مشبع من أزرق الميثيلين - 3 قطرات، محلول أساسي مشبع من الفوكسين - قطرتان، ماء الصنبور - 20 مل). يُسكب محلول الطلاء على المسحة، ويُثبت فوق لهب الموقد، ثم يُترك الطلاء لمدة دقيقة أخرى، وبعد ذلك يُغسل بالماء ويُجفف بورق الترشيح. في اللطاخة الملطخة، يجب أن تكون الخلفية الرئيسية حمراء زاهية، ويجب أن تكون بروتوبلازم الخلايا العصبية ملونة باللون الأزرق المحمر، ويجب أن تكون نواتها زرقاء داكنة، ويجب أن تكون أجسام Babes-Negri ملونة باللون الأحمر الفراولة مع بنية حبيبية نموذجية. تبدو خلايا الدم الحمراء وكأنها دوائر غير ملونة.

ثانيا. الدراسات المصلية

9. تفاعل الترسيب المنتشر في هلام الأجار. يتم استخدام التفاعل للكشف عن المستضد الخاص بداء الكلب في الدماغ غير المحفوظ للحيوانات التي ماتت بسبب داء الكلب في الشوارع، وكذلك في الحيوانات التي تم إجراء اختبار حيوي عليها. للتفاعل، يمكنك استخدام دماغ قديم (يصل إلى شهر واحد).

يتم إجراء التفاعل على شرائح زجاجية خالية من الدسم، حيث يتم وضع 2.5 مل من هلام الأجار المذاب والمبرد إلى 60 درجة مئوية، ويتم تحضيره وفقًا للوصفة: أجار أجار جاف - 12 - 15 جم؛ كلوريد الصوديوم النقي كيميائيًا - 8.6 جم؛ محلول 1٪ (مرشح) من برتقال الميثيل في 50 درجة كحول - 5 - 10 مل؛ ميرثيولات - 0.01 جم؛ الماء المقطر - 1 لتر.

ملحوظة. لإعداد التفاعل، من الأفضل استخدام Difco agar-agar، فهو يذوب تمامًا؛ تتطلب الأنواع الأخرى من أجار أجار ترشيحًا دقيقًا.

بعد أن يتصلب الآجار، يتم عمل الآبار فيه باستخدام أنبوب معدني أو زجاجي ذو جدران رقيقة بقطر داخلي 4 - 5 مم، ووضعها وفقًا للاستنسل (انظر الشكل -).

بالنسبة للتفاعلات في الحيوانات الكبيرة، يتم استخدام أجزاء من الدماغ - قرن أمون، القشرة الدماغية، المخيخ، النخاع المستطيل؛ في الفئران، Gophers، خنازير غينيا، الهامستر، إلخ - أي ثلاثة أجزاء من الدماغ؛ في الفئران، الدماغ بأكمله.

مخطط لإعداد هطول الأمطار الصغيرة:
أ - القشرة (النصف الأيسر)؛ في- القشرة (النصف الأيمن)؛ مع- قرن عمون (يسار)؛
د- قرن عمون (يمين)؛ ه- المخيخ. و- النخاع.
1 , 2 , 3 , 4 - تخفيفات الجلوبيولين، على التوالي 1:2، 1:4، 1:8، 1:16.

RP إيجابي مع جميع تخفيفات الجلوبيولين
(القشرة الدماغية للأغنام، داء الكلب في الشوارع)

RP إيجابي مع تخفيفات الجلوبيولين 1:4؛ 1: 8، 1:16
(قرن كلب عمون، داء الكلب في الشوارع)

RP إيجابي مع تخفيفات الجلوبيولين 1:16،
لا توجد خطوط هطول مع التخفيفات 1:2، 1:4،
(النخاع المستطيل للكلب، داء الكلب في الشوارع)

يتم طحن الدماغ في هاون ومدقة من الخزف أو في الجمجمة نفسها لتكوين "معجون" يستخدم لملء آبار المستضد. تمتلئ الآبار المتبقية مع عجل الجلوبيولين داء الكلب في التخفيفات من 1:2، 1:4، 1:8، 1:16. حجم المكونات المستخدمة هو 0.02 مل.

يتم وضع عناصر التحكم ذات المستضدات الإيجابية والسلبية في وقت واحد على كوب منفصل باستخدام نفس الأجار باستخدام نفس الاستنسل.

بعد وضع مكونات التفاعل في الآبار المناسبة، يتم نقل الشرائح إلى غرفة رطبة (أطباق بتري مع ورق ترشيح رطب أو صوف قطني) وتوضع في منظم الحرارة لمدة 6 ساعات عند درجة حرارة 37 - 38 درجة مئوية. ثم تُترك الأكواب في درجة حرارة الغرفة لمدة 18 ساعة أخرى.

يتم تسجيل التفاعل بعد 3 و6 و24 ساعة من إجرائه. لمنع جفاف الآجار، يتم وضع أكواب التفاعل في نفس أطباق بيتري التي تحتوي على صوف قطني مبلل بعد كل مشاهدة.

مع وجود رد فعل إيجابي لهطول الأمطار في أجار، يمكن أن يتشكل واحد أو اثنان، ونادرًا جدًا ثلاثة خطوط هطول متوازية بين الآبار التي تحتوي على الجلوبيولين والمستضد. وتكون خطوط الهطول الناتجة مرئية بصريًا عندما يتم إضاءة النظارات من الأسفل إلى الأعلى بزاوية تبلغ حوالي 45 درجة.

إذا كان رد فعل هطول الأمطار سلبيا، يتم إجراء اختبار حيوي.

10. رد فعل المناعي. وهو يعتمد على الكشف بواسطة مجاهر خاصة (ML-1، ML-2، ML-3، وما إلى ذلك) للمستضد الفيروسي الذي تفاعل مع مصل محدد مضاد لداء الكلب موسوم بصبغة الفلورسنت.

بالنسبة للتفاعل، يتم عمل مطبوعات رقيقة ومتساوية الطبقات على أكواب منزوعة الشحوم بعناية من أدمغة طازجة أو مجمدة حديثًا. يتم تحضير البصمات من أجزاء من الدماغ (قرن الأمون، القشرة الدماغية، المخيخ، النخاع المستطيل) بنفس طريقة الفحص المجهري. يتم تحضير ما لا يقل عن 4 مستحضرات من كل قطعة من الدماغ. وللسيطرة، يتم إجراء الاستعدادات بالمثل من دماغ حيوان سليم.

بعد التجفيف في الهواء، يتم تثبيت المستحضرات في الأسيتون لمدة 4 ساعات عند درجة حرارة لا تزيد عن 4 درجات مئوية. يجب أن تكون الحاوية التي تحتوي على المثبت مغلقة جيدًا لمنع تبخر سائل التثبيت. بعد التثبيت بالأسيتون، يتم تطبيق بضع قطرات من المترافق (الفلورسنت المضاد لداء الكلب جلوبيولين جاما) في تخفيف العمل على المستحضرات. ثم يتم وضعها في غرفة رطبة (طبق بتري أو كفيت مغلق من المينا بقاع مبلل) لمدة 20 - 30 دقيقة عند درجة حرارة 25 درجة مئوية.

بعد ذلك، تغسل المستحضرات بالماء أو بمحلول الفوسفات المنظم (الرقم الهيدروجيني 7.2 - 7.4) لمدة ساعة واحدة، ثم تشطف بالماء المقطر، وتجفف بالهواء وتفحص. يتم عرض الاستعدادات تحت نظام الغمر. للغمر، يتم استخدام زيت غير الانارة.

في عينة ملطخة، تحت المجهر الفلوري، تتألق أنسجة المخ (تتوهج) بلون أصفر رمادي باهت. يتم اكتشاف مستضد فيروس داء الكلب في المستحضرات على شكل حبيبات خضراء مصفرة أو خضراء زاهية بأشكال وأحجام مختلفة - من بالكاد يمكن ملاحظتها إلى قطر يتراوح من 15 إلى 20 ميكرون.

في إعداد التحكم، لم تتم ملاحظة أي حبيبات شديدة الإضاءة باللون الأصفر والأخضر.

عند فحصه باستخدام طريقة الأجسام المضادة الفلورية، يعتبر تشخيص داء الكلب ثابتًا إذا تم اكتشاف عدد كافٍ (10 على الأقل) من الحبيبات النموذجية ذات التوهج الأخضر الساطع بأحجام مختلفة في العديد من مجالات رؤية المجهر. لا ينبغي أن يكون هناك مثل هذه التشكيلات في السيطرة.

في حالة عدم وجود مضان إيجابي، يتم إجراء اختبار بيولوجي.

ثالثا. عينة بيولوجية

11. يتم إجراء اختبار بيولوجي لداء الكلب إذا تم الحصول على نتيجة سلبية أثناء الفحص المجهري (لم يتم الكشف عن أجسام Babes-Negri)، مع تفاعلات مصلية (لم يتم اكتشاف مستضد محدد لداء الكلب)، وكذلك عند اكتشاف شوائب غير نمطية. يتم إجراء الاختبارات البيولوجية على الفئران البيضاء أو الأرانب.

12. تصاب الفئران أو الأرانب ذات الخبرة بتعليق 10٪ من دماغ الاختبار في محلول فسيولوجي أو مرق ببتون اللحم بدرجة حموضة 7.2 - 7.4. لتحضير المعلق تستخدم نفس مناطق الدماغ التي تم أخذ المادة منها لإجراء الدراسات المجهرية والمصلية.

يتم جمع الأجزاء المستأصلة من الدماغ في أنبوب اختبار معقم ويتم وزنها، ثم يتم طحنها جيدًا بمدافع الهاون والمدقة، وبعد ذلك يضاف المحلول الفسيولوجي أو مرق الببتون اللحمي للحصول على معلق بنسبة 10٪. يُترك المعلق الناتج لمدة 10 دقائق ويتم استخدام المادة الطافية للعدوى.

إذا كانت المادة المرضية ملوثة، يتم سكب السائل الطافي في وعاء آخر (أنبوب اختبار) ويضاف إليه 500 - 1000 وحدة من البنسلين والستربتومايسين لكل 1 مل من السائل، وبعد ذلك يترك لمدة 30 دقيقة أخرى في الغرفة درجة الحرارة ومن ثم استخدامها للعدوى. يجب تحضير المعلق في ظروف معقمة ومع الالتزام الصارم بقواعد الوقاية الشخصية.

اختبار بيولوجي على الفئران البيضاء. للعدوى، يتم استخدام فئران بيضاء تزن 8-10 جرام لكل دراسة، يتم أخذ 6 فئران، 3 منها مصابة في الدماغ، و 3 - تحت الجلد. عند إصابة الدماغ، يتم إدخال الإبرة في نقطة تقع خلف الخط الذي يربط الزوايا الخلفية وبعيداً قليلاً عن الخط الذي يمتد إلى منتصف الرأس. يتم مسح موقع الإصابة بالكحول. يدار المعلق بجرعة 0.03 مل. لمنع الإبرة من الاختراق بعمق في الدماغ، يتم وضع محدد على طرفها - قطعة صغيرة من أنبوب مطاطي، يتم تثبيتها على مسافة 2 - 3 مم من نهاية الإبرة. في حالة العدوى تحت الجلد، يتم حقن المعلق في منطقة طرف الأنف (الشفة العليا) بجرعة 0.05 مل. يتشكل تورم طفيف في موقع حقن التعليق. يتم وضع الفئران المصابة في مرطبانات زجاجية ويتم مراقبتها لمدة 30 يومًا. إذا كانت نتيجة الاختبار البيولوجي إيجابية، فإن الفئران عادةً ما تظهر عليها صورة سريرية لداء الكلب المشلل في اليوم السابع إلى الخامس عشر بعد الإصابة.

في البداية، لوحظ الخمول والفراء الأشعث والحدب الغريب، فضلا عن ضعف تنسيق الحركات. ثم يأتي شلل الأطراف الخلفية، وبعد ذلك - الأطراف الأمامية، ويتحول إلى شلل عام، وينتهي بالموت. مدة المرض 2 - 3 أيام.

مع تطور الشلل العام، يتم قتل الفئران باستخدام التخدير الأثير أو الكلوروفورم. يتم فتح تجويف الجمجمة للفئران الميتة والمقتولة، ويتم تلقيح الدماغ بالوسائط المغذية، وبعد ذلك تتم إزالة الدماغ، حيث يتم إعداد الاستعدادات للدراسات المجهرية والبيولوجية المناعية.

إذا لم تكن هناك مظاهر سريرية لداء الكلب في الفئران المصابة، يتم تدميرها خلال 30 يومًا. يتم تطهير الجرار التي تم حفظها فيها جيدًا.

الاختبار البيولوجي على الأرانب. لإجراء اختبار بيولوجي، خذ 4 أرانب يزن كل منها 1.5 كجم على الأقل. يصاب 2 أرنب في الدماغ و 2 في العضل في منطقة الفخذ. يتم إعطاء المعلق داخل المخ بجرعة 0.2 مل، وفي العضل بجرعة 2 مل.

إذا كانت نتيجة الاختبار البيولوجي إيجابية، تصاب الأرانب بالمرض خلال 16 إلى 21 يومًا. يحدث داء الكلب في الأرانب في شكل مشلول صامت مع نتيجة مميتة. تتم إزالة أدمغة الأرانب الميتة ويتم إجراء مزيد من الفحص بنفس طريقة إصابة الفئران بالعدوى. تتم مراقبة الأرانب لمدة 45 - 50 يومًا. وبعد الفترة المحددة يتم تدمير الأرانب. يتم تطهير الأقفاص التي تم حفظ حيوانات التجارب فيها.

رابعا. الدراسة النسيجية 1

1 يستخدم الفحص النسيجي كوسيلة إضافية

للفحص النسيجي، يتم أخذ قطع من قرن عمون، القشرة الدماغية، المخيخ، النخاع المستطيل وتثبيتها في حصة أو حصتين من الأسيتون بحيث تكون مدة التثبيت ما بين 6 إلى 18 ساعة.

من الأفضل ترك التثبيت في الأسيتون طوال الليل. ثم يتم تمرير المادة من خلال جزأين من الزيلين، مع الاحتفاظ بها لمدة 30 دقيقة في كل منهما، ومن خلال جزأين من البارافين - لمدة ساعة واحدة في كل منهما. يتم إزالة البارافين من الأجزاء النهائية باستخدام الطريقة المعتادة ويتم صبغها وفقًا لـ Lenz أو Turevich:

تلطيخ لينز. يتم تلطيخ المقاطع بمحلول الأيوسين لمدة 1-3 دقائق (يذوب 0.5 جم من الأيوسين في 100 مل من الكحول الإيثيلي بدرجة حرارة 60 درجة). يتم غسل الأيوسين بسرعة بالماء وصبغه بميثيلين ليفلر الأزرق لمدة دقيقة واحدة، وغسله بالماء، وتجفيفه بعناية بورق الترشيح وتمييزه بمحلول الوحدات. الصودا في الكحول المطلق (5 قطرات من هيدروكسيد الصوديوم لكل 30 مل من الكحول) حتى اللون الوردي الفاتح. يُسكب محلول حمض الأسيتيك على المستحضر (قطرة واحدة من حمض الأسيتيك الجليدي لكل 60 مل من الكحول المطلق) ويُحفظ حتى يظهر لون أزرق باهت، ويُغسل بسرعة بالكحول ويُصفى بالزيلين لمدة 4 - 5 دقائق. تم طلاء أجسام Babes-Negri باللون الأحمر الفاتح مع شوائب زرقاء، وسيتوبلازم الخلايا العقدية باللون الأزرق الفاتح؛

تلطيخ وفقا لتوريفيتش. مباشرة بعد مرورها عبر الكحول والماء المقطر، يتم تلطيخ الأجزاء المنزوعة الشمع باستخدام هيماتوكسيلين Weigert أو Ehrlich ويتم غسلها بالماء المقطر. ثم قم بصبغها بمحلول مائي 1% من حمض الفوكسين لمدة دقيقة واحدة ثم اغسلها جيداً بالماء المقطر حتى تظهر صبغة وردية شاحبة. بعد الغسيل، تعامل بمزيج (بأجزاء متساوية) من محلول مائي مشبع من حمض البكريك (25 - 30 جم من حمض البكريك لكل 1 لتر من الماء المقطر الساخن) وكحول 96 درجة. أثناء المعالجة، تتم ملاحظة إزالة سحب الطلاء الأحمر، وبعد 10 إلى 20 ثانية، تكتسب الأقسام صبغة صفراء. يتم شطف المقاطع بسرعة في الماء وتجفيفها قليلاً باستخدام ورق الترشيح. بعد ذلك، وبنفس السرعة، مرر عبر الكحول المطلق أو 96 درجة، والزيلين الكربوليك، والزيلين النقي، ثم ضعه في البلسم. تتميز أجسام Babes-Negri بلونها الأحمر الكرزي، ونواة الخلية سوداء أو زرقاء، اعتمادًا على نوع الهيماتوكسيلين الملطخ بها. تتنوع أجسام Babes-Negri بشكل كبير وحجمها، فهي موجودة في السيتوبلازم وعمليات الخلايا العصبية في شكل نسخ عديدة أو مفردة. في أغلب الأحيان، توجد أجسام Babes-Negri في خلايا العقدة الكبيرة، ولا تحتوي الخلايا التي تحتوي عليها على علامات انحطاط واضحة.

غالبًا ما يتم العثور على شوائب أخرى، والتي، بسبب عدد من الميزات المماثلة، يتم الخلط بينها أحيانًا وبين أجسام Negri. يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن أدمغة القطط السليمة والفئران البيضاء تحتوي أحيانًا على أجسام غير محددة محبة للحموضة. ويمكن تمييز هذه الأجسام عن الأجسام الزنجية بغياب الحبيبات الداخلية وتجانس المادة الرئيسية.

يتميز داء الكلب أيضًا بعلامات التهاب الدماغ والنخاع الحاد: في الغالب حول الأوردة الصغيرة، تم العثور على ارتشاحات حول الأوعية الدموية، وتتكون بشكل رئيسي من الخلايا اللمفاوية التي تشبه اقتران الخلايا.

في الخلايا العقدية الدماغية، قد يكون هناك انحلال لوني، وتفريغ وتورم الخلايا الحاد، بالإضافة إلى موت الخلايا الفردية. في منطقة الخلايا العصبية التالفة، يكون رد الفعل التكاثري للخلايا الدبقية ثابتًا تمامًا، ويأخذ شكل البلعمة العصبية الحقيقية، يليها استبدال الخلايا العصبية بعناصر الخلايا الدبقية المضاعفة. يُطلق على مثل هذا التراكم للخلايا المتكاثرة في موقع الخلية العصبية المتحللة اسم "عقيدة داء الكلب" - يمكن أحيانًا تتبع عملية تطور العقيدة في مقطع (1).

داء الكلب - مرض معدي حاد يحدث مع أضرار جسيمة في الجهاز العصبي، وعادة ما تكون النتيجة مميتة. البشر وجميع الثدييات معرضون للإصابة.

داء الكلب منتشر على نطاق واسع. ينتقل العامل المسبب للعدوى عن طريق الكلاب والقطط والقوارض البرية والحيوانات المفترسة، وكذلك الخفافيش مصاصة الدماء.

تعتمد مدة فترة الحضانة على مكان وقوة العضة، وكمية الفيروس الذي دخل الجرح وشدته، ومقاومة الحيوان المعض. وتستمر فترة الحضانة من 1-3 أسابيع إلى سنة أو أكثر.

يتقدم المرضحار. علاماته السريرية هي نفسها في الأساس في جميع الحيوانات، ولكنها أكثر شيوعًا في الكلاب، حيث يمكن ملاحظة مسار المرض العنيف والهادئ (الشلل). في الماشية، يمكن أن يكون لداء الكلب مسار غير نمطي (فقدان الشهية، ونى الكرش، شلل البلعوم، سيلان اللعاب). قد لا تكون هناك مرحلة الإثارة.

التغيرات المرضيةغير محدد. في آكلي اللحوم (الكلاب بشكل رئيسي)، يمكن العثور على أجسام غريبة في المعدة.

وقد أعلن فيروس داء الكلب عن الاعتلال العصبي. يخترق من المحيط (موقع اللدغة) على طول جذوع الأعصاب إلى الجهاز العصبي المركزي بشكل مركزي، وينتشر في الجسم بشكل طردي على طول الأعصاب الطرفية ويدخل إلى الأعضاء المختلفة، بما في ذلك الغدد اللعابية.

ويشير الفيروسإلى الأسرة الفيروسات المخططةعائلة فيروس ليسا. الفيروسات لها شكل قضيب ذو نهاية مقطعة. فيريون فيريون - تحتوي على الحمض النووي الريبيمع نوع حلزوني من التماثل، لديه قذيفة البروتين الدهني. درجات الحرارة المنخفضة تحافظ على الفيروس. درجة حرارة 60 درجة مئوية تقتله في 5-10 دقائق، وأشعة الشمس - في 5-7 أيام. تعمل محاليل الفورمالين والفينول وحمض الهيدروكلوريك (5٪) على تعطيل نشاط الفيروس خلال 5-10 دقائق.

يحتوي فيريون فيروس داء الكلب على مستضدات بروتين سكري (خارجي) وقفيصة نووية (داخلية). يستحث مستضد البروتين السكري تكوين أجسام مضادة تحييد الفيروس، ويحفز مستضد القفيصة النووية تثبيت المتممة والأجسام المضادة المترسبة.

في الجسم، يتم توطين الفيروس بشكل رئيسي في الجهاز العصبي المركزي، وكذلك في الغدد اللعابية واللعاب.

المزروعةعلى الفئران والأرانب والخنازير الغينية وغيرها من الحيوانات، وكذلك في مزارع الخلايا الأولية (كلى الهامستر، وأجنة الأغنام، والعجول، وما إلى ذلك) والخلايا المستمرة. لا يظهر تكاثر الفيروس في مزارع الخلايا دائمًا على أنه CPE. بعد التكيف الأولي، تكون أجنة الدجاج أيضًا عرضة للإصابة بفيروس داء الكلب. يحفز الفيروس تكوين الأجسام المتضمنة السيتوبلازمية، والتي توجد غالبًا في خلايا قرن الأمون والمخيخ والقشرة الدماغية.

مصدر العدوىهي حيوانات مريضة. ينقلون الفيروس عن طريق اللدغة. يمكن أن تصاب الحيوانات آكلة اللحوم بالعدوى عن طريق أكل أدمغة وأحبالها الشوكية للحيوانات التي ماتت بسبب داء الكلب. تم إثبات إمكانية الإصابة بداء الكلب عن طريق الهواء (في الأماكن التي تتواجد فيها الخفافيش). حتى الستينيات، كان المصدر الرئيسي لداء الكلب هو الكلاب والقطط، ثم الثعالب والذئاب والكورساك وغيرها من الحيوانات البرية.

تشخبصيتم تشخيص داء الكلب على أساس البيانات الوبائية والسريرية ونتائج الاختبارات المعملية، التي تتسم بأهمية بالغة.

عند العمل مع الحيوانات المريضة والمواد المعدية، من الضروري التقيد الصارم بتدابير السلامة الشخصية: ارتداء القفازات المطاطية، والعباءات ذات الأكمام، وساحة مطاطية أو بولي إيثيلين، وأحذية مطاطية، ونظارات السلامة، وقناع الوجه الواقي.

يمنع تشريح الحيوانات المشتبه بإصابتها بداء الكلب في الحقل.

الحصول على مواد خاصة. لاختبار داء الكلب، يتم إرسال جثث كاملة طازجة من الحيوانات الصغيرة إلى المختبر، ومن الحيوانات الكبيرة والمتوسطة الحجم - الرأس مع أول فقرتين عنق الرحم. تتم معالجة جثث الحيوانات الصغيرة بالمبيدات الحشرية قبل إرسالها للبحث.

يتم تعبئة المواد المرضية في أكياس بلاستيكية وتوضع في صناديق مغلقة بإحكام مع وسادة ماصة للرطوبة مشربة بمطهر. المادة والرسالة التوضيحية التي توضح المرسل وعنوانه ونوع الحيوان وبيانات السجل الطبي ومبرر الاشتباه في إصابة الحيوان بداء الكلب وتاريخ وتوقيع الطبيب.

التشخيص المختبري. ويشمل: الكشف عن المستضد الفيروسي في RIF وRDP وأجسام Babes-Negri والاختبارات الحيوية على الفئران البيضاء.

الشعاب المرجانية.ولأجل هذا التفاعل، تنتج الصناعة الحيوية جلوبيولين جاما فلورسنت مضاد لداء الكلب.

منهجية إعداد RIF . يتم تحضير مطبوعات أو مسحات رقيقة على شرائح زجاجية خالية من الدهون من أجزاء مختلفة من الدماغ على الجانب الأيسر والأيمن (قرن أمون، القشرة الدماغية، المخيخ، النخاع المستطيل). يتم تحضير مستحضرين على الأقل من كل جزء من الدماغ. يمكنك أيضًا فحص الحبل الشوكي والغدد اللعابية تحت الفك السفلي. للسيطرة على المرض، يتم إجراء الاستعدادات من دماغ حيوان سليم (عادةً فأر أبيض).

يتم تجفيف المستحضرات في الهواء، وتثبيتها في الأسيتون المبرد (ناقص 20 درجة مئوية لمدة 4 إلى 12 ساعة)، وتجفيفها في الهواء، ويتم تطبيق جلوبيولين جاما الفلوريسنت، ووضعها في غرفة رطبة عند 37 درجة مئوية لمدة 25-30 دقيقة، ثم يتم تجفيفها جيدًا. يغسل بمحلول ملحي أو فوسفات مع درجة حموضة 7.4، ثم يشطف بالماء المقطر، ويجفف بالهواء، ثم يوضع زيت غمر غير فلوري ويعرض تحت مجهر فلوري.

في المستحضرات المحتوية على مستضد فيروس داء الكلبلوحظ في أحجام وأشكال مختلفة حبيبات صفراء وخضراء الفلورسنت في الخلايا العصبيةولكن في كثير من الأحيان خارج الخلايا.

لا ينبغي أن يكون هناك مثل هذا التوهج في السيطرةعادةً ما يتوهج النسيج العصبي بلون رمادي أو أخضر باهت. يتم تقييم شدة التوهج بالصلبان.

النتيجة تعتبر سلبيةفي غياب مضان معين.

لا يمكن فحص المواد المأخوذة من الحيوانات المحصنة ضد داء الكلب في RIF لمدة 3 أشهر. بعد التطعيم، حيث قد يكون هناك مضان لمستضد فيروس اللقاح.

الأنسجة المحفوظة بالجلسرين والفورمالدهيد والكحول و

إلخ، بالإضافة إلى المواد التي تظهر عليها علامات الاضمحلال ولو بشكل طفيف.

RDP في هلام أجار . تعتمد الطريقة على خاصية انتشار الأجسام المضادة والمستضدات في هلام الأجار، وعند التقاءها، تشكل خطوط ترسيب مرئية بصريًا (مستضد + مركب جسم مضاد). يستخدم للكشف عن المستضد في دماغ الحيوانات التي ماتت بسبب فيروس داء الكلب في الشوارع، أو أثناء العدوى التجريبية (الاختبار الحيوي).