كتابة الحمض النووي. الحمض النووي في الطب الشرعي والعلوم

اليوم، تمت دراسة أكثر من مائة نوع من فيروس الورم الحليمي البشري، نصفها يسبب تطور التكوينات على الجلد والأغشية المخاطية للأعضاء الحميمة للإنسان. وتشير الإحصائيات إلى أن 80% من سكان العالم مصابون بهذا المرض. وهذا يعني أن خلايا الجسم تحتوي على فيروس الورم الحليمي البشري بدرجات متفاوتة من التسبب في الأورام.

يمكن أن يؤدي وجود فيروس الورم الحليمي لدى المريض إلى تطور مضاعفات خطيرة؛ ومن الصعب التنبؤ بكيفية تصرف هذا النوع أو ذاك من مسببات الأمراض. ولهذا السبب من المهم جدًا معرفة خصائص كل نمط وراثي من أجل مكافحة هذه العدوى بشكل فعال.

العديد من أنواع فيروس الورم الحليمي البشري آمنة تمامًا لحامليها؛ وتحدث الأورام الحليمية والثآليل البسيطة، والتي يتم القضاء عليها بنجاح عن طريق الطرق التجميلية.

تنتمي أنواع أخرى من الأورام الحليمية إلى المجموعة المسرطنة وتثير تعديلًا نشطًا للخلايا، مما يؤدي إلى تشخيص السرطان في الناقل. يسمح لنا تقسيم فيروس الورم الحليمي البشري إلى أنواع بتطوير أساليب العلاج الصحيحة، بناءً على اختبارات تحديد الكائنات الحية الدقيقة.

يمكن لأي شخص أن يكون حاملاً للعديد من الحمض النووي لفيروس الورم الحليمي البشري، ويمكن للفيروسات أن تستقر، أو تتوقف عن التكاثر، أو العكس - ستتقدم عملية تطوير الخلايا المسرطنة، مما يعني أنه سيكون من الصعب إيقاف تأثيرها السلبي على الجسم.

مجموعة الأورام

يعد التنميط الجيني لفيروس الورم الحليمي البشري إجراءً مهمًا في تشخيص اكتشاف المرض، وهو يمثل فرصة إضافية للتنبؤ بمسار الاضطراب. في المجموع، في الطب العملي، ينقسم فيروس الورم الحليمي إلى ثلاث مجموعات.

1. الفيروسات آمنة ولا تسبب تطور السرطان، مما يعني أنه لا داعي للذعر، والشيء الرئيسي هو عدم أن تصبح حاملاً للعدوى الأخرى في المستقبل، وإجراء اختبارات منتظمة للكشف عن العدوى وعدم إثارة الحالة؛ للجهاز المناعي.
2. احتمالية منخفضة لتطور الخلايا السرطانية عند اكتشاف فيروس الورم الحليمي 6،11،42-44 في حالات نادرة، يمكن أن تحدث طفرات في الخلايا، وتتحول إلى طفرات سرطانية.
3. المجموعة الأكثر خطورة، عند النساء، يزداد خطر الإصابة بعملية السرطان، عند الرجال - سبب سرطان المثانة. هذه هي فيروس الورم الحليمي البشري 16، 18، 31، 33، 35، 39، 45، 51، 52، 56، 59، 68.

يجب على المرضى الذين يعانون من فيروسات الورم الحليمي 66 و 56 إيلاء المزيد من الاهتمام لصحتهم، وفي أغلب الأحيان، يكون نقل العدوى بدون أعراض، وبالتالي فإن تحديد المرض يمثل مشكلة. لكل نوع من الفيروسات، من المهم مراقبة علامات فيروس الورم الحليمي البشري، وإجراء فحص خاص، وإذا لزم الأمر، بدء العلاج المؤهل.

مميزات كل نوع من الفيروسات

يساعد تصنيف الفيروسات في تحديد درجة تعقيد المرض الذي يمكن أن تثيره مثل هذه العدوى. تنتج الثآليل الشائعة عن فيروس من النوع 2 وتنتقل عن طريق الاتصال المنزلي مع حامل المرض، وغالبًا ما يعاني الأطفال والمراهقين.

تسمح دفاعات الجسم لجهاز المناعة بالتعامل مع العدوى، وتختفي التكوينات دون أن يترك أثرا، والشيء الرئيسي هو عدم إصابة الجلد في موقع تطور الأورام الحليمية، حتى لا تسبب عدوى ثانوية.

عند الإصابة بفيروس الورم الحليمي البشري من النوع 3 و5، تظهر نموات صغيرة على الوجه والكفين. تسمى هذه الطفحات أيضًا بالطفح الجلدي للأحداث، مما يعني أن الجسم يمكنه التعامل مع هذه العدوى بمفرده دون تدخل دوائي.

عندما يتم اكتشاف الثآليل الأخمصية، يمكننا أن نقول بثقة عن وجود أنواع فيروس الورم الحليمي 1 و 2 في الجسم. تعاني النساء في أغلب الأحيان من ارتداء أحذية ضيقة ذات الكعب العالي. يزداد سُمك الجلد الموجود على الثؤلول بمرور الوقت، وتتكاثر الأورام في جميع أنحاء الجسم.

تنمو تشكيلات فيروس الورم الحليمي البشري من النوع 1 في الداخل، وتسبب عدم الراحة عند المشي والألم والأذى، خاصة في الليل. يتجلى فيروس الورم الحليمي من النمط الجيني الثاني على شكل نمو فسيفسائي لا يسبب الألم، بل يسبب الانزعاج الجمالي فقط.

توجد الثآليل التناسلية عند النساء على الأغشية المخاطية للأعضاء التناسلية والأعضاء التناسلية، وعند الرجال - على رأس القضيب والقلفة. هذه فيروسات خطيرة من النوع 6 و11.

إذا تم اكتشاف فيروس الورم الحليمي ذو المخاطر المنخفضة للسرطان، فهذا يعني أننا نتحدث عن إضافة عدوى من النوع 20، 21، 14، 25، 27. غالبًا ما تكون هذه تكوينات حميدة لا تتكرر.

أثناء عمل الأم، يمكن أن يصاب الطفل بالورم الحليمي الحنجري، نوع فيروس الورم الحليمي البشري 11. ويلاحظ هذا الشكل من المرض عند الأطفال دون سن الخامسة من العمر، إذا كانت التكوينات وفيرة، فقد يكون هناك خطر الاختناق.

تحديد خطورة فيروس الورم الحليمي البشري بنوعيه 16 و18

باستخدام تحليل الدم، يمكنك إجراء التشخيص الأكثر دقة لمسار المرض، مما يعني تحديد عدة أنماط وراثية للفيروس في وقت واحد، وإجراء التشخيص الصحيح وبدء العلاج في الوقت المناسب.

إذا تم الكشف عن مزيج من الأنواع 16 و 18، فسوف يشير ذلك إلى وجود درجة عالية من الأورام - ستكون هناك حاجة إلى فحص بالمنظار.

بفضل اختبار الدم لفيروس الورم الحليمي البشري، من الممكن استبعاد إمكانية الانتكاس بنتيجة مميتة.

عند تشخيص إصابة المرأة بسرطان عنق الرحم، يمكننا القول على وجه اليقين أن سبب الطفرة هو فيروس النوع 16. تحت تأثير العوامل المواتية (ضعف جهاز المناعة، ووجود الالتهابات التناسلية الأخرى)، يبدأ فيروس الورم الحليمي تأثيره المدمر على الخلايا، وتغيير الحمض النووي الخاص بها.

وهذا يعني أن فيروس النمط الجيني 16 يؤثر على تطور الحالة السرطانية، ويسبب خلل التنسج العنقي، وتتشكل الأورام الحليمية والأورام اللقمية بكثرة في جميع أنحاء جسم المريض. عند الرجال، يمكن لهذه السلالات الخطيرة من الفيروس أن تسبب مرض بوين، وهو تلف الغشاء المخاطي للعضو التناسلي.

بفضل التحليل عالي الدقة للحمض النووي لفيروس الورم الحليمي البشري (27 نوعًا)، من الممكن تحديد التغيرات المرضية الخطيرة في الجسم الناتجة عن وجود أنواع مختلفة من فيروس الورم الحليمي.

مع خلل التنسج العنقي، بالإضافة إلى الفيروس 16 و 18، هناك أيضًا 32 و 30 و 57 و 61 وأنواع أخرى من الأورام. إذا أكدت الاختبارات أثناء الفحص وجود نوع واحد فقط من فيروس الورم الحليمي البشري عالي الخطورة، ولا توجد أي نموات، فهذا يعني أنه يمكننا التحدث عن الإزالة الذاتية للعدوى من الجسم.

أنواع أخرى من الزوائد الجلدية

تتجلى سلالة فيروس الورم الحليمي البشري 49 في نمو تكوينات مسطحة واحدة، والتي يمكن إزالتها بسهولة باستخدام جهاز ليزر. هذا النمط الجيني ليس مسبباً للأورام ولا يحدث بشكل ثانوي.

يشير اكتشاف فيروس السلالة 57 لدى المرأة إلى وجود حالة سرطانية لدى المريضة؛ إذا كان هناك نمو على الوجه، تتم إزالته باستخدام تدفق النبض، وبعد ذلك لا يبقى أي آثار أو أنسجة ندبية.

يمكن إزالة نمو فيروس الورم الحليمي البشري من النوع 27 لدى الرجال والنساء باستخدام النيتروجين السائل، ويتم استبعاد حدوث عدوى ثانوية. السلالات المرقمة 51، 52، 56 هي مسرطنة، مما يعني أن المزيد من التغييرات في بنية الحمض النووي يمكن أن تسبب السرطان.

عند الرجال، تطور الأورام في الأعضاء التناسلية والشرج. فقط العلاج الدوائي في الوقت المناسب يمكن أن يبطئ هذه العمليات ويترك انقسام خلايا الحمض النووي المدمر وراءه.

يعد فيروس الورم الحليمي البشري من النوع 37 أحد أسباب تطور الورم الشائك القرني، مما يشير إلى ظهور ورم حميد على الجلد، موضعي - الوجه، والمناطق المفتوحة من الجسم، وفي حالات استثنائية - مناطق مغلقة.

قد تشير اختبارات الكشف عن فيروس الورم الحليمي البشري من النوع 38 إلى تطور سرطان الجلد؛ وهي أورام خبيثة تتميز بالعدوانية والتطور السريع، مما يعني أنه لا يمكن تجاهل الأعراض، حيث يمكن أن يكون للمرض تأثير سلبي على جميع أعضاء وأنظمة الإنسان.

تحليل لأنواع فيروس الورم الحليمي البشري

هناك العديد من الطرق المخبرية التي يمكنها التحديد الدقيق لعدد سلالات الفيروس الموجودة في جسم الرجل والمرأة. ولهذا الغرض، يتم استخدام أنواع التشخيص مثل تفاعل البوليمر المتسلسل وتحليل التنميط الجيني. يتم إجراء PCR لتحديد نوع الفيروس، وتكون نتائج هذه الدراسة على شكل جدول يحتوي على قائمة بأنواع فيروس الورم الحليمي البشري وعلامات المكتشف منها ومؤشر للحمل الفيروسي.

مادة التحليل عند النساء هي مسحة من قناة عنق الرحم. خلال فترة الحمل، ليس من الضروري إجراء اختبار للورم الحليمي، لأنه لا يوجد أي تهديد للأم والجنين. يجب على الرجال الذين يعانون من تكوينات مشبوهة استشارة طبيب المسالك البولية. فقط مثل هذا الاهتمام الخاص بصحتك سيساعد على تجنب العواقب الوخيمة على النساء بعد إصابة الجسم.

متى يجب تشخيص إصابة النساء بفيروس الورم الحليمي البشري؟

يجب عدم السماح بظهور أعراض المرض؛ ومن المهم الخضوع لفحوصات وقائية منتظمة لدى طبيب أمراض النساء مرة أو مرتين في السنة، والتأكد من إجراء اختبارات للكشف عن الإصابة بعد السنة الأولى من النشاط الجنسي.

خاتمة

تخضع جميع تصنيفات اكتشاف فيروس الورم الحليمي البشري في الجسم لتغييرات، لأن الفيروسات تتحور وتسبب مضاعفات ولا يمكن علاجها، وتعاود الظهور بعد إزالتها، وتصبح عملية تشخيص وتفسير الاختبارات أكثر تعقيدًا.

لم يتم بعد دراسة تفاصيل هذه الأورام بدقة؛ كم من الوقت سيستغرق لتقليل خطر الخطر بعد الإصابة بالسلالات المسرطنة وإزالة الفيروس بالكامل من الجسم، غير معروف.

بالنسبة للمرضى الذين يعانون من أي نوع من فيروس الورم الحليمي البشري، يلزم اتباع نهج علاجي فردي من أجل إيقاف انتشار الفيروس في الجسم بنجاح، ويجب فحصهم بانتظام من قبل متخصصين متخصصين، واتباع التوصيات، وقيادة نمط حياة صحي.

الخطر الرئيسي لفيروس الورم الحليمي البشري للنساء والرجال هو تكوين ورم خبيث، لذلك يتم تصنيف الفيروس مع الأخذ في الاعتبار درجة خطره على الأورام.

اعتن بنفسك وكن بصحة جيدة!

تعتمد الطريقتان الأكثر استخدامًا لكتابة الحمض النووي للكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض حاليًا على طريقة PCR. في الحالة الأولى، يتم استخدام واحد أو عدة بادئات قصيرة من البنية الأولية العشوائية، بطول 6-15 نيوكليوتيدات، والتي، نظرًا لصغر حجمها، لها خصوصية منخفضة لمواقع جينية محددة وتكون قادرة على التهجين مع العديد من مواقع الحمض النووي الجينومي. . في الحالة الثانية، يتم استخدام بادئات قليلة النوكليوتيدات المحددة، بطول 20-27 نيوكليوتيدات، والتي تحيط تسلسلاتها بتسلسل النيوكليوتيدات قيد الدراسة في الجينوم البكتيري.

أرز. II.35. مخطط لكتابة الحمض النووي للكائنات الحية الدقيقة باستخدام PCR والبادئات للبنية التعسفية

أ- اختلافات خاصة بالسلالة بسبب اختلاف توطين أقسام الحمض النووي المتفاعلة مع الاشعال. يفتقر الحمض النووي للسلالتين 2 و3 إلى المنطقة الموجودة في الحمض النووي للسلالة 1، مما يؤدي إلى اختفاء النطاق المقابل لمنتج PCR في مخطط الكهربية؛ ب- نتائج تضخيم الحمض النووي الذي يحتوي على مواقع ربط لبادئات التوطين الثابت. يحتوي الحمض النووي للسلالتين 2 و3 على عمليات حذف بأطوال مختلفة بين مواقع الربط التمهيدي. وبدلاً من ذلك، قد يحتوي الحمض النووي للسلالتين 1 و2 على مدخلات غير موجودة في الحمض النووي للسلالة 3. وينعكس هذا في أطوال منتجات PCR المفصولة بالرحلان الكهربائي. أ، ب – مواقع الارتباط الأولية على الحمض النووي

الكتابة الجينية للكائنات الحية الدقيقة باستخدام بادئات البنية الأولية التعسفية.يعتمد استخدام بادئات قليل النوكليوتيد القصيرة ذات البنية التعسفية على حقيقة أنه في الجينومات الكبيرة توجد مواقع هبوط متعددة لها، وبالتالي بدء تفاعل البوليميراز المتسلسل. كلما كانت هذه البادئات أقصر، كلما زاد عدد مواقع الهبوط الخاصة بها. أحد القيود على المشاركة الإضافية لمثل هذه الاشعال في PCR هو المسافة بين موقعي الهبوط للاشعال الموجهة بشكل معاكس. كلما زاد طول منتج PCR الذي ينبغي تشكيله نتيجة لعمل هذه الاشعال، قل موثوقية عمل نظام الكتابة بأكمله. من الناحية العملية، يتراوح طول منتجات PCR المتكونة باستخدام بادئات تعسفية بين 0.2 و2.0 كيلو بايت.

اعتمادًا على توطين مواقع الهبوط على الحمض النووي لزوج من البادئات القصيرة، يمكن تشكيل نوعين من منتجات PCR. في الحالة الأولى، ترجع الاختلافات في أطوال منتجات PCR إلى وجود الكائنات الحية الدقيقة المكتوبة على الحمض النووي لعدد مختلف من مواقع الارتباط لأحد البادئات أو كليهما (الشكل II.35، أ). في الحالة الثانية، يتم تحديد هذه الاختلافات من خلال أطوال شرائح الحمض النووي ( amplicons)، تم اختتامها بين أزواج من مواقع الهبوط الأولية مع عدم تغيير عددها في مواضع جينية محددة (انظر الشكل II.35، ب). ومن الناحية العملية، يمكن تحقيق هذين الاحتمالين في وقت واحد. أثناء الكتابة الجينية لحقيقيات النوى باستخدام هذه الأساليب، أحيانًا ما يصل إلى 100 أمبليكون يعمل على الفور، بينما يصل هذا العدد في البكتيريا إلى 20 فقط.

على الرغم من حقيقة أنه في النهج الذي تمت مناقشته، يتم اختيار تسلسلات التمهيدي بشكل عشوائي، وعادة ما يكون نمط التضخيم الناتج خاصًا بالأنواع والسلالات. علاوة على ذلك، فإن عدد مواقع الارتباط على نفس الحمض النووي للبادئات ذات الطول نفسه، ولكن مع هياكل أولية مختلفة، يمكن أن يختلف بشكل كبير. في التين. يُظهر II.35 هذه الخصائص لعشرين من البادئات المكونة من 10 نيوكليوتيدات تم اختبارها على الحمض النووي البشري والفاصوليا وبكتيريا S. aureus. يمكن ملاحظة أن استخدام التمهيدي AGGGGTCTTG، على سبيل المثال، يؤدي إلى تضخيم 8 أمبليكونات في الحمض النووي البشري، و3 أمبليكونات في الحمض النووي لفول الصويا ولا يكتشف أمبليكون واحد في DNA S. aureus، بينما باستخدام التمهيدي AATCGGGCTG فمن الممكن لاكتشاف ما يصل إلى 40 أمبليكون في الحمض النووي البشري وفول الصويا وما يصل إلى 20 أمبليكون في الحمض النووي البكتيري. وبالتالي، عند استخدام الطريقة التي تمت مناقشتها في كتابة الحمض النووي، فإن الخطوة الأكثر أهمية هي اختيار الاشعال أو مجموعاتها لتحديد ما إذا كان الكائن الحي ينتمي إلى نوع معين أو سلالة أو خط معين.

الكتابة الجينية للكائنات الحية الدقيقة باستخدام البصمات الجينومية.هناك طريقة أخرى للكتابة الجينية باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وهي فحص تعدد الأشكال في مواضع محددة والتي يكون تركيبها الأساسي معروفًا جزئيًا على الأقل. يتم تصنيع بادئات قليلة النوكليوتيد المحددة، والتي تحيط مواقع الارتباط الخاصة بها بتسلسل الحمض النووي قيد الدراسة بطول 1.5-2.5 كيلو بايت. بعد PCR، يتم تحديد ميزات البنية الأساسية لمنتجات PCR باستخدام تحليل التقييد. يمكن أن يكون موضع مواقع التقييد في تسلسل النيوكليوتيدات الذي تم تحليله خاصًا بالأنواع أو السلالات ويكون بمثابة علامة وراثية دقيقة لكائن حي دقيق معين.

باستخدام هذه الطريقة، والتي تعد في الأساس طريقة مختلفة لتحديد RFLP التي تمت مناقشتها أعلاه، يتم تحديد سلالات مسببات الأمراض ذات الصلة الوثيقة والمتشابهة ظاهريًا، ويتم دراسة التركيب الجيني لمجموعات الكائنات الحية الدقيقة وآليات تقلبها التكيفي.

11.2.2. تحديد الهوية الشخصية على أساس الحمض النووي للقمر الصناعي الصغير: تحديد الأبوة

يعد تحديد الأبوة مشكلة اجتماعية وقانونية وطبية خطيرة. غالبًا ما يكون حل هذه المشكلة مطلوبًا في المحاكم، عند حل النزاعات الخاصة، لتشخيص ما قبل الولادة (داخل الرحم)، والاستشارات الوراثية وزراعة الأعضاء. على سبيل المثال، في الولايات المتحدة وحدها، تم إجراء أكثر من 120 ألف اختبار أبوة في عام 1990، وهذا العدد يتزايد بسرعة. وقد قُدرت السوق العالمية لأنظمة الاختبارات التشخيصية هذه بأكثر من مليار دولار في عام 1994، وهي الآن أكبر سوق بين وسائل التشخيص الجيني الجزيئي.

ومع استخدام أنظمة الاختبار التشخيصي المعتمدة على الحمض النووي عبر الأقمار الصناعية، أصبح تحديد الأبوة يعتمد على أساس علمي متين. ولهذا الغرض، يتم استخدام نهجين حاليا. يستخدم أحدهما مجسات قليل النوكليوتيد الخاصة بالعديد من مواضع الأقمار الصناعية الصغيرة، بينما يستخدم الآخر مجموعات من المجسات (أو البادئات) المحددة لمواضع VNTR متعددة الأشكال الفردية (لمزيد من المعلومات حول VNTR، راجع القسم 1.3.1).

الجوانب النظرية لإمكانية تحديد الأبوة.تعتمد إمكانية تحديد الأبوة، وكذلك نسبة العينات البيولوجية التي تحتوي على الحمض النووي لشخص معين، على وجود علامات وراثية واضحة في الجينوم البشري على شكل تسلسلات معينة من الحمض النووي، تكون مجموعة منها فريدة بالنسبة لفرد معين . من الناحية النظرية، يمكن أن تكون هذه العلامات أي تسلسل من نيوكليوتيدات الحمض النووي التي تتميز بتباين كبير في التجمعات البشرية. كما هو مذكور أعلاه، تعد تسلسلات التكرار الترادفي للأقمار الصناعية الصغيرة (VNTRs) من بين أكثر تسلسلات النيوكليوتيدات متعددة الأشكال في الجينوم البشري. لذلك، ليس من المستغرب أن يتم استخدامها لتحديد الهوية الشخصية. إن وجود مجموعة من العلامات الجينية بين VNTRs، المشتركة بين الرجل والمرأة والطفل المتنازع عليه، في بعض الحالات يمكن أن يشير بوضوح إلى الروابط الأسرية بينهما.

إن عدم وجود علامات وراثية مشتركة لدى الطفل الذي تم فحصه والرجل يستبعد بوضوح هذا الأخير كأب للطفل. ومع ذلك، فإن اكتشاف علامات مشتركة فيها لا يمكن أن يكون دليلاً على أن الرجل المشتبه به هو الأب. يعتمد دليل الأبوة على حسابات إحصائية بسيطة تأخذ في الاعتبار ترددات الأليلات الشائعة لمواقع VNTR التي تتم دراستها في السكان. يتم حساب نسبة (X/Y) لاحتمال (X) للحصول على مجموعة ملحوظة من العلامات لأب حقيقي محتمل إلى احتمال (Y) لاكتشاف هذه المجموعة من العلامات في أي شخص تم اختياره عشوائيًا ينتمي إلى هذه الفئة من السكان. وتسمى نسبة الاحتمال هذه مؤشر الأبوة(مؤشر الأبوة - PI).

عند حساب PI، تنشأ مشكلة أخرى تتعلق بتحديد احتمال (X) أن يكون الرجل الذي شمله الاستطلاع هو الأب. ويجب معرفة هذا الاحتمال قبل إجراء أي اختبارات تشخيصية. ولا يمكن اعتبار القيمة شائعة الاستخدام البالغة 0.5 معقولة بدرجة كافية في جميع الحالات المحددة. لحسن الحظ، بالنسبة لقيم PI الكبيرة جدًا (> 10 4) التي يتم الحصول عليها عادةً من دراسات الحمض النووي هذه، يبدو أن اختيار هذا الاحتمال الأولي غير مهم تقريبًا. كقاعدة عامة، ينتج هذا عن قيم الاحتمالية المنخفضة Y.

تحديد الأبوة باستخدام مجسات قليل النوكليوتيد الخاصة بالعديد من مواضع VNTR. في عام 1985 آي.أو. كان جيفريز وآخرون أول من أظهر أن تحقيقات قليل النوكليوتيد المكملة لتسلسلات جين الميوجلوبين البشري لديها في الوقت نفسه القدرة على التهجين الجنوبي مع مواقع الحمض النووي المتعددة الأقمار الصناعية. يبدو أن ملفات تعريف التهجين مخصصة للأفراد. يُطلق على مجموعة أجزاء التقييد المنفصلة كهربائيًا من الحمض النووي الذي تم تحليله، والتي تم اكتشافها بعد التهجين باستخدام مجسات مُسمى خاصة بمواقع الأقمار الصناعية الصغيرة متعددة الأشكال، اسم بصمات الحمض النووي، أو البصمات الجينية. باستخدام هذه وغيرها من مجسات قليل النوكليوتيد المماثلة، من الممكن اكتشاف ما يصل إلى 15-20 قطعة مختلفة من الحمض النووي لفرد واحد على مخطط كهربي واحد، يتجاوز وزنها الجزيئي 3.5 كيلو بايت، بالإضافة إلى العديد من الأجزاء الأصغر التي لا تؤخذ في الاعتبار عندما تحديد الأبوة بهذه الطريقة.

أرز. II.36. أمثلة على الاستبعاد وإثبات الأبوة باستخدام كتابة الحمض النووي

تظهر نتائج التهجين الجنوبي بمسبار F10 هوية كاملة لشظايا الحمض النووي في الطفل والأب (الممران 2 و 3)، والتي تعتبر دليلاً على الأبوة، أو التعرف على 6 قطع إضافية على الأقل من الحمض النووي في الطفل، يشار إليها بـ السهام الغائبة عن الأب (المسار 5 و 6 – استبعاد الأبوة)

في التين. ويبين II.36 نتائج إحدى هذه التجارب. يعتمد تفسير بصمات الحمض النووي التي تم الحصول عليها من تحليل المواقع المتعددة على ثلاث فرضيات. بادئ ذي بدء، من المفترض أن شظايا الحمض النووي المرئية في بصمات الأصابع هي منتجات أليلية للمواقع الجينية الفردية وتنتقل إلى النسل بشكل مستقل عن بعضها البعض. ثانيًا، بالنسبة لكل موضع وراثي، يُفترض أن تكرارات الحدوث في مجموعة الأليلات الفردية تتبع توزيع بواسون الطبيعي. وأخيرًا، من المفترض أن أجزاء الحمض النووي التي تتطابق حركتها الكهربية تمثل نفس الأليل في موضع معين. تُظهر الخبرة المتراكمة في العمل باستخدام بصمات الحمض النووي أن الافتراض الأول قد تم استيفاءه بشكل جيد: أليليه(زوج من الجينات المتماثلة التي تحدد السمات المظهرية المختلفة في الكائنات ثنائية الصيغة الصبغية) ونادرا ما يتم ملاحظة الارتباط الوراثي بين المواقع المدروسة. لا يؤثر الفشل في تحقيق الافتراض الثاني بشكل خطير على نتائج الاختبار، حيث يتم إجراء الاستنتاجات دون مراعاة تكرار حدوث أليل معين بناءً على مصادفة البنية (أجزاء الحمض النووي) للعديد من المواقع. المسلمة الثالثة هي الأكثر إثارة للجدل، ولكن تطبيقها يعطي الاستقرار لقيم مؤشر الأبوة.

في ظل هذه الظروف الأولية، يعتمد التقييم الإحصائي لبصمات الحمض النووي للمواقع المتعددة على معلمة واحدة فقط: الجزء المتوسط ​​من شظايا الحمض النووي ( س) والتي تتزامن مع الأشخاص الذين ليس لديهم روابط عائلية. تعتمد هذه المعلمة إلى حد كبير على تقنيات البحث المختبري أكثر من اعتمادها على خصائص السكان قيد الدراسة. هذا، أولاً وقبل كل شيء، هو قدرة النظام المستخدم على فصل أجزاء الحمض النووي الفردية بالرحلان الكهربي (أي دقة الطريقة المستخدمة)، ومبادئ اختيار أجزاء محددة من الحمض النووي للتحليل، فضلاً عن معايير تحديد الهوية. من شظايا الحمض النووي المقارنة. وبالتالي، قد تختلف المعلمة x عند مقارنة النتائج التي تم الحصول عليها في مختبرات مختلفة، ولكن هذه الاختلافات ستظل ثابتة عبر مختلف المجموعات السكانية والمجموعات السكانية الفرعية. في الواقع، عند استخدام، على سبيل المثال، تحقيقات 33.6 و 33.15، اتضح ذلك سوينطبق الشيء نفسه على الأفراد غير المرتبطين، وفي أزواج الزوج والزوجة، وفي المجموعات العرقية المختلفة.

أرز. II.37. مقارنة محتوى المعلومات لاثنين من مجسات الأقمار الصناعية لتحديد الهوية الشخصية

ترددات حدوث مواقع الأقمار الصناعية الصغيرة D1S7 ( أ) وD1S80 ( ب) من حجم معين في السكان تم تقييمه عن طريق التهجين الجنوبي بعد هضم الحمض النووي باستخدام إنزيم التقييد هايثالثا ( أ) أو PCR ( ب). يحتوي موضع D1S7 على توزيع أحادي الواسطة شبه مستمر، في حين أن موضع D1S80 له تغاير الزيجوت أقل (84٪) مع عدد صغير من الأليلات المنفصلة التي تظهر توزيعًا متعدد الوسائط

تحديد الأبوة باستخدام مجسات الحمض النووي الخاصة بموضع واحد فقط.تعكس بصمات الحمض النووي التي تم الحصول عليها من الدراسة المتزامنة للعديد من المواقع النمط الظاهري للفرد وليس النمط الجيني. وفي الواقع، تحتوي الصورة الناتجة على العديد من حزم الحمض النووي، بما في ذلك الأجزاء غير المنفصلة والمنفصلة بشكل ضعيف. يشبه هذا المخطط الكهربي سمة ظاهرية معقدة، مثل شكل وجه الشخص، وهو نتيجة للتعبير عن عدد كبير من الجينات. في المقابل، باستخدام مجسات الحمض النووي، وهي تسلسلات مستنسخة من الأقمار الصناعية الصغيرة وتتفاعل مع موضع واحد فقط، من الممكن الحصول على معلومات حقيقية حول النمط الجيني للكائن قيد الدراسة. وهكذا، عند التعامل مع المواقع البشرية المتعددة الأشكال، يضع الباحثون أيديهم على النظام الأليلات السائدة(أي الأليلات، معاًالمشاركة في تكوين الخصائص المظهرية) الموروثة وفقًا لقوانين مندل. لقد كان فهم وراثة مواقع الأقمار الصناعية الصغيرة هذه هو الذي أدى إلى الاستخدام الواسع النطاق لطريقة الموقع الفردي لتحديد الأبوة.

حاليًا، تم الحصول على مئات من نسخ الحمض النووي للأقمار الصناعية الصغيرة، وعلى أساسها تم تطوير مجموعات مسبار مناسبة لتحديد الأبوة. عند اختيار مجسات لمثل هذه المواقع التابعة للأقمار الصناعية الصغيرة، يتم عادةً استخدام المعايير التالية: يجب أن تتمتع المجسات بخصوصية موضعية صارمة، ويجب أن تكون المواقع التي تم اختبارها غير مرتبطة (يتم نقلها إلى النسل بشكل مستقل عن بعضها البعض) وأن تتمتع باستقرار جيني كافٍ، ولكن ليس مفرطًا . على وجه الخصوص، من بين المجسات الأكثر استخدامًا، يتوافق MS1 (D1S7) مع موضع جيني متغاير الزيجوت في 99٪ من الحالات، ولكنه يتحول بتردد عالٍ جدًا (0.05 لكل مشيج) وبالتالي، على الرغم من محتواه العالي من المعلومات، فهو لا يستخدم في تحديد الأبوة ( الشكل II.37، أ). في الوقت نفسه، يتميز موضع D1S80 ذو التباين الأقل بكثير (84٪ متغاير الزيجوت) بتكوين مجموعات في توزيع تردد جزء الحمض النووي على طول الطول (انظر الشكل II.37، ب). ولذلك، فإن الأخطاء الصغيرة في تحديد طول الأليلات يمكن أن تؤدي إلى أخطاء كبيرة في تقدير وتيرة حدوثها. تتغير هذه المواقع بسهولة تامة نتيجة للانحراف الوراثي وزواج الأقارب.

حاليًا، تم تطوير نظرية تشير إلى عدد المواقع التي يجب كتابتها للحصول على الإجابة الصحيحة حول الأبوة بالنظر إلى قيم تغاير الزيجوت المعروفة لهذه المواقع في السكان. على سبيل المثال، إذا تم استخدام مواضع متغايرة الزيجوت بنسبة 90%، فيجب تحليل ستة مواضع من هذا القبيل لتحديد الأبوة. في الولايات المتحدة، يتم حاليًا استخدام مجموعة مكونة من ثلاثة إلى خمسة مجسات أحادية الموضع بشكل شائع لهذا الغرض. تتميز مجسات الموقع الفردي بدقة منخفضة مقارنة بالأشقاء ( إخوة). على وجه الخصوص، فإن استخدام أحد هذه المجسات لديه فرصة بنسبة 75% فقط لاكتشاف الاختلافات الجينية بين الأشقاء، ويزداد هذا الاحتمال إلى 99.6% عند استخدام أربعة مجسات. تصبح هذه الحقيقة ذات أهمية خاصة عندما يكون من الضروري، عند تحديد الأبوة، الاختيار بين الإخوة.

ميزات تحديد الأبوة في المواقع الفردية باستخدام PCR.كبديل لتحقيقات موضع واحد، تم استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل مؤخرًا بشكل متكرر لتحديد الأبوة. يمكن تضخيم مواضع الأقمار الصناعية الصغيرة والصغيرة الفردية باستخدام الاشعال المكملة لتسلسلات الحمض النووي الفريدة التي تحيط بهذه التسلسلات المتكررة. عند التعرف على شخص ما، فإن طريقة PCR، والتي تعد في الأساس نوعًا من تقنية الموقع الفردي، نظرًا لأنها تتعامل مع الموقع الفردي، لها ميزتان على الأقل مقارنة بمسابير الموقع الفردي. أولاً، يعد تعدد أشكال طول الحمض النووي للأليلات التي تمت دراستها باستخدام هذه الطريقة أكثر تميزًا من الأليلات التي تمت دراستها باستخدام مجسات أحادية الموضع (انظر الشكل II.37، أ,ب). هذا الظرف يسهل الحساب اللاحق لمؤشر الأبوة. ثانياً، تعتبر طريقة PCR أكثر حساسية ويمكن استخدامها عند تحليل العينات التي تحتوي على<1 нг геномной ДНК и полученных из разных источников (см. раздел 11.1.1).

تشمل عيوب تفاعل البوليميراز المتسلسل عند تطبيقه لتحديد الأبوة المحتوى المنخفض من المعلومات للسواتل الصغيرة متعددة الأشكال والسواتل الصغيرة القصيرة. هذا يرجع إلى حقيقة أن لديهم<90% гетерозиготности, небольшим числом аллелей и имеют тенденцию к образованию кластеров по размерам (см. рис. II.37,ب). بالإضافة إلى ذلك، فإن توزيع مثل هذه التسلسلات في الجينوم يتأثر بزواج الأقارب والأفراد الذين ينتمون إلى مجموعات عرقية معينة. عدد مواقع الأقمار الصناعية الصغيرة التي تحتاج إلى فحص بواسطة PCR لتحديد الأبوة يقترب من 11، والأقمار الصناعية الصغيرة - 18.

يتم استخدام ثلاثة مواضع للأقمار الصناعية الصغيرة البشرية بشكل شائع لكتابة PCR: في جين صميم البروتين الشحمي B (APOB)، D17S5 (المعروف أيضًا باسم موضع D17S30) وD1S80. يمكن تضخيم المواقع الثلاثة بسهولة (الحجم الأقصى لمتغيراتها الأليلية لا يتجاوز 1 كيلو بايت) ويمكن اكتشافها بسهولة باستخدام الرحلان الكهربائي. ومع ذلك، فهي تتميز بمستوى منخفض من تغاير الزيجوت وانخفاض التباين (وهو ما ينعكس في عدد صغير من الأليلات المعروفة). نادرًا ما تحدث الطفرات في هذه السواتل الصغيرة.

إحدى طرق زيادة محتوى المعلومات الخاصة بأشكال الأقمار الصناعية الصغيرة أثناء كتابة الحمض النووي هي التضخيم المتزامن لموضعين من الأقمار الصناعية الصغيرة المرتبطة بشكل وثيق، والتي تشكل مجموعات منها مجموعة الأنواع الفردية. على سبيل المثال، كشف التضخيم المتزامن لاثنين من تكرارات GATA الموجودة في الإنترون 40 من جين عامل فون ويلبراند، والتي يتم فصلها بتسلسل 212 نقطة أساس، عن مستوى تغاير الزيجوت الإجمالي للموقع المدمج بنسبة ~ 93٪. وفي الوقت نفسه، كانت مستويات تغاير الزيجوت في المواقع الفردية 72 و78% فقط على التوالي.

في الختام، تجدر الإشارة مرة أخرى إلى أن الأساليب الحديثة لتحديد الأبوة على أساس كتابة الحمض النووي متناقضة إلى حد ما، في منطقها. إذا كان الاستنتاج السلبي حول الأبوة، استنادًا إلى عدم تطابق أليلات مواقع الأقمار الصناعية الصغيرة أو الصغرية التي تم تحليلها، لا شك فيه على الإطلاق، فلا يمكن التوصل إلى استنتاج إيجابي إلا بدرجة معينة من الاحتمال، والذي يعتمد على تكرار الحدوث من أليلات محددة من المواقع التي تم تحليلها في السكان. من ناحية أخرى، نتيجة للأخطاء المنهجية، يمكن بسهولة التوصل إلى استنتاجات سلبية كاذبة، ولكن يتم استبعاد الاستنتاج الإيجابي حول الأبوة نتيجة لخطأ منهجي مختبري عمليا.

تم تأكيد محتوى المعلومات العالي لبصمات الحمض النووي متعدد البؤر من خلال عدد كبير من الدراسات الوراثية والسكانية. أظهرت البيانات التجريبية التي تم الحصول عليها من آلاف العائلات أن المسابر متعددة البؤر يمكنها حل جميع حالات الأبوة المتنازع عليها. يتم إعاقة استخدام مجسات موضع واحد بسبب عدم القدرة على إنشاء تصنيف كامل للأليلات ذات الصلة في مجتمع ما بسبب توزيع حجمها المستمر على ما يبدو. ومع ذلك، حتى في هذه الحالة، من الناحية العملية، يتم حل المشكلة بالكامل بمساعدة مجموعة من خمسة إلى ستة مجسات أحادية الموضع. يقتصر استخدام PCR على الحفظ التطوري العالي لمواقع الأقمار الصناعية الصغيرة والصغيرة المتضخمة، ونتيجة لذلك، بسبب العدد الإجمالي الصغير للأليلات. ومع ذلك، يمكن أن يكون تفاعل البوليميراز المتسلسل مفيدًا جدًا في المراحل الأولى من البحث نظرًا للبساطة المنهجية لإجراء التجارب، خاصة في ظروف انخفاض توافر المواد البيولوجية الأولية. جميع المجموعات الثلاث من الأساليب تكمل بعضها البعض بشكل جيد وفي مجموعات مختلفة في الحالات المثيرة للجدل تجعل من الممكن تحديد هوية الشخص بشكل لا لبس فيه.

النتائج التي تم الحصول عليها من دراسة بنية وتنظيم الحمض النووي الجينومي للحيوانات والنباتات والكائنات الحية الدقيقة تركت بصمة عميقة على منهجية تنظيمها. إن مشكلة تخصيص كائن حي معين لمجموعة معينة بشكل مناسب ليست مشكلة أكاديمية بحتة. واستنادًا إلى معايير دقيقة، فإن علم منهجيات الكائنات الحية، الذي يحدد العلاقة التطورية بينها، يعد، بالإضافة إلى كونه نظريًا بحتًا، ذا أهمية عملية كبيرة. وعلى وجه الخصوص، فإن معرفة مصدر مختلف سلالات الكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض التي تسبب حالات العدوى في المستشفيات من شأنها أن تسمح بوضع تدابير وقائية فعالة ضد انتشارها.

في الآونة الأخيرة، تم اكتشاف علامات وراثية في شكل تسلسلات محددة من الحمض النووي، مما يجعل من الممكن تحديد العلاقات ذات الصلة بين الأفراد من نفس النوع من خلال الدراسات داخل وبين المجموعات السكانية. هذا النوع من الأبحاث على السكان البشر له أهمية خاصة من وجهة نظر عملية. حاليًا، تتيح الطرق الوراثية الجزيئية التعرف على الأفراد في أبحاث الطب الشرعي، وكذلك حل مشكلة تحديد الأبوة في القضايا المثيرة للجدل.

الكتابة الجينية أو DNAهو تحديد خصائص النمط الجيني للكائن الحي من خلال تحليل الحمض النووي للجينوم الخاص به. بمعنى آخر، في عملية كتابة الحمض النووي، يتم تحديد ميزات بنية الحمض النووي الأولية للكائن قيد الدراسة في مواقع وراثية محددة. من الواضح أن المواقع الجينية المحفوظة تمامًا غير موجودة. تتراكم التغيرات الطفرية في الجينوم بشكل مستمر طوال التطور التطوري (التاريخي والتطوري) للأنواع. لكن النوع نفسه من التغيرات يحدث بشكل مطرد في جينومات الأفراد الذين ينتمون إلى نفس المجموعة السكانية أو إلى مجموعات سكانية مختلفة. وبطبيعة الحال، من الأسهل اكتشافها الاختلافات بين الأنواعفي تسلسل النيوكليوتيدات في مناطق الجينوم المدروسة، حيث أن هذه الاختلافات عادة ما تكون كبيرة، وهي التي تحدد المسافة التطورية بين الأنواع (نسبها تشعب).

وبالتالي، فإن كل نوع من الكائنات الحية لديه عدد كبير من الاختلافات النوعية في بنية الحمض النووي الأولية للمواقع الجينية الفردية. تسمى المواقع الجينية التي تؤدي نفس الوظيفة (التي تحتوي على نفس الجين أو عدة جينات)، ولكنها تختلف في بنية الحمض النووي الأساسي، متعدد الأشكال، وتسمى ظاهرة وجود مواضع متعددة الأشكال في السكان تعدد الأشكال الجيني.

1. كتابة الحمض النووي للكائنات الحية الدقيقة

تعتمد الطريقتان الأكثر استخدامًا لكتابة الحمض النووي للكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض حاليًا على طريقة PCR. في الحالة الأولى، يتم استخدام واحد أو عدة بادئات قصيرة من البنية الأولية العشوائية، بطول 6-15 نيوكليوتيدات، والتي، نظرًا لصغر حجمها، لها خصوصية منخفضة لمواقع جينية محددة وتكون قادرة على التهجين مع العديد من مواقع الحمض النووي الجينومي. . في الحالة الثانية، يتم استخدام بادئات قليلة النوكليوتيدات المحددة، بطول 20-27 نيوكليوتيدات، والتي تحيط تسلسلاتها بتسلسل النيوكليوتيدات قيد الدراسة في الجينوم البكتيري.

أرز. II.35. مخطط لكتابة الحمض النووي للكائنات الحية الدقيقة باستخدام PCR والبادئات للبنية التعسفية

أ- اختلافات خاصة بالسلالة بسبب اختلاف توطين أقسام الحمض النووي المتفاعلة مع الاشعال. يفتقر الحمض النووي للسلالتين 2 و3 إلى المنطقة الموجودة في الحمض النووي للسلالة 1، مما يؤدي إلى اختفاء النطاق المقابل لمنتج PCR في مخطط الكهربية؛ ب- نتائج تضخيم الحمض النووي الذي يحتوي على مواقع ربط لبادئات التوطين الثابت. يحتوي الحمض النووي للسلالتين 2 و3 على عمليات حذف بأطوال مختلفة بين مواقع الربط التمهيدي. وبدلاً من ذلك، قد يحتوي الحمض النووي للسلالتين 1 و2 على مدخلات غير موجودة في الحمض النووي للسلالة 3. وينعكس هذا في أطوال منتجات PCR المفصولة بالرحلان الكهربائي. أ، ب – مواقع الارتباط الأولية على الحمض النووي

الكتابة الجينية للكائنات الحية الدقيقة باستخدام بادئات البنية الأولية التعسفية. يعتمد استخدام بادئات قليل النوكليوتيد القصيرة ذات البنية التعسفية على حقيقة أنه في الجينومات الكبيرة توجد مواقع هبوط متعددة لها، وبالتالي بدء تفاعل البوليميراز المتسلسل. كلما كانت هذه البادئات أقصر، كلما زاد عدد مواقع الهبوط الخاصة بها. أحد القيود على المشاركة الإضافية لمثل هذه الاشعال في PCR هو المسافة بين موقعي الهبوط للاشعال الموجهة بشكل معاكس. كلما زاد طول منتج PCR الذي ينبغي تشكيله نتيجة لعمل هذه الاشعال، قل موثوقية عمل نظام الكتابة بأكمله. من الناحية العملية، يتراوح طول منتجات PCR المتكونة باستخدام بادئات تعسفية بين 0.2 و2.0 كيلو بايت.

اعتمادًا على توطين مواقع الهبوط على الحمض النووي لزوج من البادئات القصيرة، يمكن تشكيل نوعين من منتجات PCR. في الحالة الأولى، ترجع الاختلافات في أطوال منتجات PCR إلى وجود الكائنات الحية الدقيقة المكتوبة على الحمض النووي لعدد مختلف من مواقع الارتباط لأحد البادئات أو كليهما (الشكل II.35، أ). في الحالة الثانية، يتم تحديد هذه الاختلافات من خلال أطوال شرائح الحمض النووي ( amplicons)، تم اختتامها بين أزواج من مواقع الهبوط الأولية مع عدم تغيير عددها في مواضع جينية محددة (انظر الشكل II.35، ب). ومن الناحية العملية، يمكن تحقيق هذين الاحتمالين في وقت واحد. أثناء الكتابة الجينية لحقيقيات النوى باستخدام هذه الأساليب، أحيانًا ما يصل إلى 100 أمبليكون يعمل على الفور، بينما يصل هذا العدد في البكتيريا إلى 20 فقط.

على الرغم من حقيقة أنه في النهج الذي تمت مناقشته، يتم اختيار تسلسلات التمهيدي بشكل عشوائي، وعادة ما يكون نمط التضخيم الناتج خاصًا بالأنواع والسلالات. علاوة على ذلك، فإن عدد مواقع الارتباط على نفس الحمض النووي للبادئات ذات الطول نفسه، ولكن مع هياكل أولية مختلفة، يمكن أن يختلف بشكل كبير. في التين. يُظهر II.35 هذه الخصائص لعشرين من البادئات المكونة من 10 نيوكليوتيدات تم اختبارها على الحمض النووي البشري والفاصوليا وبكتيريا S. aureus. يمكن ملاحظة أن استخدام التمهيدي AGGGGTCTTG، على سبيل المثال، يؤدي إلى تضخيم 8 أمبليكونات في الحمض النووي البشري، و3 أمبليكونات في الحمض النووي لفول الصويا ولا يكتشف أمبليكون واحد في DNA S. aureus، بينما باستخدام التمهيدي AATCGGGCTG فمن الممكن لاكتشاف ما يصل إلى 40 أمبليكون في الحمض النووي البشري وفول الصويا وما يصل إلى 20 أمبليكون في الحمض النووي البكتيري. وبالتالي، عند استخدام الطريقة التي تمت مناقشتها في كتابة الحمض النووي، فإن الخطوة الأكثر أهمية هي اختيار الاشعال أو مجموعاتها لتحديد ما إذا كان الكائن الحي ينتمي إلى نوع معين أو سلالة أو خط معين.

الكتابة الجينية للكائنات الحية الدقيقة باستخدام البصمات الجينومية. هناك طريقة أخرى للكتابة الجينية باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وهي فحص تعدد الأشكال في مواضع محددة والتي يكون تركيبها الأساسي معروفًا جزئيًا على الأقل. يتم تصنيع بادئات قليلة النوكليوتيد المحددة، والتي تحيط مواقع الارتباط الخاصة بها بتسلسل الحمض النووي قيد الدراسة بطول 1.5-2.5 كيلو بايت. بعد PCR، يتم تحديد ميزات البنية الأساسية لمنتجات PCR باستخدام تحليل التقييد. يمكن أن يكون موضع مواقع التقييد في تسلسل النيوكليوتيدات الذي تم تحليله خاصًا بالأنواع أو السلالات ويكون بمثابة علامة وراثية دقيقة لكائن حي دقيق معين.

باستخدام هذه الطريقة، والتي تعد في الأساس طريقة مختلفة لتحديد RFLP التي تمت مناقشتها أعلاه، يتم تحديد سلالات مسببات الأمراض ذات الصلة الوثيقة والمتشابهة ظاهريًا، ويتم دراسة التركيب الجيني لمجموعات الكائنات الحية الدقيقة وآليات تقلبها التكيفي.

➜ لجميع التحليلات

سعر:

*باستثناء مجموعة المواد

وقت الانتهاء (أيام العمل)

موعد التسليم**

طوال اليوم حسب جدول عمل المركز الطبي

المنهجية

لم يتم الكشف عن

مادة

تجريف الجهاز البولي التناسلي

** جدول التسليم وشروط الإعداد ذات صلة بهذا التحليل فقط. إذا كنت بحاجة لإجراء عدة اختبارات، ننصحك بتوضيح الجدول والشروط من خلال الاتصال بمركز الاتصال.

*** يرجى ملاحظة أنه قد يتم زيادة توقيت التحاليل لأسباب فنية تتعلق بخصائص المادة الحيوية (العينات المحللة والكيلوسية ووجود جلطات وغيرها)، مما يتطلب إعادة الترتيب، وفي بعض الحالات، إعادة أخذ العينات من المادة.

التسميات

فيروس الورم الحليمي البشري، فيروس الورم الحليمي البشري، فيروس الورم الحليمي البشري، فيروس الورم الحليمي البشري

وصف

فيروس الورم الحليمي البشري هو العدوى المنقولة جنسيا الأكثر شيوعا. إنه يؤثر بشكل رئيسي على الظهارة ويحفز نموها ويؤدي إلى تكوين الأورام الثآليل والثآليل والتآكلات. هناك أكثر من 100 نوع معروف من فيروس الورم الحليمي. ومن الممكن أن يحمل شخص واحد عدة أنواع من الفيروس في نفس الوقت.

بعض أنواع الفيروسات (الجينية)، عند دمجها في جينوم الخلايا الظهارية (التكامل)، يمكن أن تسبب انحطاطها الخبيث، مما يؤدي إلى السرطان. يعتبر نقل فيروس الورم الحليمي البشري من النوع 16 و18 هو الأكثر خطورة، لأنه من المحتمل جدًا أن يؤدي إلى تطور سرطان عنق الرحم لدى النساء.

طريقة النقل

الاتصال (للاتصالات التناسلية التناسلية، التناسلية الفموية، التناسلية الشرجية)، العمودي (من الأم إلى الطفل)، الأسرة.

فترة الحضانة

تتراوح من عدة أسابيع إلى عدة سنوات.

ميزات الاختبار

يسمح تحليل العدوى باستخدام طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) بتحديد حساس ومحدد لوجود العامل الممرض، وكذلك تحديد أنواعه.

فقرة قائمة الاسعار	يذاكر	سعر	شرط تنفيذ (أيام)
	تحديد ومقارنة العينات (علامات الجسيمات الذاتية، كروموسوم Y، الحمض النووي للميتوكوندريا)
20.3.2	تحليل مقارن لعينتين باستخدام علامات كروموسوم Y	12 600	14
20.5	تحليل مقارن لعينتين باستخدام علامات جسمية. اللوحة القياسية - 15 موضعًا	12 600	14
29.6.1	تحليل مقارن لعينتين باستخدام علامات جسمية. لوحة موسعة - 25 موضعًا	18 000	14
22.2	تحليل عينة إضافية للعلامات الجسدية. اللوحة القياسية - 15 موضعًا	4 500	14
25.2	تحليل عينة إضافية للعلامات الجسدية. لوحة موسعة - 25 موضعًا	6 400	14
22.3	تحليل عينة إضافية لعلامات كروموسوم Y	4 500	14
22.5	تحليل عينة إضافية لعلامات الحمض النووي للميتوكوندريا	4 500	21
20.4.2	تحليل مقارن لعينتين باستخدام علامات الحمض النووي للميتوكوندريا	12 600	21
	الكتابة (علامات جسمية، كروموسومات X، كروموسومات Y، DNA الميتوكوندريا)
23.1	كتابة عينة واحدة باستخدام علامات جسمية. اللوحة القياسية - 15 موضعًا	4 500	14
25.3	كتابة عينة واحدة باستخدام علامات جسمية. لوحة موسعة - 25 موضعًا	6 400	14
23.2	كتابة عينة واحدة باستخدام علامات كروموسوم X	4 500	14
23.3	كتابة عينة واحدة باستخدام علامات كروموسوم Y	4 500	14
23.4	كتابة عينة واحدة باستخدام علامات الحمض النووي للميتوكوندريا	4 500	21
	عزل الحمض النووي من المواد البيولوجية (باستثناء الدم وظهارة الشدق)
28.1	عزل الحمض النووي من المواد البيولوجية (ما عدا الدم وظهارة الشدق) (عينة واحدة).	6 000	14

إن تسلسل النيوكليوتيدات للجينوم الكامل لكل شخص فريد من نوعه. يمكن استخدام هذه الخاصية ل تعريف. ومع ذلك، في الوقت الحاضر، لا يزال تسلسل الجينوم بأكمله مكلفًا للغاية ويستغرق وقتًا طويلاً بحيث لا يمكن استخدامه بشكل روتيني تحديد الهوية البشرية. لحسن الحظ، ليس كل شيء سيئًا للغاية... ليس فقط تسلسل النوكليوتيدات كامل الجينوم للحمض النووي للشخص له خصائص فردية، ولكن أيضًا النمط الجيني لعدد معين كبير إلى حد ما من الأقسام متعددة الأشكال (المواقع) من الجينوم.

حاليا ل تعريففي البشر، يتم استخدام ما يسمى بـ STR loci عالميًا تقريبًا. يأتي الاختصار STR من العبارة الإنجليزية Short Tandem Repeat - حرفيًا: تكرار ترادفي قصير. المواقع من هذا النوع عبارة عن سلاسل تتكون من 2-6 نيوكليوتيدات صغيرة طويلة ومتسلسلة متطابقة (مونومرات) أو "متكررة". تختلف أليلات هذه المواقع في عدد هذه التكرارات. تتمتع مواقع STR بالمزايا التالية:

• عدد كبير من الأليلات، مما يساعد على تقليل احتمالية المصادفة العشوائية للأنماط الجينية لأشخاص مختلفين.
• عدد كبير من مواضع STR المعروفة وتوزيعها الموحد نسبيًا عبر جميع الكروموسومات البشرية.
• القدرة على استخدام الأساليب الحديثة لكتابة العينات بسرعة ودقة وبتكلفة زهيدة في هذه المواقع.

لقد أصبح المعيار الدولي الفعلي هو النظام CODIS(نظام مؤشر الحمض النووي المشترك)، ويتكون من 13 موقعًا جسميًا STR (D3S1358، THO1، D21S11، D18S51، D5S818، D13S317، D7S820، D16S539، CSF1PO، vWA، D8S1179، TPOX، FGA). يتم اختيار مواقع هذا النظام بطريقة تجعل تكرار أي نمط جيني وفقًا لها صغيرًا جدًا بحيث لا يمكن أن يكون هناك شخصان لهما نفس النمط الجيني على الأرض بأكملها وفقًا لمجموعة المواقع الخاصة بنظام CODIS.

في المختبرات الحديثة، يتم إجراء التنميط الجيني تلقائيًا باستخدام أنظمة الأجهزة والبرامج، مما يجعل من الممكن توحيد إجراء الكتابة والقضاء عمليًا على تأثير العامل البشري.

في التين. يوضح الشكل 1 مثالاً لعرض نتائج الكتابة البشرية باستخدام مجمع أجهزة وبرامج المحلل الجيني 3130 (النظم البيولوجية التطبيقية). يتم إجراء الكتابة باستخدام نظام موضع معرف AmpFlSTR (النظم البيولوجية التطبيقية)، الذي يحتوي على جميع مواقع نظام CODIS، ومواقع STR الإضافية D2S1338 وD19S433، بالإضافة إلى موضع AMELOGENIN، الذي يحدد جنس العينة.

أرز. 1. عرض نتائج الكتابة البشرية باستخدام مجمع أجهزة وبرامج المحلل الجيني 3130 (النظم البيولوجية التطبيقية).

يتم عرض الملف الجيني الناتج في شكل جدول (الجدول 1):

الجدول 1. مثال على نتائج الكتابة البشرية (النمط الجيني يتوافق مع تلك الواردة في الشكل 1).

موضع	الأليلات			موضع	الأليلات
D8S1179	10	14		D2S1338	23	23
D21S11	29	30		D5S818	12	13
D7S820	9	10		إف جي إيه.	23	23
CSF1PO	10	11		D19S433	14	15.2
D3S1358	15	16		vWA	15	16
THO1	9	9.3		تبوك	8	8
D13S317	9	12		D18S51	14	17
D16S539	9	12		أميلوجينين	X	ي

لماذا قد يحتاج الشخص العادي تحليل تحديد الهوية?

قد تنشأ مواقف عندما يكون من الضروري تحديد أصل المادة البيولوجية من شخص معين. وقد يكون ذلك ضروريا، على سبيل المثال، لإزالة الأخطاء في تشخيص السرطان. في كثير من الأحيان، يأتي الأشخاص الذين تم تشخيص إصابتهم بالسرطان إلى مركزنا لطلب التحقق مما إذا كانت المواد البيولوجية الخاصة بهم قد تم استخدامها بالفعل في الفحص النسيجي. في كثير من الأحيان، تشير نتائج تحليل الهوية إلى أن العينات النسيجية المقدمة لا تنتمي إلى الشخص الذي تقدم بطلبه، بل إلى شخص آخر.