يسببه فيروس داء الكلب. علاوة على ذلك، ليس فقط للحيوان الأليف نفسه، ولكن أيضًا لبيئته (المالك وأفراد الأسرة الآخرين). ويسبب الفيروس التهاب الدماغ لدى الإنسان والحيوان. الثعالب والذئاب والقطط والماشية الكبيرة والصغيرة والكلاب والأغنام والماعز والخيول وغيرها معرضة بشكل خاص للإصابة بالمرض من قبل الحيوانات الأليفة والبشر حيوان مصاب بداء الكلبأو من ملامسة اللعاب لمنطقة تالفة من الجلد أو الأغشية المخاطية أو في العينين. يمكن أن يصبح اللعاب معديًا قبل 10 أيام من ظهور علامات داء الكلب.
يوجد حاليًا أوصاف لطرق انتقال أخرى: الطريقة المحمولة جواً (الغذائية - من خلال الغذاء والماء) والطريقة عبر المشيمة (من خلال المشيمة أثناء الحمل).
ينتشر الفيروس على طول المسارات العصبية، ويصل إلى الغدد اللعابية والخلايا العصبية في القشرة الدماغية، ويسبب أضرارًا شديدة لا رجعة فيها.
مرض داء الكلب الحيوانيمسجلة في جميع أنحاء العالم (الاستثناءات الوحيدة هي اليابان وأستراليا والمملكة المتحدة).
ولسوء الحظ، فإن روسيا ليست على قائمة الاستثناءات. تعد موسكو ومنطقة موسكو أيضًا بيئة مواتية لحدوث داء الكلب في الحيوانات الأليفة والبرية.
الفيروس غير مستقر في البيئة الخارجية، فهو يموت عند تسخينه إلى 56 درجة خلال 15 دقيقة، وعند غليه خلال دقيقتين. كما أن فيروس داء الكلب حساس للأشعة فوق البنفسجية وأشعة الشمس المباشرة. ومع ذلك، فإن فيروس داء الكلب مقاوم لدرجات الحرارة المنخفضة والمضادات الحيوية.
يمكن أن تستمر فترة الحضانة أثناء الإصابة بداء الكلب من عدة أيام إلى عدة أشهر (في المتوسط 3-6 أسابيع). يمكن أن يستمر داء الكلب عند البشر لمدة تصل إلى عام. يسبق ظهور الصورة السريرية فترة كامنة (حضانة). الحيوان خطير أيضًا في هذا الوقت.
أعراض وعلامات داء الكلب في الحيوانات
علامات داء الكلبقد تظهر في حيوان بعد أسبوعين من تعرضه للعض من قبل حيوان مسعور أو ملامسة فيروس. انتبه لسلوك حيوانك الأليف. أي سلوك غير لائق وغير طبيعي للحيوان يجب أن ينبهك ويجعلك أكثر انتباهاً. وفي بعض الحالات قد ترتفع درجة الحرارة.
كما تعلمون، الحيوانات البرية تخاف من البشر. في حالة المرض، يمكن للحيوانات البرية أن تقترب من المنزل وحتى تهاجم الماشية والناس. لذلك، إذا بدأ حيوانك الأليف في التصرف بقوة أو بشكل مفرط، فهذه إشارة جدية لعدم المخاطرة واستدعاء طبيب بيطري للفحص والتشخيص لاحتمال الإصابة بداء الكلب.
في كثير من الأحيان، يجب أن تستبعد الأعراض غير المحددة والتشخيصات غير الموثوقة أثناء الحياة الخيارات "العشوائية"، لأن نحن نتحدث عن العواقب المميتة ليس فقط للحيوان الأليف، ولكن أيضًا على الأرجح للمالك.
تشخيص داء الكلب في الحيوانات
يتم التشخيص بناءً على البيانات الشاملة والاختبارات المعملية. لا توجد اليوم طريقة موثوقة بنسبة 100% لتشخيص داء الكلب أثناء الحياة في الحيوانات المستخدمة في الممارسة البيطرية.
يمكن اكتشاف المستضد الفيروسي داخل الحياة باستخدام MFA في بصمات القرنية للحيوانات المصابة بداء الكلب. وأيضا يمكن عزل الفيروس من بعض الأنسجة وسوائل الجسم. لكن النتيجة السلبية لهذه الطريقة لا تستبعد احتمال الإصابة بداء الكلب.
في تشخيص داء الكلب بعد الوفاة في الحيوانات، تكون النتائج أكثر دقة، لأنه يتم استخدام طرق أخرى. على سبيل المثال، أحد التشخيصات المرضية الدقيقة عند فحص الدماغ هو اكتشاف شوائب محددة (أجسام Babes-Negri). أيضًا، تظل الطريقة الأكثر أهمية هي الاختبار الحيوي - العدوى داخل المخ.
من العوائق التي تحول دون تشخيص داء الكلب في الحيوانات أيضًا وجود أشكال مختلفة من المرض. قام الأطباء البيطريون بتقسيم مظاهر داء الكلب تقريبًا إلى ثلاثة أشكال (بعض الأشكال لها مراحل مختلفة).
أشكال تطور ومسار داء الكلب في الحيوانات (الصورة السريرية):
الشكل العنيف لداء الكلب:
المرحلة 1.
يتجنب الحيوان الناس ويختبئ في مكان مظلم ومنعزل. قد يظهر سلوك غير نمطي - زيادة المودة أو العدوان السلبي. في هذه الحالة، قد تحدث الحكة في موقع اللدغة. قد يلعق الحيوان أو يعض مكان دخول الفيروس (إصابة مسببة). تنخفض الشهية. يظهر القيء وسيلان اللعاب والهلوسة. عملية البلع صعبة.
المرحلة 2.
يظهر عدوان واضح. يزداد القلق، ويظهر الميل إلى تناول الأشياء غير الصالحة للأكل. الرغبة اللاواعية في التحرك. يمكن للحيوان أن يعض جسده (إصابة نفسه)، يقضم الأشياء المحيطة به، والذخيرة، والأرض. الهجوم على الحيوانات الأخرى وحتى المالك. لا يستطيع الحيوان الأليف ابتلاع الماء. وبسبب هذا، اللعاب غزير ولا يمكن السيطرة عليه. الأكل مستحيل. مظهر من مظاهر النوبات المتشنجة. يحدث شلل جزئي في عضلات الوجه ومجموعات الأطراف. ونتيجة لذلك، يتطور الحول، ويتدلى الفك السفلي، ويسقط اللسان من الفم.
المرحلة 3
(المحطة - مشلول). حالة الاكتئاب. الإرهاق الشديد للجسم وتطور الشلل. يستلقي الحيوان الأليف بشكل شبه دائم ويدخل في حالة غيبوبة وغيبوبة. تحدث الوفاة نتيجة توقف التنفس بسبب شلل عضلات الجهاز التنفسي.
الشكل الصامت لداء الكلب:
يتميز الشكل الصامت بتطور الشلل وسيلان اللعاب وعدم القدرة على تناول الطعام. بعد 2-4 أيام يموت الحيوان الأليف. مرحلة الإثارة (الغضب) قصيرة الأجل أو غائبة.
شكل غير نمطي من داء الكلب:
شكل غير نمطي (يصعب تشخيصه). قد يحدث الإسهال أو ونى الأمعاء. قد يكون هناك تحسن قصير المدى يتبعه أعراض عصبية تقدمية. ونتيجة لذلك يموت الحيوان الأليف. يمكن أن تستمر هذه المرحلة من داء الكلب لمدة تصل إلى 3 أشهر أو أكثر.
في الماشيةيسود الشكل الصامت. يتم التعبير عن الإثارة في هذه الحالة بشكل ضعيف، ويلاحظ خوار أجش، وسيلان اللعاب، ومشية غير مستقرة، وسرعان ما يتطور شلل الأطراف. في كثير من الأحيان، فإن المسار غير النمطي هو رفض الطعام، ونى المعدة، والرغبة المتكررة في التغوط، وهجمات التشنجات، ثم يتطور الشلل. في الشكل العنيف، في وقت النوبة، تنفصل الحيوانات عن مقودها، وتزأر، وتحفر الأرض، وترمي نفسها على الجدران، وتهاجم الحيوانات الأخرى من نوعها، وتكون عدوانية بشكل خاص تجاه الكلاب.
في الأغنام والماعزيستمر المرض تقريبًا كما هو الحال في الماشية، لكن الشلل يتطور بشكل أسرع (في اليوم الثاني).
في الخيول والخنازيرويسود الشكل العنيف.
الوقاية من داء الكلب في الحيوانات
الأكثر فعالية وكفاءة طريقة الوقاية من داء الكلب الحيوانيهو التطعيم. وفقا لقانون الاتحاد الروسي، فإن التطعيم السنوي إلزامي لجميع الحيوانات الأليفة وحيوانات المزرعة. يوجد اليوم مجموعة كبيرة من اللقاحات ضد داء الكلب في الحيوانات، سواء المصنعة المستوردة أو المحلية. توفر اللقاحات الحديثة مناعة لمدة ثلاث سنوات. التطعيم السنوي ضد داء الكلب في الحيوانات لا يشكل خطرا على حيوان أليف سليم.
ينتمي إلى جنس Lyssavirus (اليونانية ليسا - داء الكلب). يسبب عدوى قاتلة في الحيوانات والبشر، وتتميز بأضرار لا رجعة فيها للخلايا العصبية في الجهاز العصبي المركزي. في عام 1885، أثبت L. Pasteur تجريبيًا طريقة لتخفيف مسببات الأمراض غير المعروفة حتى الآن وحصل على لقاح مضاد لداء الكلب. في عام 1892، وصف V. Babes وفي عام 1903، A. Negri، شوائب محددة في الخلايا العصبية في دماغ الحيوانات التي ماتت بسبب داء الكلب (أجسام نيجري). ومن المعروف أن العديد من المتغيرات الحيوية ذات الصلة بالعامل الممرض معروفة: فيروس "البرية" للغزلان والثعالب القطبية الشمالية والثعالب في القطب الشمالي، وفيروس الخفافيش في أمريكا، وفيروس "الكلب المجنون" في غرب أفريقيا، وما إلى ذلك.الزراعة والتكاثر
يتم زراعة فيروس داء الكلب في مزارع خلايا الكلى للهامستر حديث الولادة وفي الخلايا ثنائية الصيغة الصبغية البشرية. النشاط المرضي الخلوي متغير. يمكن أن يتكيف الفيروس مع أجنة الدجاج والبط عند إصابته في كيس الصفار.المرضية والمناعة
يبقى الفيروس عند بوابة دخول العدوى لعدة أيام. يبدو أن التكاثر الأولي يحدث في الخلايا العضلية في موقع اللدغة. ثم تصل الجزيئات الفيروسية إلى نهايات الأعصاب الحسية الطرفية، وتتحرك على طول أسطواناتها المحورية والمساحات المحيطة بالعصب (حتى 3 ملم في الساعة)، مما يؤثر على الخلايا العصبية في الحبل الشوكي والدماغ. قد تفسر السرعات المختلفة التي يتحرك بها الفيروس على طول جذوع الأعصاب طول فترة حضانة العدوى. إنه الحد الأدنى (ما يصل إلى 10-14 يومًا) عندما يخترق العامل الممرض جلد الرأس والوجه والأطول (1.5 شهرًا أو أكثر) مع لدغات على الأطراف (اليدين والقدمين). يحدث التكاثر المكثف للفيروس في الخلايا العصبية، مما يؤدي إلى ظهور أجسام Babes-Negri السيتوبلازمية التي تحتوي على القفيصات النووية الفيروسية. تتأثر الخلايا العصبية في قرن الأمون، والنخاع المستطيل، وخلايا بوركينجي في المخيخ بشكل مكثف. ويقوم الجسم بتصنيع الأجسام المضادة المحايدة للفيروس، والتي قد يكون لها تأثير وقائي قبل أن يخترق العامل الممرض خلايا الجهاز العصبي المركزي.علم الأوبئة
خزان الفيروس في الطبيعة هو العديد من الحيوانات ذوات الدم الحار. يمكن أن تصاب الخفافيش بعدوى مزمنة بدون أعراض. الأكثر حساسية لمسببات داء الكلب هي الكلاب والثعالب والذئاب وابن آوى وكذلك القطط والوشق. في أغلب الأحيان، يصاب الشخص بالثعالب والقطط المسعورة، وفي كثير من الأحيان من الكلاب والحيوانات الأخرى التي يوجد فيها الفيروس في الغدد اللعابية ويتم إطلاقه في البيئة الخارجية مع اللعاب. ينتقل الفيروس عن طريق اللدغات وملامسة اللعاب للجلد والأغشية المخاطية المتضررة، ويعتبر انتقال الفيروس من شخص لآخر أمراً نادراً للغاية حرارة. عند 56 درجة مئوية، يحدث التعطيل في 60 دقيقة، عند 80-100 درجة مئوية - في دقيقة واحدة. يتم تعطيله بسرعة في محاليل القلويات واليود والمنظفات وتحت الأشعة فوق البنفسجية. يؤدي التجفيف البطيء إلى تعطيل نشاط العامل الممرض في المادة خلال بضعة أيام، وفي ظل ظروف التجفيد، يستمر الفيروس لسنوات. وعادة ما يتم التشخيص المختبري لداء الكلب بعد وفاة حيوان أو شخص عند اكتشاف جثث الأطفال الزنجيين. الخلايا العصبية في الدماغ والحبل الشوكي، في خلايا الغدد اللعابية، الكشف عن المستضد الفيروسي في الأنسجة المصابة باستخدام تفاعل التألق المناعي. في لعاب المرضى وفي أدمغة الموتى، يمكن تحديد وجود الفيروس عن طريق العدوى داخل المخ لدى الفئران البيضاء، التي تصاب بشلل الأطراف وسرعان ما تموت.وقاية
حاليا، يتم استخدام اللقاحات الحية والمعطلة.داء الكلب
ينتمي فيروس داء الكلب إلى جنس Lyssavirus من عائلة Rhabdoviridae، وله شكل كروي مميز ذو نهاية مسطحة والأخرى مدورة. هناك نوعان مختلفان من الفيروس - فيروس الشوارع (البرية)، الذي ينتشر في الطبيعة بين الحيوانات، والمضعف - فيروس الإصلاح، الذي تم الحصول عليه بواسطة JI. يؤثر داء الكلب من خلال الممرات المتكررة عبر دماغ الأرانب في أغلب الأحيان على الكلاب والذئاب والثعالب وابن آوى والقطط، وفي كثير من الأحيان على الأبقار والظربان والقيوط والخفافيش. تحدث العدوى البشرية من خلال لدغات الحيوانات المريضة وحتى عندما يسيل لعابها على خدوش الجلد أو الأغشية المخاطية. ينتهي المرض لدى البشر دائمًا بالوفاة، والطرق الرئيسية لتشخيص داء الكلب هي بعد الوفاة، على الرغم من تطوير بعض الاختبارات أثناء الحياة.التشخيص المختبري
يعتمد التشخيص المختبري على استخدام الطرق الفيروسية والبيولوجية والمصلية. المادة المستخدمة في الدراسة هي أدمغة الحيوانات والموتى، واللعاب، وأنسجة الغدد اللعابية، والتي يتم إرسالها إلى المختبر في وعاء معقم به الجلسرين ومغطى بالثلج.طريقة الأجسام المضادة الفلورسنت
تعتبر طريقة الأجسام المضادة الفلورية هي الطريقة الأسرع والأكثر دقة للتشخيص المختبري لداء الكلب. للكشف عن المستضد الفيروسي في مسحات بصمات الدماغ والغدد اللعابية وقرنية العين (اختبار intravital)، يتم استخدام تفاعلات التألق المناعي المباشر وغير المباشر. يتم تثبيت المسحات في الأسيتون البارد لمدة 8-10 ساعات عند درجة حرارة 4 درجات مئوية ومعالجتها في غرفة رطبة لمدة 30 دقيقة باستخدام الجلوبيولين المناعي لداء الكلب المسمى بـ FITC، ويتم غسلها بمحلول فوسفات عازل، وتجفيفها وفحصها في مجهر الفلورسنت. يتم ملاحظة المستضدات الفيروسية على شكل حبيبات خضراء ذات أشكال وأحجام مختلفة.الكشف عن جثث الاطفال الزنجي
يعد اكتشاف أجسام الأطفال الزنجيين في مسحات بصمات الأصابع والمقاطع النسيجية للدماغ وأنسجة الغدة اللعابية أيضًا طريقة سريعة لتشخيص داء الكلب. من دماغ شخص أو حيوان ميت، يتم استخدام مقص معقم لقطع قطع بسمك 3-4 مم في الاتجاه العرضي من النخاع المستطيل وقرن آمون والمخيخ. يتم ضغط شريحة زجاجية على السطح المقطوع للحصول على انطباع عن الأنسجة. في المستحضرات المصبوغة حسب Muromtsev أو Seller، يكون للأجسام أحجام مختلفة (4-10 مم)، وشكل دائري أو بيضاوي، وأحمر أرجواني، والسيتوبلازم ونواة الخلايا العصبية زرقاء. تم تلوين المقاطع النسيجية وفقًا لـ Romanovsky-Giemsa أو Mann أو Turevich. قد تحتوي الخلية الواحدة على جسم واحد أو أكثر. وهي محاطة بقشرة محددة بوضوح ولها بنية داخلية على شكل حبيبات قاعدية، وغالبًا ما تقع بالقرب من النواة.طريقة الكشف عن إدراج Babes-Negri
تعتبر طريقة الكشف عن التضمين Babes-Negri محددة تمامًا لداء الكلب، على الرغم من أنها أقل حساسية من طريقة الأجسام المضادة الفلورية. في أنسجة دماغ الكلاب، تم العثور على الجثث في 90-95٪ من الحالات، وفي الأشخاص الذين ماتوا بسبب داء الكلب - في 70٪، لذلك فإن غياب أجساد الأطفال الزنجيين لا يستبعد تشخيص داء الكلب. وفي مثل هذه الحالات، من الضروري استخدام طرق بحث أخرى.التحليل الحيوي على الفئران
تُستخدم الطريقة البيولوجية لعزل فيروس داء الكلب من أنسجة المخ والغدد اللعابية للجثث ولعاب المرضى والحيوانات (اختبار داخل الحياة). الأنسب للعدوى هي مص الفئران. لإجراء الاختبار الحيوي، يتم استخدام 15-20 حيوانًا. تتم العدوى تحت التخدير عن طريق الحقن داخل المخ بمقدار 0.03 مل من معلق مادة الاختبار. يمكنك أيضًا إجراء اختبار بيولوجي على الهامستر السوري عن طريق حقنه بالمادة في العضل، وإذا كانت مادة الاختبار تحتوي على فيروس داء الكلب، فإن الفئران تعاني من ارتعاش عضلي وشلل. وفي معظم الحالات، تموت الحيوانات خلال خمسة أيام. يجب التأكد من وجود فيروسات داء الكلب في الفئران المصابة والميتة باستخدام تفاعل التألق المناعي المباشر أو الكشف عن أجسام Babes-Negri، ويتم أيضًا تحديد فيروس داء الكلب المكتشف باستخدام تفاعل التعادل على الفئران البيضاء.الدراسات المصلية
يتم إجراء الدراسات المصلية لتحديد مناعة ما بعد التطعيم. يتم الكشف عن الأجسام المضادة لفيروس داء الكلب في تفاعلات التعادل، والتثبيت التكميلي، والتألق المناعي. تعتبر التفاعلات المناعية (المقايسة المناعية الإشعاعية والمقايسة المناعية الإنزيمية) حساسة.داء الكلب(السعار) مرض معدٍ خطير على الحيوانات والإنسان. ويحدث هذا المرض في جميع دول العالم. تتميز بنتيجة قاتلة بنسبة 100٪.
العوامل الممرضة– فيروس RNA ينتمي إلى عائلة Rhabdovirus. هذا الفيروس لديه ميل للأنسجة العصبية. ويوجد في أعلى التتر في دماغ الحيوانات المريضة. بالإضافة إلى ذلك، توجد الفيروسات أيضًا في النخاع الشوكي والغدد اللعابية والدمعية.
هناك:
- وهو فيروس "بري" ينتشر في الظروف الطبيعية وهو شديد الإمراض للإنسان والحيوان.
- و "الثابت" الذي تم الحصول عليه في ظروف المختبر لا يسبب الأمراض للحيوانات والبشر عند تناوله خارج العصب.
فيروس داء الكلب ليس مقاومًا لدرجات الحرارة المرتفعة: عند درجة حرارة 60 درجة مئوية يتم تعطيله بعد 10 دقائق، وعند درجة حرارة 100 درجة مئوية يتم تعطيله على الفور تقريبًا. لكن الدماغ المتجمد يمكن أن يظل قابلاً للحياة لمدة تصل إلى عدة أشهر. كما يستمر لعدة أشهر في الأنسجة المتعفنة. مقاومة لمحاليل اليود. ولكن يتم تعطيله بسرعة بواسطة المحاليل المطهرة المعتمدة على الفورمالديهايد والكلورامين والقلويات.
البيانات الوبائية.
جميع الحيوانات ذوات الدم الحار معرضة للإصابة بفيروس داء الكلب. الحيوانات الأكثر حساسية هي الكلاب البرية (مثل الثعالب، والثعالب القطبية الشمالية، والذئاب، وكلاب الراكون، وابن آوى)، والقوارض القططية. الطيور أقل عرضة للإصابة.
في البرية، خزانات فيروس داء الكلب هي الحيوانات المفترسة والخفافيش، في المدينة - الكلاب الضالة.
مصدر العدوى هو الحيوانات المريضة التي تفرز الفيروس في لعابها. ويلاحظ وجود الفيروس في اللعاب بالفعل قبل 8-10 أيام من ظهور علامات المرض. تحدث العدوى من خلال اللدغة عندما يصل اللعاب إلى الأغشية المخاطية أو المناطق المتضررة من الجلد.
طريقة تطور المرض .
بعد دخول الجسم، يبدأ الفيروس في التكاثر في مكان الإدخال. وبعد 24 ساعة يبدأ في اختراق الأنسجة العصبية. ويتحرك في الأعصاب نحو الحبل الشوكي والدماغ بمعدل 7 سم/يوم. بعد أن وصل إلى الدماغ، يبدأ الفيروس في التكاثر بقوة، ثم ينتقل الفيروس عبر الأعصاب إلى جميع الأعضاء، وقبل كل شيء، إلى الغدد اللعابية والعينين. تتراوح فترة الحضانة (من لحظة الإصابة حتى ظهور العلامات السريرية) في المتوسط من 14 إلى 60 يومًا، وقد تصل أحيانًا إلى 6-12 شهرًا.
علامات طبيه.
هناك 3 أنواع من تطور المرض.
- دورة كلاسيكية ثلاثية المراحل أو شكل عنيف. في البداية، يلاحظ تغيير في سلوك الحيوان (المرحلة 1)، يصبح حنونًا جدًا أو، على العكس من ذلك، خجولًا وغير متواصل. يمكن أن تستمر هذه المرحلة من عدة ساعات إلى 4 أيام. ثم تأتي المرحلة التالية - الإثارة (المرحلة الثانية)، والتي تستمر من 1-4 أيام. تصبح الحيوانات عدوانية وعرضة للتجول ومهاجمة الحيوانات والناس. يتطور فقدان الشهية والقلق وسيلان اللعاب. وقبل 3-4 أيام من الوفاة، تتطور مرحلة الشلل أو الاكتئاب، والتي تتميز بالشلل التدريجي.
- شكل مشلول أو صامت.تتميز بتطور الشلل دون مرحلة سابقة من الإثارة. مع هذا الشكل، يلاحظ سيلان اللعاب، وترهل الفك السفلي، وصعوبة البلع، وفقدان الشهية. ثم يتطور شلل عضلات الجذع والأطراف. وفاة الحيوان يحدث بعد 3-4 أيام.
- "داء الكلب غير النمطي".هذا هو مسار مزمن تحت الإكلينيكي (دون ظهور الأعراض) للمرض، والذي يمكن أن يستمر لمدة تصل إلى 3 أشهر.
تشخبص.
يتم التشخيص الأولي على أساس التاريخ والأعراض السريرية. في حالة الاشتباه في داء الكلب بعد وفاة حيوان، يتم إرسال جثة الحيوان إلى المختبر. إذا لم يكن ذلك ممكنا، استخدم الرأس أو الدماغ. يجب اتخاذ احتياطات صارمة عند تناول المواد!
يشمل التشخيص المختبري لداء الكلب عدة طرق بحثية.
- الكشف عن جثث الاطفال الزنجي. لتشخيص داء الكلب، يتم إجراء فحص نسيجي لدماغ الحيوان المتوفى في المختبر. ويلاحظ وجود عقيدات داء الكلب في هياكل الجزء السفلي من البطين الرابع للدماغ ووجود أجسام بابيس نيجري (شوائب اليوزينيات السيتوبلازمية التي تتكون من جزيئات فيروس داء الكلب) في الدماغ. يمكن العثور عليها في الحصين والهياكل القشرية والجذعية للدماغ، وفي المخيخ والعقد الظهرية للحبل الشوكي وظهارة القرنية للعين. ومع ذلك، إذا لم يتم اكتشاف جثث الأطفال الزنجي، فلا يمكن استبعاد الإصابة بداء الكلب.
- الكشف عن المستضد باستخدام الأجسام المضادة الفلورية (MFA) أو تحليل التألق المناعي (ELISA). بالإضافة إلى هذه التفاعلات، يجري حاليًا تطوير طريقة تشخيصية جديدة باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).
- اختبار بيولوجي لإصابة الفئران حديثي الولادة بفيروس من معلقات الدماغ والغدد اللعابية.
وفقًا لتشريعات الاتحاد الروسي، في حالات عضات الكلاب أو الحيوانات الأخرى (باستثناء أولئك الذين يعانون بشكل واضح من داء الكلب)، يجب على الضحايا الاتصال فورًا بالمؤسسات الطبية. ويجب نقل الحيوانات التي عضتها إلى أقرب مؤسسة بيطرية حكومية لفحصها من قبل المتخصصين والحجر الصحي لمدة 10 أيام.
لمنع انتشار داء الكلب، يتم توفير التطعيم الإلزامي السنوي للكلاب والقطط بلقاحات داء الكلب.
وفي الوقت الحالي، لاستيراد الحيوانات إلى عدد من البلدان، يلزم تقديم وثيقة تؤكد عدد الأجسام المضادة الصالحة لفيروس داء الكلب. للحصول على حماية فعالة ضد داء الكلب، يجب أن يكون الحد الأدنى لمستوى الأجسام المضادة المحايدة للفيروس في الدم 0.5 وحدة دولية/مل على الأقل. هذا النوع من الدراسات ليس تشخيصيًا ويهدف فقط إلى تحديد قوة المناعة ضد داء الكلب.
في موسكو، يمكنك التبرع بالدم لتحديد عيار الأجسام المضادة لفيروس داء الكلب في مركز التشخيص الجزيئي الواقع في Zvenigorodskoye Shosse، 5. وقد حصل مركز السيطرة على الأمراض على اعتماد دولي لإجراء هذا الاختبار ويصدر شهادات دولية صالحة طوال حياة الحيوان، بشرط الالتزام بالمواعيد النهائية لإعادة التطعيم.
يتم تحديد عيار الأجسام المضادة في موعد لا يتجاوز 30 يومًا بعد التطعيم. لذلك، إذا كنت تخطط للسفر مع حيواناتك الأليفة إلى الاتحاد الأوروبي أو بلدان أخرى، فيجب عليك الاهتمام مسبقًا بالتطعيم والتبرع بالدم لهذا الاختبار (تصدر النتائج خلال 7-14 يومًا).
مساعد مختبر في مختبر بيطري
"BioVetLab" لازاريفا إن.في.
داء الكلب (ب) هو مرض حاد يصيب الحيوانات ذوات الدم الحار، ويتميز بتلف الجهاز العصبي المركزي. الحيوانات الأليفة والبرية بجميع أنواعها، وكذلك البشر، معرضة للإصابة.
يتم تسجيل المرض في مناطق مختلفة من العالم. ولم تكن هناك حالات لانتشار المرض في أستراليا أو بريطانيا العظمى أو اليابان. وينتهي المرض دائمًا تقريبًا بالموت. هناك بالفعل حالات موثقة للشفاء من داء الكلب لدى البشر والكلاب بعد الإصابة التجريبية.
ينتمي فيروس داء الكلب (RBV) إلى عائلة Rhabdoviridae، جنس Lyssavirus. لقد ثبت الآن أن VD له 4 أنماط مصلية، وهو ما يرجع على ما يبدو إلى الاختلافات في تكوين بروتينات الغشاء. ترتبط جميع أنواع VD من الناحية المناعية، ولكنها تختلف في الفوعة. WB لديه خصائص GA وGAD. هناك علاقة خطية بين نشاط العدوى ونشاط GA. تنتج الحيوانات المحصنة ضد داء الكلب أجسامًا مضادة VNA وCSA وantiGA وlytic (تدمير الخلايا المصابة بالفيروس في وجود مكملات).
يتم التشخيص على أساس البيانات الوبائية وأعراض المرض والتغيرات المرضية (وهي أقل أهمية) وبشكل رئيسي نتائج الاختبارات المعملية.
التشخيص المختبرييتكون من دراسة دماغ الحيوانات من أجل اكتشاف ارتفاع ضغط الدم الفيروسي في IF وRDP والكشف عن أجسام Babes-Negri وإجراء اختبار حيوي على الفئران البيضاء.
في الاتحاد الروسي، يتم حاليًا تنظيم إنتاج مجموعات تشخيص B في IF وRDP في VNITIBP وKazNIVI.
عزل الفيروسات.يتم إرسال جثث الحيوانات الصغيرة الطازجة إلى المختبر للبحث من الحيوانات الكبيرة - الرأس أو الدماغ. وفي بعض الحالات يمكن حفظ الدماغ في نسبة 50% من الجلسرين. يجب وضع الجثة أو الرأس بعناية في كيس بلاستيكي، ووضع الدماغ في وعاء به غطاء زجاجي أو مطاطي مملوء بالبارافين. يتم تعبئة المواد في حاويات مقاومة للرطوبة. فقط العقول غير المعلبة هي المناسبة للبحث الفيروسي. يجب أن نتذكر أن تشريح الجثة واستخراج الدماغ وغيرها من العمليات باستخدام المواد المرضية يجب أن تتم في ظل ظروف معقمة والالتزام الصارم بالتدابير الوقائية الشخصية: رأس الحيوان ثابت بقوة، والأيدي محمية بزوجين من القفازات (الجراحية). والتشريحية)، ويتم ارتداء نظارات واقية لحماية العينين، وضمادة شاش مكونة من 6 طبقات على الأنف والفم.
البحوث المختبرية للمادةيتم إجراء اختبارات داء الكلب خارج نطاق الدور؛ ويتم إبلاغ النتائج على الفور إلى طبيب المزرعة ورئيس أطباء المنطقة (المدينة).
إشارة الفيروس وتحديد الهوية. إجراءات إجراء البحث: من كل جزء من الدماغ على الجانبين الأيسر والأيمن (قرن عمون، المخيخ، القشرة الدماغية والنخاع المستطيل)، يتم إعداد 4 مسحات من بصمات الأصابع للـ IF واكتشاف أجسام الأطفال الزنجيين؛ يتم وضع RDP مع أنسجة المخ. إذا كانت النتائج سلبية، يتم إجراء الاختبار الحيوي.
الكشف عن هيئات إدراج محددة. يتم تلطيخ ضربات البصمة باستخدام Sellers أو Muromtsev أو طرق أخرى. بعد تلطيخ، يتم عرض الاستعدادات تحت المجهر الضوئي مع نظام الغمر. تعتبر النتيجة الإيجابية هي وجود أجسام Babesch-Negri محددة (عند صبغها وفقًا للبائعين - تشكيلات حبيبية بيضاوية أو مستطيلة محددة بوضوح من اللون الوردي والأحمر في البروتوبلازم، عند صبغها وفقًا لمورومتسيف - أرجواني فاتح مع شوائب زرقاء داكنة أما أجسام بابيش-نيغري، فهي في أغلب الأحيان تقع خارج الخلايا العصبية.
السمة الأكثر تميزًا لأجسام Babes-Negri هي بنيتها الداخلية، مما يسمح لها بالتمييز بدقة تامة. تظهر الحبوب الصغيرة بالداخل - حبيبات قاعدية ذات لون أزرق داكن وحتى أسود، بحجم 0.2-0.5 ميكرون.
تعتبر القيمة التشخيصية للكشف عن الهيئات المشمولة لإثبات الإصابة بمرض VD مقبولة بشكل عام. ومع ذلك، فإن الحيوانات السليمة، وخاصة القطط والفئران البيضاء، لديها تكوينات يمكن أن يسبب وجودها صعوبات في التشخيص. في بعض الحالات، في دماغ القطة، من الممكن التمييز بثقة بين هذه الادراجات من أجسام Babes-Negri، وهنا يوصى باستخدام طرق تحديد الهوية، وخاصة IF. وبالمثل، في الكلاب التي ماتت نتيجة التسمم بسم الثعبان أو الصدمة الكهربائية، يمكن العثور على جثث متضمنة تشبه أجساد Babes-Negri. يتم الكشف عن أجسام بابيش-نيجري فقط في 65-85% من حالات داء الكلب، وبالتالي فإن غيابها ليس إجابة سلبية، ويتم فحص المادة في اختبارات أخرى (IF، RDP، bioassay).
لو.أحد الاختبارات الرئيسية لتشخيص B. عندما يتم إجراؤها بطريقة مؤهلة تأهيلاً عاليًا، يتم الحصول على موافقة بنسبة 99-100٪ مع طريقة الاختبار الحيوي. عادة، في الممارسة التشخيصية، يتم استخدام طريقة IF المباشرة، والتي يتم تنفيذها باستخدام Ig المضاد لداء الكلب. يتم تثبيت المستحضرات في الأسيتون المبرد (8-10 درجة مئوية) لمدة 4 ساعات على الأقل وتستخدم مسحات من دماغ الفئران البيضاء السليمة كعنصر تحكم سلبي. يتم أخذ النتائج في الاعتبار بصريًا في المجهر الفلوري بناءً على تقييم شدة التلألؤ لمجمع AG-AT. يتم اكتشاف Ag VB على شكل حبيبات صفراء-خضراء أو خضراء زاهية ذات أشكال وأحجام مختلفة في الخلايا (عادةً خارج الخلايا). يعتبر التشخيص ثابتًا إذا تم اكتشاف عدد كافٍ (10 على الأقل) من الحبيبات النموذجية ذات توهج أخضر ساطع أو العديد من النقاط الصغيرة في العديد من مجالات الرؤية، ويجب ألا يكون هناك مثل هذا التوهج في التحكم.
لإثبات خصوصية التلألؤ لمجمع AG-AT، يتم استخدام طريقة قمع IF، والتي تتكون من قدرة AG العربي المرتبط بـ AT غير الفلورسنت على عدم الاندماج مرة أخرى مع AT الفلورسنت المحدد. وللقيام بذلك، يتم تطبيق Ig المضاد لداء الكلب بنسبة 5% على مستحضرات ثابتة محضرة من الدماغ قيد الدراسة، ويتم حفظها لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في غرفة رطبة، ويتم غسلها بمحلول ملحي، ثم صبغها بمضادات داء الكلب الفلورية. Ig باستخدام الطريقة المباشرة المقبولة عمومًا. لا ينبغي أن يكون هناك مضان في المستحضرات المعالجة بهذه الطريقة.
تتيح طريقة IF اكتشاف مرض VD في خلايا قرنية العين وإجراء تشخيص أولي أثناء المرض: أثناء مرض الحيوان، وكذلك قبل يوم أو يومين أو أكثر من ظهوره السريري. يمكن استخدام هذه الطريقة لدراسة الحيوانات المشتبه بإصابتها بالمرض B، وكذلك الكلاب والقطط السليمة سريريًا والتي قامت بعض الأشخاص والحيوانات. للقيام بذلك، قم بإعداد انطباعات القرنية، مع مراعاة جميع قواعد السلامة الشخصية، افتح الشق الجفني للحيوان بالإبهام والسبابة واضغط على مقلة العين البارزة قليلاً بسطح شريحة زجاجية، على بعد 0.5 سم من النهاية. من الضروري التأكد من أن الحيوان لا يومض بالجفن الثالث، حيث تتم إزالة الخلايا الظهارية من الزجاج ويتم الحصول على مسحة ذات نوعية رديئة. يتم عمل مستحضرين على الأقل يحتويان على طبعتين من كل عين. وللسيطرة، يتم تحضير بصمات القرنية من الحيوانات السليمة بنفس الطريقة. يمكن تحضيرها في المنزل. يتم تجفيف المطبوعات في الهواء، وتثبيتها في الأسيتون لمدة 4 ساعات عند 4 درجات مئوية، وتعبئتها وإرسالها إلى المختبر. هي ملطخة الاستعدادات كما لو، وفقا للطريقة المقبولة عموما.
في المستحضرات التي يتم الحصول عليها من الحيوانات المريضة أو تلك التي في نهاية فترة حضانة المرض، في السيتوبلازم في العديد من الخلايا الظهارية، يتم ملاحظة حبيبات مضيئة ذات أحجام مختلفة بأشكال مختلفة - من نقاط تشبه الغبار إلى 2 ميكرون أو أكثر. من أجل الحصول على نتائج موثوقة، يتم فحص 50-100 خلية في كل إعداد، وفي المجموع من الحيوان - ما لا يقل عن 200-400 خلية. تعتبر نتائج الفحص المجهري إيجابية إذا تم العثور على 11٪ أو أكثر من الخلايا ذات بؤر التألق المميزة في بصمات قرنية الحيوان. يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه في المستحضرات المأخوذة من الحيوانات السليمة (التحكم)، بسبب التألق الذاتي، قد يتم العثور على خلايا مفردة ذات بؤر ذات شكل وتألق مماثل.
من المهم ملاحظة أن IF يجعل من الممكن تسريع الاستجابة عند إجراء التشخيص النهائي باستخدام الاختبار الحيوي، حيث لا يمكن تحديد تشخيص B إلا في اليوم 4-8 بعد إصابة الفئران بمادة الاختبار، والحضانة فترة المرض في الفئران يمكن أن تصل إلى 20 يوما. إذا كان من الممكن اكتشاف VD في أنسجة الغدة اللعابية تحت الفك السفلي. يتم تحضير تحضيرات اللطاخة من الغدد اللعابية تحت الفك السفلي، بأخذ مادة من 6 أجزاء مختلفة من الغدة على الأقل، حيث أن توزيع الفيروس فيها غير متساوٍ. في كثير من الأحيان، للحصول على طبعة، عليك أن تمارس ضغطًا قويًا، لأنه بسبب وفرة الميوسين، لا يبقى سوى القليل من المواد على الزجاج.
تم توضيح إمكانية تحديد VB في الجلد بطريقة IF ولهذا الغرض يتم أخذ عينات من فروة الرأس وكذلك بصيلات الشعر الحسي واللمسي للكمامة أو الحليمات الحسية الجانبية (على خد الكلب). يتم تخزين العينات في -20 أو -70 درجة مئوية. يتم إجراء عمليات التجميد منها ومعالجتها بالجلوبيولين الفلوري. ترتبط نتائج تحليل IF التي تم الحصول عليها من تحديد VB في الجلد بشكل كبير مع البيانات التي تم الحصول عليها من دراسة دماغ نفس الحيوان. وقد ظهر ارتباط وثيق بين اكتشاف فيروس AG في عينات أنسجة المخ والشفاه بطريقة IF.
RDP.يستخدم للكشف عن WB AG في الدماغ غير المحفوظ للحيوانات التي ماتت بسبب داء الكلب في الشوارع، أو الجراء المستخدمة في الاختبار الحيوي. يتم وضع RDPs باستخدام الأسلوب الميكروي على شرائح زجاجية باستخدام هلام أجار 1-1.5% وفقًا للطريقة المقبولة عمومًا. يتم اكتشاف أعلى نسبة من النتائج الإيجابية عند استخدام الاستنسل التالي: أ - قرن عمون (الجانب الأيمن)؛ ب - القشرة الدماغية (الجانب الأيمن)؛ ج - المخيخ (الجانب الأيمن)؛
د - النخاع المستطيل (الجانب الأيمن)؛ + (زائد) - التحكم الإيجابي؛ - (ناقص) - السيطرة السلبية؛ 1، 2، 3، 4 - الآبار مع تخفيف الغلوبولين المناعي المحدد 1:2، 1:4، 1:8، 1:16، على التوالي
يتم تحضير كتلة متجانسة تشبه المعجون من كل جزء من الدماغ باستخدام الملقط، الذي يتم وضعه في الآبار المقابلة. يتم فحص الدماغ بأكمله من الفئران. يتم تحضير AG من أجزاء من الدماغ على الجانب الأيسر بطريقة مماثلة (مطلوب ما مجموعه 4 شرائح مع هلام أجار لكل فحص). يؤخذ التفاعل في الاعتبار بعد 6، 24، 48 ساعة. إذا كان هناك 1 أو 2-3 خطوط من هطول الأمطار بين الآبار التي تحتوي على AG والجلوبيولين المناعي، يعتبر التفاعل إيجابيا.
يعد RDP سهل التنفيذ ومحددًا، لكن النسبة المئوية لاكتشاف Ag الفيروسي في مادة الاختبار هي 45-70. عند فحص دماغ الفئران التي تم الحصول عليها باختبار حيوي إيجابي، يكتشف RDP ما يصل إلى 100% من الحالات. إن غياب أجسام Babes-Negri والتألق النوعي وRDP السلبي في المادة المدروسة لا يوفر سببًا لاستبعاد وجود الفيروس. وفي هذه الحالة، يتم التشخيص النهائي بناءً على نتائج الاختبار الحيوي على الفئران البيضاء، يليه تحديد الفيروس.
الفحص الحيوي.من المقبول عمومًا أن الاختبار الحيوي هو طريقة أكثر فعالية من اكتشاف أجسام Babes-Negri، وIF، وما إلى ذلك. ومع ذلك، في بعض الحالات تبين أنها سلبية، على الرغم من تأكيد التشخيص B عن طريق الكشف عن الأجسام المتضمنة وIF. وتراوحت نسبة النتائج السلبية للمقايسة الحيوية من 1.3 إلى 12.
يمكن تفسير المعلومات المتعلقة بالفعالية المتغيرة للاختبار الحيوي من خلال عدد من العوامل: اختيار حيوان التجربة، وعدد الحيوانات في التجربة، وطريقة العدوى، وطريقة وفترة تخزين المادة قبل دخول المختبر. قد تلعب ظاهرة تداخل الجسيمات المعدية مع الجسيمات غير النشطة دورًا أيضًا في حالة استخدام مادة مخففة بشكل غير كافٍ للتلقيح.
في الدماغ والغدد اللعابية للثعالب والظربان التي ماتت بسبب داء الكلب، تم العثور على مادة تمنع عدوى الفيروس، مما لا يسمح بتشخيص المرض لدى هذه الحيوانات عن طريق العدوى داخل المخ لدى الفئران. إن وجود مادة مثبطة في مادة الاختبار لا يمنع اكتشاف Ag الفيروسي بطريقة IF؛ بالنسبة للظربان والثعالب، هذه هي الطريقة التشخيصية الأكثر حساسية.
من بين جميع أنواع الحيوانات (الأرانب، والخنازير الغينية، والفئران البيضاء البالغة، والهامستر) المستخدمة في الاختبارات الحيوية، يفضل الكثير منها الفئران المرضعة لأنها أكثر حساسية لسلالات مختلفة من VB وأقل خطورة في العمل معها. الهامستر السوري حساس مثل الفئران، لكن الوصول إليه أقل صعوبة.
RSK.يتم استخدام الكشف عن مستضدات معينة في الخلايا الجذعية السرطانية عند تشخيص داء الكلب بشكل أقل تكرارًا من الطرق الأخرى. يتم تحضير AG من الدماغ وإرساله للبحث. للقيام بذلك، يتم طحن أنسجة المخ (أجزاء من المهاد وجذع الدماغ غنية بشكل خاص بالمستضد الذي يعمل على تثبيت المتممة) في المخزن المؤقت الفيروسي بنسبة 1:10 وتترك في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة، وبعد ذلك يتم تعطيل المعلق. عند 56 درجة مئوية لمدة 5 ساعات، يقتل هذا العلاج الفيروس ويزيل عدم تكامل أنسجة المخ دون الإضرار بالمستضد المحدد. يتم طرد المعلق لمدة 15 دقيقة عند 3500 دقيقة-1 من السائل الطاف، وهو مادة لاختبار وجود AG، ويتم تحضير التخفيفات المتزايدة بمقدار ضعفين من 1:2 إلى 1:64 واستخدامها للاختبار في RSC.
إليسا.في اختبار ELISA، تم اكتشاف تلطيخ محدد لـ AG في خلايا دماغ الحيوانات التي ماتت بسبب داء الكلب سواء في العينات المأخوذة حديثًا والمخزنة في الجلسرين، وكذلك في العينات المخزنة بدون الجلسرين عند درجة حرارة 20 درجة مئوية لمدة 8-18 ساعة للتشخيص الروتيني لداء الكلب في الحيوانات، للكشف عن AG WB في أقسام البارافين الأنسجة عند تثبيت المستحضرات بمحلول الفورمالين 10٪ مع درجة حموضة 5.3 والمعالجة اللاحقة للمستحضرات المضمنة في البارافين مع البيبسين.
على عكس RN في الفئران وفي زراعة الخلايا، يمكن لـ ELISA اكتشاف AT في الحيوانات في غضون ساعات قليلة، ELISA هي الطريقة المخبرية الواعدة للكشف عن AT والإشارة إلى الفيروس نفسه. إحدى الطرق السريعة لتشخيص داء الكلب هي تقنية الالتقاط وطريقة IF للكشف عن AG EVs. لقد ثبت أن طريقة الكشف عن WB AG في المقاطع البارافينية باستخدام طريقة البيروكسيداز-مضاد البيروكسيديز تتفوق بشكل كبير على طريقة ELISA. وفي عام 1987، تم إنشاء مجموعة التشخيص المناعي السريع لإنزيم داء الكلب (RREID)، وهي مناسبة للدراسات الوبائية والمخبرية.
تحديد البديل باستخدام mAbs. باستخدام mAbs إلى البروتينات السكرية VB، تم اختيار متغيرات AG، ومن بينها تم تحديد المتغيرات الحرارية (الضارة) ظاهريًا. عند استخدام مجموعتين من mAbs، تبين أن السلالات البرية تختلف عن أجهزة الكمبيوتر. سلالات Fixe (Pasteur)، وCVS، وFlury HEP، وERA، و"duck" لمحددات AG. أتاحت دراسة 7 سلالات معزولة من مرضى باستخدام mAbs تحديد اختلافات معينة بينها وبين سلالة اللقاح فيما يتعلق بمحددات المستضد.
من المقبول عمومًا أنه يمكن اكتشاف اختلافات AT بين السلالات البرية باستخدام mAbs ضد القفيصة النووية AT N، التي تتفاعل مع الشوائب السيتوبلازمية للخلايا المصابة بالفيروسات؛ ضد البروتين السكري (G AG)، الذي يتفاعل مع أغشية الخلايا المصابة، ويتحلل هذه الخلايا في وجود مكمل ويبطل مفعول الفيروس. بسبب التباين المحتمل لـ AG للبروتين السكري السطحي لـ VB من مناطق جغرافية مختلفة، تم استخدام البروتين النووي الريبي الذي يتميز ببنية AG محفوظة كـ AG وقائي. وبالتالي، ليس بروتين G فحسب، بل أيضًا WB RNP له نشاط وقائي.
التشخيص المصلي والتشخيص بأثر رجعي. هذه الطرق غير معتادة بالنسبة لداء الكلب، حيث أنها تستخدم فقط لغرض اختبار المناعة بعد التطعيم. للكشف عن ومعايرة ما بعد التطعيم، يتم استخدام الرقم الهيدروجيني، والذي يتم تحديده باستخدام الطريقة المقبولة عمومًا. يتم استخدام WB الثابت باعتباره AG. كان الرقم الهيدروجيني في خلايا BHK-21 أكثر حساسية من IF غير المباشر في اكتشاف AT في أمصال الثعالب المحصنة. بالإضافة إلى ذلك، تم اقتراح RTGA وELISA.
RTGA.لم يتم العثور على استخدام واسع النطاق حتى الآن في الممارسة التشخيصية بسبب وجود مثبطات غير محددة في مصل الدم، والتي يكون VB حساسًا لها للغاية، والأهم من ذلك، أن GA AG، الذي لم يتم تنقيته بشكل كافٍ، لديه حساسية منخفضة. لإعداد GA AG WB، يقترح استخدام أجهزة الكمبيوتر. موسكو، تمت زراعته في مزرعة الخلايا VNK-21، بعد معاملته بالسابونين، يليه التنقية والتركيز. يتم فصل GA عن مكونات الفيريون الأخرى بواسطة الطرد المركزي الفائق. كان للتحضير الناتج درجة نقاء 99.92%، وكان له نشاط GA مرتفع (1:128)، والذي تم الحفاظ عليه جيدًا لمدة شهر واحد عند درجة حموضة 5-9.
قبل إجراء RTGA، يجب إجراء عملية التربسين المعتدلة لخلايا الدم الحمراء لتوعيتها. عند استخدام معلق 0.25% من كريات الدم الحمراء التربسينية (يفضل 10 7 خلايا في 1 مل)، تزيد حساسية RTGA 4 مرات. لتخفيف AG والأمصال، يتم استخدام محلول ملح البورات (الرقم الهيدروجيني 9) مع إضافة 0.4٪ من ألبومين المصل البقري. يتم تحضير معلق كريات الدم الحمراء في محلول ملحي ذو درجة حموضة حمضية، بحيث بعد دمجها مع خليط من الفيروس والمصل، درجة الحموضة فيه 9، يتم تحديد الرقم الهيدروجيني النهائي خلال 6.2. بعد إضافة تعليق خلايا الدم الحمراء إلى الآبار، تهتز اللوحة، وتغلق بغشاء شفاف وتوضع على الجليد. يتم أخذ نتائج RTGA في الاعتبار بعد 40-50 دقيقة، ومع كريات الدم الحمراء من الدجاج البالغ من العمر يومين أو قرود الريسوس - بعد 1-1.5 ساعة.
تم تطوير مقايسة مناعية إشعاعية استنادًا إلى قدرة AT على الارتباط بـ 125 المسمى 1-AG VB. يمكن استخدام IgG المعزول من مصل داء الكلب مفرط المناعة للكشف عن مستضدات WB بواسطة RIA في الطور الصلب. تم الحصول على أفضل النتائج عند استخدام محلول الفوسفات الملحي (درجة الحموضة 6.0) بقوة أيونية تبلغ 0.01 مولار ومسمى IgG بنشاط يتراوح بين 200-250 ألف نبضة / دقيقة.
ينطبق RIA التنافسي في المرحلة الصلبة للكشف عن الأجسام المضادة لداء الكلب في طاف المصل والورم الهجين.
تشخيص متباين. من الضروري استبعاد مرض Aujeszky، حيث تكون الحيوانات المريضة غير عدوانية ولا يوجد انحراف في الشهية. في الكلاب، يتم استبعاد الشكل العصبي للطاعون. قد ينشأ الاشتباه في داء الكلب من التهاب الدماغ والنخاع المعدي في الخيول. تتيح مجموعة من الاختبارات المعملية إجراء تشخيص دقيق لداء الكلب. تم اقتراح طريقة جديدة للتمييز بين سلالات VD المختلفة، بناءً على هضم إنزيم التقييد لمنتجات تضخيم PCR لجزء الجينات N.
داء الكلب هو مرض معد حاد يحدث مع أضرار جسيمة في الجهاز العصبي، وعادة ما تكون النتيجة مميتة.
البشر وجميع الحيوانات ذوات الدم الحار معرضة للإصابة. يتم تسجيل داء الكلب في بلدان مختلفة من العالم.
خصائص العامل الممرض. ينتمي الفيروس إلى عائلة Rhabdoviridae، جنس Lyssavirus. تحتوي على الحمض النووي الريبي. يتم تمثيل الجينوم بجزيء RNA خطي واحد مفرد تقطعت به السبل. تتكون فيروسات الفيروس من قفيصة نووية ذات تناظر حلزوني ومظروف من البروتين الدهني مع نتوءات على شكل نادي من البروتين السكري. والفيريون على شكل رصاصة، ويبلغ متوسط حجمه 180-175 نانومتر.
مقاومة التأثيرات الفيزيائية والكيميائية. درجات الحرارة المنخفضة تحافظ على الفيروس. تعتبر درجات الحرارة المرتفعة (80-100 درجة مئوية) ضارة به، ويمكن للفيروس أن يعيش في المواد المتعفنة لمدة تصل إلى أسبوعين. المطهرات (محاليل الفورمالديهايد والقلويات الكاوية والمبيضات) بتركيزات طبيعية لها تأثير ضار على الفيروس.
هيكل مستضدي. تحتوي فيريونات فيروس داء الكلب على مستضدات بروتين سكري (خارجي) وقفيصة نووية (داخلية). يحفز مستضد البروتين السكري تكوين أجسام مضادة تحييد الفيروس ومضادة للتراص الدموي، وتضمن تطور المناعة في الحيوانات، ويحفز مستضد القفيصة النووية تثبيت المتممات والأجسام المضادة المترسبة.
يحتوي فيروس داء الكلب على 4 أنماط مصلية (نماذج أولية): فيروس داء الكلب، لاغوس، موكولا، دوفينهاج. ترتبط السلالات الوبائية لفيروس داء الكلب من الناحية المناعية، ولكنها تختلف في الفوعة. وتنقسم جميع سلالات الفيروس المعزولة إلى 5 مجموعات على أساس الفوعة. تتميز سلالات المجموعة الأولى بضراوة عالية والمجموعة الخامسة - منخفضة الضراوة.
يرتبط طيف إمراض الفيروس ارتباطًا وثيقًا ببيئته التي لها خصائصها الخاصة. وبالتالي، فمن الضروري التمييز بين اثنين من المظاهر الوبائية الرئيسية والمستقلة لعدوى فيروس ليسا:
1) أوبئة داء الكلب الحيوانية التي تدعمها الحيوانات البرية (الثعالب، الذئاب، كلاب الراكون، ابن آوى، النمس، الظربان، الراكون، إلخ)؛
2) الأوبئة الحيوانية من أصل chiropteric، بدعم من مصاصي الدماء والخفافيش الحشرية وآكلة اللحوم.
منذ الستينيات، أصبح داء الكلب في الحيوانات البرية منتشرًا. كان الخزان الرئيسي ومصدر العدوى هو الثعالب والحيوانات البرية الأخرى. يمكن أن يستمر المرض فيها بشكل خفي، مما يضمن بقاء الفيروس في الظروف الطبيعية. عادة ما ينتهي داء الكلب في الكلاب أثناء الأوبئة الحيوانية في المناطق الحضرية بموتهم.
النشاط المستضدي. تنتج الحيوانات المحصنة ضد داء الكلب أجسامًا مضادة لتحييد الفيروس، وتثبيت المتممة، والترسيب، ومضادة للتراص الدموي، والتحللي (تدمير الخلايا المصابة بالفيروس في وجود المتممة).
يمتلك الفيروس خصائص تراص دموي ضد خلايا الدم الحمراء في الأوز والدجاج والخنازير الغينية والأغنام والبشر (المجموعة 0). عادة، يتم إجراء تفاعل التراص الدموي باستخدام خلايا الدم الحمراء عند درجة حرارة 0-4 درجة مئوية، ودرجة الحموضة 6.2-6.4. هناك علاقة خطية بين النشاط المعدي والتراص الدموي.
زراعة الفيروسات. في الظروف المختبرية، يمكن زراعة الفيروس على حيوانات المختبر (الفئران، الأرانب، الهامستر، الخنازير الغينية، إلخ) باستخدام طريقة القتال داخل المخ. يتكاثر الفيروس في مزارع الخلايا الأولية والمستمرة (كلى الهامستر السوري، وأجنة الأغنام، والعجول، وBHK-21، وخلايا الورم العصبي العقدي الجاسيري للفئران، وما إلى ذلك). في المقاطع الأولى، يتكاثر الفيروس ببطء، دون أن يسبب CPE. بعد التكيف الأولي، تكون أجنة الدجاج أيضًا عرضة للإصابة بفيروس داء الكلب.
العدوى التجريبية. تتكاثر بسهولة على جميع أنواع الحيوانات ذوات الدم الحار.
علامات طبيه. تعتمد مدة فترة الحضانة على موقع العضة، وطبيعة الجرح، وكمية الفيروس الذي دخل الجرح وشدته، ونوع الحيوان المعض وعمره ومقاومته. وتستمر فترة الحضانة من أسبوع إلى سنة أو حتى أطول. المظاهر السريرية للمرض هي نفسها بشكل أساسي في جميع الحيوانات، ولكنها أكثر شيوعًا في الكلاب، حيث يمكن ملاحظة مسار المرض العنيف والصامت (الشلل). في الماشية، يمكن أن يكون لداء الكلب مسار غير نمطي (فقدان الشهية، ونى الكرش، شلل البلعوم، سيلان اللعاب). قد لا تكون هناك مرحلة الإثارة.
التغيرات المرضية. يمنع تشريح الحيوانات المشتبه بإصابتها بداء الكلب في الحقل.
في آكلي اللحوم (الكلاب بشكل رئيسي)، يمكن العثور على أجسام غريبة في المعدة.
توطين الفيروس. وقد أعلن فيروس داء الكلب عن الاعتلال العصبي. يخترق بشكل مركزي من المحيط (موقع اللدغة) على طول جذوع الأعصاب إلى الجهاز العصبي المركزي ، وينتشر في الجسم بالطرد المركزي على طول الأعصاب الطرفية ويدخل إلى الأعضاء المختلفة ، بما في ذلك الغدد اللعابية.
في الجسم، يتم توطين الفيروس بشكل رئيسي في الجهاز العصبي المركزي، وكذلك في الغدد اللعابية واللعاب. وقد ثبت وجود الفيروس في بعض الأعضاء الداخلية. يتم إخراجه من الجسم عن طريق اللعاب، عن طريق الرئتين والأمعاء والبول.
مصدر العدوى- الحيوانات المريضة. ينقلون الفيروس عن طريق اللدغة. قد تحدث العدوى عن طريق إفراز اللعاب من الجلد التالف. يمكن أن تصاب الحيوانات آكلة اللحوم بالعدوى عن طريق أكل أدمغة وأحبالها الشوكية للحيوانات التي ماتت بسبب داء الكلب. تم إثبات إمكانية الإصابة بداء الكلب من خلال الانتقال الهوائي (في الأماكن التي توجد بها الخفافيش). حتى ستينيات القرن العشرين، كان المصدر الرئيسي لداء الكلب هو الكلاب والقطط، ثم الثعالب والذئاب والكورساك وغيرها من الحيوانات البرية.
التشخيص. يتم تشخيص داء الكلب على أساس البيانات الوبائية والسريرية ونتائج الاختبارات المعملية، التي تتسم بأهمية بالغة.
عند العمل مع الحيوانات المريضة والمواد المعدية، من الضروري التقيد الصارم بتدابير السلامة الشخصية: ارتداء القفازات المطاطية، والعباءات ذات الأكمام، وساحة مطاطية أو بولي إيثيلين، وأحذية مطاطية، ونظارات السلامة، وقناع الوجه الواقي.
التشخيص المختبري. لاختبار داء الكلب، يتم إرسال جثث كاملة طازجة من الحيوانات الصغيرة إلى المختبر، ومن الحيوانات الكبيرة والمتوسطة الحجم - الرأس مع أول فقرتين عنق الرحم. تتم معالجة جثث الحيوانات الصغيرة بالمبيدات الحشرية قبل إرسالها للبحث.
يتم تعبئة المواد المرضية في أكياس بلاستيكية وتوضع في صناديق مغلقة بإحكام مع وسادة ماصة للرطوبة مشربة بمطهر. يتم إرسال المادة والرسالة التوضيحية، التي تشير إلى المرسل وعنوانه، ونوع الحيوان، وبيانات السجل الطبي وأساس الاشتباه في إصابة الحيوان بداء الكلب، وتاريخ وتوقيع الطبيب، عن طريق البريد.
تشمل التشخيصات المختبرية: الكشف عن المستضد الفيروسي في RIF وRDP وأجسام Babes-Negri والفحص الحيوي على الفئران البيضاء.
الشعاب المرجانية. من أجل هذا التفاعل، تنتج الصناعة الحيوية الفلورسنت المضاد لداء الكلب γ-الجلوبيولين.
يتم تحضير انطباعات أو مسحات رقيقة على شرائح زجاجية خالية من الدهون من أجزاء مختلفة من الدماغ على الجانب الأيسر والأيمن (قرن الأمون، القشرة الدماغية، المخيخ والنخاع المستطيل). يتم تحضير مستحضرين على الأقل من كل جزء من الدماغ. يمكنك أيضًا فحص الحبل الشوكي والغدد اللعابية تحت الفك السفلي. للسيطرة على المرض، يتم إجراء الاستعدادات من دماغ حيوان سليم (عادةً فأر أبيض).
يتم تجفيف المستحضرات في الهواء، وتثبيتها في الأسيتون المبرد (ناقص 15-20 درجة مئوية) لمدة 4 إلى 12 ساعة، ثم تجفيفها في الهواء، ويتم تطبيق جلوبيولين فلورسنت معين، ووضعها في غرفة رطبة عند 37 درجة مئوية لمدة 25 ساعة. -30 دقيقة. ثم يتم غسلها جيدًا بمحلول ملحي أو محلول فوسفات مع درجة حموضة 7.4، وشطفها بالماء المقطر، وتجفيفها بالهواء، ووضعها بزيت غمر غير فلورسنت، وعرضها تحت مجهر فلورسنت. في المستحضرات التي تحتوي على مستضد فيروس داء الكلب، يتم ملاحظة حبيبات الفلورسنت ذات اللون الأصفر والأخضر ذات الأحجام والأشكال المختلفة في الخلايا العصبية، ولكن في أغلب الأحيان خارج الخلايا. في السيطرة، لا ينبغي أن يكون هناك مثل هذا التوهج؛ عادة ما يضيء الأنسجة العصبية بلون رمادي أو أخضر باهت. يتم تقييم شدة التوهج بالصلبان. تعتبر النتيجة سلبية إذا لم يكن هناك مضان محدد.
لا يمكن فحص المواد المأخوذة من الحيوانات المحصنة ضد داء الكلب في RIF بعد 3 أشهر من التطعيم، حيث قد يكون هناك مضان لمستضد فيروس اللقاح.
الأنسجة المحفوظة بالجلسرين والفورمالدهيد والكحول وما إلى ذلك، وكذلك المواد التي تظهر عليها علامات التحلل ولو الطفيف، لا تخضع للفحص في RIF.
RDP في هلام أجار. تعتمد الطريقة على خاصية انتشار الأجسام المضادة والمستضدات في هلام الأجار، وعند التقاءها، تشكل خطوط ترسيب مرئية بصريًا (مستضد + مركب جسم مضاد). يستخدم للكشف عن المستضد في دماغ الحيوانات التي ماتت بسبب فيروس داء الكلب في الشوارع، أو أثناء العدوى التجريبية (الاختبار الحيوي).
يتم إجراء التفاعل على شرائح زجاجية يُسكب عليها 2.5-3 مل من محلول أجار 1.5٪ المنصهر.
هلام أجار: أجار ديفكو - 15 جم، كلوريد الصوديوم - 8.5 جم، محلول 1٪ من برتقال الميثيل في 50٪ كحول إيثيل - 10 مل، ميرثيولات - 0.01 جم، ماء مقطر - 1000 مل.
بعد التصلب في أجار، يتم عمل الآبار باستخدام استنسل بقطر 4-5 مم، يوضع تحت شريحة زجاجية مع أجار. تتم إزالة أعمدة أجار بقلم الطالب. تمتلئ الآبار الموجودة في الأجار بالمكونات وفقًا للرسم التخطيطي.
في الحيوانات الكبيرة، يتم فحص جميع أجزاء الدماغ (الجانبين الأيسر والأيمن)، في الحيوانات المتوسطة (الفئران، الهامستر، إلخ) - أي ثلاثة أجزاء من الدماغ في الفئران - الدماغ بأكمله. باستخدام الملقط، يتم تحضير كتلة تشبه العجينة من الدماغ، ويتم وضعها في الآبار المناسبة.
يتم وضع عناصر التحكم ذات المستضدات الإيجابية والسلبية على زجاج منفصل باستخدام نفس الاستنسل.
بعد ملء الآبار بالمكونات، توضع المحضرات في حجرة رطبة وتوضع في منظم الحرارة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 6 ساعات، ثم تترك في درجة حرارة الغرفة لمدة 18 ساعة، ويتم تسجيل النتائج خلال 48 ساعة.
يعتبر التفاعل إيجابيًا عند ظهور واحد أو اثنين أو ثلاثة خطوط هطول بأي شدة بين الآبار التي تحتوي على تعليق الدماغ وداء الكلب γ-الجلوبيولين.
التلوث البكتيري وتسوس الدماغ لا يمنعان استخدامه في RDP. المواد المحفوظة بالجلسرين والفورمالين وغيرها من الوسائل غير مناسبة لـ RDP.
الكشف عن جثث الاطفال الزنجي. يتم عمل مسحات أو مطبوعات رقيقة على شرائح زجاجية من جميع أجزاء الدماغ (كما هو الحال بالنسبة لـ RIF)، ومستحضرين على الأقل من كل جزء من الدماغ، ويتم صبغها باستخدام إحدى الطرق (وفقًا لـ Sellers، Muromtsev، Mann، Lenz، إلخ.).
مثال على تلطيخ البائعين: يتم تطبيق صبغة على مستحضر طازج غير مجفف (جزء واحد من محلول 1٪ من الفوكسين الأساسي مخلوط مع جزأين من 1٪ أزرق الميثيل)، ويغطي المستحضر بالكامل به، ويترك لمدة 10-30 يتم غسلها باستخدام محلول الفوسفات (الرقم الهيدروجيني 7.0-7.5)، وتجفيفها في وضع عمودي عند درجة حرارة الغرفة (في مكان مظلم) وعرضها تحت المجهر المغمور بالزيت.
تعتبر النتيجة الإيجابية هي وجود أجسام Babes-Negri - وهي تكوينات حبيبية بيضاوية أو مستطيلة محددة بوضوح ذات لون وردي-أحمر، وتقع في سيتوبلازم الخلايا أو خارجها.
هذه الطريقة لها قيمة تشخيصية فقط عند اكتشاف شوائب محددة نموذجية.
الفحص الحيوي. إنه أكثر فعالية مقارنة بجميع الطرق المذكورة أعلاه. يتم وضعه عند الحصول على نتائج سلبية بالطرق السابقة وفي الحالات المشكوك فيها.
بالنسبة للفحص الحيوي، يتم اختيار فئران بيضاء تزن 16-20 جرامًا ويتم طحن الأنسجة العصبية من جميع أجزاء الدماغ في هاون مع رمل معقم، ويضاف المحلول الفسيولوجي للحصول على تعليق بنسبة 10٪، ويترك لمدة 30-40 دقيقة، ثم يتم طحنه. يتم استخدام الطاف لإصابة الجراء. في حالة الاشتباه في حدوث تلوث بكتيري، أضف 500 وحدة من البنسلين والستربتوميسين لكل 1 مل من المعلق واتركه لمدة 30-40 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
في اختبار حيوي واحد، يصاب 10-12 فأرًا: نصفها داخل المخ بـ 0.03 مل، ونصفها تحت الجلد في منطقة الأنف أو في الشفة العليا بـ 0.1-0.2 مل.
يتم وضع الفئران المصابة في أوعية زجاجية (يفضل أحواض السمك) ويتم مراقبتها لمدة 30 يومًا، مع الاحتفاظ بسجلات يومية. يعتبر موت الفئران خلال 48 ساعة غير محدد ولا يؤخذ في الاعتبار عند تقييم النتائج. في وجود فيروس داء الكلب في المادة المرضية، من اليوم 7 إلى 10 بعد الإصابة، لوحظت الأعراض التالية في الفئران: الفراء المتعرج، أحدب الظهر الغريب، ضعف تنسيق الحركات، شلل الخلف، ثم الأطراف الأمامية والموت. في الفئران الميتة، يتم فحص الدماغ في RIF للكشف عن أجسام Babes-Negri ويتم وضع RDP.
يعتبر الاختبار الحيوي لداء الكلب إيجابيًا إذا تم اكتشاف أجسام Babes Negri في المستحضرات المأخوذة من أدمغة الفئران المصابة أو تم اكتشاف المستضد بواسطة طرق RIF أو RDP. التشخيص السلبي هو عدم موت الفئران خلال 30 يومًا.
يوصى بالتشخيص المبكر باستخدام طريقة الاختبار الحيوي (وهذا مهم بشكل خاص عندما يعض الحيوان الذي تتم دراسته شخصًا) لاستخدام ليس 10-12، ولكن 20-30 فأرًا للعدوى، ومن اليوم الثالث بعد الإصابة، اقتل 1 -2 الفئران يوميا لفحص أدمغتهم REEF. وهذا يسمح (في الحالات الإيجابية) بتقليل فترة الدراسة لعدة أيام.
في الممارسة المخبرية، يتم أحيانًا استخدام ما يسمى بطريقة الاختبار الحيوي المحددة. جوهرها هو أن الفئران تمرض عند إصابة أنسجة دماغ الحيوانات المصابة بداء الكلب ولا تمرض إذا تمت معالجة هذه الأنسجة مسبقًا (10 دقائق عند 37 درجة مئوية) بمصل مضاد لداء الكلب.
يوصي بعض الباحثين بتشخيص داء الكلب أثناء الحياة باستخدام دراسة التألق المناعيبصمات القرنية للحيوانات المشتبه بإصابتها بداء الكلب، لكن فعالية هذه الطريقة منخفضة.
عادة في المختبر، يتم إجراء الدراسة بالتسلسل التالي: يتم إجراء مسحات بصمات الأصابع من الدماغ من أجل RIF والكشف عن أجسام Babes-Negri، ويتم وضع RDP، وإذا تم الحصول على نتائج سلبية، يتم إجراء اختبار حيوي.
مع الأداء المؤهل تأهيلاً عاليًا لـ RIF، يتم الحصول على تطابق بنسبة 99-100% مع الاختبار الحيوي. تم اكتشاف جثث الأطفال الزنجيين فقط في 65-85٪ من حالات داء الكلب، في RDP - من 45 إلى 70٪.
الوقاية المحددة. حاليًا، يتم استخدام اللقاحات المعطلة واللقاحات الحية للوقاية من داء الكلب. تقليديا، يمكن تقسيم اللقاحات:
لقاحات الجيل الأول، التي يتم تحضيرها من أدمغة الحيوانات المصابة بفيروس داء الكلب الثابت؛
لقاحات الجيل الثاني، التي يتم تحضيرها من سلالات فيروس داء الكلب المتكيفة مع زراعة الخلايا؛
لقاحات الجيل الثالث، والتي يتم الحصول عليها باستخدام طرق الهندسة الوراثية.
تم تطوير لقاح مؤتلف في الخارج ويتم استخدامه بنجاح في بعض البلدان، والذي يحتوي على فيروس الجدري المؤتلف الذي يحمل جين البروتين السكري الرئيسي بغلاف فيروس داء الكلب.
في الوقت الحالي، بدأ التطوير وتم إثبات إمكانية استخدام لقاحات الحمض النووي للوقاية من داء الكلب. في روسيا ورابطة الدول المستقلة، يتم استخدام لقاح معطل من سلالة Shchelkovo-51، والذي يتم إعداده باستخدام مزرعة الخلايا VNK-21، على نطاق واسع.
تمثل الإنجازات العلمية في التطعيم عن طريق الفم للثعالب في الظروف الطبيعية علامة بارزة في مكافحة بؤر العدوى الطبيعية.
إذا وجدت خطأ، يرجى تحديد جزء من النص والنقر عليه السيطرة + أدخل.
