Analisi dello striscio di sangue periferico. Lo studio degli elementi cellulari nel sangue periferico è uno dei

Formula dei leucociti (microscopia)- si tratta di un esame che prevede il conteggio dei 5 principali tipi di leucociti (neutrofili, linfociti, monociti, eosofili, basofili) nel sangue periferico e il loro numero nella quantità di materiale donato dal paziente. La microscopia di uno striscio di sangue colorato è considerata il "gold standard" della diagnostica ed è di grande importanza nella diagnosi di malattie del sangue, infezioni e processi infiammatori. Viene anche utilizzato per valutare lo stato del corpo prima degli interventi chirurgici e l'efficacia del trattamento.

La differenza tra la microscopia e il metodo strumentale sta nella descrizione dei cambiamenti nel citoplasma cellulare e nella presenza di inclusioni in esso. Viene inoltre condotta una descrizione degli eritrociti con fissazione dei cambiamenti, vale a dire:

• anisocitosi,
• poichilocitosi,
• microcitosi,
• macrocitosi,
• ipocromia,
• ipercromia, ecc.

Il metodo è indispensabile nella diagnosi delle malattie ematologiche, poiché consente di individuare e descrivere blasti e cellule giovani, per sospettare la leucemia.
Blasti, promielociti, mielociti, metamielociti normalmente non si trovano nel sangue periferico.
Neutrofili- il gruppo più numeroso di leucociti, che costituisce più della metà di tutti i leucociti. Durante l'esame viene fissata la presenza di due tipi di neutrofili nel sangue: pugnalato e segmentato.Bene le cellule segmentate costituiscono un piccolo numero dell'intera popolazione di cellule leucocitarie.

Basofili- il gruppo più piccolo di leucociti, che contiene sostanze organiche nel citoplasma - eparina e istamina. I leucociti basofili durante il decadimento e la degranulazione contribuiscono al rapido sviluppo dello shock anafilattico nel corpo.

Monociti- un gruppo di grandi leucociti del sangue, che è coinvolto nella risposta immunitaria immediata a nuovi fattori e sono i precursori delle cellule protettive - i macrofagi.

Linfociti- un gruppo di leucociti che svolge funzioni immunitarie di base e reagisce a oggetti estranei, provocando una reazione cellulare e umorale del corpo. Costituiscono più di 1/3 di tutti i leucociti.

Plasmacellule o plasmacellule componente del tessuto linfoide, responsabile della produzione di immunoglobuline. Nella maggior parte dei casi, non sono presenti nel sangue di una persona sana.

La loro presenza indica lo sviluppo di malattie virali (morbillo, rosolia, vari tipi di mononucleosi, epatite A, B, C, D, E e altre) nel corpo, così come il plasmocitoma, persistenza dell'antigene per lungo tempo. Inoltre, può indicare malattie post-radiazioni e la presenza di neoplasie.

Quando le plasmacellule vengono fissate nel sangue, il risultato è indicato per 100 unità calcolate (1/100, 3/100 e così via).

Preparazione allo studio

Non richiede una formazione speciale. Le principali raccomandazioni sono:

• trattenerlo al mattino a stomaco vuoto o in altri momenti della giornata, ma non prima che siano trascorse 4 ore dal pasto.
• mancanza di elevato stress emotivo o di attività fisica seria.
• una pausa tra altri tipi di esame: radiografia, ecografia, ecc.
• restrizione di tutti i tipi di fisioterapia prima della diagnosi.

Fattori che influenzano il risultato dello studio

1. Mancato rispetto delle regole di preparazione allo studio: prelievo di campioni di sangue non a stomaco vuoto o subito dopo altri tipi di esami.
2. Esercizio fisico o stress eccessivo;
3. Periodo di gravidanza.
4. Assunzione di farmaci specifici (sulfamidici, antinfiammatori non steroidei, cloramfenicolo, tireostatici, citostatici, corticosteroidi, eparina, levodopa, fenitoina, acido valproico, analgesici narcotici).

Unità

Eosinofili: %

Basofili: %

Monociti: %

Linfociti: %

Il sangue è un liquido di composizione complessa - plasma, in cui sono sospesi elementi sagomati: eritrociti (globuli rossi, globuli rossi - globuli rossi), leucociti (globuli bianchi, globuli bianchi - globuli bianchi) e piastrine (piastrine, Plt). Durante la coagulazione del sangue, dopo la separazione del coagulo, rimane un liquido che viene chiamato siero.Il sangue periferico contiene normalmente elementi cellulari maturi. I precursori immaturi si trovano nell'organo ematopoietico: il midollo osseo rosso.

Tra i metodi di studio quantitativo e qualitativo delle cellule del sangue, il più comune è un esame clinico generale del sangue: determinazione della concentrazione di emoglobina, indice di colore, contenuto di eritrociti, leucociti, formula dei leucociti, descrizione delle caratteristiche del quadro morfologico delle cellule del sangue , valutazione della velocità di eritrosedimentazione (VES). Se si verificano cambiamenti in questi indicatori, viene inoltre determinato il numero di reticolociti e piastrine. Questi studi vengono effettuati per tutti i pazienti ricoverati. In regime ambulatoriale, sono spesso limitati a una determinazione insufficientemente informativa della quantità di emoglobina, leucociti e VES (la cosiddetta "troika"). L'analisi clinica del sangue periferico è uno degli esami di laboratorio più importanti e talvolta consente di determinare immediatamente la direzione della ricerca diagnostica (ad esempio, quando nella formula del sangue compaiono blasti o la presenza di iperleucocitosi con linfocitosi assoluta, ombre di Gumprecht) . Sulla base di un esame del sangue clinico, è difficile giudicare l'ematopoiesi in generale. Un quadro più completo è dato da uno studio parallelo del midollo osseo (citologico, citochimico e citogenetico).

In condizioni patologiche, i cambiamenti ematologici variano a seconda della gravità del processo, dello stadio della malattia e della presenza di complicanze, comorbidità e terapia. Va tenuto presente che i cambiamenti nei parametri di laboratorio (ad esempio, un cambiamento nel numero dei leucociti e nell'emocromo) si osservano non solo in condizioni patologiche, ma anche durante alcune procedure diagnostiche, cambiamenti nello stato fisiologico del corpo ( cambiamenti climatici, ora del giorno, età, attività fisica, livelli ormonali).

Raccolta e lavorazione del sangue

Si consiglia di effettuare lo studio al mattino a stomaco vuoto o 1 ora dopo una colazione leggera. Esaminare principalmente il sangue capillare, è possibile utilizzare il sangue venoso (preso anche a stomaco vuoto). Si sconsiglia di prelevare il sangue dopo stress fisico e mentale, l'uso di farmaci, soprattutto se somministrati per via endovenosa o intramuscolare, l'esposizione ai raggi X e dopo procedure fisioterapiche. In casi di emergenza, queste regole vengono ignorate.

Emoglobina (Hb)

L'emoglobina è il principale pigmento respiratorio e il componente principale degli eritrociti, legato alle cromoproteine ​​e che svolge l'importante funzione di trasportare l'ossigeno dai polmoni ai tessuti e di trasportare l'anidride carbonica e i protoni dai tessuti ai polmoni. Svolge inoltre un ruolo essenziale nel mantenimento dell'equilibrio acido-base del sangue. Il sistema tampone creato dall'Hb aiuta a mantenere il pH del sangue entro certi limiti.

Le emoglobine sono proteine ​​tetrameriche, le cui molecole sono formate da vari tipi di catene polipeptidiche. La molecola è costituita da due catene di due tipi diversi. La catena polipeptidica di ciascuna subunità dell'emoglobina è specificamente ripiegata attorno a un grande anello eme piatto contenente ferro, un composto della protoporfirina IX con ferro. L'eme conferisce all'emoglobina il suo colore caratteristico.

Le proprietà delle singole emoglobine sono indissolubilmente legate sia alle loro strutture quaternarie che secondarie e terziarie. Le emoglobine più comuni hanno la seguente struttura tetramerica: HbA (emoglobina adulta normale) a 2 b 2 ; HbF (emoglobina fetale) - a 2 g 2; HbS ((emoglobina nell'anemia falciforme) - a 2 s 2; HbA 2 (emoglobina minore di un adulto) - a 2 d 2. La struttura quaternaria contribuisce alle prestazioni dell'emoglobina grazie alla sua funzione biologica unica e offre la possibilità di una rigorosa regolamentazione delle sue proprietà.

Valori normali. Nelle persone sane la concentrazione di emoglobina nel sangue è: uomini 132-164 g/l

donne 115-145 g/l

Fluttuazioni giornaliere. I valori di emoglobina sono minimi al mattino e massimi alla sera. Una variazione significativa dell'emoglobina è considerata pari o superiore a 15 g/l.

Significato clinico

Diminuzione del contenuto di emoglobina nel sangue viene chiamato al di sotto della norma per un dato sesso ed età anemia. Secondo i criteri dell'OMS, l'anemia come sindrome clinica è definita come una diminuzione della concentrazione di emoglobina nel sangue periferico inferiore a 110 g/l per qualsiasi età e sesso.

Va tenuto presente che la diagnosi di anemia non può essere effettuata solo sulla base della determinazione della concentrazione di emoglobina nel sangue. Questo studio stabilisce solo la presenza di anemia. Per chiarirne la natura, è necessario determinare il numero di eritrociti, l'indice di colore, studiare la morfologia degli eritrociti e altri indicatori.

Eritrociti (RBC - globuli rossi - globuli rossi)

Eritrociti - gli elementi formati più numerosi del sangue, il cui contenuto principale è l'emoglobina. Gli eritrociti maturi sono cellule non nucleari con forma discoidale biconcava. Il disco piatto è il più adatto al trasporto di sostanze sia all'esterno che all'interno della cella, nonché alla diffusione dei gas al centro della cella. La superficie del disco è 1,7 volte più grande della superficie della sfera corrispondente in volume e può variare moderatamente senza allungare la membrana cellulare. La forma biconcava, l'elasticità, la deformabilità e la conservazione della struttura cellulare quando l'emoglobina viene rimossa da essa dipendono dalle caratteristiche strutturali dell'eritrocito, principalmente dal suo citoscheletro. Il citoscheletro degli eritrociti differisce dal citoscheletro delle cellule nucleari. Gli eritrociti hanno solo un citoscheletro superficiale, che è una combinazione resistente ai detergenti di proteine ​​tra loro e con la membrana, formando una sorta di rete lungo la superficie interna della membrana plasmatica rivolta verso il citoplasma. Questo citoscheletro è anche chiamato scheletro di membrana, perché. lo rende più forte e fornisce unità allo strato lipidico, dona mobilità interna e flessibilità.

Il citoscheletro eritrocitario svolge un ruolo importante nella sua capacità di deformarsi. Un eritrocita discoidale può facilmente passare attraverso un filtro a micropori da 3 µm, attraverso la parete del seno della milza.

Negli eritrociti hanno luogo numerose reazioni enzimatiche. Assorbono aminoacidi, lipidi, tossine. A causa del contenuto di emoglobina in essi contenuti, sono coinvolti nella regolazione dell'equilibrio acido-base. Poiché la membrana degli eritrociti è permeabile agli anioni e impermeabile ai cationi e all'emoglobina, sono coinvolti nella regolazione della composizione ionica del plasma. Inoltre, gli eritrociti hanno proprietà antigeniche, ma il loro ruolo principale è fornire ossigeno ai tessuti e partecipare al trasporto dell'anidride carbonica.

significato clinico.

declino il numero di eritrociti (eritrocitopenia) è uno dei criteri principali per la sindrome anemica. Dalla vera anemia è necessario distinguere l'idremia associata ad un aumento del volume plasmatico dovuto all'afflusso di fluido tissutale (ad esempio, quando converge l'edema). Le cause dell'anemia sono la perdita di sangue, i disturbi ematopoietici nel midollo osseo (carenza di ferro, acido folico, vitamina B 12, processi aplastici) e l'aumento dell'emolisi. Il grado di eritrocitopenia varia e nei casi gravi (anemia aplastica, anemia emolitica durante una crisi, anemia da carenza di B 12) può raggiungere 1x10 12 /l o meno. Inoltre, una diminuzione del numero di globuli rossi si verifica con leucemia, mieloma multiplo, linfomi non Hodgkin, lupus eritematoso sistemico, artrite reumatoide, metastasi di tumori maligni, ecc. Si osserva anche una diminuzione del numero di globuli rossi con insufficienza proteica negli alimenti, digiuno, dieta vegetariana.

Aumento Il numero di globuli rossi per unità di volume di sangue è chiamato poliglobulia o eritrocitosi. In condizioni fisiologiche, si osserva nei neonati nei primi 3 giorni di vita (ispessimento temporaneo del sangue a causa della perdita di liquidi da parte del corpo con un improvviso passaggio alla respirazione polmonare e alla respirazione cutanea), negli adulti con aumento della sudorazione, fame . Salendo a grande altezza, l'eritrocitosi non è dovuta ad un ispessimento del sangue, ma ad un vero e proprio aumento della produzione di eritrociti dovuto all'ipossia. Eritrocitosi osservata in condizioni patologiche come sintomi di una serie di malattie (eritrocitosi secondaria). L'eritrocitosi sintomatica secondaria è divisa in assoluta e relativa. La causa della poliglobulia assoluta è un aumento reattivo dell'eritropoiesi con un aumento della massa dei globuli rossi circolanti (con difetti cardiaci congeniti, bronchite cronica ostruttiva, cancro ipernefroide, emangioblastoma cerebellare, ecc.). Alla base della relativa poliglobulia è un ispessimento del sangue senza aumento del numero di eritrociti a seguito di una diminuzione del volume plasmatico durante vomito prolungato, diarrea e ustioni.

Dall'eritrocitosi sintomatica vanno distinte le malattie del sangue legate all'emoblastosi (policitemia vera).

Cambiamenti nella dimensione dei globuli rossi

microcitosi- predominanza negli strisci di sangue di eritrociti di piccolo diametro (5,0-6,5 micron). Questo sintomo si osserva nella sferocitosi ereditaria, nell'anemia da carenza di ferro, nella talassemia, ecc. Queste cellule hanno un volume e una quantità ridotti di emoglobina. Il fattore principale è la violazione della sintesi dell'emoglobina, tipica dell'anemia da carenza di ferro, nonché di alcune emoglobinopatie.

Schistociti - piccoli frammenti di eritrociti, ovvero cellule degenerativamente alterate di forma irregolare con un diametro di 2,0-3,0 micron. Si trovano negli strisci di sangue con anemia emolitica microangiopatica, vasculite, glomerulonefrite, uremia, emoglobinuria in marcia, emoglobinopatie, DIC, sindrome mielodisplastica e altre malattie.

macrocitosi - la presenza di eritrociti con diametro > 9,0 µm negli strisci di sangue. Questo segno viene rilevato nei neonati come caratteristica fisiologica, così come negli adulti con anemia macrocitica, malattie del fegato, carenza di vitamina B 12 e acido folico, con anemia nelle donne in gravidanza, nei pazienti con tumori maligni, con diminuzione della funzionalità tiroidea, malattie mieloproliferative.

Megalocitosi - l'aspetto negli strisci di sangue di eritrociti con un diametro di 11,0-12,0 micron, ipercromici, senza illuminazione al centro, ovali. Si trovano nell'anemia causata da una carenza di vitamina B 12 e acido folico, nell'anemia delle donne in gravidanza, nell'invasione elmintica, nella diseritropoiesi.

Anisocitosi - la presenza negli strisci di sangue di eritrociti di dimensioni diverse: con una predominanza di eritrociti di piccolo diametro - microanisocitosi, con una predominanza di eritrociti grandi - macroanisocitosi. L'anisocitosi si osserva nell'anemia da carenza di ferro sia nel periodo iniziale della malattia che a seguito della terapia con ferro, a seguito della quale nel sangue compaiono eritrociti ricchi di emoglobina, formati durante il ripristino dei livelli di ferro nel sangue, mentre piccoli circolano gli eritrociti formatisi prima dell'inizio del trattamento. L'anisocitosi si verifica in malattie caratterizzate dalla presenza di un pool di eritrociti normale e patologicamente alterato. Quindi, con l'anemia ipoplastica, l'emoglobinuria parossistica notturna, le malattie mieloproliferative, la talassemia, sono presenti sia microciti che normociti, nonché macrociti. L'anisocitosi è caratteristica della maggior parte delle anemie di vario tipo.

Cambiamenti nella forma dei globuli rossi

Cambiamenti nella forma degli eritrociti di varia gravità (poichilocitosi) può essere osservato in quasi tutte le anemia, indipendentemente dalla sua genesi. Normalmente una piccola parte delle cellule può avere anche una forma diversa da quella discoidale.

Solo pochi tipi di eritrociti sono specificamente caratteristici di patologie specifiche. Queste sono malattie ereditarie: sferocitosi ereditaria - malattia di Minkowski-Choffard (microsferociti) e anemia falciforme (cellule falciformi). Altre forme possono comparire in diverse condizioni patologiche. Qui è importante distinguere tra forme reversibili (echinociti e stomatociti), che possono ancora essere restituiti a forme normali e irreversibilmente alterate (acantociti, codociti-cellule bersaglio, sferociti, stomatociti irreversibilmente alterati).

Echinociti - cellule sferiche, sulla cui superficie si trovano abbastanza regolarmente 30-50 spicole. Allo stesso tempo, il rapporto superficie-volume rimane normale. La trasformazione discocito-echinocita è inizialmente reversibile ed è stato dimostrato che le spicole ricompaiono sulla superficie cellulare ogni volta nello stesso punto. La vicinanza della superficie vetrosa provoca spesso la formazione di echinociti. Si ritiene che questo effetto sia associato ad alcalinizzazione locale del mezzo pH > 9,0. Un cambiamento del pH da neutro ad alcalino e viceversa provoca una transizione reversibile da discocito a sferocita e viceversa.

Quando gli eritrociti vengono sospesi in un mezzo isotonico, spesso si verifica la formazione di echinociti. L'aggiunta di albumina può riportare le cellule alla loro normale forma discocitica. Gli echinociti si trovano in vivo, di solito nei casi in cui il contenuto di ATP nelle cellule è basso o la composizione di acidi grassi del plasma è disturbata. Se la cellula rimane per lungo tempo nello stato di echinocita, si verifica il processo di perdita della componente lipidica della membrana e i cambiamenti di forma diventano irreversibili. Gli echinociti appaiono spesso come artefatti; possono comparire nell'uremia insieme agli acantociti, deficit ereditario di piruvato chinasi e fosfoglicerato chinasi.

Stomatociti (o idrociti) hanno un volume e una superficie aumentati del 20-30%, una forma a fessura del lume centrale (pellor). Queste cellule si formano sotto l'influenza di fattori molto diversi: pH basso, anioni non penetranti, detergenti cationici, clorpromazina, vinblastina, vitamina A.

cellule falciformi- caratteristici dell'anemia falciforme e di altre emoglobinopatie, contengono emoglobina S, che può polimerizzare e deformare la membrana, soprattutto con un basso contenuto di ossigeno nel sangue. Questa è la base del "test del laccio emostatico", quando, per aumentare il contenuto di queste cellule nel preparato, viene applicato un laccio emostatico al dito del paziente prima del prelievo di sangue per provocare ipossia locale.

Cellule bersaglio (codociti) hanno una superficie maggiore a causa dell’eccesso di colesterolo. Hanno una periferia colorata e una piccola area sferica più scura sullo sfondo di una parte centrale chiara. Queste forme sono caratteristiche della a- e b-talassemia, emoglobinopatie C e S, intossicazione da piombo e malattie del fegato, in particolare ittero ostruttivo prolungato. I codociti sono particolarmente frequenti nell'ittero ostruttivo (secondo Bessis fino al 75%).

acantociti(la superficie della cellula ha una forma frastagliata), a differenza degli echinociti, non sono in grado di ritornare alla normalità se immessi nel plasma fresco. Tali cellule sono sferoidali (non hanno pelor), recano da 3 a 12 spicole con estensioni a forma di clava alle estremità. La lunghezza e lo spessore delle spicole variano notevolmente. Volume, area superficiale e contenuto di emoglobina sono generalmente normali. Gli acantociti si trovano nelle forme gravi di anemia emolitica, malattie del fegato, abetalipoproteinemia ereditaria, deficit ereditario di piruvato chinasi, sferocitosi ereditaria (forme gravi). Un piccolo numero di acantociti può essere osservato nei pazienti dopo splenectomia.

Cellule lacrimali (dacriociti) a differenza degli acantociti, hanno una grande spicola e spesso contengono un'inclusione: il corpo di Heinz; sono solitamente microciti. Queste cellule vengono rilevate particolarmente spesso nella mielofibrosi, meno spesso in varie forme di anemia.

stomatociti osservato nella stomatocitosi ereditaria. La ragione del loro aspetto è l'aumentata permeabilità della membrana al sodio e al potassio. Dopo che l’aumento compensatorio del trasporto ionico non è più efficace, il citoplasma si arricchisce di sodio, perde potassio e si idrata. Le cellule bersaglio hanno anche una maggiore concentrazione di sodio e una diminuzione di potassio. Il grande volume dello stomatocita non gli impedisce di sopravvivere abbastanza a lungo nel microcircolo. In un numero minore (circa il 3% della popolazione cellulare totale), gli stomatociti si trovano nelle malattie epatiche ostruttive, nella cirrosi alcolica, nella patologia cardiovascolare e nei tumori maligni. È possibile identificare gli stomatociti come artefatti.

xerociti- cellule disidratate compattate di forma irregolare, caratteristiche di una malattia ereditaria - xerocitosi familiare. In senso fisiologico, queste cellule sono opposte agli stomatociti e nascono dalla perdita di cationi e, quindi, di acqua. Tuttavia, lo xerocita a volte assomiglia nella forma a uno stomatocita (ma con un citoplasma compatto e disidratato).

microsferociti- cellule specifiche per la microsferocitosi ereditaria. Il cambiamento nella spettrina porta a disturbi nella stabilità della membrana. La loro identificazione sugli strisci di sangue a volte richiede molta cura. È caratteristico che i microsferociti in uno striscio appaiono omogenei, senza poichilocitosi significativa, il loro numero va da 1-3 a 20-30 per campo visivo (il resto delle cellule è normale, in totale ci sono 50 cellule nel campo di visualizzazione). Se la popolazione di microsferociti è eterogenea, questo è più tipico dell'anemia emolitica. La microsferocitosi rilevata sui preparati, che è combinata con anisocitosi e poichilocitosi, può anche indicare un danno meccanico agli eritrociti (sindrome da frammentazione degli eritrociti), ustioni, carenza di glucosio-6-fosfato deidrogenasi. La sferocitosi può essere considerata come uno stadio terminale, pre-emolitico, nel quale passano echinociti, acantociti e stomatociti in caso di danno irreversibile.

Ellittociti normalmente costituiscono meno dell'1% di tutte le cellule. Con varie anemie (talassemia, carenza di ferro e soprattutto anemia megaloblastica), il loro contenuto raggiunge il 10%. Allo stesso tempo, la popolazione degli ellittociti è di dimensioni eterogenee. Se gli ellittociti sono omogenei e costituiscono più del 25%, questo è più caratteristico dell'ellittocitosi ereditaria.

Degmaciti (cellule morsicate) spesso contengono corpi di Heinz e si osservano nell'anemia emolitica causata da avvelenamento con ossidanti. Nei casi molto gravi di avvelenamento, sui preparati si può osservare una penombra degli eritrociti (eccentrociti).

Schistociti (cellule a casco e triangolari) osservato in microangiopatia, anemia emolitica sotto l'influenza di fattori fisici, ipertensione maligna, uremia, nonché in casi di complicanze nelle protesi di vasi sanguigni e valvole.

Indici RBC

Indicatori MCV (volume corpuscolare medio, volume corpuscolare medio di un eritrocito, volume corpuscolare medio), MCH (emoglobina corpuscolare media, contenuto medio di emoglobina in un eritrocito), MCHC (concentrazione corpuscolare media di emoglobina, concentrazione corpuscolare media di emoglobina), nonché i metodi per il loro calcolo furono introdotti nel 1929 da Wintrobe (1993).

Volume medio degli eritrociti (MCV) si calcola dividendo il valore dell'ematocrito di 1 mm 3 di sangue per il numero di globuli rossi presenti in 1 mm 3 secondo la formula:

MCV \u003d EMATOCRITO 1 mm 3 / NUMERO DI ERITROCITI IN 1 mm 3

Il risultato è espresso in micron cubi (μm 3), o fentolitri (fl). In pratica il volume medio di un eritrocito si calcola moltiplicando l'ematocrito (%) per 10 e dividendo il prodotto risultante per il numero di eritrociti in milioni per millimetro cubo di sangue:

MCV \u003d Ematocrito (%) x10 / NUMERO DI ERITROCITI (milioni di cellule / mm 3)

Emoglobina eritrocitaria media (MCH)è impostato secondo la formula:

MCH=EMOGLOBINA(g/100ml)x10/NUMERO DI GLOBULI ROSSI (milioni/μl)

Il risultato è espresso in picogrammi (pg), la norma è 27-31 pg. Questo indicatore caratterizza il contenuto medio di emoglobina in un singolo eritrocita. È simile all'indicatore di colore, che è incluso nell'emocromo completo ed è ampiamente utilizzato in clinica. In base a questi indici le anemie si dividono in normo-, ipo- e ipercromiche.

Concentrazione media di emoglobina eritrocitaria (MCHC) si calcola dividendo la concentrazione di emoglobina in g/100 ml per l'ematocrito e moltiplicando per 100:

MCHC \u003d EMOGLOBINA (g / dl) / Ematocrito (%) x 100

Questo indice è espresso in g/dL. Le differenze tra gli ultimi due indici dovrebbero essere evidenti. Il primo indicatore indica la massa di emoglobina nell'eritrocita medio ed è espresso in frazioni di grammo (picogrammi). Il secondo indice mostra la concentrazione di emoglobina nell'eritrocita medio, cioè rapporto tra contenuto di emoglobina e volume cellulare. Riflette la saturazione degli eritrociti con emoglobina ed è normalmente pari a 30-37 g/dl. A differenza del contenuto medio di emoglobina in un eritrocita (MCH), MCHC non dipende dal volume cellulare medio ed è un test sensibile per le violazioni dei processi di formazione dell'emoglobina. Il contenuto informativo di MCHC nell'anemia da carenza di ferro è dell'85% (Zolotnitskaya R.P., 1982).

Nell'anemia normocromica, un aumento o una diminuzione della dimensione media degli eritrociti è associato a un corrispondente aumento o diminuzione della massa di emoglobina contenuta nella cellula, la concentrazione media di emoglobina (MCHC) rimane normale. Con l'anemia ipocromica, la diminuzione del contenuto medio di emoglobina negli eritrociti è più significativa della diminuzione del volume cellulare medio. Pertanto, MCHC è subnormale.

Ad eccezione della microsferocitosi ereditaria, in alcuni casi di anemia falciforme e di emoglobinosi C, l'MCHC non supera il 37%. Pertanto, limitare l’ipercromia è molto raro. Il valore del 37% è praticamente il limite superiore della saturazione degli eritrociti con l'emoglobina e un ulteriore aumento della concentrazione può provocare la cristallizzazione.

L'indicatore MCV è il più informativo per lo studio e la diagnosi dell'anemia. MCH e MCHC trasportano meno informazioni cliniche. La relazione degli indici eritrocitari è espressa dalla formula:

MCH (pg)=MCHC(g/l)xMCV(fl)/1000

Le moderne macchine ematologiche ricevono i valori MCH e MCHC mediante calcolo secondo il programma incorporato nel processore. In assenza di automi, è conveniente calcolare gli indici eritrocitari utilizzando il nomogramma di Mason.

Indicatore di colore

(PROCESSORE)- valore relativo che caratterizza il contenuto medio di emoglobina nell'eritrocito. La formula per calcolare l'indice di colore è:

CP=EMOGLOBINA (g/l)x3 / prime 3 cifre della conta eritrocitaria

La CPU normale è 0,86-1,05. Questo indicatore ha la stessa interpretazione clinica del contenuto medio di emoglobina in un eritrocito. Tuttavia, l'indicatore del colore è determinato in unità arbitrarie, quindi ha un significato astratto.

Indice di anisocitosi (RDW) caratterizza l'eterogeneità della dimensione degli eritrociti in modo molto più accurato di quanto si possa ottenere mediante la valutazione visiva di uno striscio di sangue, la misurazione del diametro medio degli eritrociti e la costruzione di una curva di Price-Jones. La valutazione del grado di anisocitosi al microscopio è accompagnata da una serie di errori. Quando gli eritrociti si seccano, il loro diametro diminuisce del 10-20%, negli strisci spessi è inferiore che in quelli sottili. A differenza dei metodi morfologici per la valutazione dell'anisocitosi, il calcolo conduttometrico automatizzato ha una maggiore precisione e riproducibilità dei risultati.

Tabella 1

Informazioni simili.

Il contenuto di emoglobina, la velocità di eritrosedimentazione (VES), il numero di eritrociti e leucociti in 1 μl di sangue, la formula leucocitaria (la percentuale di vari gruppi di leucociti), nonché l'indicatore di colore (un coefficiente che indica il grado di saturazione degli eritrociti con emoglobina) costituiscono i dati di un esame del sangue clinico generale.
Il sangue per l'analisi viene prelevato al mattino (non necessariamente prima di colazione), ma in condizioni policliniche il sangue deve essere prelevato dopo un riposo di 10-15 minuti.
Per la ricerca, il sangue viene prelevato dall'anulare della mano sinistra dopo un attento trattamento con alcol. Viene praticata una puntura sulla superficie laterale della parte carnosa della prima falange con un ago scarificatore sterile, e il piano dell'ago deve essere perpendicolare al disegno della pelle del dito: in questo caso, la ferita si apre e il sangue viene rilasciato per un a lungo.

Determinazione della concentrazione di emoglobina

Tra i metodi per determinare l'emoglobina, i più utilizzati sono i metodi basati sulla colorimetria, ovvero la determinazione dell'intensità del colore.
Il più semplice di questi è la determinazione dell'emoglobina mediante colorimetria visiva nell'emometro Saly, che è un supporto di legno con una provetta centrale graduata, ai lati della quale si trovano tubi di vetro sigillati con uno standard di colore (ematina cloridrato in glicerina).
Una soluzione allo 0,1% di acido cloridrico viene preliminarmente versata nella provetta centrale fino alla tacca corrispondente a 2 o 3 g%, quindi vengono aggiunti con attenzione (esattamente!) 0,02 ml di sangue prelevato da un dito con un'apposita pipetta attaccata all'emometro . Lo strato superficiale di acido viene lavato con una pipetta e, dopo aver mescolato il sangue e l'acido con una bacchetta di vetro, si lascia agire per 5 minuti per formare ematina cloridrato. Quindi, aggiungendo acqua distillata e mescolando continuamente con un bastoncino, il colore del liquido nel tubo centrale corrisponde completamente agli standard. La concentrazione di emoglobina corrisponde al segno del livello della soluzione sul menisco inferiore. La concentrazione di emoglobina può essere espressa in g% di emoglobina o in unità convenzionali. 16,67 g di emoglobina equivalgono a 100 unità.
La concentrazione di emoglobina nel sangue nelle donne va da 11,7 a 15,8 g ° / o da 117 a 158 g / l, negli uomini - da 13,3 a 18 g% o da 133 a 180 g / l.

Prelievo di sangue per contare gli elementi formati

Per contare gli elementi formati, il sangue viene diluito in miscelatori (melanger) o provette, che recentemente sono diventati più diffusi.
Per contare i globuli rossi, il sangue viene diluito 200 volte con una soluzione di cloruro di sodio al 3%; se per prelevare il sangue utilizziamo una pipetta da un emometro, il cui volume è 0,02 ml, allora dobbiamo prendere 4 ml di soluzione di cloruro di sodio.
Per contare i leucociti, il sangue viene diluito 20 volte, quindi vengono prelevati 0,02 ml di sangue e 0,38 ml di una soluzione colorata al 3% di acido acetico blu di metilene, necessaria per provocare la distruzione dei globuli rossi.
Il prelievo del sangue deve essere effettuato con la massima accuratezza, poiché a volumi così piccoli l'ingresso di una bolla d'aria o di un residuo di sangue all'esterno della pipetta porta ad un aumento dell'errore di determinazione.
Prima di riempire la camera è necessario strofinare il vetro lucido della camera in modo che appaiano degli anelli iridescenti.
Prima di riempire la camera, il sangue diluito viene accuratamente miscelato, mentre le cellule si depositano sulle pareti della provetta o dell'ampolla del miscelatore, dopodiché una goccia di sangue viene posta sotto il vetro smerigliato della camera e lasciata riposare per 1 minuto. cellule.
Il conteggio degli elementi formati viene effettuato al microscopio a basso ingrandimento (obiettivo 8X, oculare 15X o 10X) in un campo visivo oscurato.

Gli eritrociti vengono contati in 5 quadrati grandi (16x5 = 80 quadratini) situati in diverse parti della camera, è possibile prendere dei quadrati posizionati in diagonale.
Vengono contati gli eritrociti che si trovano all'interno del quadrato e quelli che si trovano sui suoi lati superiore e sinistro; gli eritrociti che si trovano sui lati inferiore e destro non vengono contati, poiché appartengono già ad altri quadrati.
Dopo aver contato il numero di eritrociti (A) in 5 grandi quadrati, si trova la media aritmetica del numero di eritrociti in un quadratino A / 80, cioè in 1/4000 μl. Pertanto, per trovare il numero di globuli rossi presenti in 1 µl, dobbiamo moltiplicare il numero ottenuto dalla divisione per 4000 e per 200 (diluizione).

Pertanto, otteniamo la seguente formula:

X=A*4000*200/80,

dove X è il numero di eritrociti in 1 µl e A è il numero di eritrociti in 5 grandi quadrati.
Se contassimo i globuli rossi in 5 grandi quadrati e diluissimo il sangue 200 volte, il fattore totale per il numero A sarebbe 10.000.
Il contenuto normale di eritrociti nel sangue delle donne è 4-5 * 10 6 , uomini - 4,5-5,5 * 10 6 .
I leucociti si contano in 100 quadrati grandi, non divisi in quadrati piccoli, che corrispondono a 1600 quadrati piccoli. Pertanto, il numero di leucociti presenti in 100 quadrati viene diviso per 1600, moltiplicato per 4000 e 20 (diluizione). In questo caso, per ottenere il risultato, è sufficiente moltiplicare il numero di leucociti contati per 50. Il contenuto normale di leucociti nel sangue è 5 * 10 3 - 8 * 10 3 in 1 μl.

Indicatore di colore del sangue. L'indice di colore del sangue è un numero che mostra la saturazione media di emoglobina di un singolo eritrocita di un dato sangue rispetto alla saturazione di un singolo eritrocita di sangue normale.
Per il contenuto normale di emoglobina, vengono prelevate 100 unità e il numero normale di globuli rossi è 5.000.000.
Il valore dell'indice di colore delle persone sane varia da 0,9 a 1,1.
Esame di uno striscio di sangue periferico. Negli strisci di sangue si studia la morfologia degli eritrociti e si considera la formula leucocitaria, cioè il rapporto percentuale tra i diversi tipi di leucociti.
Per avere successo, la preparazione, la fissazione e la colorazione degli strisci di sangue devono essere eseguite con grande attenzione.
Per preparare uno striscio, la superficie di un vetro pulito e sgrassato a una distanza di 0,5 cm dal bordo del vetrino viene toccata con una goccia di sangue nel punto della puntura sul dito, quindi viene posizionato il vetrino coprioggetto lucido con un angolo di 45° rispetto al vetrino e per prima cosa si avvicina la goccia di sangue in modo che si diffonda lungo il bordo posteriore del coprioggetto e si formi uno striscio con un leggero movimento, senza pressione brusca. Lo striscio dovrebbe terminare sul vetrino con una “pannocchia”. Lo striscio viene asciugato all'aria, una volta essiccato, uno striscio buono e sottile ha un colore giallo.
Con una semplice matita appuntita al centro dello striscio vengono scritti il ​​nome del paziente e la data dello studio, dopodiché gli strisci vengono fissati in alcool metilico per almeno 5 minuti e colorati secondo il metodo Romanovsky-Giemsa.

La vernice è costituita da una miscela di coloranti acidi (eosina) e basici (Azur II). Questo metodo di colorazione consente di differenziare le cellule. Il primo passo nel lavorare con uno striscio è valutare la morfologia dei globuli rossi. Per fare ciò, scegli un luogo sottile in cui le celle giacciono separatamente e non sotto forma di colonne di monete. Gli eritrociti normali sono cellule prive di nucleo, di colore rosa, arrotondate, approssimativamente dello stesso diametro - 7,5 micron, gli eritrociti hanno la forma di un disco biconcavo, quindi nello striscio hanno un'illuminazione al centro e una periferia più intensamente colorata.

(modulo diretto4)

Preparare una goccia densa

Per analizzare il sangue per la malaria da Plasmodium, viene preparata una goccia spessa. Il sangue viene prelevato nel solito modo dalla polpa del dito. Una goccia di sangue che fuoriesce dal sito di iniezione viene toccata con la superficie di un vetrino. 2-3 gocce applicate separatamente vengono imbrattate con l'angolo di un altro bicchiere. Uno striscio secco viene versato (senza fissazione) con la vernice di Romanovsky per 30-40 minuti, quindi la goccia colorata viene accuratamente risciacquata con acqua e il preparato viene asciugato in posizione verticale.

Dati di analisi del campione

Un aumento del numero di globuli rossi e di emoglobina nel sangue può essere dovuto a una malattia dei globuli rossi - eritremia, quindi il numero di globuli rossi arriva fino a 9-106 o più.
Un aumento del contenuto di globuli rossi nel sangue può verificarsi secondariamente, cioè quando non vi è alcuna malattia del foglio rosso dell'ematopoiesi e il numero di globuli rossi aumenta a causa di una malattia di altri organi e sistemi (con pneumosclerosi diffusa scompensata, enfisema, alcuni tipi di difetti cardiaci congeniti, sclerosi vascolare del sistema dell'arteria polmonare, difetti del cuore destro, insufficienza circolatoria di III grado, ecc.). Questo sintomo è chiamato eritrocitosi.
Gli eritrociti morfologicamente alterati compaiono nell'anemia ipercromica (megaloblastica). Allo stesso tempo, nel sangue si trovano grandi eritrociti con un alto contenuto di emoglobina (macrociti), eritrociti embrionali (megaloblasti), che di solito non si trovano nel sangue periferico. Con l'anemia ipocromica cambia anche la morfologia degli eritrociti: compaiono eritrociti piccoli (microciti), di forma alterata (poichilociti) ed eritrociti con un basso contenuto di emoglobina (eritrociti ipocromici).

Conta dei leucociti

Quando si calcola la formula dei leucociti, è necessario determinare le caratteristiche strutturali del citoplasma e dei nuclei cellulari. L'appartenenza di una cellula a un particolare gruppo è determinata sulla base della totalità di tutti i segni del citoplasma e del nucleo.
Quando si calcola la formula, è necessario attenersi allo stesso metodo di spostamento del vetro sotto il microscopio. Molto spesso, il metodo della microscopia viene utilizzato in 4 punti dello striscio. È noto che i leucociti sono distribuiti in modo non uniforme nello striscio: ci sono meno linfociti ai bordi che al centro e alla fine dello striscio ci sono più monociti che all'inizio. Pertanto, quando si calcola la formula dei leucociti, è meglio spostarsi lungo una linea spezzata, contando tutte le cellule incontrate.
Un conteggio di 200 cellule è un minimo pratico per gli studi clinici di routine.
I leucociti del sangue periferico, a seconda della presenza o assenza di granularità nel citoplasma, si dividono in granulociti (neutrofili, eosinofili, basofili) e agranulociti (monociti e linfociti).
Neutrofili. La dimensione delle cellule è di 10-12 micron. Il citoplasma delle cellule è di colore rosa pallido con granularità fine, abbondante, viola. Normalmente nel sangue si trovano neutrofili stab (2-4%) e segmentati (60-65%).
Eosinofili. Le cellule hanno le stesse dimensioni dei neutrofili, a volte un po' più grandi, il citoplasma è pieno di grossi granuli rosso-giallastri, il nucleo solitamente ha due segmenti della stessa dimensione. Gli eosinofili sono normali al 2-4%.
Basofili. È il granulocita più piccolo in termini di dimensioni. Il nucleo è irregolare, multilobato, occupa quasi tutta la cellula, il citoplasma rosa pallido contiene grossi granuli viola scuro. I granuli basofili si dissolvono in acqua e talvolta, a seguito del lavaggio durante la colorazione del preparato, al posto dei granuli rimangono cellule incolori. Normalmente, i basofili sono lo 0,1%.
Linfociti. La dimensione delle cellule varia da 7 a 10 µm. Il nucleo è compatto, arrotondato o a forma di fagiolo. Il citoplasma delle cellule è di colore blu pallido con una zona di illuminazione attorno al nucleo (perinucleare), a volte nel citoplasma sono presenti granuli azurofili separati di colore rosso-viola. Il sangue periferico contiene normalmente il 20-35% di linfociti.
Monociti. La dimensione delle cellule varia da 12 a 20 µm. Il nucleo è spesso a ferro di cavallo, talvolta di forma irregolare. Il citoplasma è più esteso di quello dei linfociti, di colore azzurro cenere con granularità fine, delicata, rossastra.
I monociti sono normali al 6-8%.
Un aumento del contenuto di leucociti nel sangue è chiamato leucocitosi, mentre una diminuzione del contenuto è chiamata leucopenia.

Colorazione e conteggio dei reticolociti

I reticolociti sono globuli rossi giovani con una sottile retina blu o granularità nel citoplasma. Queste cellule caratterizzano l'attività dell'ematopoiesi rossa.
Per rilevare il conteggio dei reticolociti, viene utilizzato il metodo della colorazione sopravitale (a vita). Si fanno strisci di vernice blu brillante di cresile su vetrini in alcool assoluto, quindi si fa uno striscio di sangue sul vetro colorato nel modo consueto e si pone in una camera umida per 3-5 minuti, dopo di che si asciuga e si esamina al microscopio con un lente da immersione. Normalmente si trovano 8-10 reticolociti per 1000 eritrociti, il loro numero è solitamente espresso in percentuale (0,8-1%) o in ppm (8-10% o) rispetto agli eritrociti.
I reticolociti sono cellule che caratterizzano l'aumento della produzione di globuli rossi nel midollo osseo.
Appaiono in grande percentuale nel sangue periferico nell'anemia ipocromica ("anemia maligna"), nell'anemia emolitica e in altre malattie. Durante l'esacerbazione dell'anemia ipercromica si osserva un contenuto ridotto di reticolociti e la loro completa scomparsa nel sangue periferico.

Per prevenire l'aggregazione (incollaggio) delle piastrine, viene praticata una puntura della pelle attraverso una goccia di soluzione di solfato di magnesio al 14% applicata sul dito. Il sangue viene mescolato con magnesia e vengono preparati strisci sottili su vetrini, che vengono poi fissati e colorati secondo Romanovsky per 2 ore.
Viene determinato il numero di piastrine per 1000 eritrociti e, conoscendo il numero di eritrociti in 1 μl, viene contato il numero di piastrine in 1 μl di sangue. Le piastrine normali ne contengono da 250.000 a 400.000.
Un aumento del contenuto delle piastrine nel sangue si riscontra con l'eritremia, con le malattie della milza, con alcune forme di malattie maligne (ad esempio il pancreas). Un basso numero di piastrine si verifica con l'anemia.

Definizione di VES

La velocità di eritrosedimentazione viene determinata nel sangue miscelato in rapporto 4:1 con citrato di sodio.
La reazione viene inserita nell'apparato di Panchenkov. Il capillare di Panchenkov viene lavato con citrato di sodio, quindi il citrato viene aspirato fino alla tacca 50, dove si trova la lettera R (reagente) e soffiato in una provetta Vidalevskij. Lo stesso capillare viene utilizzato per prelevare il sangue due volte fino al segno K (sangue) e mescolarlo con citrato. Lo stesso capillare viene riempito con sangue misto a citrato alla divisione 0 e posto verticalmente su un treppiede per un'ora. Un'ora dopo, viene annotato il valore in millimetri della colonna di plasma formatasi sopra gli eritrociti sedimentati, che è una misura della velocità di sedimentazione degli eritrociti.
La VES normale negli uomini è 10 mm/h, nelle donne è 14 mm/h.
La velocità di sedimentazione degli eritrociti aumenta nelle malattie infiammatorie, acute e croniche, nei tumori maligni e in altre malattie.

Test di compatibilità del fattore Rh

2-3 ml del sangue del ricevente vengono prelevati in una provetta senza citrato, dopo la coagulazione del sangue, il coagulo viene cerchiato con una bacchetta di vetro e il sangue viene centrifugato. Due gocce di siero da questa provetta vengono applicate su una capsula Petri, viene aggiunta mezza goccia del sangue del donatore, mescolata e la tazza viene posta a bagnomaria (42-45 °). Dopo 10 minuti, la coppetta viene rimossa ed osservata alla luce con leggera oscillazione. La comparsa di agglutinazione indicherà l'inammissibilità di questa trasfusione di sangue.

N. Puletti

Fare strisci di sangue è tecnicamente semplice e veloce. Per ottenere la massima informazione, la valutazione delle cellule del sangue deve essere sistematizzata.

Preparazione e colorazione degli strisci di sangue

Quando si preleva materiale da un animale idealmente calmo con un diametro medio di allargamento delle vene, il sangue dovrebbe fluire rapidamente in una provetta contenente un anticoagulante. L'EDTA (etilendiamminotetraacetato) viene spesso utilizzato, perché questo anticoagulante consente di preservare meglio le cellule del sangue studiate. Tuttavia, per prevenire vari tipi di degradazione morfologica delle cellule, l'intervallo di tempo tra il prelievo di sangue fresco e ben omogeneizzato e la preparazione del preparato dovrebbe essere il più breve possibile (J.W. Harvey, 2001; D. Walker, 2008).

La colorazione classica è diversa dalla colorazione rapida. Negli ultimi tempi, i metodi di colorazione rapida come Diff-Quick® si sono rivelati vantaggiosi perché sono resistenti alle variazioni di pH e alla formazione di depositi di macchie. Tuttavia, sono meno efficaci nel rilevare i policromatofili e colorano scarsamente i granuli di basofili e mastociti (J.W. Harvey, 2001; D. Walker, 2008). Per ottenere un quadro visivo specifico dei reticolociti è necessario colorarli con il nuovo blu di metilene (NBM). In una provetta di plastica, una goccia di sangue viene mescolata con due gocce di NBM. La provetta viene lasciata a temperatura ambiente per 10 minuti. Una piccola goccia dopo la miscelazione viene posta su un vetrino e strizzata come quando si esegue uno striscio di sangue. Quindi il vetrino viene asciugato rapidamente all'aria ed esaminato al microscopio ad elevato ingrandimento (×50–×100).

Esame sistematico degli strisci di sangue

Quando si valuta uno striscio di sangue, è molto importante essere guidati da un unico schema di ricerca.

Uno striscio di sangue costituito da uno strato sottile (monocellulare) con un'estremità arrotondata si ispessisce verso la base. Le cellule del sangue vengono valutate su uno strato sottile, perché uno strato spesso trasporta poche informazioni. A basso ingrandimento (x10 o x20), la parte marginale dello striscio, principalmente la sua estremità arrotondata, viene solitamente esaminata per individuare aggregati piastrinici o cellule atipiche larghe (linfoblasti o cellule dendritiche) (foto 4). Gli aggregati piastrinici dopo la loro attivazione si formano in vitro. Questo fenomeno talvolta si verifica a causa di un prelievo di sangue difficile, che, ad esempio, è più spesso osservato nei gatti (E. Duan Lassen, G. Weiser, 2006; S.L. Stockhman, M.A. Skkott, 2008; D. Walker, 2008).

Foto 4. Microscopia di uno striscio di sangue di un cane sano (× 1000). Coaguli piastrinici

L'esame dello striscio di sangue è un metodo abbastanza comune per diagnosticare rapidamente molti disturbi comuni nei cani e nei gatti. Le condizioni principali per l'uso efficace di questo metodo diagnostico sono il rigoroso rispetto della tecnica di preparazione dello striscio e uno studio sistematico in conformità con l'algoritmo di studio.

Punti chiave

Dopo il prelievo, il sangue deve essere posto rapidamente in una provetta con anticoagulante per mantenere la qualità delle cellule.

La colorazione con nuovo blu di metilene consente l'identificazione dei reticolociti.

La valutazione viene effettuata su uno strato sottile di uno striscio di sangue con una lettura al microscopio a livello delle sue trecce.

L'esame sistematico dello striscio di sangue si riferisce all'algoritmo APEL.

SVM n. 5/2010