Questo ci permette di comprendere i metodi della ricerca citologica. Metodi di ricerca citologica

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Il metodo citologico, basato sull'esame microscopico e sulla valutazione del materiale cellulare ottenuto in vario modo da un focolaio patologico, è una branca dell'oncomorfologia.

Lo scopo di uno studio citologico è stabilire la diagnosi corretta dei tumori maligni di qualsiasi sede e in qualsiasi fase del processo.

Ciò consente di risparmiare tempo, evitare un intervento chirurgico per eseguire una biopsia e non ritardare l’inizio del trattamento.

Vantaggi e benefici del metodo citologico:

Assolutamente innocuo;
velocità (lo studio può essere completato entro 10 minuti);
relativa semplicità e accessibilità (non sono richiesti reagenti e attrezzature costosi), il metodo è fattibile nella fase ambulatoriale dell'esame;

La possibilità di utilizzare più studi, che è particolarmente importante per monitorare i cambiamenti morfologici durante il trattamento e valutarne l'effetto;
una piccola quantità di materiale adeguato per lo studio;
la capacità di riconoscere il cancro nelle primissime fasi iniziali (diagnosi citologica del cancro “silente” clinicamente, radiologicamente ed endoscopicamente);

È la metodica d'elezione nei casi in cui la biopsia tissutale e l'esame istologico siano impossibili o estremamente indesiderabili (sospetto di melanoma);
consente di identificare un gruppo di displasia in base alla gravità della proliferazione epiteliale, formare ragionevolmente gruppi ad aumentato rischio di cancro di diverse localizzazioni e condurre un monitoraggio dinamico di questa categoria di persone;
consente di differenziare le metastasi dai tumori primari e, in alcuni casi, di indicare la fonte delle metastasi.

Allo stesso tempo, nel processo di realizzazione di uno striscio, le relazioni spaziali degli elementi strutturali del tessuto vengono inevitabilmente interrotte, il che limita significativamente le capacità diagnostiche della citologia e rende il metodo istologico più informativo nel determinare la nosologia del tumore e assoluta nello stabilirne l’invasività.

Interpretazione dei preparati citologici- processo difficile. Come è noto, non esistono caratteristiche citomorfologiche patognomoniche inerenti solo ad una cellula maligna e che consentano di distinguerla in modo assoluto da una cellula non tumorale.

Attualmente vengono prese in considerazione fino a 180 diverse caratteristiche citomorfologiche del tumore. I principali sono: mancanza di confini cellulari chiari; un aumento o una diminuzione delle dimensioni e della forma delle cellule (poichilocitosi); aumento del rapporto nucleo-citoplasma; polimorfismo nucleare e ipercromia; la presenza di nuclei “nudi” e strutture olonucleari; aumento delle dimensioni e del numero dei nucleoli; cambiamenti nella struttura e nella distribuzione della cromatina; la presenza di un numero maggiore di mitosi patologiche, ecc. Pertanto, il citomorfologo utilizza nel suo lavoro una serie di segni di atipia cellulare, ciascuno dei quali non ha un significato indipendente significativo.

Le caratteristiche funzionali delle cellule tumorali possono anche essere studiate mediante reazioni citochimiche basate su alcuni prodotti della loro attività vitale (cheratina, muco, sostanze simili al muco, melanina, lipidi, emosiderina, alcuni enzimi caratteristici del tessuto originale). La loro presenza conferisce caratteristiche caratteristiche a tale cellula e può essere decisiva nel determinare la natura del tessuto e la variante istologica del tumore.

Ad esempio, la presenza di muco nel citoplasma di una cellula tumorale parla a favore del cancro che forma muco, la presenza di granuli di melanina suggerisce il melanoma; citoplasma leggero contenente glicogeno e lipidi e nuclei situati centralmente con un grande nucleolo - la base per la diagnosi del cancro ipernefroide, ecc.

Formulare una conclusione citologica è un processo complesso e scrupoloso. La conclusione del citologo si basa sui risultati di uno studio della composizione cellulare con considerazione obbligatoria dei dati dell'esame clinico.

Pertanto, al momento dell'invio del materiale per l'esame citologico, il medico deve compilare correttamente ed accuratamente la scheda allegata (indicare età, sesso, numero della tessera ambulatoriale o dell'anamnesi, caratteristiche e localizzazione del focolaio patologico). Per evitare interpretazioni errate dei cambiamenti cellulari caratteristici della patomorfosi terapeutica, il citologo necessita di informazioni complete su tutti i tipi di trattamento eseguiti, con l'indicazione obbligatoria della data del suo completamento.

A seconda del metodo di ottenimento del materiale per l'esame citologico, la citologia clinica è divisa in tre grandi sezioni: esfoliativa o citologia dei materiali sgonfiati, puntura ed endoscopica.

Citologia esfoliativa (folium - foglia, ex - caduta) - si basa sulla "desquamazione" fisiologica delle cellule dalla superficie del tessuto (espettorato, succo gastrico, urina, secrezione dal capezzolo della ghiandola mammaria, vagina, retto, lavaggi dal organi cavi, strisci da superfici erose, ferite, fistole; fluidi da cavità sierose, ecc.).

Dagli organi cavi si può ottenere materiale mediante risciacqui con soluzioni saline o enzimatiche (tripsina, chimotripsina, ecc.), che favoriscono l'esfoliazione delle cellule tumorali. Gli strisci per l'esame citologico possono essere ottenuti anche mediante impronta o raschiatura dalla superficie dei tessuti utilizzando una spatola, un batuffolo di cotone, spazzole speciali e altri dispositivi.

Citologia non esfoliativa (aslirazione, puntura) - studio delle cellule provenienti da formazioni tumorali aspirate durante la puntura con un ago. Per la citologia della puntura viene utilizzato materiale proveniente da linfonodi, midollo osseo, tumori ossei, tiroide e ghiandole mammarie, tumori polmonari periferici, ecc. Utilizzando la foratura è possibile ottenere materiale anche da cavità chiuse.

Questi sono essudati e trasudati (liquido pleurico, ascitico, pericardico, cerebrospinale, sinoviale), nonché il contenuto delle formazioni cistiche. Quando si evacua una grande quantità di liquido e/o quando si ottiene materiale utilizzando la tecnica del risciacquo, è consigliabile utilizzare il metodo della concentrazione cellulare. Per fare ciò, l'intero volume del liquido evacuato viene depositato, il suo strato inferiore viene centrifugato e vengono preparati degli strisci dal sedimento arricchito di cellule.

Per quanto riguarda le biopsie con ago, ci sono state speculazioni sulla possibile diffusione del tumore durante queste procedure. È ormai generalmente accettato che il rischio minimo esistente sia controbilanciato dall’enorme beneficio per i pazienti dovuto alla reale possibilità di un’accurata diagnosi morfologica della malattia. L'esecuzione di una puntura richiede competenze speciali (scelta del sito di puntura, raccolta del materiale cellulare, sua quantità e qualità).

Una puntura metodicamente eseguita correttamente comporta l'aspirazione attiva del materiale cellulare con una siringa con movimenti simultanei di microrotazione e traslazione dell'ago. Quindi la siringa viene scollegata e solo dopo l'ago viene rimosso dal tessuto (Fig. 8.9).

Riso. 8.9. Fasi metodologiche dell'esecuzione di una biopsia tramite puntura. A - fissazione manuale del tumore e sua puntura, B - sequenza di manipolazioni con una siringa.

Si sono diffuse forature mirate di formazioni sotto il controllo degli ultrasuoni e della tomografia computerizzata. Con un tumore localizzato superficialmente e le condizioni più favorevoli, è possibile diagnosticare citologicamente un tumore costituito da 10 6 -10 9 cellule con una massa compresa tra 1 mg e 1 g.

Citologia endoscopica: campionamento mirato di materiale durante un esame endoscopico. Metodologicamente si dovrebbe attenersi alla regola secondo cui la prima biopsia viene prelevata dalla zona più alterata della mucosa, poiché quelle successive potrebbero non essere del tutto accurate a causa del sanguinamento che si verifica. Gli strisci di impronte dalla superficie dei pezzi ottenuti durante la biopsia possono essere utilizzati anche come materiale per la citologia.

I risultati dello studio dipendono in gran parte dalla precisione con cui è stato prelevato il materiale, dalla sua quantità e dalla sua conservazione. Il materiale citologico viene trasferito su vetrini appositamente preparati e trattati (puliti, privi di grasso, asciutti) e distribuito in uno strato sottile. La cosa principale è rendere i tratti il ​​più sottili possibile.

Gli strisci spessi e gli strisci con un elevato contenuto di sangue sono registrati molto male, il che influisce negativamente sulla qualità della colorazione del materiale cellulare e limita fortemente le possibilità della sua interpretazione microscopica. Gli strisci sui vetrini vengono fissati (solitamente alcol ed etere in parti uguali) e colorati con miscele di ematossilina ed eosina o asureosina.

La citologia clinica si è ormai affermata come disciplina clinica indipendente con grandi capacità diagnostiche e preventive. Gli studi citologici sono ampiamente utilizzati per la diagnosi, la selezione delle tattiche terapeutiche e la valutazione dell'effetto terapeutico per i tumori di quasi tutte le localizzazioni.

Cancro ai polmoni

Se negli strisci è presente materiale cellulare adeguato, il citologo può quasi sempre identificare tutti i tipi di cancro. Il materiale può essere raccolto durante la broncoscopia (lavaggi, biopsia con pennello).

Un esame più semplice, ma meno efficace, viene ripetuto (fino a 5 volte) dell'espettorato secreto spontaneamente (sensibilità - 20-40%). I risultati della diagnosi citologica dell'espettorato dipendono dalla posizione del tumore, dal numero di studi e dal rispetto delle regole per la raccolta del materiale.

L'efficacia dello studio aumenta quando l'espettorato mattutino viene raccolto quotidianamente per 3-5 giorni nello stesso ricevitore con un fissativo alcolico. Il metodo per ottenere l'espettorato indotto si è dimostrato migliore, ad es. raccolto dopo dieci minuti di inalazione con una soluzione enzimatica (sensibilità - 60-80%)

Per verificare le formazioni polmonari periferiche è indicata la puntura transtoracica.Lo studio degli strisci del materiale della puntura consente di riconoscere citologicamente il cancro e determinarne la forma istologica (rispettivamente nell'89% e nel 93%). Inoltre, questa tecnica di ricerca consente di verificare le metastasi nei polmoni.

Cancro mammario

Quando si diagnostica il cancro, la citologia viene utilizzata nella fase di definizione della diagnosi in combinazione con un esame clinico e una mammografia. Il materiale per lo studio è lo scarico dal capezzolo, strisci e raschiature dalla superficie ulcerata dell'areola, punture di formazioni tumorali, linfonodi regionali ingrossati e compattazioni nell'area delle cicatrici postoperatorie.

Il metodo citologico consente di verificare il cancro della ghiandola nell'89-98% dei casi. In caso di processi benigni della ghiandola, la composizione cellulare del punteggiato consente di identificare i cambiamenti iperplastici nell'epitelio e il grado della loro gravità, e talvolta di effettuare diagnosi nosologica (cisti, papilloma, fibroadenoma, tumore a forma di foglia ).

Cancro cervicale

Il materiale per la ricerca viene prelevato durante un esame ginecologico dalla superficie della cervice, dal sistema uterino esterno e dal canale cervicale.

La facilità di ottenere il materiale e l'elevata efficienza del metodo (90-97% delle risposte corrette) consentono di utilizzarlo non solo per diagnosticare il cancro, ma anche le malattie precancerose durante gli esami preventivi di massa.

La risposta di un esame citologico in occasione di visite mediche viene data secondo la classificazione di Papanicolaou modificata:

I - epitelio senza caratteristiche;
II - iperplasia;
III - displasia grave;
IV - inizio della malignità:
V - cancro.

Se vengono rilevati displasia grave o segni di tumore maligno, il paziente necessita di un esame approfondito presso un istituto oncologico.

Lo screening citologico per il cancro della cervice è ampiamente effettuato in tutto il mondo e ha dimostrato la sua reale capacità di riconoscere le forme più iniziali del tumore (cancro in situ e stadio I). Allo stesso tempo, il compito del citologo comprende anche la diagnosi dei processi infiammatori, delle infezioni virali e di altri processi specifici.

Cancro dell'utero

Per la diagnosi citologica, il materiale dalla cavità uterina si ottiene mediante aspirazione con siringa marrone o lavaggio. Entrambi i metodi danno approssimativamente gli stessi risultati. Dal punto di vista citologico, il cancro dell'endometrio viene rilevato nell'84-100% dei casi.

L'elevata efficienza del metodo nella diagnosi del cancro e del cancro precanceroso, la sua semplicità e la disponibilità per un uso ripetuto in ambito ambulatoriale rendono possibile raccomandarne l'uso in pazienti a rischio di cancro dell'endometrio (obesità, diabete, fibromi uterini, menopausa tardiva, tumori di tipo estrogenico). reazione colpocitologica in postmenopausa, sanguinamento anovulatorio, ecc.).

A causa delle peculiarità della loro localizzazione anatomica, le neoplasie ovariche sono estremamente difficili da diagnosticare. Gli errori nel fare una diagnosi basata solo sui dati clinici raggiungono il 40%.

È noto che nelle pazienti con tumori ovarici borderline e maligni, anche una piccola quantità di versamento dello spazio retto-uterino contiene una sospensione di cellule. Pertanto, l'esame citologico del fluido ottenuto durante la puntura della volta vaginale posteriore è un metodo altamente affidabile per diagnosticare i tumori ovarici.

In questo caso, è possibile ottenere informazioni sull'istogenesi e sul livello di differenziazione del tumore, che consentono di elaborare in modo più razionale un piano di trattamento. E studi ripetuti sulla composizione cellulare dei versamenti durante la chemioterapia consentono di valutarne l'effetto ed effettuare la correzione.

La colpocitologia - un metodo di studio delle cellule epiteliali vaginali per determinare lo stato ormonale di una donna - è ampiamente utilizzata per diagnosticare tumori ovarici ormono-attivi, monitorare il trattamento ormonale dei tumori (cancro uterino, cancro al seno) e per valutare la quantità di estrogeni nel corpo (il cosiddetto “specchio ormonale”).

Lo studio si basa sulla risposta fisiologica delle cellule epiteliali della mucosa vaginale al contenuto degli ormoni sessuali. Maggiore è il livello di estrogeni nel corpo di una donna, maggiore sarà il numero di cellule mature nella mucosa.

La metodica colpocitologica è semplice e consiste nel raccogliere materiale dalla mucosa della parete laterale della vagina a livello della faringe esterna. Il materiale viene prelevato senza sforzo in modo che le cellule superficiali della copertura epiteliale siano incluse nello striscio, per evitare interpretazioni errate. Gli strisci preparati vengono colorati dopo la fissazione.

Dopo averli visualizzati, viene compilato un colpocitogramma, una caratteristica dell'epitelio vaginale, che indica il rapporto percentuale (indice) delle cellule con vari gradi di differenziazione (maturità). Più spesso viene utilizzato l'indice cariopicnotico: il rapporto tra cellule cheratinizzate con un nucleo picnotico e il numero totale di cellule.

Più alto è l'indice, maggiore è la saturazione del corpo con estrogeni. L’assunzione di materiale per uno “specchio ormonale” può essere utilizzata anche durante gli esami preventivi per identificare le donne con alti livelli di estrogeni in menopausa, che rappresentano un gruppo a rischio di cancro dell’endometrio

Tumori del tratto gastrointestinale

Gli studi citologici completano i metodi esistenti di diagnosi e diagnosi differenziale del cancro di questa localizzazione. Se si sospetta il cancro dell'esofago e dello stomaco, il materiale per la ricerca viene ottenuto mediante il metodo dei lavaggi “ciechi” con soluzione salina, soluzione enzimatica o prelevato durante la fibroesofagogastroscopia.

Se si sospetta un cancro del colon-retto, il materiale per la citologia può essere ottenuto mediante esplorazione rettale digitale, sigmoidoscopia, fibrocolonscopia e utilizzando tamponi. Il metodo citologico è particolarmente informativo per le forme di cancro ulcerative e infiltrative.

Tumori della pelle

Se si sospettano tumori cutanei maligni, il materiale per l'esame citologico può essere ottenuto prendendo impronte dalla superficie ulcerata, raschiando e pungendo con un ago sottile. L'uso della citologia per la diagnosi della melana è particolarmente importante, poiché questo è l'unico metodo possibile per verificarla nel periodo preoperatorio.

L'uso della biopsia per sospetto melanoma è controindicato a causa della possibilità di disseminazione del tumore. Spesso, quando un tumore è localizzato sul viso, viene utilizzata la citologia invece della biopsia, cosa che può essere impossibile o indesiderabile per ragioni estetiche.

Altri tumori

La citologia è un metodo prezioso per diagnosticare i tumori della tiroide e delle ghiandole salivari, del tratto genito-urinario (vescica, reni, prostata, testicoli), dei tessuti molli e delle ossa, del sistema linfatico e di altri organi.

Spesso i risultati di un esame citologico chiariscono la diagnosi clinica, eliminano la necessità di una biopsia e facilitano il trattamento su base eziopatogenetica. È inoltre necessario sottolineare il ruolo estremamente importante dello screening citologico durante gli esami preventivi di massa.

Oggi, la citologia è il metodo principale di screening per il cancro precanceroso e cervicale e integra in modo significativo altri metodi di screening quando si esaminano individui appartenenti a gruppi ad alto rischio.

Negli ultimi anni sono diventati sempre più utilizzati metodi di ricerca immunomorfologica e citomorfologica quantitativa che utilizzano la tecnologia informatica. Ciò consente di passare da metodi di analisi soggettivi e solo qualitativi a oggettivi e quantitativi, che possono aumentare significativamente il livello di diagnosi del tumore.

Inoltre, le tecnologie di telemetria si stanno sviluppando rapidamente nell’oncomorfologia clinica. Con il loro aiuto è possibile effettuare una diagnosi accurata e una consulenza qualificata sui farmaci a distanza.

Pertanto, un moderno insieme di metodi per la diagnosi morfologica dei tumori consente in quasi tutti i casi di identificare con precisione l'affiliazione istogenetica della neoplasia, il grado della sua malignità e fornire una valutazione prognostica abbastanza affidabile. Tutto ciò ci consente di sviluppare tattiche di trattamento adeguate alla situazione specifica secondo i protocolli repubblicani.

Uglyanitsa K.N., Lud N.G., Uglyanitsa N.K.

Di grande importanza è anche l'ampia applicazione durante biopsie e studi citologici. La questione delle capacità e dei metodi citologici è ancora oggetto di dibattito. Tuttavia, non vi è alcuna differenza fondamentale tra loro. Questi metodi sono progettati per completarsi a vicenda. La citologia dovrebbe essere eseguita da un morfologo qualificato, combinando il lavoro in questa direzione con studi istologici. Solo in questo modo il morfologo può migliorare le proprie competenze nel campo della citologia, poiché i dati iniziali vengono chiariti da dati istologici più completi. Va notato che un morfologo qualificato è anche un citologo, soprattutto quando si tratta di identificare forme precoci di tumori maligni e processi precancerosi. C'è un'idea sbagliata secondo cui un citologo fa una diagnosi basata su singole cellule. In realtà l'esame citologico è essenzialmente una sorta di biopsia, grazie alla quale si possono esaminare le singole cellule e i loro complessi che costituiscono lo “sfondo” su cui si sviluppa il tumore. Tale biopsia presenta alcuni vantaggi poiché è molto accessibile e sicura. Inoltre, il materiale per la ricerca può essere ottenuto da un gran numero di posti. Quando si esaminano strisci citologici, così come durante l'esame istologico, è necessario utilizzare varie colorazioni istochimiche a seconda della natura del materiale esaminato (colorazione utilizzando il metodo Romanovsky-Giemsa quando si esaminano linfonodi e organi del sistema ematopoietico, colorazione utilizzando il metodo Papanicolaou quando si esamina la secrezione della cervice, dei polmoni e di altri organi dove è presente un epitelio squamoso stratificato di copertura, colorato per il muco). Ciò consente di condurre analisi istochimiche dei disordini metabolici nelle cellule.

Dovresti concentrarti soprattutto sul cancro di tipo Bowen. I focolai di cancro pre-invasivo si presentano sotto forma di un singolo focolaio di malignità iniziale o sotto forma di focolai multipli, a volte a notevole distanza l'uno dall'altro. Lo studio delle micropreparazioni e l'osservazione dei pazienti hanno dimostrato che i processi iperplastici, rigenerativi e l'infiammazione cronica dovrebbero essere oggetto di attenzione sia da parte dei medici che dei patologi.

È possibile determinare le forme iniziali di cancro nello stomaco, nell'intestino, nell'utero e nelle cavità paranasali. È noto che i tumori a cellule giganti dell'osso possono essere una fonte di sviluppo del sarcoma; i tumori cancerosi si sviluppano da tumori misti della ghiandola parossistica; con la linfogranulomatosi è possibile la transizione al reticolosarcoma; I teratomi possono essere fonte di sviluppo di tumori maligni di varie strutture e loro stessi, avendo una struttura istologica benigna, possono metastatizzare.

In un certo numero di organi, un quadro morfologico chiaro di tali forme iniziali di tumori maligni non è stato ancora chiaramente delineato, sebbene, ovviamente, la forma pre-invasiva si presenti in qualsiasi localizzazione. È però necessario studiarli il più approfonditamente possibile per individuare le forme precoci e prevenire le forme avanzate di tumori.

Spesso è estremamente difficile diagnosticare neoplasie maligne e talvolta è del tutto impossibile stabilire la natura e la natura del tumore senza studi istologici e citologici.

I patologi devono tenere conto della necessità di effettuare l'analisi istologica del materiale inviato all'esame il più rapidamente possibile (ovviamente senza sacrificare la qualità), poiché qualsiasi ritardo nel chiarire la natura della malattia peggiora drasticamente la prognosi della malattia in presenza di un processo tumorale.

Recentemente, il metodo di ricerca citologico ha trovato un uso diffuso ai fini della diagnosi precoce del cancro. Questa metodica si basa sullo studio di gruppi di elementi cellulari contenuti nelle secrezioni delle mucose degli organi affetti da tumori.

Attualmente esiste già un numero significativo di studi che dimostrano che negli stadi iniziali la lesione tumorale rimane a lungo all'interno della copertura epiteliale. Durante il processo di cancerizzazione, le cellule, anche prima della crescita distruttiva, acquisiscono proprietà maligne, grazie alle quali possono essere riconosciute (forme di cancro intraepiteliali, intracanalicolari). La crescita distruttiva appare già nelle fasi successive dello sviluppo del tumore.

Il metodo citologico viene utilizzato con successo nella diagnosi di malattie dell'esofago, dei polmoni, dello stomaco, del retto, della vescica, della cervice e della cavità orale. In alcuni casi, soprattutto quando è impossibile eseguire una biopsia, è difficile fare una diagnosi corretta senza un metodo citologico.

La malattia di Bowen è un classico esempio di cancro intraepiteliale superficiale, in cui solo successivamente si può osservare una crescita sommersa e metastasi ai linfonodi.

A causa della mastopatia, si sviluppano forme intracanalicolari, che iniziano e si sviluppano nei canali con successiva crescita distruttiva.

Esempi simili si osservano nel cancro della cervice, nelle cosiddette forme intraepiteliali, quando il tumore si diffonde lungo un piano e le cellule sono polimorfiche, ma non si diffondono oltre l'epitelio superficiale, e solo successivamente compaiono segni di crescita infiltrativa.

Sia normalmente che in patologia, si osserva costantemente il rigetto delle singole cellule e dei loro gruppi. Il rigetto degli elementi tumorali avviene in vari stadi della crescita maligna, il che aiuta a riconoscere il processo anche prima della disintegrazione del tumore quando si esaminano le secrezioni, anche in un momento in cui il quadro clinico non consente ancora di fare una diagnosi corretta. Pertanto, studiando le caratteristiche morfologiche delle cellule maligne presenti nelle secrezioni, è possibile effettuare la diagnosi precoce delle neoplasie maligne.

Per la prima volta, il metodo di ricerca citologica cominciò ad essere utilizzato alla fine del secolo scorso dal fondatore della scuola di patologi di Kharkov V.B. Krylov e dai suoi studenti, che svilupparono un metodo per studiare i preparati nativi (non colorati) allo scopo di diagnosticare tumori maligni.

La ricerca nella sua forma nativa è spesso difficile, soprattutto nelle prime forme di crescita maligna. Recentemente, un metodo più affidabile di ricerca citologica è considerato uno studio preliminare del materiale nella sua forma nativa con ulteriore fissazione e colorazione dello striscio con varie vernici, tra le quali le più comuni sono le macchie Romanovsky - Giemsa, Papanicolaou. Nonostante il fatto che durante la fissazione e la colorazione gli elementi cellulari cambino in una certa misura la loro forma, è comunque possibile studiare la struttura cellulare in modo più sottile.

Le secrezioni raccolte per gli studi citologici vengono applicate su un vetrino, dopodiché vengono immediatamente (per evitare l'essiccazione del preparato) immerse per la fissazione in una miscela di alcool ed etere, prelevata in quantità uguali (miscela di Nikiforov), che garantisce la conservazione della forma degli elementi cellulari.

Per la diagnosi citologica è necessaria una quantità sufficiente di materiale. In sua assenza, ricorrono a studi ripetuti, a volte multipli.

La trasformazione maligna delle cellule può essere giudicata sulla base di un insieme di segni che caratterizzano le cellule della neoplasia e le loro relazioni con altre cellule. Tali segni includono innanzitutto un grado pronunciato di atipia, polimorfismo nella dimensione e nella forma di cellule, nuclei e nucleoli, ingrandimento del nucleo rispetto alla dimensione delle cellule, formazione di nuclei giganti e successivamente di cellule con un cambiamento nella rete della cromatina, caratterizzata da colorazione intensa, e basofilia del protoplasma.

Tuttavia, alcuni dei segni elencati si verificano durante i processi infiammatori e rigenerativi e pertanto è sempre necessario effettuare una diagnosi differenziale.

La trasformazione maligna è solitamente preceduta da alterazioni pretumorali e durante l'esame citologico è necessario tenere conto del "contesto patologico" sulla base del quale si è verificato il tumore canceroso. Solo sulla base di un'analisi citologica completa, cioè tenendo conto di tutti gli elementi cellulari (epitelio atipico, linfociti, leucociti, mesotelio). caratteristico dei cambiamenti patologici che precedono la trasformazione cancerosa, può essere fatta una diagnosi corretta.

Il desiderio di effettuare una diagnosi differenziale tra processi benigni e maligni ha portato al fatto che alcuni ricercatori, quando diagnosticano, ad esempio, un processo infiammatorio cronico, cercano di monitorare la dinamica dell'ulteriore decorso della malattia al fine di individuare lo stadio iniziale della malignità. Attualmente, è necessario non solo stabilire in modo affidabile la presenza di un tumore maligno, ma anche escludere la presenza di tumore maligno cellulare.

Anche durante i primissimi processi di rigenerazione, mediante esame citologico dello scarico della cervice e della cavità orale, si possono individuare cellule ipocromiche e ipercromiche, cellule ipertrofiche, caratterizzate da qualche polimorfismo e vacuolizzazione del protoplasma. Con l'ulteriore sviluppo del processo compaiono cellule granulari vacuolate e grumose. Quando il cancro si manifesta negli strisci, c'è un gran numero di nuclei “nudi” con cambiamenti nei nucleoli, con la comparsa di cellule e nuclei giganti, con la formazione di forme sinciziali e vacuolizzazione del protoplasma. A volte si osservano mitosi e fenomeni di citofagia. Con tumori maligni sviluppati dell'utero, nello striscio si notano forme caratteristiche di leucociti: gonfie, lisate o spalmate nella preparazione, sotto forma di filamenti e fili di sostanza nucleare. Non c'è fagocitosi. Presso l'Istituto radiologico e oncologico di ricerca di Kiev, A.V. Rudenko ha proposto una classificazione delle cellule epiteliali atipiche nelle lesioni precancerose e cancerose iniziali della cervice. È stato stabilito che nei pazienti con alterazioni infiammatorie della cervice si possono osservare cambiamenti nei rapporti tra le dimensioni del protoplasma e il nucleo delle cellule epiteliali. L'uso di questa classificazione nella pratica facilita la selezione dei pazienti che necessitano di ulteriore osservazione. Secondo i materiali della nostra clinica, in quasi il 100% dei casi sono state ottenute diagnosi citologiche corrette, successivamente confermate da studi istologici. Questo metodo diagnostica anche gli stadi iniziali del cancro cervicale, anche in quei pazienti in cui ad occhio nudo non è possibile rilevare alcun cambiamento nell'organo e non sono presenti sintomi clinici della malattia.

La tecnica dell'esame citologico consente di rilevare l'atipia della copertura epiteliale della cervice, che precede la crescita di un tumore canceroso, e con osservazioni ripetute di tali pazienti, di rilevare i primi stadi intraepiteliali del cancro.

L'elevata efficienza del metodo di ricerca citologica è evidenziata dai dati del dispensario oncologico di Lviv, dove, durante l'esame di 108 pazienti, la coincidenza delle diagnosi citologiche e istologiche è stata osservata nell'88,3%. Secondo l'Istituto di Ostetricia e Ginecologia, negli strisci di pazienti con cancro cervicale vengono rilevati elementi cancerosi nel 96,7% (B.I. Zhelsznov). Osservando 136 pazienti con sospetto cancro del canale cervicale, il metodo citologico ha permesso di accertare il cancro in 65 di loro.

Nella clinica di A.I. Savitsky, il metodo citologico viene utilizzato con successo per studiare le secrezioni del polmone, della ghiandola mammaria e di altri organi. N. N. Schiller-Volkova, studiando la secrezione dalla cervice, ha mostrato che un segno di malignità sono grandi cellule epiteliali in strisci con un grande nucleo giovane, con polimorfismo pronunciato e vacuolizzazione del protoplasma. I gruppi cellulari hanno l'aspetto di formazioni sinciziali senza confini chiari delle singole cellule, con un gran numero di nuclei polimorfici strettamente adiacenti l'uno all'altro. L'esame citologico di 158 donne ha permesso di rilevare cambiamenti in 14 pazienti sospettati di cancro, cambiamenti successivamente confermati dall'esame istologico. Tuttavia, 11 pazienti non presentavano segni clinici indicanti un processo tumorale.

Il metodo citologico è particolarmente importante per la diagnosi dei tumori polmonari, la cui presenza è ancora molto difficile da riconoscere. I metodi diagnostici citologici per il cancro del polmone hanno raggiunto un'elevata perfezione.

Nella clinica dell'Istituto Oncologico A.P. Herzen, in uno studio su 230 pazienti con cancro ai polmoni, una diagnosi positiva è stata fatta in media nell'89,6%. inoltre, per i tumori cancerosi localizzati in posizione centrale - nel 94,7%, e per quelli localizzati perifericamente - nell'83%.

Viene anche utilizzato un metodo per ottenere la secrezione dalla mucosa bronchiale e da pezzi microscopici di tumori mediante l'attrazione del tessuto tramite vuoto, che si ottiene introducendo uno speciale tubo di gomma direttamente nel bronco della lesione (metodo della biopsia di broncoaspirazione). Se un esame a raggi X ha diagnosticato un tumore nel 77% dei pazienti e una broncoscopia nell'84,6%, utilizzando questo metodo di ricerca, il cancro broncogeno viene riconosciuto nel 94,8% dei pazienti.

Quando studiavamo pazienti con varie malattie dell'esofago, abbiamo utilizzato il metodo della biopsia per aspirazione, applicando una sonda speciale alla lesione nell'esofago. Allo stesso tempo, nel 92% dei casi sono state stabilite diagnosi affidabili.

Nella clinica del Kyiv Research X-Ray and Oncology Institute N. P. Bulich. Studiando l'acqua di lavanda gastrica ottenuta con il metodo di sifonamento da lei sviluppato attraverso un doppio tubo duodenale, fece una diagnosi differenziale tra cancro e altre malattie dello stomaco. L'autore ha ottenuto una diagnosi affidabile di cancro nel 69% dei casi.

Il metodo di ricerca citologico ha trovato la sua applicazione in altre localizzazioni, in particolare nel cancro del retto, della cavità nasale, della laringe e nello studio del liquido cerebrospinale.

L'esperienza accumulata dimostra che questo metodo di ricerca, in combinazione con dati clinici, radiologici, istologici e istochimici, è una tecnica diagnostica molto efficace. Il suo importante vantaggio risiede nella velocità della ricerca, nell'accessibilità e nella sicurezza, che ne consentono un ampio utilizzo nella pratica ambulatoriale e negli esami preventivi di gruppo della popolazione.

L'articolo è stato preparato e curato da: chirurgo

La struttura, l'ultrastruttura e il funzionamento degli organelli cellulari sono attualmente studiati utilizzando i seguenti metodi principali: luce ed elettroni, campo scuro, contrasto di fase, polarizzazione, microscopia a fluorescenza, utilizzata per studiare la struttura, ultrastruttura di cellule fissate e centrifugazione differenziale , che consente di isolare singoli organelli e analizzarli utilizzando metodi citochimici, biochimici, biofisici e di altro tipo.

Microscopia ottica.

Il principio del metodo è che un raggio di luce, passando attraverso un oggetto, entra nel sistema di lenti dell'obiettivo e costruisce un'immagine primaria, che viene ingrandita utilizzando le lenti dell'oculare. La parte ottica principale del microscopio, che ne determina le capacità principali, è l'obiettivo.

Nei microscopi moderni le lenti sono intercambiabili, il che rende possibile studiare le cellule a diversi ingrandimenti. La caratteristica principale di un microscopio come sistema ottico è la risoluzione, cioè la capacità di dare un'immagine separata di due oggetti vicini l'uno all'altro.

Le immagini prodotte dall'obiettivo possono essere ingrandite molte volte, utilizzando un potente oculare o, ad esempio, proiettandole su uno schermo (fino a 10 5 volte). Il potere risolutivo di un microscopio ottico è limitato dalla lunghezza d'onda della luce: quanto più corta è la lunghezza d'onda, tanto maggiore è il potere risolutivo. Tipicamente, i microscopi ottici utilizzano sorgenti luminose nella regione visibile dello spettro (400-700 nm), quindi la risoluzione massima del microscopio in questo caso non può essere superiore a 200-350 nm (0,2-0,35 µm). Se utilizzi la luce viola (260-280 nm), puoi aumentare la risoluzione a 130 - 140 nm (0,13-0,14 micron). Questo sarà il limite della risoluzione teorica di un microscopio ottico, determinato dalla natura ondulatoria della luce.

Pertanto, tutto ciò che un microscopio ottico può fornire come dispositivo ausiliario al nostro occhio è aumentare la sua risoluzione di circa 1000 volte (l'occhio umano nudo ha una risoluzione di circa 0,1 mm, che equivale a 100 micron). Questo è l'ingrandimento “utile” del microscopio, al di sopra del quale aumenteremo solo i contorni dell'immagine senza rivelare nuovi dettagli in essa. Pertanto, quando si utilizza la luce visibile, 0,2-0,3 µm è il limite di risoluzione finale di un microscopio ottico.

Microscopio elettronico.

Per la microscopia elettronica a scansione, il materiale viene spesso congelato per produrre una superficie ricoperta di ghiaccio. In questo caso, la perdita di acqua e sostanze idrosolubili viene eliminata e anche i cambiamenti chimici nelle strutture sono minori. Quando si analizzano i dati ottenuti utilizzando un microscopio elettronico, è necessario ricordare che questo metodo esamina gli stati statici della cellula al momento del rapido arresto del movimento del citoplasma causato dall'influenza delle sostanze chimiche fissatrici.

Microscopia in campo oscuro.

La sua essenza è che, come le particelle di polvere in un raggio di luce (effetto Tyndall), minuscole particelle (meno di 0,2 micron) brillano in una cella sotto illuminazione laterale, la cui luce riflessa entra nella lente del microscopio. Questo metodo è stato utilizzato con successo nello studio delle cellule viventi.

Sono ampiamente utilizzati per determinare la localizzazione dei siti di sintesi dei biopolimeri, per determinare il trasporto di sostanze in una cellula, per monitorare la migrazione o le proprietà delle singole cellule. metodo dell'autoradiografia- registrazione delle sostanze marcate con isotopi. Ad esempio, utilizzando questo metodo, utilizzando precursori di RNA etichettati, è stato dimostrato che tutto l'RNA è sintetizzato solo nel nucleo interfase e la presenza di RNA citoplasmatico è il risultato della migrazione delle molecole sintetizzate dal nucleo.

In citologia, vari metodi analitici e preparativi biochimica. In quest'ultimo caso è possibile ottenere vari componenti cellulari sotto forma di frazioni separate e studiarne la chimica, l'ultrastruttura e le proprietà. Attualmente, quasi tutti gli organelli e le strutture cellulari sono ottenuti sotto forma di frazioni pure.

Uno dei modi principali per isolare le strutture cellulari è centrifugazione differenziale (separazione). Il principio della sua applicazione è che il tempo impiegato dalle particelle per depositarsi in un omogeneizzato dipende dalla loro dimensione e densità: più la particella è grande o pesante, più velocemente si depositerà sul fondo della provetta. Per accelerare questo processo di sedimentazione vengono utilizzate le accelerazioni create da una centrifuga.

Mediante ripetuta centrifugazione frazionata di sottofrazioni miste, si possono ottenere frazioni pure. Nei casi di separazione più fine delle frazioni, viene utilizzata la centrifugazione in gradiente di densità di saccarosio, che consente di separare bene componenti che differiscono anche leggermente tra loro per gravità specifica. Le frazioni risultanti, prima di essere analizzate con metodi biochimici, devono essere controllate per la purezza utilizzando un microscopio elettronico.

Domande di controllo:

1. Livelli di organizzazione della materia vivente

2. Teoria cellulare dell'organizzazione degli organismi

3. Metodi di ricerca in citologia

4. Obiettivi e oggetto della citologia

5. Progettazione del microscopio ottico

6. Struttura del microscopio elettronico

7. Precauzioni di sicurezza durante il lavoro citologico

8. Requisiti per la preparazione del materiale biologico per la ricerca citologica

9. Sostanze fissatrici, meccanismo d'azione

10. Citochimica, requisiti dei materiali e capacità

11. Analisi quantitativa (morfometria), requisiti e capacità

12. Artefatti in citologia, modi per oggettivare i risultati

1. Zavarzin A.A., Kharazova A.D. Fondamenti di citologia generale. - L., 1982.

2. Chentsov Yu.S. Nozioni di base di citologia. - M., 1984.

3. Shubnikova E.A. Morfologia funzionale dei tessuti. - M., Casa editrice dell'Università statale di Mosca, 1981.

Lo scopo di questa analisi è determinare il tipo di lesioni registrate, la loro natura benigna o maligna. Diamo uno sguardo più da vicino a questo problema.

La cellula è il principale materiale da costruzione del corpo. Il livello di salute umana e la sua capacità di resistere a varie patologie dipende direttamente dalla sua qualità. Lo studio delle cellule consente di identificare l'insorgenza di alterazioni patologiche, monitorare l'andamento della terapia e la stabilità del risultato ottenuto. Lo studio della struttura cellulare è chiamato citologico.

L'essenza di tali studi

L'essenza del metodo citologico è analizzare le caratteristiche della composizione cellulare di un determinato biomateriale utilizzando un microscopio: cambiamenti nel citoplasma e nei nuclei. Di norma, la citologia è intesa come uno studio di natura ginecologica, ma questo metodo di ricerca può essere utilizzato per studiare il succo della ghiandola prostatica, le impronte del tessuto rimosso, il liquido sinoviale e l'espettorato.

Cosa emerge durante questa analisi?

Il metodo di ricerca citologica ci consente di identificare i disturbi nelle funzioni ormonali delle ovaie. E lo studio degli strisci prelevati dalla volta vaginale e dalla cervice consente di rilevare il cancro nelle fasi iniziali e le condizioni precancerose. Inoltre, lo studio può rilevare il cancro della prostata, della vescica, dello stomaco, dei polmoni e di altri organi. È anche possibile identificare la forma istologica di una formazione tumorale, determinare la prevalenza di una formazione maligna e riconoscere le metastasi. Ma lo scopo della ricerca citologica non è solo il cancro, ma anche le patologie autoimmuni, le malattie infiammatorie e virali. Utilizzando tale analisi, è anche possibile monitorare la velocità di rigenerazione dei tessuti.

Indicazioni per l'uso

Un ginecologo, oncologo, chirurgo o terapista può prescrivere un metodo di ricerca citologica. Le principali indicazioni a riguardo sono:

• Sospetto di infezione virale, cancro, processo infiammatorio. In questo caso, sono necessarie ricerche per chiarire la diagnosi sospetta.
• Conferma dell'oncologia durante la resezione dei tessuti.
• Monitoraggio delle dinamiche terapeutiche per diverse patologie.
• Monitoraggio dei risultati terapeutici.
• Screening preventivo.
• Monitorare la condizione se esiste la possibilità di ricaduta. Gli studi citologici sono obbligatori dopo la guarigione del cancro.

Qual è la differenza tra i metodi di ricerca citologici e istologici? Maggiori informazioni su questo argomento di seguito.

La differenza tra l'analisi citologica e l'esame istologico è che vengono studiate le cellule e non le sezioni di tessuto. Ciò significa che le conclusioni finali vengono tratte sulla base dei cambiamenti avvenuti nel nucleo, nel citoplasma, nel rapporto nucleo-citoplasma, nella formazione di complessi e nelle strutture cellulari.

Per la ricerca possono essere utilizzati vari materiali biologici: tutto dipende dall'organo che viene esaminato.

Biomateriale per la ricerca

Di norma, il metodo di ricerca citologico (a differenza del metodo istologico, quando parti di tessuto vengono prelevate per l'esame, solitamente mediante biopsia o resezione) non comporta l'intervento nel corpo del paziente: quasi tutti i biomateriali possono essere ottenuti in modo indolore modo. Può essere ricercato:

1. Raschiati prelevati da ulcere, superfici erose, fistole, ferite.
2. Strisci, lavaggi dal canale cervicale e dalla cervice. Il metodo di ricerca citologica viene utilizzato più spesso qui.
3. Liquido amniotico.
4. Secrezioni del seno.
5. Secrezione dalla ghiandola prostatica.
6. Urina.
7. Espettorato.

Tuttavia, il prelievo di alcuni biomateriali può causare disagio al paziente. Ma tale procedura viene eseguita rapidamente e molto spesso è possibile raccogliere il materiale necessario durante altri studi, eliminando nuove procedure dolorose.

Metodo invasivo

I seguenti materiali vengono raccolti in modo invasivo per il metodo di studio citologico:

1. Punteggia da cavità sierose e articolari (la raccolta avviene con un ago sottile).
2. Liquido cerebrospinale.
3. Sangue.
4. Lavaggi da vari organi durante l'endoscopia.

Inoltre, impronte di tessuti rimosse durante l'intervento chirurgico o prelevate a scopo di

I campioni biologici ottenuti possono essere studiati utilizzando diverse tecniche.

Metodi di base dell'esame citologico

Diverse cliniche possono utilizzare diversi metodi di tale ricerca, i principali sono:

Patologie identificate attraverso tale analisi

La malattia principale, di cui si ricercano le tracce attraverso l'esame citologico, è il cancro. Inoltre, la citologia permette di identificare condizioni precancerose e le seguenti patologie:

1. Infarti.
2. Patologie del sistema nervoso centrale di natura infiammatoria.
3. Maturità fetale (se viene esaminato il liquido amniotico).
4. Malattie non maligne (insufficienza cardiaca congestizia, tubercolosi, polmonite).
5. Presenza di antigeni virali e agenti infettivi nei campioni di biomateriali.
6. Processi infiammatori, comprese varie meningiti.

conclusioni

Pertanto, i metodi diagnostici citologici sono uno dei modi più informativi per studiare le condizioni di vari organi conosciuti oggi dalla medicina. Consentono il rilevamento tempestivo del cancro, delle condizioni precancerose e di altre malattie.

Cos'è un esame citologico? In quali casi viene effettuato? Troverai le risposte a queste e ad altre domande in questo articolo.

Uno studio citologico è lo studio delle caratteristiche strutturali delle cellule, della composizione cellulare dei tessuti, dei fluidi e degli organi del corpo umano in condizioni normali e nei processi patologici utilizzando un microscopio. Lo scopo dello studio è determinare il tipo di lesioni registrate , la loro natura benigna o maligna.

Citologia e istologia: qual è la differenza?

La differenza tra l'analisi citologica e l'esame istologico è che vengono studiate le cellule e non le sezioni di tessuto. Ciò significa che le conclusioni finali vengono tratte sulla base dei cambiamenti avvenuti nel nucleo, nel citoplasma, nel rapporto nucleo-citoplasma, nella formazione di complessi e nelle strutture cellulari.

Quando viene eseguito un esame citologico?

L'esame citologico viene utilizzato per:

• Esame preventivo (screening)
• Chiarire o stabilire una diagnosi di una malattia
• Chiarire o stabilire una diagnosi durante l’intervento chirurgico
• Controllo durante e dopo il trattamento
• Monitoraggio della dinamica del processo o per la rilevazione precoce di cambiamenti patologici

Quali materiali vengono utilizzati per l'analisi

Liquidi

Questi possono essere campioni liquidi:

• urina, espettorato o succo di prostata
• liquido cerebrospinale e amniotico
• tamponi di vari organi prelevati durante l'endoscopia
• strisci della cervice e strisci della cavità uterina (esame citologico degli strisci, esame citologico della cervice)
• secrezione dalle ghiandole mammarie
• raschiature e impronte di superfici erose o ulcerate, fistole o ferite
• liquido dalle cavità articolari e sierose

Punti

Questi includono materiali ottenuti mediante puntura diagnostica per aspirazione, che viene eseguita utilizzando uno speciale ago sottile.

Stampe

In questo caso si parla di impronte di tessuto rimosso, ad esempio da una superficie appena tagliata di tessuto rimosso durante l'intervento chirurgico o prelevato per un ulteriore esame istologico.

Scopo dell'esame citologico

Lo scopo principale del metodo di ricerca citologica è ottenere una risposta alla domanda sull'assenza o presenza di una neoplasia maligna nel paziente il cui materiale è stato studiato. Questo metodo consente di determinare con maggiore precisione la natura del processo patologico (tumori benigni e maligni), la natura delle lesioni infiammatorie, proliferative, reattive e precancerose.

Sono le caratteristiche morfologiche dettagliate della neoplasia rilevata che consentono di scegliere il metodo di trattamento più ragionevole. che si tratti di rimozione chirurgica del tumore, radioterapia, chemioterapia o una combinazione di queste, a seconda della struttura del tumore, della sua origine, del grado di atipia delle sue cellule e della possibile risposta al trattamento.

L'esame citologico, rispetto ad altri metodi, presenta indubbi vantaggi nell'identificazione degli stadi iniziali del cancro. Questo metodo di ricerca viene utilizzato nella diagnosi di tumori in quasi tutti i tessuti e tutti gli organi del corpo umano. Grazie all'esame citologico è possibile individuare il cancro allo stomaco, al polmone e ad altri organi anche in assenza di manifestazioni e segni radiologici, clinici ed endoscopici.

Analisi citologiche in ginecologia

Uno striscio citologico viene eseguito in regime ambulatoriale durante una visita ginecologica. Normalmente si consiglia di effettuare tale analisi una volta all'anno, quando ci si sottopone a una visita preventiva dal medico. Un ulteriore esame citologico può essere prescritto se:

• ci sono malattie infiammatorie in cui vi è il sospetto di un'infezione urogenitale
• quando si ricercano le cause dell’infertilità
• ci sono denunce di irregolarità mestruali
• è necessario determinare la natura dei cambiamenti dovuti all'uso a lungo termine della contraccezione ormonale
• quando si pianifica una gravidanza
• È previsto l'intervento ginecologico chirurgico (curettage, installazione di un dispositivo intrauterino, ecc.).

Esecuzione di analisi citologiche in ginecologia

È meglio se il materiale viene raccolto il 10-11 giorno del ciclo mestruale. 2 giorni prima della procedura è necessario astenersi dai rapporti sessuali, dalle lavande e dall'uso di contraccettivi o farmaci topici. Inoltre non dovresti urinare per circa 2 ore prima della procedura.

La raschiatura (prelievo di materiale) dalla cervice viene eseguita utilizzando una speciale spazzola sterile dopo che il medico ha inserito uno speculum e fissato la cervice. Di norma, questo viene fatto due volte: da un punto situato più vicino all'utero e poi alla vulva. Il materiale risultante viene applicato su un vetrino, asciugato e fissato utilizzando soluzioni speciali. Spesso, per accelerare il processo di ottenimento dei risultati, sono le donne stesse a consegnare il materiale al laboratorio per la ricerca.

La procedura in sé è completamente indolore e molto rapida: non più di 10-15 secondi. Successivamente, a volte può verificarsi un leggero sanguinamento, che scompare entro un giorno. Questo di solito accade quando una donna ha una sorta di processo infiammatorio.