introduzione
antiossidante vitaminico dei frutti di mare
Fin dall'antichità l'uomo si è interessato a tutto ciò che riguarda il cibo e la nutrizione. All'inizio l'importante era procurarsi qualsiasi tipo di cibo, poi sono seguiti secoli in cui gli uomini hanno ampliato le proprie fonti alimentari, sviluppando l'agricoltura, e allo stesso tempo hanno migliorato i metodi di preparazione dei vari piatti, portandoli a una vera e propria arte (ricordate il francese o cucina cinese). Solo a metà del secolo scorso, con l'inizio della rivoluzione industriale e scientifica, è emersa la scienza della nutrizione, che oggi si chiama dietologia o nutrizionistica.
Di norma, le vitamine entrano nel nostro corpo insieme al cibo, che teoricamente dovrebbe contenere alcune vitamine inerenti ai suoi elementi per natura stessa. Frutta e verdura, carne, latte, cereali: tutto questo, coltivato in modo appropriato, dovrebbe contenere un elenco minimo di vitamine essenziali, ma ai nostri tempi ciò accade abbastanza raramente. Scarsa ecologia, uso attivo di elementi chimici nell'alimentazione animale e nella produzione di prodotti vegetali, ingegneria genetica: molto spesso annulla l'utilità dei prodotti che non contengono vitamine ed è la causa diretta della loro mancanza di contenuto nel corpo umano .
Le vitamine sono composti organici speciali che sono vitali per il corpo umano per il suo normale funzionamento; svolgono un ruolo importante nel metabolismo.
Una carenza di vitamine può portare a gravi cambiamenti nella salute. Sfortunatamente, il nostro corpo non è in grado di sintetizzare da solo le vitamine (ad eccezione della vitamina K, che si forma in quantità sufficienti nell'intestino a causa dell'attività di batteri speciali), quindi la loro carenza deve essere reintegrata.
Le vitamine A ed E contenute nei prodotti alimentari svolgono un ruolo enorme nella vita perché... sono antiossidanti naturali.
Negli ultimi tempi si usa spesso la parola antiossidanti. Puoi ascoltarlo in TV, leggerlo su un giornale o una rivista di moda o vederlo sulle confezioni degli alimenti. A questo proposito, iniziamo a porci le domande: “Cosa sono gli antiossidanti e perché sono necessari negli alimenti?”
Lo scopo del lavoro è determinare il contenuto quantitativo di vitamine A ed E nella carne di frutti di mare e nel pesce di mare.
Gli obiettivi della ricerca. Per raggiungere questo obiettivo, è necessario risolvere i seguenti compiti:
1. Determinare il contenuto quantitativo di vitamine A ed E e di coniugati dienici nella carne di pesce.
2. Confrontare il contenuto quantitativo delle vitamine A ed E e dei coniugati dienici nella carne dei frutti di mare.
Oggetto della ricerca sono la carne di frutti di mare (gamberetti, polpi, calamari, cozze) e la carne di pesce di mare (merluzzo, melù, passera).
Oggetto dello studio è il contenuto quantitativo di vitamine A ed E nei frutti di mare e nella carne di pesce di mare.
1. Revisione della letteratura analitica
1.1 Comprensione generale della composizione chimica e delle proprietà dei frutti di mare
Il termine frutti di mare è usato per riferirsi a tutti gli abitanti commestibili degli oceani del mondo. Sebbene il pesce appartenga al mare, questo prodotto è classificato come un gruppo separato e non è classificato come pesce. Il pesce viene utilizzato non solo in cucina, ma anche in medicina e nell'industria chimica. Quasi ogni tipo di pesce ha proprietà benefiche eccezionali che hanno un effetto benefico sulla salute e sul benessere umano.
Il pesce è un prodotto di alto valore nutrizionale perché contiene proteine (13-23%), grassi (0,1-33%), minerali (1-2%), vitamine A, D, E, B1, B12, PP, C, estrattivi e carboidrati. La composizione chimica del pesce non è costante; varia a seconda della specie, dell'età, del luogo e del momento della cattura.
Pesce e frutti di mare contengono composti estremamente necessari per l'uomo, come aminoacidi essenziali, tra cui lisina e leucina, acidi grassi essenziali, tra cui acidi eicosapentaenoico e docosoesaenoico unici, vitamine liposolubili, micro e macroelementi in rapporti favorevoli per il corpo umano .
Di particolare importanza è la metionina, che è una sostanza lipotropa antisclerotica. In termini di contenuto di metionina, il pesce occupa uno dei primi posti tra i prodotti proteici di origine animale. A causa della presenza di arginina e istidina, nonché dell'elevato coefficiente di efficienza delle proteine (per la carne di pesce è 1,88-1,90 e per la carne bovina - 1,64), i prodotti ittici sono molto utili per un organismo in crescita. Le proteine del pesce sono altamente digeribili. In termini di velocità di digeribilità, pesce e latticini sono identici e occupano il primo posto.
Le proteine del pesce sono per lo più complete: albumine e globuline (proteine semplici), nucleoproteine, fosforoproteine e glucoproteine (proteine complesse). In totale, il tessuto muscolare del pesce contiene l'85% di proteine complete. Sono quasi completamente (97%) assorbiti dal corpo umano. Pertanto, il pesce è una fonte di nutrimento proteico.
Il collagene proteico del tessuto connettivo incompleto (15%) si trasforma facilmente in glutina sotto l'influenza del trattamento termico, quindi la carne di pesce si ammorbidisce più velocemente della carne di animali domestici.
L'olio di pesce contiene una grande quantità di acidi grassi insaturi (linoleico, linolenico, arachidonico, ecc.), quindi è liquido a temperatura ambiente, ha un basso punto di fusione (sotto i 37 ° C) e viene facilmente assorbito dal corpo umano. Il grasso nel corpo del pesce è distribuito in modo non uniforme.
Il pesce soddisfa il fabbisogno umano quotidiano di proteine animali del 7-24%, di grassi - dello 0,1-12%, compresi gli acidi grassi polinsaturi - dello 0,1-18%.
L’olio di fegato di pesce contiene quantità particolarmente elevate di vitamine A e D. La vitamina A è ricca principalmente del grasso del fegato dei merluzzi marini (merluzzo, eglefino, merluzzo, ecc.), degli squali, della spigola, dello sgombro e molti altri. Il contenuto di vitamina D nel fegato dei pesci varia dal 60 al 360 µg%, ma in alcune specie di corvine raggiunge il 700-1900 µg%.
Le vitamine idrosolubili (gruppo B) vengono in gran parte preservate dai metodi convenzionali di lavorazione del pesce. Durante la cottura del pesce, parte delle vitamine idrosolubili in esso contenute passano nel brodo, e quindi è consigliabile utilizzarlo a scopo alimentare. Nella carne scura di sgombro, sardina e tonno sono presenti soprattutto molte vitamine del gruppo B (20 mcg per 100 g), che sono estremamente necessarie a causa dell'aumento delle proteine nella dieta umana.
La quantità di grasso nella carne di diversi pesci varia. In base al contenuto di grassi, i pesci sono suddivisi nei seguenti gruppi:
· a basso contenuto di grassi (fino al 2%) - merluzzo, eglefino, merluzzo bianco, navaga, tinca, lucioperca, pesce persico, lucioperca, combattente, passera del Pacifico;
· magro (2-5%) - aringhe del Pacifico e dell'Atlantico (durante la deposizione delle uova), sperlano, carpa, scarafaggio, carassio, triglia, spigola, pesce gatto, ide;
· grassi (5-15%) - beluga, storione, sterlet, salmone, salmone chum, salmone rosa, sgombro, sugarello, tonno, aringhe dell'Atlantico e del Pacifico (estate, autunno, inizio inverno);
· molto grasso (15-33%) - salmone, lampreda, sterlet siberiano, storione siberiano, aringhe del Pacifico e dell'Atlantico (fine estate).
I minerali fanno parte delle proteine, dei grassi, degli enzimi e delle lische del pesce. La maggior parte di loro sono nelle ossa. Questi sono sali di calcio, fosforo, potassio, sodio, magnesio, zolfo e cloro. Il contenuto di fosforo nella carne di pesce è in media dello 0,20-0,25%. Di particolare grande importanza fisiologica sono elementi come ferro, rame, iodio, bromo, fluoro, ecc., Contenuti nei pesci in quantità molto piccole.Con l'aiuto del pesce è possibile soddisfare il fabbisogno di ferro del corpo del 25%, fosforo del 50-70, magnesio - del 20%. I frutti di mare contengono più minerali, in particolare oligoelementi, rispetto ai pesci d'acqua dolce. È ricco di iodio, necessario per il normale funzionamento della ghiandola tiroidea. In media, i pesci d'acqua dolce contengono 6,6 mcg di iodio per 100 g di sostanza secca, i pesci anadromi - 69,1 mcg, i pesci semi-anadromi - 26 mcg e i pesci marini - 245 mcg.
L'odore pungente specifico del pesce di mare è dovuto alla presenza di sostanze azotate in esso contenute: le ammine.
I carboidrati del pesce sono rappresentati dal glicogeno (0,05-0,85%), che forma il gusto, l'odore e il colore dei prodotti ittici. Il sapore dolciastro del pesce dopo il trattamento termico è dovuto alla scomposizione del glicogeno in glucosio.
Il valore nutrizionale del pesce dipende non solo dalla composizione chimica, ma anche dal rapporto tra parti e organi commestibili e non commestibili nel suo corpo. Le parti commestibili includono carne, pelle, caviale, latte, fegato; immangiabile: ossa, pinne, squame, interiora. Maggiore è la quantità di carne e caviale nel pesce, maggiore è il suo valore nutritivo.
Il pesce come prodotto alimentare è molto apprezzato. Tuttavia, la contaminazione dei pesci d’acqua dolce con sostanze nocive è diventata un vero problema. È vero che le quantità residue di metalli pesanti o di idrocarburi clorurati sono per lo più al di sotto della concentrazione massima consentita (MPC), ma la somma di tutte le sostanze nocive può portare a conseguenze indesiderate per la salute. La concentrazione di queste sostanze nei pesci marini è in media significativamente inferiore all'MPC.
Se escludiamo dalla dieta il pesce avariato e il pesce proveniente da corpi idrici eccessivamente inquinati, allora possiamo dire che si tratta di un prodotto alimentare molto importante e di alta qualità.
Le proprietà benefiche dei frutti di mare sono determinate principalmente dal loro habitat. L'acqua di mare contiene un'enorme quantità di minerali, quindi gli animali che vivono in essa assorbono tutti i "benefici" dei mari e degli oceani.
I frutti di mare contengono proteine rapidamente digeribili, acidi grassi, micro e macroelementi. A differenza dei prodotti a base di carne, i frutti di mare sono molto più nutrienti e più sani. nei muscoli dei frutti di mare c'è molte volte meno tessuto connettivo rispetto ai muscoli degli animali terrestri: ciò è dovuto alle peculiarità della loro struttura e del loro habitat. A differenza degli animali del sushi, la carne degli animali marini non contiene grassi densi, ma contiene molte proteine e acidi grassi polinsaturi (PUFA), necessari per bambini e adulti. La mancanza di PUFA minaccia l’invecchiamento precoce e le malattie croniche. I PUFA proteggono i vasi sanguigni, prevenendo lo sviluppo dell'aterosclerosi.
Anche i frutti di mare contengono molto fosforo, e questo è importante per coloro che soffrono di malattie del sistema nervoso centrale, studiano intensamente o sono impegnati in lavori mentali.
I frutti di mare hanno poche calorie, quindi mangiarli protegge dall'accumulo di peso in eccesso. Se, ad esempio, li confrontiamo con il vitello, che è considerato carne dietetica, risulteranno meno calorici, perché... Il contenuto calorico della carne di vitello è di circa 290 kcal per 100 g, mentre calamari, gamberetti e cozze ammontano solo a circa 70-85 kcal e contengono da 0,3 a 3 g di grassi.
I benefici dei gamberetti non si limitano al loro basso contenuto calorico. È una ricca fonte di proteine animali e ferro, oltre a numerose vitamine. I gamberetti contengono anche antiossidanti. E la più importante di queste, l’astaxantina, protegge dal cancro e dall’aterosclerosi. Questa sostanza ha una struttura simile al carotene della carota. È formato da alghe oceaniche, dalle quali passa nel corpo di gamberetti, granchi e pesci rossi.
È noto che i frutti di mare sono ricchi di iodio (e questo vale non solo per gli animali marini, ma anche per le piante) e le alghe possono essere considerate la sua fonte naturale più accessibile. Lo iodio è necessario per le persone impegnate in attività mentale, poiché la sua carenza contribuisce a un rapido affaticamento; per gli adolescenti, poiché il loro corpo cresce rapidamente e ha bisogno di nutrimento; le donne incinte hanno bisogno di iodio sia per il proprio corpo che per il feto.
I frutti di mare sono anche ricchi di rame e zinco, di cui il corpo ha bisogno per normalizzare il metabolismo, la produzione di ormoni, la formazione delle cellule del sistema immunitario, delle cellule germinali, l'elaborazione delle proteine e altri importanti processi vitali.
Una proprietà importante di quasi tutti i frutti di mare è la capacità di ridurre l'impatto del sovraccarico emotivo: non per niente nei paesi situati sulla costa del mare la popolazione è calma e amichevole, equilibrata e ottimista - la dieta qui gioca un ruolo importante.
I frutti di mare catturati in acque ambientalmente sfavorevoli possono essere dannosi e oggi sulla Terra esistono sempre più luoghi simili. Oltre all'inquinamento causato dalle perdite di petrolio e dallo scarico di rifiuti industriali e domestici, ci sono molti posti nell'oceano dove sono presenti radiazioni radioattive e gli abitanti del mare nuotano e vivono ovunque.
Dovresti mangiare pesce appena pescato o congelato; i frutti di mare in scatola conservano poco valore nutrizionale e inoltre spesso contengono troppi additivi alimentari. Gli alimenti confezionati sottovuoto possono contenere anche sostanze chimiche dannose. Se i frutti di mare sono stati congelati sufficientemente freschi, le sue proprietà benefiche vengono mantenute quasi completamente, ma molto dipende dalla conservazione: se il prodotto è stato conservato in modo errato, la sua qualità potrebbe deteriorarsi drasticamente.
I nutrizionisti sconsigliano un consumo eccessivo di frutti di mare e raccomandano di includerli nella dieta non più di due volte a settimana. A proposito, alcune prelibatezze di pesce sono ricche di colesterolo e alcune hanno la capacità di accumulare quantità eccessive di mercurio.
1.2 Perossidazione lipidica
La perossidazione lipidica è un processo complesso che avviene sia nei tessuti animali che vegetali. Comprende l'attivazione e la degradazione dei radicali lipidici, l'incorporazione dell'ossigeno molecolare preattivato nei lipidi, la riorganizzazione dei doppi legami negli acili lipidici polinsaturi e, di conseguenza, la distruzione dei lipidi di membrana e delle biomembrane stesse. Come risultato dello sviluppo delle reazioni dei radicali liberi della perossidazione lipidica, si formano numerosi prodotti, tra cui alcoli, chetoni, aldeidi, esteri, ecc. Ad esempio, solo durante l'ossidazione dell'acido linoleico, vengono prodotti circa 20 prodotti della sua decomposizione formato. Le membrane biologiche, in particolare le membrane degli animali a sangue freddo, contengono grandi quantità di acidi grassi insaturi e metalloproteine che attivano l'ossigeno molecolare. Pertanto, non sorprende che in essi possano svilupparsi processi di perossidazione lipidica.
Le idee moderne sul meccanismo della perossidazione lipidica indicano la possibilità di aggiunta diretta di ossigeno molecolare alle molecole organiche con la formazione di idroperossidi. Il substrato per l'ossidazione nelle membrane biologiche sono gli acidi grassi polinsaturi, che fanno parte dei fosfolipidi.
La perossidazione (autoossidazione) dei lipidi a contatto con l'ossigeno non solo rende i prodotti alimentari inutilizzabili (irrancidimento), ma provoca anche danni ai tessuti in vivo, contribuendo allo sviluppo di malattie tumorali. L'effetto dannoso viene avviato dai radicali liberi che si formano durante la formazione di perossidi di acidi grassi contenenti doppi legami che si alternano con ponti di metilene (questa alternanza avviene negli acidi grassi polinsaturi naturali). La perossidazione lipidica è una reazione a catena che garantisce la riproduzione ampliata dei radicali liberi, che avviano l'ulteriore diffusione della perossidazione. L'intero processo può essere rappresentato come segue.
1) Iniziazione: formazione di R da un predecessore
2) Sviluppo della reazione:
3) Terminazione (cessazione della reazione):
Poiché l'idroperossido ROOH agisce come precursore nel processo di iniziazione, la perossidazione lipidica è una reazione a catena ramificata con il potenziale di causare danni significativi. Per regolare il processo di perossidazione dei grassi, sia l'uomo che la natura utilizzano antiossidanti. A questo scopo ai prodotti alimentari vengono aggiunti propil gallato, butilidrossianisolo e butilidrossitoluene. Gli antiossidanti naturali includono la vitamina E liposolubile (tocoferolo), nonché gli urati idrosolubili e la vitamina C. Il carotene è un antiossidante solo a bassi livelli.
Gli antiossidanti si dividono in due classi:
1) antiossidanti preventivi che riducono la velocità di inizio della reazione a catena.
2) antiossidanti quench (rottura della catena) che impediscono lo sviluppo di una reazione a catena.
I primi includono la catalasi e altre perossidasi che distruggono il ROOH e gli agenti chelanti dei metalli DTPA (dietilentriamina pentaacetato) e EDTA (etilendiamminotetraacetato). I fenoli o le ammine aromatiche sono spesso usati come antiossidanti che spezzano la catena. In condizioni in vivo, i principali antiossidanti che rompono la catena sono la superossido dismutasi, che elimina i radicali liberi superossido nella fase acquosa, così come la vitamina E, che elimina i radicali liberi ROO nella fase lipidica, e possibilmente l’acido urico.
1.3 Ruolo biologico delle vitamine A ed E
Retinoml (vera vitamina A, trans - 9,13 - dimetil-7 - (1,1,5 - trimetil-cicloesen-5-il-6) - nonatetraene - 7,9,11,13 - olo) - liposolubile vitamina, antiossidante (Fig. 1.1)
Riso. 1.1 Formula del retinolo
La vitamina A è chiamata retinolo per la sua importanza fondamentale per il funzionamento della retina (retina). Ma, come per altre vitamine, il suo ruolo nell’organismo è molto più ampio ed è legato a numerosi processi critici.
Ruolo biologico della vitamina A.
· Funzione antiossidante: neutralizzazione dei radicali liberi dell'ossigeno, previene la ricomparsa (recidiva) di tumori dopo l'intervento chirurgico.
· Regolazione delle funzioni genetiche: aumento della sensibilità delle cellule agli stimoli di crescita, che garantisce la normale crescita delle cellule dell'embrione e dell'organismo giovane, regolazione della divisione e differenziazione delle cellule che si dividono rapidamente, come le cellule della placenta, del tessuto osseo, della cartilagine, epitelio cutaneo, epitelio spermatogeno, membrane mucose, sistema immunitario.
Tutte queste funzioni garantiscono il normale funzionamento del sistema immunitario, aumentano la funzione barriera delle mucose, ripristinano i tessuti epiteliali danneggiati, stimolano la sintesi del collagene e riducono il rischio di infezioni.
· Partecipazione ai processi fotochimici visivi.
La retina, in combinazione con la proteina opsina, forma il pigmento visivo rodopsina, che si trova nelle cellule retiniche dell'occhio responsabili della visione crepuscolare in bianco e nero: i bastoncini.
· La partecipazione alla sintesi degli ormoni steroidei, la spermatogenesi, è un antagonista della tiroxina, l'ormone tiroideo.
· I singoli carotenoidi hanno funzioni specifiche:
a) b - il carotene è particolarmente necessario per neutralizzare i radicali liberi degli acidi grassi polinsaturi e dei radicali dell'ossigeno, ha un effetto protettivo nei pazienti con aterosclerosi, angina pectoris, aumentando il contenuto di lipoproteine ad alta densità nel sangue, che hanno un effetto anti-aterogenico effetto (previene la formazione di placche aterosclerotiche).
b) luteina e zeaxetina: aiutano a prevenire la cataratta e riducono il rischio di degenerazione maculare.
c) il licopene ha un effetto antiaterosclerotico, protegge l'organismo dallo sviluppo del cancro al seno, all'endometrio e alla prostata. Il più alto contenuto di licopene è nei pomodori.
Ipovitaminosi
Le cause sono carenza nutrizionale, ipovitaminosi C, ipovitaminosi E, carenza di zinco, diminuzione della funzione tiroidea (ipotiroidismo) e carenza di ferro nel corpo. Il ferro è necessario per il normale funzionamento degli enzimi contenenti ferro che catalizzano la conversione dei carotenoidi in retinolo nel fegato e nell'intestino.
La mancanza di vitamina A porta a un gran numero di malattie e altri problemi di salute nel nostro corpo. Il segno più noto della carenza di questa vitamina è la cecità notturna, una malattia caratterizzata da problemi di vista in luoghi con scarsa illuminazione. In questo caso, non solo gli occhi vedono male, ma la persona inizia anche a provare disagio: la mucosa si secca, gli occhi lacrimano al freddo e si verifica un annebbiamento della cornea. Inoltre, c'è una sensazione di sabbia negli occhi, negli angoli compaiono croste e muco.
Oltre agli organi visivi, la carenza di vitamina A colpisce anche altri organi. In particolare, la pelle soffre perché diventa troppo secca e quindi comincia a raggrinzirsi abbastanza presto. Sulla testa si forma la forfora, i capelli perdono la loro naturale lucentezza e diventano opachi. Anche il sistema genito-urinario e il tratto gastrointestinale soffrono di numerose patologie dovute alla carenza di retinolo e sugli organi riproduttivi femminili possono formarsi erosioni, polipi, mastopatie e persino tumori.
La mancanza di vitamina A è principalmente spiegata da una cattiva alimentazione e spesso si osserva un rifiuto di grassi e cibi proteici. Inoltre, ciò potrebbe essere dovuto alla presenza di malattie intestinali, epatiche e dello stomaco, nonché a una carenza di vitamina E, che aiuta il retinolo a ossidarsi più rapidamente.
Ipervitaminosi.
Principalmente associato all'assunzione eccessiva di vari integratori alimentari contenenti vitamina A. L'ipervitaminosi associata al consumo di cibi ricchi di vitamina A praticamente non si verifica.
L'avvelenamento acuto si manifesta con mal di testa, debolezza, nausea, disturbi della coscienza e della vista.
L'avvelenamento cronico è caratterizzato da indigestione, perdita di appetito, che porta alla perdita di peso, l'attività delle ghiandole sebacee della pelle diminuisce, si sviluppa dermatite secca e possibile fragilità ossea.
L'ipervitaminosi è particolarmente pericolosa durante la gravidanza. L'embriotossicità del farmaco ad alte dosi è stata dimostrata. Sono state descritte anche la nefrotossicità e la cancerogenicità dell'ipervitaminosi.
Il fabbisogno giornaliero di vitamina A per i bambini in età prescolare varia da 0,5 a 1,5 mg. La norma per un adulto è leggermente più alta, ma il limite più basso è 1,5 mg; quando questo livello scende, si sviluppano sintomi di carenza. Le donne incinte e che allattano devono aumentare l'apporto di vitamina A a 2-2,5 mg.
La vitamina E appartiene a un gruppo di composti naturali: derivati del tocolo. Liquidi viscosi di colore giallo chiaro, insolubili in acqua, altamente solubili in cloroformio, etere, esano, etere di petrolio e, peggio ancora, in acetone ed etanolo.
· La vitamina è integrata nel doppio strato fosfolipidico della membrana cellulare e svolge una funzione antiossidante, prevenendo la perossidazione lipidica.
Questa funzione è particolarmente importante nelle cellule che si dividono rapidamente, come l'epitelio, le membrane mucose, le cellule embrionali e la spermatogenesi.
· Riduce la degenerazione delle cellule del tessuto nervoso.
· È noto l'effetto positivo della vitamina E sullo stato delle pareti vascolari e sulla riduzione dei coaguli di sangue.
· La vitamina E protegge la vitamina A dall'ossidazione.
· L'applicazione topica di creme con vitamina E migliora le condizioni della pelle, previene l'invecchiamento cellulare e favorisce la guarigione delle aree danneggiate.
Ipovitaminosi.
Le cause dell'ipovitaminosi sono la carenza nutrizionale.
Quadro clinico. La patologia delle membrane cellulari porta all'emolisi dei globuli rossi, si sviluppa anemia, aumento della permeabilità della membrana e si verifica la distrofia muscolare.
Da parte del sistema nervoso possono verificarsi danni alle corde posteriori del midollo spinale e alla guaina mielinica dei nervi, che portano a ridotta sensibilità e paresi dello sguardo.
L’ipovitaminosi può portare alla sterilità.
Con una mancanza di vitamina E, una persona inizia a sentirsi debole, l'umore peggiora bruscamente e si instaura l'apatia verso tutto. Inoltre, i sintomi della carenza di vitamina E si esprimono nella comparsa di macchie senili e nel deterioramento della condizione della pelle del viso. Dal momento in cui iniziano la preparazione alla gravidanza fino alla fine dell'allattamento al seno, i ginecologi prescrivono ai loro pazienti dosi maggiori di vitamina E. Il tocoferolo è indispensabile per coloro che praticano sport professionistici o sperimentano un sovraccarico fisico quotidiano.
L'assunzione giornaliera di vitamina E dipende dall'età e dal sesso. Per i bambini da 0 a 7 anni sono sufficienti da 5 a 10 mg. questa vitamina. I bambini dai 7 ai 14 anni richiedono una dose leggermente maggiore, da 10 a 14 mg. Gli adulti hanno bisogno di ricevere almeno 10 mg di vitamina E al giorno: è a questo valore che la carenza non si svilupperà. Il fabbisogno di vitamina E aumenta anche nelle donne in gravidanza e in allattamento. Per loro, la norma va da 15 a 30 mg. Il livello di vitamina E può aumentare durante shock nervoso, stress o dopo aver sofferto di malattie gravi.
Attività antiossidante della vitamina A.
Le sostanze biologicamente attive svolgono una funzione specifica nel corpo, prendendo parte a complessi processi biochimici. Come è noto, le radiazioni ultraviolette, il fumo, lo stress e alcuni farmaci (compresi i farmaci) possono stimolare la formazione di radicali liberi e di specie reattive dell'ossigeno.
L’ossigeno è essenziale per la vita. Una diminuzione del contenuto di ossigeno ha un effetto dannoso sulla condizione degli organismi viventi. Ma, d'altra parte, la capacità ossidativa dell'ossigeno ha un effetto dannoso sulle strutture cellulari.
I radicali liberi dell'ossigeno compaiono non solo sotto l'influenza di fattori esterni aggressivi, ma possono anche formarsi come sottoprodotti dell'ossidazione biologica nei tessuti e nelle cellule. I radicali liberi possono provocare lo sviluppo di varie reazioni. La reazione più indesiderabile è l'interazione con i lipidi: la perossidazione. Di conseguenza, si formano perossidi. Con questo meccanismo gli acidi grassi insaturi, componenti delle membrane cellulari, vengono più spesso ossidati. La perossidazione può verificarsi negli oli contenenti acidi grassi insaturi. L'olio acquisisce un sapore amaro: "irrancidisce".
L'ossidazione nei tessuti e nelle cellule è di natura a catena e aumenta come una valanga. Di conseguenza, oltre ai radicali liberi, si formano perossidi lipidici, che si trasformano facilmente in nuovi radicali liberi che reagiscono con tutte le molecole biologiche (lipidi, proteine, DNA).
Il sistema antiossidante è in grado di bloccare le reazioni di ossidazione dei radicali liberi. Gli antiossidanti interagiscono in modo complesso. Alcuni antiossidanti si trovano negli organelli cellulari, altri si trovano extracellularmente (nello spazio intercellulare). Ad esempio, SOD, catalasi, glutatione perossidasi si trovano sia nel citoplasma che nei mitocondri di quegli organelli cellulari dove sono presenti più radicali liberi. Oltre alla protezione antiossidante intracellulare, gli antiossidanti extracellulari forniscono glutanione, vitamine E, C, A, SOD, catalasi, glutanione perossidasi. Il coenzima Q10 (ubichinone) protegge i mitocondri dal danno ossidativo.
Inoltre, anche altri composti biologici hanno proprietà antiossidanti: tocoferoli, carotenoidi, ormoni sessuali femminili, composti tiolici (contenenti zolfo), alcuni complessi proteici, aminoacidi della vitamina K, ecc.
Tuttavia, sotto l'influenza di fattori esterni aggressivi (ad esempio, le radiazioni ultraviolette), il sistema antiossidante della pelle non è sempre in grado di proteggerla. Allora è necessario utilizzare prodotti che potenziano la protezione antiossidante.
Vitamina A (retinolo, retinolo). Il ruolo della vitamina A nella vita del corpo è vario. Il retinolo e i suoi metaboliti retinici (cis- e transaldeide) e l'acido retinolico, gli esteri del retinolo (retinil palmitato, retinil acetato, ecc.) subiscono alcune trasformazioni sotto l'influenza di enzimi specifici.
Lo studio del retinolo iniziò nel 1909 e fu sintetizzato nel 1933 da Paul Karrer. La vitamina A è presente nei prodotti alimentari sotto forma di esteri, nonché sotto forma di provitamine: alfa, beta e gamma caroteni, ecc. (nei prodotti di origine vegetale). Il carotene fu scoperto nel 1931 nelle carote. Il più attivo è il β-carotene.
La vitamina A è ampiamente distribuita. Si trova in prodotti di origine animale, fegato di bovini e suini, tuorlo d'uovo, latte intero, panna acida, fegato di spigola, merluzzo, ippoglosso, ecc.
I caroteni sono anche una fonte di vitamina A (verdure a polpa rossa: carote, pomodori, peperoni, ecc.). La degradazione dei caroteni avviene prevalentemente negli enterociti sotto l'azione di un enzima specifico (β-carotene diossigenasi (non è esclusa la possibilità di una conversione simile nel fegato) in retinale. Sotto l'azione di una specifica reduttasi intestinale, la retina viene ridotta a retinolo.L'assorbimento migliora in presenza di grassi e in presenza di acidi grassi insaturi.La vitamina A ha proprietà immunostimolanti.
Con carenza di vitamina A, insieme ai sintomi generali, si nota un danno specifico alla pelle, alle mucose e agli occhi. C'è un danno all'epitelio cutaneo, accompagnato da proliferazione e cheratinizzazione patologica. Si osserva ipercheratosi, la pelle si desquama intensamente, si formano crepe, compaiono acne, cisti delle ghiandole sebacee e appare un'esacerbazione di infezioni batteriche e micotiche. Si verificano danni alle mucose del tratto gastrointestinale, del sistema genito-urinario e del sistema respiratorio, che interrompono la loro funzione e contribuiscono allo sviluppo di malattie (gastrite, cistite, pielite, laringotracheobronchite, polmonite). Tipici sono i danni al bulbo oculare: xeroftalmia, ridotta acuità visiva, capacità di distinguere gli oggetti al crepuscolo (alterato adattamento all'oscurità); con grave carenza vitaminica, la percezione dei colori può essere compromessa.
La carenza di vitamina A compromette la crescita ossea, poiché la vitamina A è necessaria per la sintesi dei condroitin solfati nelle ossa e in altri tessuti. La vitamina A e i carotenoidi hanno una spiccata proprietà antiossidante grazie alla loro capacità di inibire la perossidazione lipidica.
Carotenoidi - β-carotene (si accumula nelle ovaie, proteggendo le uova dai perossidi), reservatolo (presente nel vino rosso e nelle arachidi - un potente antiossidante), licopene (ha una pronunciata proprietà antiossidante contro le lipoproteine, presenti nei pomodori), ecc. (luteina , zeaxantina, cantaxantina si accumulano nella retina).
Nei cosmetici moderni, un posto speciale è dato ai retinoidi (composti sintetici e naturali simili nell'azione al retinolo). La vitamina A, come notato, regola i processi biochimici nella pelle ed è in grado di influenzare le cellule della pelle (regola i processi di proliferazione, differenziazione e interazioni intercellulari).
Vengono utilizzati i retinoidi, se applicati localmente (in concentrazioni dello 0,001-1% - retin-A, airol, radevit, acido retinoico, differin, ecc.) Aiutano a rinnovare l'epidermide, a normalizzare il funzionamento delle ghiandole sebacee, a ripristinare la matrice dermica nei programmi di trattamento dell'acne e rallentano i processi di invecchiamento
Questi farmaci non devono essere utilizzati contemporaneamente all'assunzione di alcuni farmaci che hanno proprietà fotosensibilizzanti (tetracicline, sulfamidici, tiazidici, ecc.). I farmaci hanno proprietà teratogene e non sono raccomandati per l'uso nelle donne in gravidanza. L'uso dei farmaci di uso generale è descritto nella sezione “Trattamento dell'acne”.
Attività antiossidante della vitamina E.
Vitamina E (tocoferolo acetato, Tocopheroli acetas). Il tocoferolo acetato è un preparato sintetico di vitamina E. L'α-tocoferolo ha la maggiore attività biologica. Sotto il nome di “vitamina E” sono conosciuti anche altri tocoferoli, che sono simili per natura chimica ed effetto biologico. La vitamina E ha una pronunciata proprietà antiossidante. Cattura gli elettroni spaiati delle specie reattive dell'ossigeno, blocca la perossidazione lipidica (cioè inibisce la perossidazione degli acidi grassi insaturi), stabilizzando lo stato delle membrane cellulari. Questa proprietà, che impedisce l'ossidazione degli acidi grassi insaturi, viene utilizzata nei cosmetici e consente di evitare l'irrancidimento dei grassi.
Inoltre, la vitamina E è coinvolta nella biosintesi dell'emoglobina e delle proteine nel sangue, nella divisione cellulare, nella respirazione dei tessuti e in altri processi complessi e importanti. La vitamina E ripristina la vitamina A e il coenzima Q10 (ubichinone). Inoltre, l'effetto della vitamina E è associato all'azione dei microelementi (in particolare il selenio, che fa parte del fosfolipide glutatione perossidasi e della glutatione perossidasi, la cui attività dipende dalla vitamina C).
I tocoferoli si trovano naturalmente nelle parti verdi delle piante, soprattutto nei giovani germogli di cereali; alcuni di essi si trovano nel grasso, nella carne animale, nelle uova, nel latte, nei gamberetti, nei calamari, ecc.
In medicina e cosmetologia vengono utilizzati estratti di cereali, chicchi germogliati e oli vegetali spremuti a freddo. I seguenti oli vegetali sono ricchi di tocoferolo:
· soia (1140 mg/kg);
· cotone (990 mg/kg);
· mais (930 mg/kg);
oliva (130 mg/kg)
e altri (olio di arachidi, olivello spinoso, palma, mandorla, nocciola).
1.4 Sistema antiossidante non enzimatico
I componenti dell'AOS non enzimatico possono essere sostanze a basso peso molecolare che hanno un'elevata costante di velocità per l'interazione con i ROS.
L'AOS non enzimatico comprende composti di diversa struttura e proprietà chimiche: idrosolubili - glutatione, ascorbato, cisteina, ergotioneina e idrofobici - tocoferolo, vitamina A, carotenoidi, ubichinoni, vitamine del gruppo K, che riducono il tasso di formazione di sostanze libere radicali e ridurre la concentrazione dei prodotti di reazione, che si verificano con la partecipazione dei radicali.
L'obiettivo principale dell'azione dell'AO a basso peso molecolare è associato alla protezione di proteine, acidi nucleici, polisaccaridi e biomembrane dalla distruzione ossidativa durante i processi dei radicali liberi. Gli AOS a basso peso molecolare diventano importanti in condizioni di stress ossidativo, quando gli AOS enzimatici risultano meno efficaci rispetto al loro effetto protettivo. Le ragioni di ciò sono la rapida inattivazione del pool costitutivo degli enzimi da parte dei radicali liberi e il notevole tempo necessario per indurne la sintesi.
I lipidi contengono antiossidanti naturali (AO), che influenzano significativamente la velocità della reazione di terminazione della catena di ossidazione. Gli AO idrofobici di tipo fenolico comprendono tre gruppi di sostanze: tocoferoli, ubichinoni e vitamine del gruppo K. Ciascuna di queste sostanze forma un gruppo di composti strutturalmente correlati, tra cui chinoni, chinoli, cromanoli e cromenoli. Nel doppio strato lipidico delle membrane, queste forme possono trasformarsi l'una nell'altra. Ciascun gruppo di antiossidanti naturali è presente nei lipidi prevalentemente in una forma, la più stabile per questi composti: le vitamine del gruppo K sono sotto forma di chinoni, i tocoferoli sono nei lipidi, principalmente nella forma ciclica di 6-idrossicromani, sia nella forma di tocoferolo libero e sotto forma di suoi esteri; per gli ubichinoni la forma chinone è la più stabile. La forma idrochinonica degli ubichinoni è piuttosto instabile e viene ossidata dall'ossigeno atmosferico, ma nelle cellule fino al 70% dell'ubichinone può trovarsi in forma ridotta. Più stabili sono le forme cicliche: gli ubicromenoli, che non partecipano al processo di trasferimento degli elettroni lungo la catena respiratoria. Si presume che questa forma svolga il ruolo di AO nei lipidi.
Una caratteristica dei composti di cui sopra è la presenza nella loro struttura di sostituenti alifatici laterali costituiti da diverse unità isoprenoidi che differiscono nel grado di insaturazione.
La composizione degli antiossidanti naturali contenuti nei lipidi comprende forme fenoliche ridotte che reagiscono attivamente con i radicali lipidici perossidici (ROO) e forme chinoniche ossidate che interagiscono con i radicali alchilici (R). Le vitamine del gruppo K e il tocoferolo hanno un'affinità significativa per i perossiradicali; le costanti di velocità di reazione sono rispettivamente 5,8106 e 4,7106 M-1s-1. Gli ubichinoli e gli ubicromenoli sono 10 volte meno attivi dei tocoferoli. L'elevata affinità degli AO naturali per i radicali perossidici è dovuta alla presenza di gruppi idrossilici labili nelle loro molecole e la lunghezza e il grado di insaturazione delle catene laterali non hanno un effetto significativo.
I chinoni reagiscono facilmente con i radicali alchilici dei lipidi (R), la cui quota nella quantità totale di radicali liberi durante la perossidazione lipidica è elevata, secondo il meccanismo:
R+Q RQ; RQ + R RQR e può inibire efficacemente l'ossidazione.
I chinoni e i loro derivati sono in grado di reagire con i ROS; in particolare, i chinoni sono in grado di legare i radicali anionici superossido coinvolti nell’inizio delle catene di ossidazione dei lipidi dei radicali liberi per formare semichinoni. Allo stesso tempo, si presume che gli ubisemichinoni e gli ubichinoni possano, come il menasemichinone e il menadiolo, reagire con l'ossigeno molecolare per formare radicali anionici superossido.
2. Materiali e metodi di ricerca
2.1 Panoramica generale dei metodi per determinare il contenuto delle vitamine A ed E
Nel campo dello studio delle vitamine si è accumulato materiale enorme e vario che indica che le vitamine sono composti organici di diversa natura chimica necessari per garantire il metabolismo, che è alla base di tutti i processi vitali. A questo proposito, l'interesse per le vitamine non diminuisce nel tempo, ma aumenta ancora di più. Particolarmente importante è lo sviluppo di metodi per determinare le vitamine in vari oggetti al fine di controllarne il contenuto negli alimenti, nei cosmetici e nei medicinali.
Metodi per determinare il contenuto di vitamina A nei prodotti.
Quando si determina quantitativamente la vitamina A nei prodotti alimentari, vengono utilizzati vari metodi: colorimetrico, fluorescente, spettroscopia diretta e HPLC. La scelta del metodo è determinata dalla disponibilità dell'una o dell'altra attrezzatura, dallo scopo dello studio, dalle proprietà del materiale analizzato, dal contenuto previsto di vitamina A e dalla natura delle impurità che l'accompagnano.
L'isolamento della vitamina viene effettuato mediante bollitura con una soluzione alcolica di KOH in ambiente di azoto; e successiva estrazione con etere di petrolio.
1. Per la determinazione quantitativa delle sostanze con attività della vitamina A è possibile utilizzare il metodo della spettrofotometria diretta, basato sulla capacità di questi composti di assorbire selettivamente la luce a diverse lunghezze d'onda nella regione UV dello spettro. L'assorbimento è proporzionale alla concentrazione della sostanza quando misurata a quelle lunghezze d'onda in cui si osserva la caratteristica massima di assorbimento di un dato composto nel solvente utilizzato. Il metodo è il più semplice, veloce e abbastanza specifico. Fornisce risultati affidabili quando si determina la vitamina A in oggetti che non contengono impurità e hanno assorbimento nella stessa regione dello spettro. Se tali impurità sono presenti, il metodo può essere utilizzato in combinazione con una fase di separazione cromatografica.
2. Un metodo fluorescente promettente si basa sulla capacità del retinolo di fluorescere sotto l'influenza dei raggi UV (lunghezza d'onda della luce emozionante 330-360 nm). La massima fluorescenza si osserva nella regione di 480 nm. La determinazione della vitamina A con questo metodo è disturbata dai carotenoidi e dalla vitamina D. Per eliminare l'effetto interferente, viene utilizzata la cromatografia su ossido di alluminio. Lo svantaggio del metodo fluorescente è l'attrezzatura costosa.
3. In precedenza, il metodo colorimetrico più comune per determinare la vitamina A era la reazione con cloruro di antimonio. Viene utilizzata una soluzione di cloruro di antimonio in cloroformio (reagente Carr-Price). Il meccanismo di reazione non è stato stabilito con precisione e si presume che la reazione coinvolga un'impurezza di SbCL5 in SbCl3. Il composto formato nella reazione è colorato di blu. Le misurazioni della densità ottica vengono effettuate ad una lunghezza d'onda di 620 nm per 3-5 secondi. Uno svantaggio significativo del metodo è l'instabilità del colore in via di sviluppo, nonché l'elevata idrolizzabilità di SbCl3. Si supponga che la reazione proceda nel modo seguente:
Questa reazione non è specifica per la vitamina A; i carotenoidi danno una colorazione simile, ma la separazione cromatografica di questi composti consente di eliminare la loro influenza interferente.
La determinazione della vitamina A con i metodi elencati è solitamente preceduta da una fase preparatoria, comprendente l'idrolisi alcalina delle sostanze grasse e l'estrazione del residuo insaponificabile con un solvente organico. Spesso è necessario effettuare la separazione cromatografica dell'estratto.
4. Recentemente, al posto della cromatografia su colonna, si sta utilizzando sempre più spesso l'HPLC, che permette di separare le vitamine liposolubili (A, D, E, K), solitamente presenti contemporaneamente nei prodotti alimentari, e di quantificarle con grande accuratezza. L'HPLC facilita la determinazione di varie forme di vitamine (alcol della vitamina A, suoi isomeri, esteri del retinolo), che è particolarmente necessaria quando si monitora l'aggiunta di vitamine ai prodotti alimentari.
Metodi per determinare il contenuto di vitamina E nei prodotti.
Il gruppo di sostanze sotto il nome generale “vitamina E” comprende derivati del tocolo e del trienolo, che hanno l'attività biologica dell'a-tocoferolo. Oltre all'a-tocoferolo, sono noti altri sette composti correlati con attività biologica. Tutti possono essere trovati nei prodotti. Di conseguenza, la principale difficoltà nell'analisi della vitamina E è che in molti casi è necessario considerare un gruppo di composti che hanno una grande somiglianza chimica, ma allo stesso tempo differiscono nell'attività biologica, che può essere valutata solo con un metodo biologico. Questo è difficile e costoso, quindi i metodi fisico-chimici hanno quasi completamente sostituito quelli biologici.
Le principali fasi della determinazione della vitamina E: preparazione del campione, idrolisi alcalina (saponificazione), estrazione del residuo insaponificabile con solvente organico, separazione della vitamina E dalle sostanze che interferiscono con l'analisi e separazione dei tocoferoli mediante vari tipi di cromatografia, determinazione quantitativa. I tocoferoli sono molto sensibili all'ossidazione in ambiente alcalino, quindi la saponificazione e l'estrazione vengono effettuate in atmosfera di azoto e in presenza di un antiossidante (acido ascorbico). La saponificazione può distruggere le forme insature (tocotrienoli). Pertanto, se è necessario determinare tutte le forme di vitamina E contenute in un prodotto, la saponificazione viene sostituita da altri tipi di lavorazione, ad esempio la cristallizzazione a basse temperature.
1. La maggior parte dei metodi fisico-chimici per la determinazione della vitamina E si basano sull'uso delle proprietà redox dei tocoferoli. Per determinare la quantità di tocoferoli nei prodotti alimentari, la reazione più spesso utilizzata è la riduzione del ferro ferrico a ferro bivalente da parte dei tocoferoli con la formazione di un complesso Fe (2+) colorato con reagenti organici. Il più comunemente usato è 2.2" - dipiridile, con il quale Fe (2+) dà un complesso colorato di rosso (lmax = 500 nm). La reazione non è specifica. Coinvolge anche caroteni, stirene, vitamina A, ecc. Inoltre, l'intensità del colore dipende in modo significativo dal tempo, dalla temperatura, dall'illuminazione. Pertanto, per aumentare la precisione dell'analisi, i tocoferoli vengono prima separati dai composti che interferiscono con la determinazione mediante colonna, cromatografia gas-liquido, HPLC.Quando si determina il valore della vitamina E di prodotti in cui l'a-tocoferolo rappresenta più dell'80% del contenuto totale di tocoferolo (carne, latticini, pesce, ecc.) è spesso limitato a determinare la quantità di tocoferoli.Quando altri tocoferoli (oli vegetali, cereali, prodotti da forno, noci) sono presenti in quantità significative, per separarli viene utilizzata la cromatografia su colonna.
2. Per determinare la quantità di tocoferoli è possibile utilizzare anche il metodo fluorescente. Gli estratti di esano hanno un massimo di fluorescenza nella regione di 325 nm con un'eccitante lunghezza d'onda della luce di 292 nm.
3. Per la determinazione dei singoli tocoferoli, il metodo HPLC è di indubbio interesse, poiché fornisce sia la separazione che l'analisi quantitativa in un unico processo. Il metodo è inoltre caratterizzato da elevata sensibilità e accuratezza. La rilevazione viene effettuata mediante assorbimento o fluorescenza.
2.2 Determinazione del contenuto quantitativo di vitamine A ed E nei frutti di mare
La determinazione del contenuto quantitativo di vitamine A ed E è stata effettuata su campioni di quattro tipi di frutti di mare congelati (gamberetti, polpi, calamari, cozze) e tre tipi di pesce di mare congelato (merluzzo, melù, passera). Sono stati studiati cinque campioni paralleli di ciascun oggetto, in cui è stato determinato il contenuto di vitamine A ed E.
Metodo per determinare il contenuto quantitativo delle vitamine A ed E .
La carne di pesce tritata (campione da 1 g), 1 ml di alcol e 1 ml di acqua distillata vengono posti in provette da centrifuga. Le provette vengono tappate e il contenuto viene miscelato agitando delicatamente. Aggiungere quindi 5 ml di esano e agitare nuovamente. Successivamente centrifugare per 10 minuti a 1500 giri/min.
Per le misurazioni viene utilizzato lo strato di esano chiaramente separato.
Il contenuto di vitamine A ed E è stato determinato utilizzando un analizzatore di fluorato.
La calibrazione del dispositivo Fluorate è stata effettuata misurando i segnali di fluorescenza delle soluzioni preparate. Il monitoraggio della stabilità della caratteristica di calibrazione consiste nel misurare la concentrazione di vitamine in diverse miscele. La calibrazione è considerata stabile se il valore ottenuto della concentrazione di vitamine nella miscela differisce dal valore noto di non più del 10% nell'intervallo 0,5 -2,0 mg/dm 3 e del 20% a concentrazioni inferiori. Se i risultati ottenuti non sono conformi agli standard specificati, il processo di calibrazione deve essere ripetuto.
Il funzionamento del dispositivo si basa su un metodo fluorimetrico per misurare il contenuto di sostanze organiche e inorganiche nella regione spettrale di 250-900 nm (ad esempio, intervallo di vitamina E 300-320 nm). Per l'analisi sono state utilizzate cuvette da 10x20 mm. Mentre si lavora sul fluorato, è necessario selezionare il metodo richiesto dal menu, quindi misurare il segnale di fondo, quindi installare la cuvetta con il campione e avviare il processo di misurazione.
Il filtro per luce di eccitazione E-1 (292 nm) e il filtro per luce di registrazione E-2 (320 nm) vengono utilizzati come filtri luminosi durante la misurazione della vitamina E. Il filtro per la luce di eccitazione A-1 (335 nm) e il filtro per la luce di registrazione A-2 (460 nm) vengono utilizzati come filtri della luce durante l'analisi della vitamina A.
Questo metodo per determinare il contenuto vitaminico è stato scelto per la disponibilità dell'attrezzatura necessaria e la facilità d'uso.
2.3 Determinazione dei coniugati dienici nei frutti di mare
Oltre al fatto che l'attività antiossidante dei frutti di mare può essere giudicata dal contenuto di vitamine A ed E e dal contenuto di coniugati dienici.
I prodotti primari della perossidazione lipidica comprendono endoperossidi ciclici e mono- e idroperossidi alifatici, i cosiddetti lipoperossidi e coniugati dienici.
I radicali liberi o perossidazione lipidica (LPO) sono una reazione a catena autosufficiente, i cui prodotti in quantità moderate sono necessari per l'attuazione di funzioni corporee come il rinnovamento delle membrane biologiche, la fagocitosi, la regolazione della pressione sanguigna, ecc., ma in grandi quantità sono dannosi, perché interrompono la struttura delle membrane cellulari.
Durante l'ossidazione dei radicali liberi dell'acido arachidonico, nella posizione b rispetto al doppio legame avviene un'estrazione di idrogeno, che porta al movimento di questo doppio legame con la formazione di DC.
I coniugati dienici sono metaboliti tossici che hanno un effetto dannoso su lipoproteine, proteine, enzimi e acidi nucleici.
La determinazione dei coniugati dienici presenta un vantaggio significativo per valutare la perossidazione lipidica, poiché riflette lo stadio iniziale dell'ossidazione. Un substrato comune per la determinazione dei coniugati dienici è qualsiasi sostanza contenente acidi grassi polinsaturi.
I coniugati dienici hanno assorbimento nella regione UV (l = 232 nm), un coefficiente di estinzione molare di 2,2 10 5 cm -1 M -1. La preparazione del campione per l'analisi dei coniugati dienici prevede necessariamente l'estrazione dei lipidi con solventi organici.
a) Estrazione dei coniugati dienici dal siero sanguigno o dai tessuti con una miscela eptano-isopropanolo, seguita dalla misurazione della densità ottica nella fase eptano o isopropanolo (l = 232-234 nm).
b) Dall'analisi HPLC si è scoperto che i coniugati dienici formati nel corpo umano sono principalmente rappresentati da isomeri dell'acido linoleico, acido ottodec-9 cis -, trans - dienoico.
In questo lavoro è stato determinato il grado di coniugazione dienica degli acidi grassi superiori insaturi secondo il metodo I.D. Acciaio (1977).
Principio. Il processo di ossidazione perossidica degli acidi grassi polinsaturi è accompagnato dalla riorganizzazione dei doppi legami e dall'emergere di un sistema di strutture dieniche coniugate che hanno un massimo di assorbimento a 232-234 nm con una spalla nella regione di 260-280 nm, corrispondente a chetodieni coniugati.
Reagenti:
1) eptano
2) isopropanolo
3) alcool etilico
Avanzamento dello studio:
Per determinare i coniugati dienici, 300 mg di carne di pesce marino sono stati omogeneizzati con 3 ml di una miscela eptano: isopropano in un rapporto 1:1 e centrifugati per 10 minuti a 6000 giri al minuto. Al surnatante sono stati aggiunti 0,25 ml di acqua. A 0,5 ml di fase eptanica sono stati aggiunti 2,5 ml di alcol etilico. La densità ottica è misurata a l=233 nm rispetto al controllo (eptano: isopropano 1:1).
Durante la perossidazione lipidica, nella fase di formazione dei radicali liberi nelle molecole NLC, appare un sistema di doppi legami coniugati, accompagnato dalla comparsa di un nuovo massimo nello spettro di assorbimento a 233 nm.
La DC è stata calcolata utilizzando la formula:
DK=D233/(E*s)
dove D233 è la densità ottica;
E - coefficiente di estinzione molare, 2,2 * 10 5 cm -1 * M -1 ;
C - concentrazione dei lipidi, mg/ml.
I coniugati dienici sono stati espressi come μmol DC/mg lipide.
3. Risultati e discussioni
Gli esperimenti sono stati condotti utilizzando i metodi selezionati per la determinazione delle vitamine A ed E e dei coniugati dienici, i cui risultati sono presentati nelle figure.
Nota* - P< 0,05 по сравнению с мясом осьминога
Figura 3.1 - Contenuto di vitamina A nei frutti di mare
Sulla base dei dati della Figura 3.1, i campioni di frutti di mare oggetto di studio possono essere organizzati nella seguente sequenza in base all'aumento del contenuto di vitamina A: polpo, calamaro, cozza, gamberetto. Il contenuto di vitamina A nella carne di calamaro è 2,3 volte superiore a quello della carne di polpo, la carne di cozze contiene 4,6 volte più vitamina A e la carne di gamberetti contiene 6,9 volte più vitamina A.
Figura 3.2 - Contenuto di vitamina A nei pesci di mare
Secondo i risultati degli esperimenti sul contenuto quantitativo di vitamina A nella carne di pesce di mare, è chiaro che i campioni studiati contengono quasi la stessa quantità di vitamina A (Fig. 3.2).
Nota* - P< 0,05 по сравнению с мясом осьминога
Figura 3.3- Contenuto di vitamina E nei frutti di mare
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Esperienza 1.Determinazione quantitativa della vitamina C.
Principio del metodo. Il metodo si basa sulla capacità della vitamina C di ridurre il 2,6-diclorofenolindofenolo, che ha un colore rosso in ambiente acido e scolorisce durante la riduzione; in ambiente alcalino il colore è blu. Per proteggere la vitamina C dalla distruzione, la soluzione in esame viene titolata in un mezzo acido con una soluzione alcalina di 2,6-diclorofenolindofenolo fino alla comparsa di una colorazione rosa.
Per calcolare il contenuto di acido ascorbico in prodotti come cavoli, patate, aghi di pino, rosa canina, ecc., utilizzare la formula:
Dove X– contenuto di acido ascorbico in milligrammi per 100 g di prodotto; 0,088 – contenuto di acido ascorbico, mg; UN– risultato della titolazione con soluzione 0,001 N di 2,6-diclorofenolindofenolo, ml; B - volume dell'estratto prelevato per la titolazione, ml; IN - quantità di prodotto prelevato per l'analisi, g; G– quantità totale di estratto, ml; 100 – conversione per 100 g di prodotto.
Conclusione: annotare i risultati dell'esperimento e i dati calcolati.
Esperimento 1.1. Determinazione del contenuto di vitamina C nel cavolo.
L'ordine di lavoro.
Pesare 1 g di cavolo cappuccio, pestarlo in un mortaio con 2 ml di una soluzione di acido cloridrico al 10% (HCl - Acido cloridrico, acido cloridrico, acido cloridrico), aggiungere 8 ml di acqua e filtrare. Misurare 2 ml del filtrato per la titolazione, aggiungere 10 gocce di una soluzione di acido cloridrico al 10% e titolare con 2,6-diclorofenolindofenolo finché il colore rosa persiste per 30 s, in base a questo principio del metodo reazioni. Calcolare il contenuto di acido ascorbico in 100 g di cavolo utilizzando la formula sopra riportata. 100 g di cavolo cappuccio contengono 25-60 mg di acido ascorbico, 100 g di rosa canina 500-1500 mg e aghi di pino 200-400 mg.
Esperimento 1.2. Determinazione del contenuto di vitamina C nelle patate.
L'ordine di lavoro.
Pesare 5 g di patate, pestatele in un mortaio con 20 gocce di una soluzione di acido cloridrico al 10% (in modo che le patate non scuriscano). Aggiungere gradualmente acqua distillata - 15 ml. La massa risultante viene versata in un bicchiere, la malta viene sciacquata con acqua, viene versata su una bacchetta di vetro in un bicchiere e titolata con 0,001 N. soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo fino a un colore rosa, in base a questo principio del metodo reazioni. 100 g di patate contengono 1-5 mg di vitamina C.
Conclusione: annotare i risultati dell'esperimento.
Esperimento 1.3. Determinazione del contenuto di vitamina C nelle urine.
Determinare il contenuto di vitamina C nelle urine dà un'idea delle riserve di questa vitamina nell'organismo, poiché esiste una corrispondenza tra la concentrazione di vitamina C nel sangue e la quantità di questa vitamina escreta nelle urine. Tuttavia, con l'ipovitaminosi C, il contenuto di acido ascorbico nelle urine non è sempre ridotto. Spesso è normale, nonostante la grande carenza di questa vitamina nei tessuti e negli organi.
Nelle persone sane, la somministrazione orale di 100 mg di vitamina C porta rapidamente ad un aumento della sua concentrazione nel sangue e nelle urine. Con l’ipovitaminosi C, i tessuti carenti di vitamina C trattengono la vitamina C ingerita e la sua concentrazione nelle urine non aumenta. L'urina di una persona sana contiene 20-30 mg di vitamina C o 113,55-170,33 µmol/giorno. Nei bambini, il livello di questa vitamina diminuisce con lo scorbuto e con le malattie infettive acute e croniche.
Con uno studio approfondito dei processi di produzione di concentrati alimentari e di essiccazione delle verdure, quando si stabilisce il valore nutrizionale dei prodotti finiti, nonché quando si monitora la produzione di prodotti arricchiti, viene determinato il contenuto delle seguenti vitamine: vitamina C (ascorbico acido), B1 (tiamina), B2 (riboflavina), PP (acidi nicotinici), carotene (provitamina A).
Preparazione dei campioni per la determinazione delle vitamine. I campioni dei prodotti in esame vengono preparati immediatamente prima dell'analisi. Quando si analizzano frutta e verdura fresca, i campioni sotto forma di segmenti longitudinali vengono tagliati da singoli campioni con un coltello in acciaio inossidabile, che vengono rapidamente tritati con un coltello (cavoli, cipolle) o su una grattugia (patate, ortaggi a radice), mescolati accuratamente e dalla massa omogenea risultante viene prelevato un campione di almeno 200 d, che viene immediatamente inviato alla ricerca.
Le bacche fresche e i piccoli frutti succosi non vengono pre-tritati; Dal campione medio, diverse bacche e frutti vengono presi in un barattolo da luoghi diversi, mescolati e viene prelevato un campione per l'analisi. I semi vengono rimossi dai frutti e dalle bacche con i semi, quindi si procede come descritto sopra.
Frutta e verdura secca di almeno 50 g vengono frantumate in un mulino da laboratorio o con le forbici e il materiale tritato risultante viene versato in un barattolo con tappo smerigliato. Dalla massa accuratamente miscelata viene prelevato un campione per l'analisi di laboratorio.
I concentrati alimentari in una quantità di almeno 200 g vengono frantumati in un mulino da laboratorio, miscelati e viene prelevato un campione per l'analisi.
I concentrati di latte alimentare fortificato (in forma di bricchette) di almeno 100 g vengono frantumati e macinati in un mortaio, mescolati accuratamente e viene prelevato un campione per l'analisi.
I prodotti in polvere in una quantità di almeno 50 g vengono accuratamente miscelati prima del campionamento per la ricerca.
Quando si studiano prodotti liquidi, puree e pastosi, i campioni per l'analisi vengono prelevati dopo aver accuratamente miscelato il campione.
Determinazione della vitamina C
La vitamina C, acido l-ascorbico (C6H8O6), si trova negli alimenti in due forme: ridotta e ossidata (acido deidroascorbico).
I metodi chimici quantitativi per determinare l'acido ascorbico si basano sulle sue proprietà riducenti. I principali metodi per determinare il contenuto di acido ascorbico nei farmaci e nei prodotti alimentari sono la titolazione indofenolo o iodometrica. Il reagente indofenolo utilizzato è il 2,6-diclorofenolindofenolo, di colore blu; titolato con acido ascorbico si riduce e diventa un leucocomposto incolore. Il completamento della reazione è giudicato dal colore rosa della soluzione test, causato da un eccesso dell'indicatore, che in ambiente acido assume una colorazione rosa. La quantità di indofenolo utilizzata per la titolazione determina il contenuto di vitamina C nel prodotto. Per la titolazione iodometrica viene utilizzata una soluzione di iodato di potassio, l'amido funge da indicatore.
Quando si determina la vitamina C nei prodotti alimentari, vengono utilizzati metodi di titolazione dell'indofenolo: arbitrato, utilizzando idrogeno solforato e controllo (semplificato). La scelta del metodo dipende dalle proprietà del prodotto in esame e dallo scopo dell'analisi.
Metodo di arbitrato (indofenolo utilizzando idrogeno solforato)
Una porzione pesata del prodotto in esame pari a 10-50 g, a seconda del contenuto atteso di vitamina C, prelevata con una precisione di 0,01 g, viene trasferita quantitativamente utilizzando una soluzione al 5% di acido acetico in un matraccio tarato (o cilindro) e si porta il contenuto del pallone con lo stesso acido a volume 50-100 ml. Quando si analizzano concentrati e frutta e verdura essiccata, un campione di 5-10 g viene macinato in un mortaio con 5-10 g di polvere di vetro o sabbia di quarzo (preliminarmente ripulita dalle impurità di ferro, lavata e calcinata) e con una quantità tre volte superiore di una soluzione al 5% rispetto all'acido acetico campione. Durante la macinazione il prodotto analizzato deve essere completamente ricoperto di acido acetico. L'impasto ben macinato viene lasciato in infusione nel mortaio per 10 minuti, dopodiché il contenuto della malta viene versato in un matraccio tarato (o cilindro) attraverso un imbuto, facendo attenzione a non trasferire sedimenti. Il mortaio, l'imbuto e il bastone vengono sciacquati più volte con una soluzione al 5% di acido acetico, lasciando ogni volta depositare il sedimento. I liquidi di lavaggio vengono versati nella soluzione di prova in un matraccio tarato (o cilindro) e regolati ad un volume di 50-100 ml, a seconda delle dimensioni del campione prelevato e del contenuto previsto di vitamina C. Il contenuto del matraccio tarato o cilindro vengono accuratamente miscelati e centrifugati o filtrati rapidamente attraverso uno strato di cotone idrofilo.
10 ml dell'estratto di acido acetico risultante vengono pipettati in un matraccio, vetro o provetta da centrifuga con una capacità di 60-80 ml e vengono aggiunti in sequenza 0,4 g di carbonato di calcio e 5 ml di una soluzione al 5%, agitando leggermente, per creare il pH richiesto e chiarificare la soluzione di acetato di piombo preparata in una soluzione al 5% di acido acetico. Questa operazione deve essere eseguita con attenzione, poiché l'aggiunta di carbonato di calcio si accompagna a formazione di schiuma. La soluzione viene rapidamente centrifugata o filtrata in un pallone asciutto attraverso un piccolo filtro pieghettato pre-preparato.
Se il filtrato risulta torbido si ripete la chiarifica utilizzando un'altra porzione dell'estratto in acido acetico del prodotto analizzato. Aggiungere una quantità 2, 3 o 4 volte maggiore di carbonato di calcio e una soluzione al 5% di acetato di piombo, quindi filtrare o centrifugare come sopra indicato. Una corrente di idrogeno solforato, ottenuta da un apparecchio Kipp mediante l'azione di acido cloridrico (1:1) o solforico (1:3) diluito su solfuro di ferro, viene fatta passare attraverso il filtrato trasparente per 5-15 minuti. Per far precipitare rapidamente e completamente il solfuro di piombo, la soluzione viene agitata vigorosamente all'inizio del passaggio dell'idrogeno solforato. Il passaggio dell'idrogeno solforato è completo quando lo strato di liquido sopra il precipitato nero di solfuro di piombo diventa trasparente. La soluzione viene filtrata attraverso un piccolo filtro asciutto e senza ceneri in un pallone asciutto e l'idrogeno solforato viene completamente rimosso dal filtrato trasparente utilizzando una corrente di anidride carbonica da un cilindro o apparecchio Kipp caricato con marmo e acido cloridrico diluito (1:1). L'anidride carbonica può essere sostituita con azoto. Il controllo della completezza della rimozione dell'idrogeno solforato viene effettuato utilizzando carta da filtro inumidita con una soluzione di acetato di piombo, che viene portata al collo del pallone; in assenza di idrogeno solforato la carta rimane incolore, l'aspetto di un colore giallo-nero macchia su di esso indica la presenza di idrogeno solforato. Il passaggio dell'idrogeno solforato e del gas inerte deve essere effettuato sotto una cappa aspirante.
Innanzitutto, pipettare nel matraccio 5 ml di una soluzione di acido acetico all'80% e abbastanza acqua distillata in modo che il volume totale di liquido con la soluzione di prova sia di 15 ml. Pipettare quindi da 1 a 10 ml della soluzione chiarificata in esame ottenuta dopo aver eliminato l'idrogeno solforato e titolare 0,001 N da una microburetta o micropipetta. soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo fino alla comparsa di una colorazione rosa, che non scompare entro 30-60 secondi. La titolazione viene effettuata goccia a goccia agitando delicatamente e continuamente la soluzione titolata. La titolazione non dovrebbe durare più di 2 minuti. Dopo aver completato la titolazione è necessario aggiungere altre due gocce di soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo agitando vigorosamente la soluzione; se il colore della soluzione in esame si intensifica, possiamo supporre che la fine della reazione sia stata trovata correttamente, e in questo caso il volume delle gocce indicatrici aggiunte non viene preso in considerazione. Quando si stabilisce la quantità di soluzione di prova necessaria per la titolazione, si deve presumere che per la titolazione non vengano utilizzati più di 2 ml di 0,001 N. Soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo.
La determinazione della vitamina C viene effettuata almeno due volte e i risultati delle titolazioni parallele non devono differire l'uno dall'altro di oltre 0,04 ml. Il contenuto di vitamina C viene calcolato come media aritmetica di 2-3 determinazioni parallele. Nel calcolare i risultati della titolazione è necessario apportare una correzione alla determinazione del controllo: titolazione 0,001 n. una soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo, una miscela di 5 ml di acido acetico all'80% e 10 ml di acqua distillata fino alla comparsa di una colorazione rosa. Questa correzione, solitamente pari a 0,06-0,08 ml per un volume di 15 ml, viene sottratta dalla quantità totale di indicatore utilizzata per la titolazione della soluzione in esame.
dove V è la quantità di 0,001 n. soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo utilizzata per la titolazione, tenendo conto della correzione per la titolazione di controllo, ml; K - fattore di conversione esattamente a 0,001 n. Soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo; V1 è il volume a cui viene portato il campione quando ad esso viene aggiunto il liquido di estrazione, ml; V2 è il volume del liquido analizzato prelevato per la titolazione, ml; V3 è il volume della soluzione o dell'estratto iniziale prelevato per l'analisi dopo l'aggiunta di acetato di piombo, in ml; V4 è il volume della soluzione iniziale o dell'estratto prelevato per l'analisi prima del trattamento con acetato di piombo; g: peso del prodotto, g; 0,088 - la quantità di acido ascorbico corrispondente a 1 ml è esattamente 0,001 n. Soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo.
I test della vitamina C non devono essere eseguiti alla luce solare diretta. La durata dell'analisi non deve essere superiore a 1 ora.
Preparazione 0,001 n. Soluzione indicatrice di 2,6-diclorofenolindofenolo
Agitare 0,25-0,3 g di indicatore in un matraccio tarato da un litro con 600 ml di acqua distillata per 1,5-2 ore (si può lasciare sciogliere per una notte), aggiungere acqua distillata a 1 litro, mescolare bene e filtrare. La soluzione indicatrice è adatta per l'analisi entro 5-10 giorni. Va conservato al buio, in un luogo fresco, preferibilmente in frigorifero.
Il titolo dell'indicatore viene controllato quotidianamente. La comparsa di una tinta sporca durante il controllo del titolo indica che la soluzione indicatrice non è adatta all'analisi.
Determinazione del titolo della soluzione indicatrice - 2,6-diclorofenolindofenolo
Il titolo della soluzione indicatrice può essere impostato in due modi.
Primo modo. A 5 ml di soluzione indicatrice aggiungere 2,5 ml di soluzione satura di ossalato di sodio e titolare con 0,01 N da una microburetta. Soluzione salina di Mohr preparata a 0,02 N. soluzione di acido solforico finché il colore blu scompare e il colore bluastro-verdastro vira al giallo-ambrato. Il titolo della soluzione salina di Mohr è fissato a 0,01 N. soluzione di permanganato di potassio e il titolo di quest'ultimo è 0,01 N. soluzione di ossalato di sodio o acido ossalico secondo metodi generalmente accettati.
La soluzione salina di Mohr rimane adatta all'analisi per 2-3 mesi se conservata in un luogo fresco e buio. Il titolo della soluzione salina di Mohr viene controllato almeno una volta al mese.
Secondo modo. Diversi cristalli di acido ascorbico (circa 1-1,5 mg) vengono sciolti in 50 ml di una soluzione di acido solforico al 2%. 5 ml di questa soluzione, prelevati con una pipetta, vengono titolati con una soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo da una microburetta fino alla comparsa di una colorazione rosa, che non scompare entro 3 minuti. Parallelamente, lo stesso volume (5 ml) di soluzione di acido ascorbico viene titolato da un'altra microburetta esattamente a 0,001 N. una soluzione di acido iodico di potassio (0,3568 g di KJO3, essiccata per 2 ore a 105 ° C, viene sciolta in 1 litro di acqua distillata, la soluzione risultante 0,01 N di KJO3 viene diluita 10 volte in un matraccio tarato con acqua distillata prima dell'analisi ). La titolazione viene effettuata in presenza di numerosi cristalli (1-2 mg) di ioduro di potassio e 2-3 gocce di soluzione di amido all'1% fino alla comparsa di una colorazione blu. Questa titolazione può essere comodamente effettuata in una tazza di porcellana.
Il titolo di una soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo (x) rispetto all'acido ascorbico si calcola utilizzando la formula
dove V è la quantità di 0,001 n. Soluzione KJO3 utilizzata per la titolazione della soluzione di acido ascorbico, ml; V1 è la quantità di soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo utilizzata per la titolazione della soluzione di acido ascorbico, ml; 0,088 - la quantità di acido ascorbico corrispondente a 1 ml è esattamente 0,001 n. Soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo, mg.
Metodo semplificato di controllo per la determinazione della vitamina C
Il metodo viene utilizzato per analisi di massa di frutta e verdura fresca. Permette la determinazione dell'acido ascorbico solo nella sua forma ridotta. La precisione del metodo è ±20%.
Metodo di determinazione. A seconda del contenuto di vitamina C previsto nel prodotto, prelevare un campione di 10-30 g in un bicchiere pesato e versarvi rapidamente 50 ml di una soluzione di acido cloridrico al 4%; i campioni riempiti di acido possono essere conservati per 10-15 minuti. Il campione insieme all'acido viene trasferito in un mortaio di porcellana. Parte dell'acido della malta viene versata in un matraccio o cilindro tarato da 100 ml e il campione con una piccola quantità dell'acido rimanente viene accuratamente macinato. Quindi il contenuto della malta viene trasferito nello stesso cilindro (o pallone) in cui si trova il resto dell'acido cloridrico, lavando il residuo della malta di porcellana con acqua distillata nello stesso matraccio tarato (o cilindro). La soluzione in un matraccio tarato viene portata a volume con acqua distillata. Il contenuto del pallone viene mescolato bene e filtrato rapidamente attraverso una garza o acqua. Da questa soluzione viene prelevato un campione per la titolazione.
Nel caso di prodotti difficili da macinare, aggiungere al campione in un mortaio di porcellana 2-5 g di sabbia di quarzo o polvere di vetro pesata, ben lavata e calcinata. Dopo aver trasferito l'intero contenuto della malta in un matraccio tarato (o cilindro) e portato il volume dell'estratto a 100 ml, si aggiunge all'estratto acqua distillata nella quantità di 0,35 ml per ogni grammo di sabbia prelevato e il l'intero liquido viene nuovamente miscelato bene.
Quando si esamina un materiale liquido, questo viene diluito in un cilindro con una soluzione al 4% di acido cloridrico e acqua distillata in modo che la concentrazione finale di acido cloridrico sia del 2%. L'acido cloridrico può essere sostituito con acido metafosforico o ossalico. Per ottenere un estratto, utilizzare una soluzione al 2% di acido metafosforico preparata in 2 N. soluzione di acido solforico. Innanzitutto, preparare una soluzione al 20% di acido metafosforico in 2 N. soluzione di acido solforico, e prima dell'uso questa soluzione viene diluita 10 volte con 2 N. soluzione di acido solforico.
Un campione del prodotto in esame viene macinato in un mortaio con una soluzione di acido metafosforico al 2% (il campione deve essere ricoperto di acido), quindi viene trasferito in un cilindro graduato. La malta viene lavata più volte con una piccola quantità di soluzione di acido metafosforico, tali soluzioni vengono versate nel cilindro portando il contenuto a 100 ml. La vitamina C nella soluzione di acido metafosforico è stabile per diverse ore. In assenza di acido metafosforico, è possibile utilizzare l'acido ossalico. Un campione del materiale da testare viene macinato rapidamente in un mortaio con 20 ml di una soluzione di acido cloridrico all'1%, quindi il contenuto di un mortaio di porcellana viene trasferito in un cilindro graduato con una capacità di 100 ml e il volume dell'estratto viene misurato. regolato a 100 ml utilizzando una soluzione all'1% di acido ossalico. Dopo agitazione, l'estratto viene filtrato. Per titolazione 0,001 N. Con una soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo non si prelevano più di 5 ml dall'estratto filtrato.
La titolazione e il calcolo del contenuto di vitamina C (in milligrammi per 100 g di prodotto) vengono eseguiti come nel metodo arbitrale. La discrepanza tra i risultati dell'analisi di due campioni paralleli dello stesso prodotto non deve superare il 3-4%.
Metodo per la determinazione della vitamina C negli alimenti secchi solfatati
Il metodo si basa sul fatto che i composti dello zolfo (in ambiente acido) vengono bloccati dalla formaldeide e non interferiscono con la titolazione dell'acido ascorbico.
Una porzione pesata del prodotto essiccato, presa in modo che l'estratto contenga 0,04-0,1 mg di vitamina C, viene macinata in un mortaio con una soluzione al 5% di acido metafosforico. L'estratto viene filtrato e, nel caso di studio di un prodotto non solfatato, titolato a 0,001 N. soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo.
Quando si analizza un prodotto essiccato solfatato, l'estratto metafosforico risultante viene acidificato con una soluzione al 50% di acido solforico e trattato con formaldeide, la cui concentrazione nella soluzione finale dovrebbe essere del 4%. La soluzione viene lasciata riposare per 8 minuti e poi titolata con 0,001 N. Soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo come sopra.
Determinazione del carotene
I metodi per determinare il carotene si basano sulla sua estrazione dai tessuti vegetali con benzina o etere di petrolio e sul successivo rilascio dalle sostanze di accompagnamento mediante cromatografia ad adsorbimento. La determinazione quantitativa del carotene viene effettuata mediante colorimetria delle soluzioni risultanti contenenti carotene. Sono state proposte tre varianti del metodo per la determinazione del carotene.
Metodo di determinazione. Prima opzione. Il carotene viene estratto dal materiale vegetale dopo averlo disidratato con alcool o acetone, quindi le sostanze che sono diventate l'estratto vengono saponificate con una soluzione alcolica alcalina. Il carotene viene nuovamente estratto, il filtrato viene fatto passare attraverso una colonna di adsorbimento e quindi viene determinata l'intensità del colore del filtrato.
Un campione del prodotto frantumato viene prelevato in quantità da 1 a 50 g, a seconda del contenuto di carotene, e macinato in un mortaio di porcellana con una piccola quantità di sabbia lavata e calcinata o vetro frantumato. Aggiungere cinque volte la quantità di alcol o acetone alla massa macinata in un mortaio, macinarla, quindi aggiungere in porzioni 20-30 ml di benzina o etere di petrolio. La miscela viene macinata, l'estratto viene filtrato su filtro di carta; l'estrazione viene ripetuta fino a quando le ultime porzioni dell'estratto diventano incolori.
Si trasferisce il filtrato in un imbuto separatore, si aggiungono alcuni millilitri di acqua distillata per separare gli strati: quello superiore è benzina, quello inferiore è alcool o acetone. Lo strato di alcol o acetone viene versato in un altro imbuto separatore e lavato 2 volte con benzina o etere di petrolio, aggiungendo questi estratti al filtrato principale. Gli estratti riuniti vengono trasferiti in un pallone e concentrati ad un volume di 20-30 ml a bagnomaria ad una temperatura non superiore a 50°C sotto vuoto. Un volume approssimativamente uguale di alcali alcolici al 5% viene aggiunto all'estratto e saponificato per 30 minuti-1 ora in un bagnomaria a riflusso mentre la soluzione bolle. Si trasferisce la soluzione saponificata in un imbuto separatore, si aggiungono alcuni millilitri di acqua, si agita e si separa lo strato di benzina, che viene poi lavato 8-10 volte con acqua distillata. L'estratto di benzina viene trasferito in un pallone ed essiccato con solfato di sodio anidro agitando fino a scomparsa della torbidità della soluzione, quindi filtrato e concentrato ad un volume di 5-10 ml, come sopra indicato. L'estratto condensato viene fatto passare a bassa pressione attraverso una colonna di adsorbimento riempita con ossido di magnesio o ossido di alluminio. Il carotene adsorbito sulla colonna viene eluito (sciolto) con etere o benzina, facendoli passare attraverso l'adsorbente fino a quando il liquido emergente dalla colonna diventa incolore.
Il filtrato risultante viene raccolto in un matraccio tarato, il volume del liquido viene regolato al livello con etere di petrolio o benzina e colorimetro in un colorimetro Dubosque o su un fotoelettrocolorimetro, utilizzando per confronto una soluzione standard di azobenzene o dicromato di potassio.
Seconda opzione. Innanzitutto viene effettuata la saponificazione della sostanza in esame, quindi l'estrazione, l'adsorbimento e la colorimetria del carotene. Una parte pesata della sostanza frantumata (da 1 a 50 g), macinata in un mortaio, viene trasferita in un pallone, si aggiungono 20-40 ml di alcool alcalino al 5%, saponificato per 30 min-1 h e quindi si procede nella allo stesso modo del primo metodo.
Terza opzione (semplificata). Con questo metodo si elimina la saponificazione e tutte le altre fasi di analisi sono le stesse del primo metodo.
Gli estratti risultanti vengono lavati con acqua, essiccati su solfato di sodio anidro, concentrati a piccoli volumi, fatti passare attraverso una colonna con un adsorbente e colorimetricati.
Quando si determina il carotene nelle carote si può escludere l'uso di una colonna di adsorbimento, poiché le carote contengono una piccola quantità di altri carotenoidi, che hanno praticamente poco effetto sul risultato della determinazione. L'analisi secondo la terza opzione viene eseguita nei casi in cui i risultati della determinazione del carotene coincidono con i risultati ottenuti lavorando secondo la prima opzione. Determinazione del carotene nel materiale vegetale secco (verdura, frutta, bacche e altri prodotti). Si preleva un campione della sostanza frantumata da 2 a 10 g, si estrae il carotene con benzina o etere di petrolio senza pretrattamento con alcool. Gli estratti risultanti vengono concentrati ad un volume di 20-30 ml e saponificati con una soluzione alcolica di KOH. Successivamente, l'analisi viene eseguita come indicato nella prima opzione.
Calcolo del contenuto di carotene. Quando si utilizza un colorimetro Duboscq e soluzioni standard di azobenzene o bicromato di potassio per la colorimetria, il contenuto di carotene (x) in mg% nel prodotto in esame viene calcolato utilizzando la formula
dove K è il fattore di conversione (la quantità di carotene in milligrammi corrispondente a 1 ml di una soluzione standard di azobenzene è 0,00235 oppure una soluzione standard di bicromato di potassio è 0,00208); H - lettura scala soluzione standard, mm; H1 - lettura della scala della soluzione di prova, mm; g - porzione pesata del prodotto in esame, g; V è il volume del filtrato dopo l'adsorbimento cromatografico, ml.
Quando si utilizza un elettrofotocolorimetro, utilizzare la seguente formula:
dove H2 è la lettura della scala reocorda della soluzione standard; H1 - lo stesso per la soluzione di prova. Le restanti notazioni sono le stesse della formula precedente.
Preparazione di soluzioni standard
Soluzione di azobenzene. 14,5 mg di azobenzene cristallino chimicamente puro vengono sciolti in 100 ml di alcool etilico al 96%.
Soluzione di bicromato di potassio. 360 mg di bicromato di potassio tre volte ricristallizzato vengono sciolti in 1 litro di acqua distillata.
Preparazione della colonna di adsorbimento
Per una colonna di adsorbimento viene utilizzato un tubo di vetro lungo 12-15 cm, con un diametro di 1-1,5 cm, ristretto verso il basso. Il tubo viene inserito attraverso il tappo in una beuta Bunsen. Nella parte inferiore del tubo di adsorbimento viene posizionato un batuffolo di cotone, quindi l'adsorbente: ossido di magnesio o ossido di alluminio. Per fare questo, preparare una sospensione da adsorbente e benzina o etere di petrolio. La colonna viene riempita per 4-6 cm con pappa e lavata con piccole porzioni di solvente, evitando la formazione di bolle d'aria.
Determinazione della vitamina B1
La vitamina B1 (tiamina, aneurina) si trova nei prodotti naturali sia in forma libera che legata. Nel primo caso si tratta di tiamina libera o del suo cloruro - cloridrato (C12H18O4Cl2); allo stato legato è un estere pirofosfato di tiamina combinato con un trasportatore proteico, cioè è un coenzima carbossilasi. Il metodo per determinare la vitamina B1 si basa sulla capacità della tiamina di essere ossidata in tiocromo dal ferricianuro di potassio in un mezzo alcalino e sulla proprietà del tiocromo risultante di produrre fluorescenza blu quando illuminato dai raggi ultravioletti. Durante l'analisi, il tiocromo viene estratto da una soluzione acquoso-alcalina con alcol isobutilico, butilico o isoamilico, separandolo così dalle impurità fluorescenti e da altre impurità indesiderate insolubili in questi alcoli.
Il contenuto di tiamina nella sostanza in esame viene determinato eseguendo una determinazione comparativa dell'intensità della fluorescenza delle soluzioni in esame e standard su un fluorimetro. Il metodo descritto è applicabile per determinare non solo il contenuto di tiamina libera, ma anche il contenuto di tiamina totale. In questo caso, la forma legata di tiamina viene prima sottoposta a scissione con un preparato enzimatico contenente una fosfatasi.
Metodo fluorometrico per la determinazione della vitamina B1. Un campione del prodotto in esame nella quantità di 5-10 g, posto in un mortaio, viene accuratamente macinato con 10-25 ml di 0,1 N. soluzione di acido solforico e trasferita quantitativamente nel pallone utilizzando la stessa soluzione acida; Il volume totale del liquido nel pallone viene regolato a circa 75 ml. Il pallone viene tappato con un condensatore a riflusso (aria), immerso in un bagno di acqua bollente, e la tiamina viene estratta per 45 minuti con agitazione periodica del contenuto. Nel caso della determinazione della tiamina libera, l'estratto risultante viene raffreddato, una soluzione 2,5 molare di acetato di sodio viene aggiunta a pH 5,0, il volume viene regolato a 100 ml con acqua distillata, miscelato, filtrato e 10-20 ml della soluzione viene preso per ulteriori analisi.
Quando si determina il contenuto totale di tiamina, l'estratto viene raffreddato a 35-40 ° C e ad esso viene aggiunto un preparato enzimatico, che nella quantità di 0,03 g per 1 g di sostanza secca del campione viene premacinato in un mortaio con 2-3 ml di una soluzione 2,5 molare di acetato di sodio, quindi la sospensione risultante del farmaco viene trasferita in un pallone utilizzando 2-3 ml di soluzione di acetato di sodio e con la stessa soluzione si regola il pH dell'estratto a 5,0.
Dopo aver aggiunto il preparato enzimatico, il pallone con l'estratto viene chiuso con un tampone di cotone e posto in un termostato per 12-15 ore ad una temperatura di 37 ° C. Quindi il contenuto del pallone viene raffreddato, il volume viene regolato a 100 ml con acqua distillata, miscelata e filtrata. L'ulteriore determinazione della tiamina libera e del suo contenuto totale viene effettuata allo stesso modo.
10-20 ml del filtrato vengono fatti passare attraverso una colonna di adsorbimento per adsorbire la tiamina. A tale scopo viene utilizzato un tubo di vetro (Fig. 25), avente le seguenti dimensioni: nella parte superiore - un diametro di 25 mm e una lunghezza di 90 mm, nella parte centrale - un diametro di 7 mm e una lunghezza di 150 mm, e nella parte inferiore - un diametro di 5 mm (diametro interno 0,03-1,0 mm) e una lunghezza di 30 mm. La lana di vetro viene posizionata nella parte centrale del tubo e sopra viene versato l'adsorbente; per lo scambiatore cationico ODV-3, l'altezza della colonna deve essere di circa 8 cm La colonna preparata per l'uso è montata su un tappo in un cilindro graduato con una capacità di 100 ml. L'adsorbente viene lavato con 10 ml di una soluzione di acido acetico al 3% e la soluzione in esame viene fatta passare attraverso la colonna. Quindi l'adsorbente viene lavato 3 volte con 10 ml di acqua distillata e la tiamina viene eluita dall'adsorbente con una soluzione al 25% di cloruro di potassio in 0,1 N riscaldata all'ebollizione. soluzione di acido cloridrico in porzioni di 6-7 ml. L'eluato viene raccolto in un cilindro graduato pulito fino ad un volume di 30 ml.
Si pipettano 5 ml della soluzione risultante in due piccoli imbuti separatori; Nel primo imbuto vengono aggiunti 3 ml di una miscela per l'ossidazione della tiamina (soluzione allo 0,4% di ferricianuro di potassio in soluzione di idrossido di sodio al 15%), miscelati e vengono aggiunti 12 ml di alcol isobutilico (butile o isoamilico) per estrarre il tiocromo formato. Aggiungere 3 ml di soluzione di idrossido di sodio al 15% nel secondo imbuto (campione di controllo), mescolare e aggiungere 12 ml di alcol isobutilico. Entrambi gli imbuti vengono agitati per 2 minuti, la miscela viene lasciata sola fino alla completa separazione, lo strato acquoso-alcalino inferiore viene separato e lo strato alcolico viene filtrato attraverso un filtro di carta, nel quale vengono prima posti 2-3 g di solfato di sodio anidro ; Il filtrato limpido viene raccolto in una provetta asciutta, da dove viene trasferito nella cuvetta del fluorimetro. La soluzione alcolica può anche essere disidratata con solfato di sodio direttamente in un imbuto separatore; dopo aver aggiunto circa 2 g del reagente, la miscela viene agitata e la soluzione disidratata viene filtrata attraverso un filtro di carta in una provetta asciutta.
Una soluzione di tiocromo da una soluzione standard di tiamina viene preparata come segue: aggiungere 1 ml di una soluzione contenente 1 μg di tiamina in due imbuti separatori con una pipetta graduata, aggiungere 4 ml di una soluzione al 25% di cloruro di potassio e quindi aggiungere 3 ml della miscela per l'ossidazione in un imbuto e nel secondo (campione di controllo) - 3 ml di soluzione di idrossido di sodio al 15%. Il contenuto degli imbuti viene miscelato e in ciascun imbuto vengono aggiunti 12 ml di alcol isobutilico. Procedere quindi come sopra descritto.
L'intensità della fluorescenza delle soluzioni alcoliche preparate viene determinata su un fluorimetro (Fig. 26) con speciali filtri luminosi utilizzando un galvanometro sensibile. L'intensità della fluorescenza viene misurata in quattro soluzioni: in due soluzioni test (controllo ossidato e non ossidato) e in due soluzioni standard (controllo ossidato e non ossidato). Ad ogni cuvetta vengono aggiunti circa 8 ml di soluzione isobutile.
dove A è la lettura del fluorimetro per la soluzione ossidata testata; B - lettura del fluorimetro per la soluzione non ossidata testata; A1 - lettura del fluorimetro per una soluzione ossidata standard; B1 - lettura del fluorimetro per una soluzione standard non ossidata; g - porzione pesata del prodotto in esame, g; V1 - volume totale dell'estratto, ml; V2 è il volume dell'estratto prelevato per l'adsorbimento, ml; V3 - volume totale dell'eluato, ml; V4 - volume dell'eluato prelevato per l'ossidazione, ml; 1000 - fattore di conversione, mg.
Preparazione di reagenti e preparati di base
1. Soluzione standard di tiamina. 10 mg di cloruro di tiamina cristallino vengono sciolti in 0,001 N. Una soluzione alcolica al 25% di acido cloridrico in un matraccio tarato da 100 ml. La soluzione non cambia per 1-1,5 mesi se conservata in una bottiglia scura in un luogo fresco. Per preparare la soluzione di lavoro, aggiungere in un matraccio da 100 ml 1 ml della soluzione standard e diluire fino a volume con acqua distillata; la soluzione viene preparata prima dell'analisi; contiene 1 mcg di tiamina in 1 ml.
2. Soluzione 2,5 molare di acetato di sodio. 340 g di acetato di sodio vengono sciolti in acqua distillata e il volume viene portato a 1 litro.
3. Soluzione al 25% di cloruro di potassio. Si sciolgono 250 g di cloruro di potassio in acqua distillata, si aggiungono 8,5 ml di acido cloridrico concentrato e si porta il volume a 1 litro con acqua.
4. Miscela per ossidazione - soluzione allo 0,04% di ferricianuro di potassio in soluzione al 15% di idrossido di sodio. La miscela viene preparata prima dell'analisi mescolando 4 ml di soluzione all'1% di ferricianuro di potassio appena preparata con 96 ml di soluzione di idrossido di sodio al 15%.
5. Preparati enzimatici a base di Penicillium notatum o Aspergillus oryza.
6. Scambiatore cationico adsorbente SDV-3. Lo scambiatore cationico viene frantumato ad una dimensione delle particelle compresa tra 0,5 e 0,13 mm in una quantità pari al 70% e inferiore a 0,13 mm - 30%. Per eliminare le impurità di ferro trattare tre volte con acido cloridrico al 10% per 2 ore ciascuna a 40-60°C, lavare con acqua distillata fino a scomparsa della reazione al cloro ed attivare mediante essiccazione a temperatura non superiore a 60-70°C .
Determinazione della vitamina B2
La vitamina B2 (riboflavina) C17H20N4O6 si trova negli alimenti naturali sia allo stato libero che legato. Sono note tre forme di riboflavina legata: flavina mononucleotide, flavina adenina dinucleotide e una terza forma strettamente legata alle proteine.
Il metodo per determinare la vitamina B2 si basa sulla proprietà delle soluzioni acquose di riboflavina di produrre un'intensa fluorescenza giallo-verde alla luce ultravioletta. Quando si determina il contenuto totale di vitamina B2 con il metodo fluorimetrico, le forme legate alla riboflavina vengono trasferite allo stato libero mediante idrolisi enzimatica e acida. Durante l'analisi, gli estratti di prodotti naturali vengono trattati successivamente con permanganato e idrosolfito di sodio per ridurre la quantità di impurità fluorescenti. Successivamente, in un campione separato, viene determinata l'intensità della fluorescenza aspecifica, che dipende solo dalle impurezze rimanenti; in questo campione, la riboflavina viene prima ridotta in una forma leuco incolore e quindi “spegne” la sua fluorescenza. Quando si calcola il contenuto di vitamina B2 nel prodotto in esame, i dati sulla fluorescenza non specifica vengono inseriti come correzione del risultato della determinazione della fluorescenza generale.
Determinazione del contenuto totale di vitamina B2. Un campione del prodotto (5-10 g) viene macinato accuratamente in un mortaio con una piccola quantità di tampone fosfato (pH 7,8-8,0), quindi trasferito in un pallone utilizzando la stessa soluzione tampone, portando la diluizione totale ad un rapporto di 1:15 o 1:20. Il pallone con il contenuto viene riscaldato a bagnomaria bollente per 45 minuti sotto agitazione frequente, raffreddato a 30 ° C, il valore del pH viene controllato e, in caso di passaggio alla zona acida, il pH viene nuovamente regolato a 7,8- 8.0 aggiungendo un tampone fosfato. All'estratto viene aggiunto un preparato enzimatico (tripsina, pancreatina o un preparato di penicillium notatum) in una quantità di 30 mg per 1 g di sostanza secca del campione, che viene premacinato in un mortaio con 2-3 ml di fosfato tampone o acetato di sodio. La cappa viene mantenuta in termostato a 37° C per 12-20 ore; Durante l'idrolisi enzimatica, la forma di riboflavina strettamente legata alle proteine viene scissa. Dopo raffreddamento, l'estratto viene portato ad un volume corrispondente ad una diluizione totale di 1:25 o 1:30 con acqua distillata e filtrato su filtro pieghettato.
Aggiungere 5 ml di filtrato in un matraccio, aggiungere 5 ml di acido tricloroacetico al 20% e scaldare a bagnomaria bollente per 10 minuti. La soluzione viene raffreddata e viene aggiunto 1/4 di volume di una soluzione 4 molare di fosfato dipotassico per regolare il pH a 6,0. Quindi all'estratto viene aggiunta goccia a goccia una soluzione di permanganato al 4% per ossidare le impurità fluorescenti; la soluzione di permanganato viene solitamente aggiunta in una quantità di 0,2-0,4 ml fino alla comparsa di un colore rossastro persistente dell'estratto.
Si lascia riposare l'estratto trattato con permanganato per 10 minuti, quindi si aggiunge goccia a goccia una soluzione di acqua ossigenata al 3% fino alla scomparsa del colore; Quando si aggiunge il perossido di idrogeno, l'estratto viene agitato continuamente. All'estratto vengono aggiunti 0,2 ml di una soluzione di lavoro di cloruro stannoso e 0,1 ml di una soluzione al 2,5% di idrosolfito di sodio per ripristinare le impurità fluorescenti. L'estratto viene agitato vigorosamente per 20 minuti per convertire la riboflavina ridotta in modo reversibile in una forma ossidata fluorescente. Si porta il volume dell'estratto a 15 ml con acqua; se vi è torbidità si filtra la soluzione. Nell'estratto preparato, l'intensità della fluorescenza viene determinata confrontandola con l'intensità della fluorescenza della soluzione di lavoro standard di riboflavina. Per fare ciò, l'estratto e la soluzione di lavoro di riboflavina (vedi sotto “preparazione dei reagenti”) vengono versati in cuvette da 8-10 ml di un fluorimetro e l'intensità della fluorescenza viene misurata su una scala galvanometrica. Successivamente aggiungere 0,1 g di carbonato acido di sodio e 0,1 g di idrosolfito in entrambe le cuvette, mescolare il contenuto delle cuvette e misurare nuovamente l'intensità della fluorescenza. In una soluzione standard di riboflavina, la fluorescenza viene ridotta a zero e nell'estratto in esame rimane una leggera fluorescenza, dovuta alla presenza di impurità fluorescenti che non vengono completamente rimosse quando l'estratto viene trattato con i reagenti sopra indicati. Per garantire la completa estinzione della fluorescenza della riboflavina, ai campioni vengono aggiunti 0,1 g di idrosolfito e l'intensità della fluorescenza viene nuovamente misurata. Quando è completamente smorzato, le letture del galvanometro non dovrebbero cambiare. Il contenuto di riboflavina in microgrammi per 1 g di sostanze (x) viene calcolato utilizzando la formula
dove A è la lettura del fluorimetro per la soluzione in esame (prima lettura); B - lettura del fluorimetro per la soluzione di prova dopo lo spegnimento (seconda lettura); C - lettura del fluorimetro per una soluzione standard contenente 0,4 μg di riboflavina in 1 ml; 0,4 - concentrazione della soluzione standard, μg; g: peso del prodotto, g; V - volume della diluizione totale, ml.
Preparazione dei reagenti basici
1. Soluzione standard di riboflavina. Un campione di 10 mg di riboflavina viene sciolto in acqua distillata in un matraccio tarato da 250 ml. 1 ml di questa soluzione contiene 40 mcg di riboflavina. La soluzione non cambia per 1 mese se conservata in condizioni fredde e buie. Prima della determinazione, preparare una soluzione di lavoro, per la quale in un matraccio tarato da 100 ml vengono aggiunti 37,5 ml di una soluzione al 20% di acido tricloroacetico, 25 ml di una soluzione 4 molare di fosfato dipotassico, 1 ml di una soluzione standard di riboflavina e portato a segno con acqua. 1 ml di soluzione di lavoro contiene 0,4 μg di riboflavina.
2. Miscela di tampone fosfato (pH 7,8-8,0). Preparare una soluzione 1/15 molare di fosfato di sodio bibasico (11,876 g di Na2HPO4-2H2O ricristallizzato in 1 litro di acqua) e una soluzione 1/15 molare di fosfato di potassio monosostituito (9,078 g di KH2PO4 ricristallizzato in 1 litro di acqua). Mescolare 9,5 parti della prima soluzione e 0,5 parti della seconda soluzione.
3. Soluzione di cloruro stannoso. 10 g di cloruro di stagno (SnCl2) vengono sciolti in 25 ml di acido cloridrico concentrato. La soluzione madre risultante viene conservata in una bottiglia scura con tappo smerigliato a temperatura ambiente. Prima di ogni determinazione, preparare una soluzione di lavoro diluendo 0,2 ml della soluzione madre con acqua fino a 100 ml.
4. Soluzione di idrosolfito di sodio. 0,25 g di Na2S2O4-2H2O vengono sciolti in 10 ml di soluzione di bicarbonato di sodio al 2%. La soluzione viene preparata prima dell'uso.
5. Preparati enzimatici: trypsin, pancreatina o preparati enzimatici da penicillium notatum.
Determinazione dell'acido nicotinico (vitamina PP)
Nei prodotti naturali la vitamina PP (acido nicotinico) si trova in forma libera e legata: come acido nicotinico C6H5O2N o la sua ammide C6H6ON2. Per la determinazione dell'acido nicotinico, che si basa sull'interazione dell'acido nicotinico con il bromuro o il cianuro di tiocianato. Il composto risultante in presenza di ammine aromatiche (anilina, metolo) in ambiente neutro o leggermente acido dà un derivato colorato di giallo. L'intensità del colore delle soluzioni di prova è direttamente proporzionale alla quantità di acido nicotinico e viene misurata colorimetricamente.
Metodo di determinazione. Un campione del prodotto di prova frantumato viene prelevato in una quantità di 5 g, trasferito in un matraccio tarato da 100 ml e vengono aggiunti 75 ml di 2-N. soluzione di acido solforico, lavando l'imbuto e il collo del pallone con una soluzione di questo acido. Il contenuto del pallone viene agitato vigorosamente. Il pallone viene posto in un bagnomaria bollente e il contenuto viene riscaldato per 90 minuti con agitazione occasionale. Successivamente si raffredda il pallone, si porta a volume la miscela con acqua distillata, si mescola accuratamente e si filtra su filtro di carta. (L'idrolizzato risultante può essere lasciato al freddo fino al giorno successivo).
Prelevare 25 ml del filtrato, porli in un matraccio tarato da 50 ml, aggiungere una goccia di fenolftaleina ed aggiungere 10 N. soluzione di idrossido di sodio fino ad ottenere un colore rosa tenue (circa 4 ml). Gli alcali in eccesso si eliminano con 1-2 gocce di 5 N. acido solforico (fino alla scomparsa del colore rosa). Se la soluzione viene riscaldata, raffreddarla, quindi aggiungere 2 ml di soluzione di solfato di zinco e 1-2 gocce di alcol isoamilico (per eliminare la schiuma). Quindi, sotto agitazione, aggiungere goccia a goccia una soluzione di 4 N. soda caustica fino alla formazione di uno spesso precipitato di idrossido di zinco. La precipitazione si completa aggiungendo una soluzione di 1 N. soda caustica finché non appare un colore rosa pallido. Aggiungere nel pallone 1-2 gocce di 5 N. acido solforico (fino alla scomparsa del colore rosa) e lasciare riposare per 10 minuti agitando di tanto in tanto. La miscela nel pallone viene portata a 50 ml con acqua distillata, agitata e filtrata su filtro di carta. Il filtrato risultante viene utilizzato per eseguire reazioni cromatiche; a questo scopo vengono utilizzate speciali provette con tappo smerigliato, che vengono inserite in un supporto rotondo. Allo stesso tempo, quando si eseguono reazioni cromatiche delle soluzioni di prova, operazioni simili vengono ripetute con soluzioni standard di acido nicotinico. Allo stesso tempo viene effettuato un controllo sui reagenti per le soluzioni standard e sulle ammine per i soggetti del test.
L'elenco delle soluzioni utilizzate nell'analisi è riportato nella tabella. 5.
Per eseguire le reazioni cromatiche, 5 ml di una soluzione standard di acido nicotinico vengono versati in due provette (determinazioni parallele) e 5 ml di acqua distillata vengono versati in due provette, quindi 5 ml della soluzione di prova vengono versati in quattro altre provette. Tutte le provette poste in un rack vengono immerse in un bagno alla temperatura di 50°C per 5 minuti, dopodiché vengono aggiunti 2 ml di soluzione di bromuro di rodano sotto il tiraggio della buretta secondo la tabella. 5 (escluso il controllo per le ammine). Il liquido nelle provette viene miscelato e lasciato a bagno per 10 minuti alla temperatura di 50 ° C. Le provette vengono raffreddate in acqua fredda a temperatura ambiente, poste in una scatola di legno con nidi per provette, la scatola è chiuso con un coperchio e lasciato riposare in un luogo buio per 10 minuti. Aggiungere 3 ml di soluzione di metolo nelle provette, mescolare il contenuto e lasciare in una scatola chiusa per 1 ora in un luogo buio.
Dopo un'ora, le soluzioni risultanti vengono colorimetrizzate utilizzando un fotoelettrocolorimetro utilizzando un filtro blu in una cuvetta con uno spessore dello strato di 10 mm. Il contenuto di acido nicotinico viene calcolato come segue. Impostare le densità ottiche delle soluzioni test (n) e standard (n1), tenendo conto delle correzioni per il controllo
dove A è la densità ottica della soluzione in esame; A1 - lo stesso, standard; B è la densità ottica della soluzione di controllo per le ammine; B1 - densità ottica della soluzione di controllo per reagenti.
In futuro, per calcolare il contenuto di acido nicotinico in mg% (x), utilizzare la seguente formula:
dove G è il contenuto di acido nicotinico in 1 ml di soluzione standard, mg; n è la densità ottica della soluzione di prova tenendo conto della soluzione di controllo; n1 è la densità ottica della soluzione standard tenendo conto della soluzione di controllo; g - peso, g; V è il volume totale dell'idrolizzato, ml; V1 - volume di idrolizzato prelevato per la purificazione con solfato di zinco, ml; V2 è il volume finale della soluzione dopo l'aggiunta di solfato di zinco, ml.
Preparazione dei reagenti
1. Soluzione standard di acido nicotinico (basica). In un pallone da 500 ml si mettono 500 mg di acido nicotinico, si aggiungono 5 ml di 10 N. H2SO4 e, quando i cristalli si sciolgono, portare a volume con acqua distillata. 1 ml di questa soluzione contiene 1000 mcg di acido nicotinico. La soluzione è adatta per 1 anno se conservata in condizioni fredde.
2. Soluzione standard: funzionante. 5 ml della soluzione standard basica vengono diluiti a 1 litro con acqua distillata. 1 ml di questa soluzione contiene 5 mcg di acido nicotinico (la soluzione viene preparata quotidianamente).
3. Soluzione di bromuro di rodano (preparare prima dell'uso). Preparare l'acqua di bromo aggiungendo bromo all'acqua distillata finché le gocce di bromo non smettono di dissolversi. All'acqua bromo raffreddata con ghiaccio, prelevata nella quantità necessaria per l'analisi, aggiungere goccia a goccia una soluzione al 10% di tiocianato di potassio o ammonio fino a quando diventa giallo chiaro, quindi una soluzione all'1% degli stessi reagenti fino a quando l'acqua bromo non diventa completamente scolorita. Aggiungere gradualmente, in piccole porzioni, 20-50 mg di carbonato di calcio fino a quando non cessa l'emissione di bolle e la formazione di torbidità. La soluzione viene filtrata in una bottiglia di vetro scuro con tappo smerigliato e conservata al freddo.
4. Soluzione di metolo all'8% (preparare prima dell'uso). 8 g di metolo ricristallizzato vengono sciolti in 0,5 N. Soluzione di HCl e trasferita in un cilindro o matraccio graduato da 100 ml, la soluzione viene portata alla tacca 0,5 N. HCl.
Ricristallizzazione del metolo. 500 ml 0,1 n. Si porta H2SO4 all'ebollizione, alla soluzione bollente si aggiungono 100 g di metolo premiscelato con 0,7 g di NaHSO3; la miscela viene riscaldata a ebollizione. Se la soluzione è fortemente colorata aggiungere 10 g di carbone attivo. La miscela viene immediatamente trasferita in un imbuto Buchner preriscaldato e filtrata. Si trasferisce il filtrato in un bicchiere, si aggiungono 0,3 g di bisolfito di sodio e 700 ml di alcool al 96%; mescolare il tutto, immergere in acqua ghiacciata e lasciare in un luogo buio per diverse ore. I cristalli precipitati di metolo vengono filtrati attraverso un imbuto Buchner, lavati sull'imbuto con alcool al 96% da un flacone spray ed essiccati all'aria al buio. Il metolo ricristallizzato viene conservato in un luogo buio in una bottiglia di vetro scuro con tappo smerigliato.
Le sostanze alimentari essenziali, raggruppate sotto il nome generico di “vitamine”, appartengono a diverse classi di composti chimici, il che di per sé esclude la possibilità di utilizzare un unico metodo per la loro determinazione quantitativa. Tutti i metodi analitici noti per le vitamine si basano o sulla determinazione delle proprietà biologiche specifiche di queste sostanze (biologiche, microbiologiche, enzimatiche), o sull'uso delle loro caratteristiche fisico-chimiche (metodi fluorescenti, cromatografici e spettrofotometrici), o sulla capacità di alcune vitamine reagire con alcuni reagenti con formazione di composti colorati (metodi colorimetrici).
Nonostante i progressi compiuti nel campo della chimica analitica e applicata, i metodi per determinare le vitamine nei prodotti alimentari richiedono ancora molto tempo e manodopera. Ciò è dovuto a una serie di ragioni oggettive, le principali sono le seguenti.
1. La determinazione di un certo numero di vitamine è spesso complicata dal fatto che molte di esse si trovano in natura allo stato legato sotto forma di complessi con proteine o peptidi, nonché sotto forma di esteri del fosforo. Per la determinazione quantitativa è necessario distruggere questi complessi e isolare le vitamine in forma libera, accessibile per l'analisi fisico-chimica o microbiologica. Ciò si ottiene solitamente utilizzando condizioni di lavorazione speciali (idrolisi acida, alcalina o enzimatica, autoclavaggio).
2. Quasi tutte le vitamine sono composti molto instabili, facilmente soggetti a ossidazione, isomerizzazione e completa distruzione sotto l'influenza di alte temperature, ossigeno atmosferico, luce e altri fattori. Dovrebbero essere osservate misure precauzionali: ridurre il più possibile il tempo per la preparazione preliminare del prodotto, evitare forte calore ed esposizione alla luce, utilizzare antiossidanti, ecc.
3. Nei prodotti alimentari, di norma, si ha a che fare con un gruppo di composti che hanno una grande somiglianza chimica e allo stesso tempo differiscono nell'attività biologica. Ad esempio, la vitamina E comprende 8 tocoferoli, simili nelle proprietà chimiche, ma diversi negli effetti biologici; il gruppo dei caroteni e dei pigmenti carotenoidi comprende fino a 80 composti, di cui solo 10 hanno proprietà vitaminiche in un modo o nell'altro.
4. Le vitamine appartengono a diverse classi di composti organici. Pertanto per loro non possono esistere reazioni di gruppo comuni e metodi di ricerca comuni.
5. Inoltre, l'analisi è complicata dalla presenza di sostanze accompagnatorie nel campione di prova, la cui quantità può essere molte volte superiore al contenuto della vitamina da determinare (ad esempio steroli e vitamina D). Per eliminare possibili errori nella determinazione delle vitamine nei prodotti alimentari, gli estratti vengono solitamente accuratamente purificati dai composti associati e la vitamina viene concentrata. Per fare ciò vengono utilizzate varie tecniche: precipitazione di sostanze che interferiscono con l'analisi, metodi di adsorbimento, cromatografia a scambio ionico o di partizione, estrazione selettiva del componente da determinare, ecc.
Negli ultimi anni, il metodo HPLC è stato utilizzato con successo per determinare le vitamine nei prodotti alimentari. Questo metodo è il più promettente, poiché consente la separazione, l'identificazione e la quantificazione simultanea di varie vitamine e delle loro forme biologicamente attive, riducendo i tempi di analisi.
Metodi fisico-chimici per lo studio delle vitamine. I metodi si basano sull'utilizzo delle caratteristiche fisico-chimiche delle vitamine (la loro capacità di fluorescenza, assorbimento della luce, reazioni redox, ecc.). Grazie allo sviluppo della chimica analitica e dell’ingegneria degli strumenti, i metodi fisico-chimici hanno quasi completamente sostituito i metodi biologici, lunghi e costosi.
Determinazione della vitamina C. La vitamina C (acido ascorbico) può essere presente negli alimenti sia in forma ridotta che ossidata. L'acido deidroascorbico (DAA) può formarsi durante la lavorazione e la conservazione degli alimenti a seguito dell'ossidazione, che ne rende necessaria la determinazione. Quando si determina la vitamina C nei prodotti alimentari, vengono utilizzati vari metodi: metodi di analisi colorimetrica, fluorescente, volumetrica basati sulle proprietà redox dell'AA e HPLC.
Il punto cruciale nella determinazione quantitativa dell'AA è la preparazione di un estratto del campione. L'estrazione deve essere completa. Il miglior estraente è una soluzione al 6% di acido metafosforico, che ha la capacità di precipitare le proteine. Vengono utilizzati anche acidi acetico, ossalico e cloridrico, nonché loro miscele.
1. Per la determinazione totale e separata delle forme ossidate e ridotte di AA, viene spesso utilizzato il metodo Roe che utilizza un reagente 2,4-dinitrofenilidrazina. L'AA (acido gulonico) sotto l'influenza di agenti ossidanti si trasforma in DAC e quindi in acido 2,3-dichetogulonico, che forma composti di colore arancione con 2,4-dinitrofenilidrazina. La stessa 2,4-dinitrofenilidrazina è una base che non può esistere nella forma aci. Tuttavia, i corrispondenti idrazoni, sotto l'influenza degli alcali, si trasformano in sali di aci intensamente colorati. Quando si determina la vitamina C con questo metodo, la presenza di agenti riducenti (glucosio, fruttosio, ecc.) interferisce. Pertanto, quando nel prodotto in studio è presente un elevato contenuto di zucchero, viene utilizzata la cromatografia, che complica la determinazione.
2. Recentemente, un metodo fluorescente molto sensibile e accurato ha ottenuto il riconoscimento per la determinazione del contenuto totale di vitamina C (la somma di AA e DAC). L'AIBN si condensa con l'o-fenilendiammina per formare il composto fluorescente chinossalina, che mostra la massima fluorescenza a un'eccitante lunghezza d'onda della luce di 350 nm.
L'intensità della fluorescenza della chinossalina in un ambiente neutro a temperatura ambiente è direttamente proporzionale alla concentrazione di AIBN. Per quantificare l'AA, viene prima ossidato in AIBN. Lo svantaggio di questo metodo è che l'attrezzatura è piuttosto costosa.
Metodi basati sulle proprietà redox dell'AA.
3. Tra i metodi basati sulle proprietà redox dell'AA, il metodo più utilizzato è la titolazione con una soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo, che ha un colore blu. Il prodotto dell'interazione dell'AA con il reagente è incolore. Il metodo può essere utilizzato nell'analisi di tutti i tipi di prodotti. Quando si analizzano prodotti che non contengono pigmenti naturali, come patate e latte, viene utilizzata la titolazione visiva. Nel caso della presenza di coloranti naturali si utilizza la titolazione potenziometrica o il metodo di estrazione con indofenolo-xilene. Quest'ultimo metodo si basa sulla decolorazione quantitativa del 2,6-diclorofenolindofenolo con acido ascorbico. Il colorante in eccesso viene estratto con xilene e la densità ottica dell'estratto viene misurata a 500 nm.
Solo AK reagisce. La DAC viene preliminarmente ridotta con cisteina. Per separare l'AA dagli agenti riducenti presenti negli alimenti cotti o conservati per lungo tempo, gli estratti vengono trattati con formaldeide. La formaldeide, a seconda del pH dell'ambiente, interagisce selettivamente con AA e impurità estranee degli agenti riducenti (pH = 0). Utilizzando questo metodo, viene determinata la somma di AK e DAC.
Il 2,6-diclorofenolindofenolo può essere utilizzato anche per la determinazione fotometrica dell'AA. La soluzione del reagente è di colore blu e il prodotto dell'interazione con AA è incolore, vale a dire Come risultato della reazione, l'intensità del colore blu diminuisce. La densità ottica è misurata a 605 nm (pH = 3,6).
4. Un altro metodo basato sulle proprietà riducenti dell'AA è il metodo colorimetrico, che sfrutta la capacità dell'AA di ridurre Fe(3+) a Fe(2+) e la capacità di quest'ultimo di formare sali di colore rosso intenso con 2,2 '-dipiridile. La reazione viene condotta a pH 3,6 e temperatura 70ºC. La densità ottica della soluzione viene misurata a 510 nm.
5. Metodo fotometrico basato sull'interazione dell'AA con il reagente di Folin. Il reagente di Folin è una miscela di acidi fosfomolibdici e fosfotungstici, cioè Questo è un metodo ben noto basato sulla formazione di blu di molibdeno, che assorbe a 640–700 nm.
6. Il metodo HPLC altamente sensibile e specifico può essere utilizzato con successo per determinare la vitamina C in tutti gli alimenti. L'analisi è abbastanza semplice; solo quando si analizzano alimenti ricchi di proteine è necessario prima eliminarle. La rilevazione viene effettuata mediante fluorescenza.
Oltre ai metodi sopra descritti per determinare la vitamina C, esistono numerosi altri metodi, ad esempio l'ossidazione con cloruro d'oro e la formazione di acidi idrossamici, ma questi metodi non hanno alcuna importanza pratica.
Determinazione della tiamina (B 1 ). Nella maggior parte dei prodotti naturali, la tiamina si trova sotto forma di estere difosforico - cocarbossilasi. Quest'ultimo, essendo un gruppo attivo di numerosi enzimi del metabolismo dei carboidrati, è in determinati legami con le proteine. Per determinare quantitativamente la tiamina è necessario distruggere i complessi e isolare la vitamina in studio in forma libera, disponibile per l'analisi fisico-chimica. A tale scopo viene effettuata l'idrolisi acida o l'idrolisi sotto l'influenza di enzimi. Gli oggetti ricchi di proteine vengono trattati con enzimi proteolitici (pepsina) in acido cloridrico. Gli oggetti ad alto contenuto di grasso (carne di maiale, formaggi) vengono trattati con etere per rimuoverlo (la tiamina è praticamente insolubile nell'etere).
1. Per determinare la tiamina nei prodotti alimentari, viene solitamente utilizzato un metodo fluorescente, basato sull'ossidazione della tiamina in un mezzo alcalino con esacianoferrato di potassio (3+) per formare un composto tiocromo che emette una forte fluorescenza alla luce ultravioletta. L'intensità della sua fluorescenza è direttamente proporzionale al contenuto di tiamina (la lunghezza d'onda della luce eccitante è 365 nm, la luce emessa è 460–470 nm (fluorescenza blu)). Quando si utilizza questo metodo, sorgono difficoltà dovute al fatto che numerosi oggetti contengono composti fluorescenti. Vengono rimossi mediante purificazione su colonne con resine a scambio ionico. Quando si analizzano carne, latte, patate, pane integrale e alcune verdure, non è necessaria alcuna pulizia.
2. La tiamina è caratterizzata dal proprio assorbimento nella regione UV (240 nm in soluzione acquosa, 235 nm in etanolo), il che significa che può essere determinata mediante spettrofotometria diretta.
3. L'HPLC viene utilizzata per la determinazione simultanea di tiamina e riboflavina.
Determinazione della riboflavina (B 2 ). Negli alimenti la riboflavina è presente principalmente sotto forma di esteri del fosforo legati alle proteine e, pertanto, non può essere determinata senza una preventiva digestione proteolitica. La riboflavina libera si trova in quantità significative nel latte.
Quando si determina la riboflavina, i metodi di analisi microbiologici e fisico-chimici (fluorescenti) sono i più utilizzati. Il metodo microbiologico è specifico, altamente sensibile e accurato; applicabile a tutti i prodotti, ma dura a lungo e richiede condizioni particolari.
Il metodo fisico-chimico è stato sviluppato in due versioni, che differiscono nel modo in cui valutano le sostanze fluorescenti:
Opzione di fluorescenza diretta (che determina l'intensità della fluorescenza della riboflavina) e
· variante lumiflavina.
1. La riboflavina libera e i suoi esteri del fosforo mostrano una caratteristica fluorescenza giallo-verde a lunghezze d'onda della luce di eccitazione di 440–500 nm. Su questa proprietà si basa il metodo fluorescente più utilizzato per la determinazione della riboflavina. La riboflavina e i suoi esteri danno spettri di fluorescenza molto simili con un massimo a 530 nm. La posizione del massimo non dipende dal pH. L'intensità della fluorescenza dipende in modo significativo dal pH e dal solvente (diverso per la riboflavina e i suoi esteri), quindi gli esteri vengono prima distrutti e viene analizzata la riboflavina libera. A questo scopo vengono utilizzati l'idrolisi con acido cloridrico e tricloroacetico, l'autoclavaggio e il trattamento con preparati enzimatici.
L'intensità della fluorescenza giallo-verde della riboflavina alla luce UV dipende non solo dalla sua concentrazione, ma anche dal valore del pH della soluzione. L'intensità massima si raggiunge a pH=6-7. Tuttavia, la misurazione viene effettuata a pH compreso tra 3 e 5, poiché in questo intervallo l'intensità della fluorescenza è determinata solo dalla concentrazione di riboflavina e non dipende da altri fattori: valori di pH, concentrazioni di sali, ferro, impurità organiche, ecc. .
La riboflavina si distrugge facilmente alla luce, la determinazione si effettua in luogo protetto dalla luce e ad un pH non superiore a 7. Si tenga presente che il metodo della fluorescenza diretta non è applicabile ai prodotti a basso contenuto di riboflavina.
2. La variante lumiflavina si basa sullo sfruttamento della proprietà della riboflavina, quando irradiata in un mezzo alcalino, di trasformarsi in lumiflavina, la cui intensità di fluorescenza viene misurata dopo la sua estrazione con cloroformio (fluorescenza blu, 460–470 nm). Poiché in determinate condizioni il 60–70% della riboflavina totale viene convertita in lumiflavina, durante l'esecuzione dell'analisi è necessario mantenere condizioni di irradiazione costanti e identiche sia per la soluzione test che per quella standard.
Determinazione della vitamina B 6 . Per determinare la vitamina possono essere utilizzati i seguenti metodi:
1. Spettrofotometria diretta. La piridossina cloridrato è caratterizzata dal proprio assorbimento a 292 nm (e = 4,4·10·3) a pH = 5.
2. Metodo Kjeldahl. La determinazione viene effettuata mediante l'ammoniaca formata durante l'ossidazione della vitamina.
3. Metodo fotometrico basato sulla reazione con 2,6-diclorochinonecloroimina (reattivo di Gibbs) a pH 8–10, che porta alla formazione di indofenoli di colore blu. Gli indofenoli vengono estratti con metiletilchetone e la densità ottica dell'estratto viene misurata a 660–690 nm (i fenoli con una posizione para libera danno la reazione di Gibbs).
4. Un metodo fluorescente basato sul fatto che, quando irradiate, la piridossina e la piridossamina mostrano una fluorescenza blu, mentre il piridossale mostra una fluorescenza blu.
Determinazione della vitamina B 9 . La determinazione dei folati nei prodotti alimentari nei tessuti e nei fluidi corporei presenta notevoli difficoltà, perché in questi oggetti sono solitamente presenti in forma legata (come poliglutammati); inoltre, la maggior parte delle forme è sensibile agli effetti dell'ossigeno atmosferico, della luce e della temperatura. Per proteggere i folati dall'idrolisi, si consiglia di effettuare l'idrolisi in presenza di acido ascorbico.
I folati nei prodotti alimentari possono essere determinati mediante metodi fisici, chimici e microbiologici. Il metodo colorimetrico si basa sulla scissione dell'acido pteroilglutammico per formare acido p-amminobenzoico e sostanze correlate e sulla loro ulteriore conversione in composti colorati. Tuttavia, a causa della mancanza di specificità, questo metodo viene utilizzato principalmente per l'analisi dei prodotti farmaceutici.
Per la separazione, purificazione e identificazione dei folati sono stati sviluppati anche metodi di cromatografia su colonne, carta e in un sottile strato di adsorbente.
Determinazione della vitamina PP. Nei prodotti alimentari l'acido nicotinico e la sua ammide si trovano sia in forma libera che legata, facendo parte dei coenzimi. I metodi chimici e microbiologici per la determinazione quantitativa della niacina comportano l'isolamento e la trasformazione più completi delle sue forme legate, che fanno parte della complessa materia organica delle cellule, in acido nicotinico libero. Forme legate di niacina vengono rilasciate mediante esposizione a soluzioni acide o idrossido di calcio quando riscaldate. L'idrolisi con una soluzione 1 M di acido solforico in un'autoclave per 30 minuti ad una pressione di 0,1 MPa porta al rilascio completo delle forme legate di niacina e alla conversione della nicotinamide in acido nicotinico. È stato stabilito che questo metodo di lavorazione produce idrolizzati meno colorati e può essere utilizzato nell'analisi di prodotti a base di carne e pesce. L'idrolisi con idrossido di calcio è preferibile per la determinazione della niacina in farina, cereali, prodotti da forno, formaggi, concentrati alimentari, verdure, bacche e frutta. Ca(OH) 2 forma composti con zuccheri e polisaccaridi, peptidi e glicopeptidi che sono quasi completamente insolubili in soluzioni raffreddate. Di conseguenza, l'idrolizzato ottenuto trattando Ca(OH) 2 contiene meno sostanze che interferiscono con la determinazione chimica rispetto all'idrolizzato acido.
1. Il metodo chimico per determinare la niacina si basa sulla reazione di Koenig, che avviene in due fasi. Il primo stadio è la reazione dell'anello piridinico dell'acido nicotinico con il bromuro di cianogeno, il secondo è la formazione di un derivato dell'aldeide glutaconica colorata a seguito dell'interazione con le ammine aromatiche. (Immediatamente dopo l'aggiunta del bromuro di cianogeno all'acido nicotinico, appare il colore giallo della glutacaldeide. Come risultato della sua interazione con le ammine aromatiche introdotte nella miscela di reazione, si formano dianili, che sono intensamente colorati di giallo, arancione o rosso, a seconda dell'ammina (benzidina - rosso, acido solfanilico - giallo).La reazione di Koenig viene utilizzata per la determinazione fotometrica della piridina e dei suoi derivati con posizione libera A. Lo svantaggio del metodo è la sua durata, poiché la velocità di reazione è bassa.
Ottenere CNBr è possibile in due modi:
1. CN – + Br 2 = CNBr + Br –
2. SCN – + Br 2 + 4H 2 O = CNBr + SO 4 2– + 8H + + Br –
Esistono molte modifiche di questa reazione a seconda della temperatura, del pH e della fonte di ammine aromatiche. Il pH e l'ammina influenzano significativamente l'intensità e la stabilità del colore in via di sviluppo. Il colore più stabile è prodotto dai prodotti di reazione dell'acido nicotinico con il reagente bromrodano (cianobromuro) e acido solfanilico o metolo (para-metilamminofenolo solfato).
2. L'acido nicotinico e la sua ammide possono essere determinati anche spettrofotometricamente grazie al loro assorbimento intrinseco nella regione UV. L'acido nicotinico è caratterizzato da un massimo di assorbimento a 262 nm (E = 4,4 10 3) e la nicotinammide a 215 nm (E = 9 10 3).
3. Il metodo microbiologico è ampiamente utilizzato per la determinazione quantitativa della niacina. È semplice, specifico, ma più lungo di quello chimico. Il metodo microbiologico consente di determinare il contenuto di niacina negli oggetti in cui ciò non può essere fatto chimicamente (prodotti ad alto contenuto di zucchero e bassi livelli di niacina).
Determinazione del b-carotene. Numerosi alimenti, soprattutto quelli di origine vegetale, contengono i cosiddetti carotenoidi. Carotenoidi (dal lat. carota– carote) – pigmenti naturali dal giallo al rosso-arancio; composti polinsaturi contenenti anelli di cicloesano; nella maggior parte dei casi contengono 40 atomi di carbonio per molecola.) Alcuni di essi (a, b-carotene, criptoxantina, ecc.) sono provitamine (precursori) della vitamina A, poiché possono essere convertiti in vitamina A nel corpo umano e animale. Se ne conoscono una decina di provitamine A, ma la più attiva tra queste è il b-carotene.
Quando si analizzano prodotti alimentari, è necessario il pretrattamento del campione per estrarre, concentrare il carotene e purificarlo dai composti associati. Per questi scopi sono ampiamente utilizzati l'estrazione (etere di petrolio, esano, acetone e loro miscele), la saponificazione e la cromatografia. Quando si determina il b-carotene, si dovrebbe evitare il riscaldamento. Ma in alcuni casi è necessaria la saponificazione a caldo, ad esempio quando il rapporto tra grassi e b-carotene è superiore a 1000:1 (latticini, grassi animali, margarina, uova, fegato). La saponificazione viene effettuata in presenza di un antiossidante. L'eccesso di alcali porta alla distruzione del b-carotene. Per separare il b-carotene dai pigmenti associati, è ampiamente utilizzata la cromatografia ad adsorbimento su colonne con ossido di alluminio e magnesio.
1. La maggior parte dei metodi fisico-chimici attualmente utilizzati per determinare il b-carotene nei prodotti alimentari si basa sulla misurazione dell'intensità dell'assorbimento della luce da parte delle sue soluzioni. Essendo composti con doppi legami coniugati, i carotenoidi hanno spettri di assorbimento caratteristici nella regione UV e visibile. La posizione della banda di assorbimento dipende dal numero di doppi legami coniugati nella molecola del carotenoide e dal solvente utilizzato. Il massimo assorbimento del b-carotene si osserva nel benzene a 464-465 nm, nell'esano e nell'etere di petrolio a 450-451 nm.
2. Recentemente, il metodo HPLC è stato utilizzato più spesso per determinare il b-carotene e altri carotenoidi. Il metodo consente di ridurre i tempi di analisi e quindi la probabilità della loro distruzione sotto l'influenza della luce e dell'ossigeno. Il metodo HPLC dei carotenoidi è un classico esempio di dimostrazione della capacità del metodo di separare e quantificare gli isomeri spaziali di a- e b-carotene nelle verdure.
Per la determinazione del b-carotene si possono utilizzare anche metodi chimici, basati ad esempio sulla reazione con cloruro di antimonio (3+) in cloroformio (blu, 590 nm), simile alla vitamina A, e con il reagente di Folin (blu, 640– 700nm). Tuttavia, a causa della non specificità di queste reazioni, non hanno trovato un utilizzo diffuso.
Determinazione della vitamina A. I rappresentanti più importanti della vitamina sono, come già accennato, il retinolo (A 1 -alcol), il retinale (A 1 -aldeide), l'acido retinoico (A 2).
Quando si determina quantitativamente la vitamina A nei prodotti alimentari, vengono utilizzati vari metodi: colorimetrico, fluorescente, spettroscopia diretta e HPLC. La scelta del metodo è determinata dalla disponibilità dell'una o dell'altra attrezzatura, dallo scopo dello studio, dalle proprietà del materiale analizzato, dal contenuto previsto di vitamina A e dalla natura delle impurità che l'accompagnano.
L'isolamento della vitamina viene effettuato mediante bollitura con una soluzione alcolica di KOH in ambiente di azoto; e successiva estrazione con etere di petrolio.
1. Per la determinazione quantitativa delle sostanze con attività della vitamina A può essere utilizzato il metodo della spettrofotometria diretta, basato sulla capacità di questi composti di assorbire selettivamente la luce a diverse lunghezze d'onda nella regione UV dello spettro. L'assorbimento è proporzionale alla concentrazione della sostanza quando misurata a quelle lunghezze d'onda in cui si osserva la caratteristica massima di assorbimento di un dato composto nel solvente utilizzato. Il metodo è il più semplice, veloce e abbastanza specifico. Fornisce risultati affidabili quando si determina la vitamina A in oggetti che non contengono impurità e hanno assorbimento nella stessa regione dello spettro. Se tali impurità sono presenti, il metodo può essere utilizzato in combinazione con una fase di separazione cromatografica.
2. Un metodo fluorescente promettente si basa sulla capacità del retinolo di emettere fluorescenza sotto l'influenza dei raggi UV (lunghezza d'onda della luce emozionante 330–360 nm). La massima fluorescenza si osserva nella regione di 480 nm. La determinazione della vitamina A con questo metodo è disturbata dai carotenoidi e dalla vitamina D. Per eliminare l'effetto interferente, viene utilizzata la cromatografia su ossido di alluminio. Lo svantaggio del metodo fluorescente è l'attrezzatura costosa.
3. In precedenza, il metodo colorimetrico più comune per determinare la vitamina A era la reazione con cloruro di antimonio. Viene utilizzata una soluzione di cloruro di antimonio in cloroformio (reagente Carr-Price). Il meccanismo di reazione non è stato stabilito con precisione e si presume che la reazione implichi una miscela di SbCL 5 in SbCl 3 . Il composto formato nella reazione è colorato di blu. Le misurazioni della densità ottica vengono eseguite a una lunghezza d'onda di 620 nm per 3-5 secondi. Uno svantaggio significativo del metodo è l'instabilità del colore in via di sviluppo, nonché l'elevata idrolizzabilità di SbCl 3. Si supponga che la reazione proceda nel modo seguente:
Questa reazione non è specifica per la vitamina A; i carotenoidi danno una colorazione simile, ma la separazione cromatografica di questi composti consente di eliminare la loro influenza interferente.
La determinazione della vitamina A con i metodi elencati è solitamente preceduta da una fase preparatoria, comprendente l'idrolisi alcalina delle sostanze grasse e l'estrazione del residuo insaponificabile con un solvente organico. Spesso è necessario effettuare la separazione cromatografica dell'estratto.
4. Recentemente, al posto della cromatografia su colonna, si è sempre più utilizzata l'HPLC, che permette di separare le vitamine liposolubili (A, D, E, K), solitamente presenti contemporaneamente nei prodotti alimentari, e di quantificarle con grande accuratezza. L'HPLC facilita la determinazione di varie forme di vitamine (alcol della vitamina A, suoi isomeri, esteri del retinolo), che è particolarmente necessaria quando si monitora l'aggiunta di vitamine ai prodotti alimentari.
Determinazione della vitamina E. Il gruppo di sostanze sotto il nome generale “vitamina E” comprende derivati del tocolo e del trienolo, che hanno l'attività biologica dell'a-tocoferolo. Oltre all'a-tocoferolo, sono noti altri sette composti correlati con attività biologica. Tutti possono essere trovati nei prodotti. Di conseguenza, la principale difficoltà nell'analisi della vitamina E è che in molti casi è necessario considerare un gruppo di composti che hanno una grande somiglianza chimica, ma allo stesso tempo differiscono nell'attività biologica, che può essere valutata solo con un metodo biologico. Questo è difficile e costoso, quindi i metodi fisico-chimici hanno quasi completamente sostituito quelli biologici.
Le principali fasi della determinazione della vitamina E: preparazione del campione, idrolisi alcalina (saponificazione), estrazione del residuo insaponificabile con solvente organico, separazione della vitamina E dalle sostanze che interferiscono con l'analisi e separazione dei tocoferoli mediante vari tipi di cromatografia, determinazione quantitativa. I tocoferoli sono molto sensibili all'ossidazione in ambiente alcalino, quindi la saponificazione e l'estrazione vengono effettuate in atmosfera di azoto e in presenza di un antiossidante (acido ascorbico). La saponificazione può distruggere le forme insature (tocotrienoli). Pertanto, se è necessario determinare tutte le forme di vitamina E contenute in un prodotto, la saponificazione viene sostituita da altri tipi di lavorazione, ad esempio la cristallizzazione a basse temperature.
1. La maggior parte dei metodi fisico-chimici per la determinazione della vitamina E si basano sull'uso delle proprietà redox dei tocoferoli. Per determinare la quantità di tocoferoli nei prodotti alimentari, la reazione più spesso utilizzata è la riduzione del ferro ferrico a ferro bivalente da parte dei tocoferoli con la formazione di un complesso Fe(2+) colorato con reagenti organici. Il più comunemente usato è il 2,2'-dipiridile, con il quale Fe(2+) dà un complesso di colore rosso (λ max = 500 nm). La reazione non è specifica. Contiene anche caroteni, stirene, vitamina A, ecc. Inoltre, l'intensità del colore dipende in modo significativo dal tempo, dalla temperatura e dall'illuminazione. Pertanto, per aumentare la precisione dell'analisi, i tocoferoli vengono prima separati dai composti che interferiscono con la determinazione mediante cromatografia su colonna, gas-liquido o HPLC. Quando si determina il valore della vitamina E dei prodotti in cui l'a-tocoferolo costituisce più dell'80% del contenuto totale di tocoferolo (carne, latticini, pesce, ecc.), spesso ci si limita a determinare la quantità di tocoferoli. Quando altri tocoferoli (oli vegetali, cereali, prodotti da forno, noci) sono presenti in quantità significative, per separarli viene utilizzata la cromatografia su colonna.
2. Il metodo fluorescente può essere utilizzato anche per determinare la quantità di tocoferoli. Gli estratti di esano hanno un massimo di fluorescenza nella regione di 325 nm con un'eccitante lunghezza d'onda della luce di 292 nm.
3. Per la determinazione dei singoli tocoferoli, il metodo HPLC è di indubbio interesse, poiché fornisce sia la separazione che l'analisi quantitativa in un unico processo. Il metodo è inoltre caratterizzato da elevata sensibilità e accuratezza. La rilevazione viene effettuata mediante assorbimento o fluorescenza.
Determinazione della vitamina D. La determinazione quantitativa della vitamina negli alimenti è estremamente impegnativa a causa del suo basso contenuto, della mancanza di reazioni specifiche sensibili alla vitamina D e delle difficoltà nel separarla dalle sostanze correlate. Fino a poco tempo fa venivano utilizzati studi biologici su ratti o polli. I metodi biologici si basano sulla determinazione della quantità minima del prodotto in esame che cura o previene il rachitismo nei ratti (polli) sottoposti a dieta ricketogenica. Il grado di rachitismo viene valutato radiograficamente. Questo è un metodo abbastanza specifico e accurato che consente di determinare la vitamina D ad una concentrazione di 0,01–0,2 μg%.
1. Quando si studiano prodotti con un contenuto di vitamina D superiore a 1 μg%, è possibile utilizzare un metodo fotometrico basato sulla reazione dei calciferoli con cloruro di antimonio (si forma un prodotto di colore rosa). Il metodo consente la determinazione sia del colecalciferolo (D 3) che dell'ergocalciferolo (D 2). L'analisi consiste nelle seguenti operazioni: saponificazione (idrolisi alcalina), precipitazione degli steroli, cromatografia (colonna o partizione) e reazione fotometrica con cloruro di antimonio. Il metodo è adatto per determinare il contenuto di vitamina D nell'olio di pesce, nelle uova, nel fegato di merluzzo, nel caviale, nel burro e negli alimenti arricchiti con questa vitamina. Il metodo descritto è laborioso e richiede molto tempo.
La vitamina D2 deve essere protetta dalla luce e dall'aria, altrimenti si verifica l'isomerizzazione. D 3 – più stabile.
2. Più veloce, più affidabile e più accurato è il metodo HPLC sempre più utilizzato, che viene utilizzato con successo nell'analisi di prodotti dietetici e per bambini arricchiti con vitamina D.
3. I calciferoli sono caratterizzati dal proprio assorbimento nell'UV e possono essere determinati mediante spettrofotometria diretta.
Negli ultimi anni, i metodi di separazione cromatografica, in particolare la cromatografia su strato sottile e gas-liquido, sono stati utilizzati con successo per determinare la vitamina D. Negli studi sperimentali, i metodi radiochimici in combinazione con la cromatografia su strato sottile o su colonna su gel di silice o ossido di alluminio sono ampiamente utilizzati per studiare il metabolismo della vitamina D negli animali e nell'uomo.
Determinazione della vitamina K. Per determinare la vitamina K vengono utilizzati metodi fisici, chimici, biologici e metodi spettrografici basati sulla sensibilità della vitamina K alle radiazioni UV.
Per la determinazione dei 2-metil-1,4-naftochinoni sono stati proposti numerosi metodi colorimetrici, basati sulle reazioni cromatiche che danno con alcuni reagenti: 2,4-dinitrofenilidrazina, N,N-dietilditiocarbammato di sodio, sali di tetrazolio, ecc. Ma tutti questi metodi e una serie di altri metodi fisici e chimici non sono sufficientemente specifici e i risultati ottenuti con il loro aiuto hanno un valore molto relativo per determinare il contenuto di vitamina K nei prodotti alimentari, negli organi e nei tessuti di esseri umani e animali. Risultati soddisfacenti si ottengono con metodi colorimetrici e spettrofotometrici in combinazione con cromatografia, purificazione e separazione della vitamina K su colonne, su carta o in un sottile strato di adsorbente.
Il termine “Vitamine” tradotto significa “ammine della vita”. Al giorno d'oggi esistono più di 30 sostanze di questo tipo e tutte sono di vitale importanza per il corpo umano, essendo parte di tutti i tessuti e le cellule, attivando e determinando il corso di molti processi.
Il fabbisogno di vitamine non è lo stesso e varia a seconda dell’età della vita, della malattia e delle condizioni meteorologiche di una persona. Il fabbisogno di vitamine aumenta durante la gravidanza, durante stress fisico e mentale, con iperfunzione della tiroide, insufficienza surrenalica e situazioni stressanti.
Va notato che anche l'ipervitaminizzazione, cioè un maggiore apporto di vitamine nel corpo umano, è sfavorevole per le funzioni metaboliche. Il sovradosaggio di vitamine si verifica principalmente quando si utilizzano preparati concentrati. La maggior parte delle vitamine entrano nel corpo umano dalle piante e una piccola parte dai prodotti animali. Più di 20 sostanze vitaminiche non possono essere sintetizzate nel corpo umano, mentre altre vengono sintetizzate negli organi interni, dove il fegato svolge un ruolo dominante.
Pertanto, scegliamo questo argomento per la nostra ricerca.
Infatti, ai nostri giorni, la salute umana e uno stile di vita sano stanno diventando sempre più una priorità. Oggigiorno vengono prodotti molti diversi additivi biologici (BAA), stimolanti e farmaci che aiutano a migliorare la salute.
Ma purtroppo dobbiamo ammettere che nelle catene di farmacie finiscono anche molti prodotti contraffatti e di bassa qualità. Dopo il traffico di armi e di droga, la falsificazione dei medicinali occupa un vergognoso terzo posto. Va notato che i preparati vitaminici e i complessi vitaminici non sono affatto prodotti economici, sono costosi. È stato interessante scoprire cosa si nasconde dietro le etichette dei farmaci venduti nelle farmacie della nostra città. Non possiamo condurre un’analisi qualitativa di tutti i farmaci; abbiamo bisogno di determinati reagenti, strumenti e tecniche. Come base per le nostre attività di ricerca, abbiamo utilizzato i metodi di analisi qualitativa di Kucherenko N. E., Severin S. E. per la determinazione delle vitamine.
Ipotesi: presumiamo che dietro le etichette dei preparati medicinali vitaminici non ci siano vitamine contraffatte, ma preparati naturali, poiché la salute dell'uomo e dei nostri abitanti dell'Amur ha il valore più alto.
Oggetto di studio: preparati vitaminici acquistati nelle farmacie cittadine.
Lo scopo del nostro lavoro: condurre un'analisi qualitativa delle vitamine acquistate nelle farmacie di Amursk e Komsomolsk-on-Amur.
In base all'argomento, sono stati impostati i seguenti compiti:
1. Conoscere le caratteristiche delle principali vitamine.
2. Condurre un'analisi qualitativa dei farmaci.
3. Confrontare i risultati ottenuti con l'avanzamento dello studio.
4. Trarre conclusioni.
Materiali e attrezzature: una serie di vitamine, reagenti chimici, metodi di analisi qualitativa Kucherenko N. E., Severina S. E. per determinare le vitamine.
1. Caratteristiche delle vitamine.
Affinché una persona sia forte e sana, ha bisogno di vitamine. Lo sappiamo tutti fin dalla prima infanzia. Ma raramente pensiamo a cosa siano queste sostanze: le vitamine. E quando ne parliamo immaginiamo semplicemente una scatola di caramelle gommose colorate o una ciotola di frutta. Una persona lontana dalla medicina ha bisogno di saperne di più sulle vitamine? Sì, è necessario, almeno per farlo
Riconosci ancora una volta quanto sia importante una dieta variata. Oggi anche i medici ci esortano a non affidarci ai preparati vitaminici farmaceutici, ma a cibi naturali ricchi di vitamine (frutta e verdura in primis, ma non solo). Quindi, cosa sono le vitamine e dove trovarle per le esigenze del corpo?
Le vitamine si formano attraverso la biosintesi nelle cellule e nei tessuti vegetali. La maggior parte di essi sono associati a trasportatori di proteine. Di solito nelle piante non si trovano in forma attiva, ma altamente organizzata e, secondo la ricerca, nella forma più adatta all'uso da parte dell'organismo, ovvero sotto forma di provitamine.
Le vitamine assicurano che il corpo utilizzi i nutrienti essenziali in modo economico e ottimale.
La mancanza di vitamine provoca gravi disturbi. Le forme nascoste di carenza vitaminica non hanno manifestazioni e sintomi esterni evidenti. Spesso tutto ciò di cui una persona si lamenta è la stanchezza, la riduzione delle prestazioni e la debolezza generale. Anche per l'ipovitaminosi
Il corpo è meno resistente agli effetti di tutti i tipi di fattori avversi. Ci vuole più tempo per ripristinare le normali funzioni dopo una malattia ed è più suscettibile a vari tipi di complicazioni.
Tutte le vitamine sono divise in due grandi gruppi: idrosolubili e liposolubili. Le vitamine idrosolubili comprendono tutte le vitamine del gruppo B, le vitamine PP, H, C, P e le vitamine liposolubili A, E, K, D.
Ora diamo uno sguardo più da vicino alle vitamine più famose.
Riboflavina (B2)
La riboflavina è una vitamina “della pelle”. È responsabile di mantenere la pelle sana, morbida e liscia. Inoltre, questa vitamina è necessaria per gli occhi (ad esempio, in caso di infiammazione degli occhi, si consiglia di assumere 3 mg di riboflavina 3 volte al giorno prima dei pasti).
La carenza di riboflavina provoca non solo malattie della pelle, ma anche disturbi digestivi, colite cronica e gastrite, malattie del sistema nervoso e debolezza generale, con conseguente diminuzione della resistenza dell'organismo alle infezioni.
Piridossina (B6)
Questa vitamina è molto importante per l’organismo, poiché favorisce un migliore assorbimento degli acidi grassi insaturi.
Inoltre, la piridossina è necessaria per la funzione muscolare: insieme al calcio, contribuisce al loro funzionamento efficace e al completo rilassamento. È stato stabilito che la carenza di piridossina può diventare un fattore che provoca lo sviluppo dell'otite media.
Acido ascorbico (vitamina C)
Questa vitamina svolge molte funzioni diverse nel corpo. I processi redox non possono verificarsi senza la sua partecipazione; aumenta l'elasticità e la forza dei vasi sanguigni, insieme alla vitamina A, protegge il corpo dalle infezioni, blocca le sostanze tossiche nel sangue ed è necessario per rafforzare denti e gengive.
Inoltre, per aumentare l’aspettativa di vita è necessario anche un apporto sufficiente di acido ascorbico, poiché è coinvolto nella creazione e nella guarigione del tessuto connettivo.
Non è difficile capire che la carenza di vitamina C è molto pericolosa. Nel frattempo, il corpo non ha la possibilità di immagazzinarlo per un uso futuro, quindi è necessario assumere regolarmente l'acido ascorbico (come parte del cibo e anche sotto forma di un farmaco). Non temere un sovradosaggio: la vitamina non è tossica e il suo eccesso viene facilmente escreto dagli organismi.
Acido nicotinico (PP)
Questa vitamina è coinvolta in molte reazioni ossidative. La sua carenza, spesso associata a una dieta monotona (ad esempio, quando si mangiano esclusivamente cereali), contribuisce allo sviluppo della pellagra.
Retinolo (vitamina A)
La vitamina A prolunga la giovinezza, normalizza il metabolismo, partecipa al processo di crescita e protegge la pelle e le mucose dai danni. Nel corpo degli animali e dell'uomo è formato dal carotene (la cosiddetta provitamina A).
Con una carenza di questa vitamina, la vista si deteriora, le condizioni della pelle cambiano (diventa secca, può apparire una piccola eruzione cutanea) e inizia un'intensa perdita di capelli.
Calciferolo (vitamina D)
I compiti principali della vitamina D nel corpo sono favorire l’assorbimento del calcio e regolare l’equilibrio fosforo-calcio. È attivamente coinvolto nel processo di formazione e crescita del tessuto osseo.
Inoltre, la vitamina D è necessaria per la normale coagulazione del sangue e la funzione cardiaca. È anche coinvolto nella regolazione dell'eccitabilità del sistema nervoso.
Anche se pochissimi alimenti contengono vitamina D, e anche in piccole quantità, la carenza di vitamina D non è molto comune. Il fatto è che il corpo può produrlo autonomamente sotto l’influenza dei raggi ultravioletti (ecco perché la vitamina D è anche chiamata “vitamina del sole”). Inoltre, per questo non è necessario prendere il sole per ore sotto i raggi cocenti del sole, è sufficiente uscire per qualche minuto al giorno durante le ore diurne.
A proposito, nel corpo delle persone dalla pelle chiara, la vitamina D si forma 2 volte più velocemente rispetto alle persone con la pelle scura.
Tocoferolo (vitamina E)
La vitamina E è conosciuta come la “vitamina della fertilità” perché è essenziale per la riproduzione. Inoltre, garantisce il normale funzionamento del muscolo cardiaco e previene la formazione di coaguli di sangue nei vasi sanguigni.
Recentemente, il tocoferolo è stato utilizzato efficacemente nel trattamento del diabete e dell’asma.
La vitamina E non è tossica, ma il suo contenuto in eccesso nel corpo porta ad un aumento della pressione sanguigna.
Il tocoferolo deve essere assunto solo in combinazione con il retinolo (vitamina A).
Rafforza la permeabilità delle pareti vascolari, riduce l'ossidazione dell'acido ascorbico e favorisce una migliore tolleranza alle situazioni di stress.
Ora che abbiamo imparato molto sul ruolo delle vitamine e sui loro benefici, sorge spontanea la domanda: “Dove puoi trovarle?” Questa domanda è tutt'altro che inattiva. Puoi consumare vitamine sintetiche farmaceutiche, ma gli esperti avvertono: tali vitamine non vengono sempre assorbite. E poi, perché ricorrere a mezzi artificiali se puoi ottenere vitamine direttamente dal cibo.
2. Descrizione dei farmaci.
Le vitamine sono sostanze essenziali per l'organismo, la cui presenza è di fondamentale importanza per il normale metabolismo e il mantenimento delle funzioni vitali in generale. Si tratta di composti a basso peso molecolare di natura organica. La maggior parte delle vitamine non vengono sintetizzate nel corpo umano e quindi il loro apporto tramite il cibo è estremamente importante. (L'eccezione è la vitamina D). Rispetto ai nutrienti essenziali, le vitamine devono essere fornite in dosi trascurabili. Allo stesso tempo, la carenza o l'assenza di una particolare vitamina provoca varie malattie e disturbi fisiologici.
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