Dubovoy B.L., Polyakova O.N. GNU SKZNIVI, Novocherkassk

La tubercolosi provoca enormi danni economici e rappresenta una grave minaccia per la salute umana. Il compito principale delle misure antitubercolari è la diagnosi tempestiva e l'identificazione precoce della fonte dell'agente infettivo.

La diagnosi intravitale mediante ricerca allergica è tardiva e non rivela gli animali nei primi giorni e nemmeno nei mesi dopo l'infezione. Pertanto, sono necessari metodi più sensibili per rivelare l'eziologia del processo allergico nella tubercolosi.

Per differenziare le reazioni tubercoliniche non specifiche, viene utilizzato un test simultaneo con allergeni: PPD per i mammiferi e KAM, costituito da diversi ceppi di micobatteri atipici. Il test allergologico simultaneo viene utilizzato per la diagnosi iniziale della tubercolina nelle aziende agricole prospere e in caso di reazioni alla tubercolina dovute a micobatteri atipici e saprofiti acido-resistenti. Ricorrono anche a commissioni di controllo e macellazione diagnostica di animali con reazione alla somministrazione intradermica di tubercolina, per chiarire la diagnosi mediante studi patoanatomici, batteriologici e un test biologico.

Tuttavia, i proprietari di mucche ad alto rendimento contestano la validità del controllo e della macellazione diagnostica degli animali che hanno dato una reazione positiva al test della tubercolina e richiedono metodi diagnostici in vivo per ulteriori test per la tubercolosi su animali altamente produttivi. Pertanto, oltre a un test allergico simultaneo, esami patoanatomici e studi di laboratorio, esame epizootologico degli allevamenti, analisi della dinamica della manifestazione delle reazioni allergiche in vari gruppi di animali, per studiare le reazioni non specifiche della tubercolina nei bovini e differenziarle da quelli specifici, vengono utilizzate reazioni cellulari in vitro: la reazione dei linfociti di trasformazione esplosiva e la lisi specifica dei leucociti e altre reazioni.

Nel nostro studio, per identificare le cause delle reazioni non specifiche della tubercolina, abbiamo utilizzato la reazione di lisi specifica dei leucociti rispetto ai cambiamenti patologici.

L'impostazione di RSLL è stata eseguita nella modifica di B.L. Quercia.

Lo scopo della ricerca era identificare le cause delle reazioni aspecifiche associate alla diagnosi differenziale della tubercolosi causata da diversi tipi di micobatteri, che è di grande importanza veterinaria, sanitaria, epizootica ed economica.

L'identificazione degli animali infetti da micobatteri e dei pazienti affetti da tubercolosi mediante la reazione di lisi specifica dei leucociti (RSLL) in vitro si basa sul fenomeno di un'aumentata sensibilità dei leucociti che appare immediatamente al contatto ripetuto con un antigene (allergene) esterno al corpo.

In condizioni di produzione, nelle aziende agricole di base della regione di Rostov sono stati eseguiti test RSLL per la possibile diagnosi di tubercolosi. Quindi, in una fattoria precedentemente prospera, otto mucche hanno reagito alla tubercolina. Sono stati sottoposti a controllo e macellazione diagnostica. Durante l'esame veterinario e sanitario non sono stati rilevati visivamente cambiamenti patoanatomici negli organi interni e nei linfonodi. Gli studi batteriologici sul materiale patologico nel Laboratorio regionale di Rostov sono risultati negativi.

Prima della macellazione, alle mucche veniva prelevato il sangue per la reazione di lisi specifica dei leucociti (RSLL). I risultati degli studi sul numero di leucociti e sugli indicatori di RSLL nei campioni di sangue sono presentati nella tabella.

Tavolo. Numero di leucociti, indicatori ROLL e cambiamenti patoanatomici nelle mucche che hanno reagito alla tubercolina.

Come si può vedere dalla tabella, in tutti i campioni di sangue con PPD-tubercolina per mammiferi, la reazione di lisi specifica dei leucociti è stata negativa, il che indica l'assenza di infezione da M. bovis.

Nei campioni di sangue di quattro mucche macellate, la reazione specifica di lisi dei leucociti è risultata positiva con la tubercolina PPD per gli uccelli. La lisi dei leucociti nei campioni era dell'11%, 20%, 22%, 26%, indicando che gli animali erano infettati da M. avium.

Nei campioni di sangue di quattro animali è stato ottenuto un risultato positivo di RLLS con CAM. La percentuale di lisi dei leucociti era dell'11%, 13%, 15%, 20%, che è associata all'infezione degli animali durante la vita con micobatteri atipici.

Pertanto, gli esami del sangue con tubercolina eseguiti all'esterno del corpo di animali con test positivo alla tubercolina consentono di identificare rapidamente le vere cause che hanno causato la sensibilizzazione del corpo alla tubercolina e, soprattutto, consentono di escludere la macellazione irragionevole di animali altamente produttivi. La possibilità di utilizzare il metodo di diagnostica in vitro delle reazioni tubercoliniche non specifiche direttamente in condizioni di allevamento contribuirà all'uso diffuso di allergeni di varia natura come mezzo di diagnosi differenziale delle reazioni tubercoliniche specifiche e non specifiche.

Si raccomanda l’uso del metodo proposto per la diagnosi delle reazioni tubercoliniche aspecifiche negli allevamenti esenti da tubercolosi. Per fare questo, il sangue viene prelevato da tutti gli animali che hanno dato una reazione positiva alla somministrazione intradermica della tubercolina ed esaminato all'esterno del corpo con le tubercoline disponibili, il che consente di identificare l'eziologia delle reazioni alla tubercolina causate da vari tipi di micobatteri.

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Saggio

Sono necessari metodi più sensibili per identificare l'eziologia del processo allergico nella tubercolosi. Per determinare l'eziologia delle reazioni non specifiche della tubercolina negli allevamenti prosperi, abbiamo utilizzato la tubercolina PPD per gli uccelli e la KAM fuori dal corpo con il sangue di animali che reagiscono alla tubercolina per i mammiferi. È stato dimostrato che l'RSLL può essere utilizzato per differenziare le reazioni specifiche e non specifiche alla tubercolina.

Parole chiave: diagnostica, tubercolosi, reazione di lisi leucocitaria specifica (RLLL).

UDC 619.616.002.5

DIAGNOSTICA DELLE REAZIONI NON SPECIFICHE ALLA TUBERCOLINA CAUSATE DA MICOBATTERI ATIPICI E AVIARI Dubovoi B.L., Polyakova O.N. Riepilogo

Sono necessari metodi più sensibili in grado di rilevare l'eziologia del processo allergico alla tubercolosi. La PPD-tubercolina per gli uccelli e la CAM fuori dal corpo con il sangue degli animali, che reagiscono alla tubercolina nei mammiferi, sono state utilizzate per determinare l'eziologia delle reazioni non specifiche della tubercolina nelle economie ricche. È accertato che l'RSLL può essere utilizzato per la differenziazione delle reazioni specifiche e non specifiche alla tubercolina.

parole chiave: diagnostica, tubercolosi, reazione di lisi specifica dei leucociti (RSLL).

Riguardo agli Autori

Dubovoy Boris L. - D. Sc. in Medicina veterinaria, professore, capo del laboratorio di ricerca sulle malattie infettive degli animali da allevamento e del pollame dell'istituto scientifico statale "Istituto di ricerca veterinaria zonale del Caucaso settentrionale" dell'Accademia russa delle scienze agrarie; 6/4. Veterinarnaya st., Novocherkassk, regione di Rostov, 394400; Tel.89281360864.

Responsabile della corrispondenza con il comitato editoriale: Polyakova Olga N.- studentessa post-laurea dell'istituto scientifico statale "Istituto di ricerca veterinaria zonale del Caucaso settentrionale" dell'Accademia russa delle scienze agrarie; 28, via Sadovaya, Novocherkassk, regione di Rostov, 394406; Tel.89287549422

Dubovoy Boris Lavrentievich, dottore in scienze veterinarie, professore, capo del laboratorio per lo studio delle malattie infettive degli animali da fattoria e del pollame dell'istituto scientifico statale "Istituto veterinario di ricerca zonale del Caucaso settentrionale" dell'Accademia russa delle scienze agrarie; 394400, regione di Rostov, Novocherkassk, st. Veterinario, d.4, kv.6; tel.: 89281360864.

Responsabile della corrispondenza con la redazione: Polyakova Olga Nikolaevna, studentessa post-laurea dell'Istituto scientifico statale "Istituto veterinario di ricerca zonale del Caucaso settentrionale" dell'Accademia russa delle scienze agrarie; 394406, regione di Rostov, Novocherkassk, st. Sadovaya, m.28; tel.: 89287549422.

L'invenzione riguarda il campo della diagnostica di laboratorio e può essere utilizzata per la diagnosi rapida della mixomatosi nei conigli. L'essenza del metodo sta nel fatto che una specifica reazione di lisi leucocitaria (RSLL) viene eseguita utilizzando un vaccino antimixomatoso del ceppo B-82, viene calcolato l'indice RSLL e, al suo valore pari o superiore al 10%, la mixomatosi è diagnosticato. Il risultato tecnico è lo sviluppo di un metodo che consente una diagnosi accelerata in una fase iniziale della malattia, nonché di identificare il decorso asintomatico della mixomatosi. 1 z.p. volo, 2 tab.

L'invenzione riguarda la medicina veterinaria, in particolare metodi espressi per la diagnosi della mixomatosi.

Esistono vari metodi per diagnosticare la mixomatosi del coniglio, inclusa la rilevazione di antigeni nella pelle colpita utilizzando anticorpi fluorescenti, la rilevazione di anticorpi, complessi immuni circolanti utilizzando reazioni di fissazione del complemento, reazioni di immunodiffusione, reazioni di neutralizzazione e test immunoenzimatico (Gunenko V.V. et al. O diagnostica e prevenzione della mixomatosi del coniglio Scienze veterinarie, 1987, vol. 12, pp. 44-45). Gli svantaggi dei metodi noti sono la complessità, la disponibilità di attrezzature costose, l'incapacità di determinare la presenza del virus nei primi giorni dopo l'infezione.

Scopo dell'invenzione è ridurre i tempi di rilevamento nell'organismo animale dell'agente patogeno della mixomatosi. Il rilevamento è possibile a partire da tre a sei ore dopo l'infezione.

Il raggiungimento di questo obiettivo si basa sul fenomeno dell'attivazione immediata, dell'ipersensibilità e del sovraccarico delle cellule del sangue immunocompetenti - i leucociti - all'esposizione ripetuta all'esterno del corpo dello stesso antigene che era precedentemente entrato nel corpo.

Il metodo per diagnosticare la mixomatosi nei conigli è il seguente. Dall'animale da test viene prelevato un campione di sangue. In una provetta sperimentale contenente 0,05 ml di una soluzione di citrato di sodio al 3,8%, 0,1 ml del sangue da analizzare e una dose di lavoro di antigene - 0,05 ml di un vaccino vivo secco contro la mixomatosi di conigli del ceppo "B-82" in diluizione di una dose immunizzante per ml di soluzione salina. La provetta di controllo è riempita con lo stesso volume, ma la soluzione salina è priva di antigene.

Le provette vengono incubate in termostato per due ore ad una temperatura di +37°C, agitando ogni 30 minuti. Quindi, per distruggere gli eritrociti dalle provette di controllo e da quelle di prova, 0,02 ml di sangue vengono trasferiti in provette con 0,4 ml di una soluzione al 3% di acido acetico e colorati con viola di genziana. Viene contato il numero di leucociti in entrambi i campioni nella camera di Goryaev e viene calcolata la velocità di reazione della lisi specifica dei leucociti (in percentuale) secondo la formula:

RSLL è considerato positivo ad un tasso del 10% o più.

In caso di leucocitosi grave, quando è difficile contare i leucociti, i campioni di sangue di controllo e sperimentali studiati vengono ulteriormente diluiti con soluzione salina in un rapporto di 1:1 o 1:2.

Sono stati selezionati dieci conigli sani per determinare la dose di lavoro dell'antigene (vaccino contro la mixomatosi dei conigli, coltura viva secca del ceppo "B-82"). Il sangue di ciascun coniglio è stato diviso in tre campioni. Tre provette con 0,05 ml di soluzione di citrato di sodio al 3% sono state riempite con 0,1 ml del sangue da analizzare. Quindi, 0,05 ml dell'antigene - un vaccino vivo secco con coltura contro la mixomatosi dei conigli del ceppo "B-82" con una diluizione di quattro dosi immunizzanti del farmaco per ml di soluzione salina, sono stati aggiunti alla prima provetta, 0,05 ml dell'antigene vaccino ad una diluizione di due dosi immunizzanti per un ml di soluzione salina, nella terza - 0,05 ml di vaccino in diluizione, una dose immunizzante per ml di soluzione salina.

Le provette sono state incubate per due ore a +37°C, agitando ogni 30 minuti. Quindi, per distruggere gli eritrociti dalle provette di controllo e da quelle di prova, 0,02 ml di sangue sono stati trasferiti in provette con 0,4 ml di una soluzione al 3% di acido acetico e colorate con viola di genziana. Successivamente, abbiamo contato il numero di leucociti in tutte le provette nella camera di Goryaev e abbiamo calcolato la velocità di reazione della lisi specifica dei leucociti (in percentuale) secondo la formula:

dove Lk e Lo sono il numero assoluto di leucociti nei campioni di controllo e sperimentali.

L'RSLL per conigli sani dovrebbe essere inferiore al 10%. I risultati sono presentati nella tabella. 1.

Come si può vedere dalla Tabella 1, l'RSLL in tutti i campioni non ha superato il 10%; pertanto, è più razionale assumere una diluizione del vaccino contro la mixomatosi dei conigli, un vaccino in coltura viva secca del ceppo B-82, al tasso di una dose immunizzante per ml di soluzione fisiologica, come dose di lavoro dell'antigene.

Per la diagnosi retrospettiva di mixomatosi in un allevamento disfunzionale è stato esaminato il sangue dei conigli.

Sulla base dei risultati delle condizioni cliniche dei conigli, sono stati formati 4 gruppi di animali, ciascuno di 5 teste (Tabella 2).

Il primo gruppo - conigli portatori del virus con una forma latente di mixomatosi - era in contatto con i pazienti, ma senza cambiamenti clinici. Gli individui avevano aree glabre visibili, indicative di nodi di mixoma in passato.

Nel secondo gruppo - clinicamente malati di mixomatosi - sono stati selezionati conigli malati con edema delle palpebre, basi dei padiglioni auricolari, regione anogenetica, dorso, con limitate formazioni nodulari nella pelle delle orecchie, della testa e delle palpebre.

I conigli del terzo gruppo sono stati vaccinati per stabilire la dinamica della lisi leucocitaria dal momento in cui l'antigene mixomatoso è stato introdotto nel corpo dell'animale e per identificare le caratteristiche della reazione di lisi leucocitaria nei vaccinati rispetto ai portatori del virus.

I conigli del quarto gruppo sono clinicamente sani e non infetti dal virus della mixomatosi, servono da controllo.

Negli animali di tutti i gruppi è stato determinato l'indice di reazione della lisi specifica dei leucociti. Per questo sono stati prelevati campioni di sangue dagli animali. Ciascun campione è stato suddiviso in sperimentale e di controllo. In una provetta sperimentale contenente 0,05 ml di una soluzione di citrato di sodio al 3,8%, 0,1 ml del sangue da analizzare e una dose di lavoro di antigene - 0,05 ml di un vaccino vivo secco contro la mixomatosi di conigli del ceppo "B-82" in diluizione di una dose immunizzante per ml di soluzione salina. La provetta di controllo è stata riempita con lo stesso volume, ma la soluzione salina è stata riempita senza antigene.

Le provette sono state incubate in termostato per due ore ad una temperatura di +37°C, agitando ogni 30 minuti. Quindi, per distruggere gli eritrociti dalle provette di controllo e da quelle di prova, 0,02 ml di sangue sono stati trasferiti in provette con 0,4 ml di una soluzione al 3% di acido acetico e colorate con viola di genziana. Abbiamo contato il numero di leucociti in entrambi i campioni nella camera di Goryaev e calcolato la velocità di reazione della lisi specifica dei leucociti (in percentuale) secondo la formula:

dove Lk e Lo sono il numero assoluto di leucociti nei campioni di controllo e sperimentali.

RSLL è stato considerato positivo ad un tasso del 10% o più.

I risultati sono presentati nella tabella 2.

Tavolo 2 Indici RSLL in conigli con mixomatosi, vaccinati e sani
Gruppi di porcellini d'India	RSLL, in %		Durata delle osservazioni in giorni	Diminuzione della % di lisi in media al giorno (%)
	all'inizio dello studio	alla fine dello studio
1. Forma nascosta, portatori di virus.	30-42	29-38	10	0,25
2. Clinicamente malato di mixomatosi	62-77	60-71	10	0,40
3. Vaccinato con vaccino mixomatoso	29-36	21-28	10	0,80
4. Comandi intatti	4-9	4-9	10	0

Come si può vedere dalla Tabella 2, il tasso di diminuzione della percentuale di lisi leucocitaria nei conigli vaccinati è 3,2 volte maggiore rispetto ai conigli portatori di virus con una forma latente di mixomatosi e 2 volte maggiore rispetto ai pazienti clinicamente malati. Nei pazienti con forma clinica di mixomatosi, la percentuale di lisi dei leucociti durante l'intero periodo di osservazione è stata molto elevata, raggiungendo il 60-77%.

Nel gruppo dei conigli vaccinati è stato riscontrato un forte aumento della percentuale di lisi leucocitaria al terzo giorno. Questa è la prova che il vaccino vivo secco contro la mixomatosi dei conigli del ceppo "B-82" provoca uno stato di sensibilizzazione dei leucociti del sangue (responsabili dell'immunità) prima della formazione di anticorpi specifici nel corpo.

La lisi dei leucociti nei conigli intatti non ha superato il 10% durante l'intero periodo dell'esperimento; rientrava nel range di normalità.

Lo studio della RSLL consente di diagnosticare il decorso asintomatico della mixomatosi.

RECLAMO

1. Un metodo per diagnosticare la mixomatosi del coniglio, caratterizzato dal fatto che una specifica reazione di lisi leucocitaria (RSLL) viene eseguita utilizzando un vaccino antimixomatoso del ceppo B-82, viene calcolato l'indice RSLL e la mixomatosi viene diagnosticata al suo valore del 10% o più.

2. Metodo per diagnosticare la mixomatosi del coniglio secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che in caso di leucocitosi, i campioni di sangue vengono diluiti con soluzione salina in un rapporto di 1:1 o 1:2 prima della conta dei leucociti.

Buona giornata! Mi chiamo Elvira. Il problema principale è la droga. Ad esempio, il paracetamolo, lo prendo a temperatura - inizia l'edema di Quincke, la prima volta che ho pensato che fosse un errore, l'ho provato con una malattia successiva senza farmaci aggiuntivi e cibo provocatorio (miele, lamponi, ecc.) - il risultato è lo stesso edema. Faccio un'analisi per un allergene - il risultato è negativo e supero i test per la lisi dei leucociti - supera la norma di due o tre volte (20-30% invece di ... fino al 10%). E così con un lunghissimo elenco di farmaci che vanno dalle vitamine, agli antibiotici, agli antidolorifici e ai sedativi a riguardo. Se viene somministrato il farmaco le reazioni sono sempre diverse dalla nausea alla perdita di coscienza e alla pressione bassa 80/40. Spiegami, per favore, qual è la differenza tra test allergenico e lisi?! Sono quasi disperato, mio ​​figlio ha la stessa situazione. Abbiamo già sperimentato tutti i possibili effetti collaterali, a partire da lievi disturbi e orticaria, per finire con lo shock anafilattico (grazie al Prednisolone, aiuta sempre). Siamo malati da molto tempo in questo modo: se ne va da solo o andiamo in ospedale con la nostra lista limitata di farmaci ammessi dai test. Ma è così limitato che i medici sono perplessi e non riescono a spiegarmi la differenza tra i due test. Se scrivi una risposta, ti sarò molto grato, o un collegamento a un'enciclopedia dove puoi trovare la risposta. Ho anche pensato di provare dosi inferiori a quelle previste....

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PREVENZIONE E DIAGNOSI DI LABORATORIO DELLA BRUCELLOSI UMANA - ISTRUZIONI METODOLOGICHE - MU 3-1-7-1189-03 (approvato dallo Stato Principale ... Attuale nel 2018

5.3.2. Reazione di lisi dei leucociti

L'introduzione di un antigene specifico in un organismo sensibilizzato non è indifferente al soggetto. A questo proposito, merita attenzione un metodo efficace per rilevare l'ipersensibilità di tipo ritardato mediante il metodo in vitro utilizzando la reazione di lisi dei leucociti (RLL). RLL si basa sulla presa in considerazione della distruzione dei leucociti di un organismo sensibilizzato sotto l'influenza di un antigene specifico, registrato con il metodo in vitro. RLL ha una specificità rigorosa, consente di quantificare il grado di sensibilizzazione del corpo e consente di ottenere una risposta 3-4 ore dopo il prelievo di sangue.

Tecnica di impostazione RLL.

La RLL viene effettuata in provette di vetro chimicamente puro. Come antigene si utilizza una sospensione di Brucella uccisa col calore (si può utilizzare il ceppo vaccinale B.abortus 19BA) in

7 concentrazioni 1 x 10 µl/ml.

Il sangue per la ricerca viene prelevato nella quantità di 1 ml e introdotto in un pallone con eparina al ritmo di 75-80 UI di eparina per 1 ml di sangue. 0,4 ml di sangue eparinizzato vengono posti in 2 provette. Alla prima provetta (provetta sperimentale) vengono aggiunti 0,1 ml di antigene della brucellosi, alla seconda - 0,1 ml di soluzione salina per stabilire la lisi non specifica dei leucociti (provetta di controllo). Le provette vengono agitate per 2-3 minuti, dopodiché viene effettuata la conta dei leucociti nella camera di Goryaev secondo il metodo adottato in ematologia. Successivamente le provette vengono poste in un termostato per 2 ore a 37 °C e agitate periodicamente dopo 15-20 minuti. Dopo l'incubazione, le provette vengono nuovamente agitate per 2-3 minuti. e contare i leucociti. Il conteggio viene eseguito almeno 2 - 3 volte per ciascun tubo, quindi viene visualizzato il numero medio. La presenza di leucociti dopo l'incubazione nelle provette sperimentali e di controllo è calcolata con la formula: il numero di leucociti dopo l'incubazione x 100% il numero di leucociti prima dell'incubazione.

L'indice specifico di lisi leucocitaria (PSL) viene calcolato determinando la differenza: la diminuzione percentuale dei leucociti nella provetta meno la diminuzione percentuale dei leucociti nel controllo. Il PSL è espresso come valore negativo e varia da -10 a -30%. Un PSL inferiore al -10% indica una lisi non specifica.

L'invenzione riguarda il campo della biotecnologia. SOSTANZA: il metodo prevede il rilevamento di animali che reagiscono alla tubercolina in allevamenti e cortili prosperi mediante test allergici pianificati. Il sangue degli animali che rispondono positivamente alla tubercolina viene esaminato mediante la reazione di lisi leucocitaria specifica (RSLL) utilizzando la PPD per i mammiferi, la PPD per gli uccelli e la CAM come diagnostico per le tubercoline. EFFETTO: il metodo consente la differenziazione delle reazioni positive specifiche e non specifiche al test della tubercolina e la diagnosi della tubercolosi in uno stadio precoce della malattia. 4 w.p. volo, 7 tab.

L'invenzione riguarda la medicina veterinaria, in particolare metodi espressivi per la diagnosi differenziale della tubercolosi causata da diversi tipi di micobatteri.

È noto che nelle aziende agricole prospere la diagnosi primaria della tubercolosi viene stabilita in modo complesso: epizootologica, clinica, allergica, patologica e di laboratorio (1.)

I metodi diagnostici elencati in molti casi non consentono di formulare una diagnosi definitiva di tubercolosi in breve tempo.

Per gli studi in vivo di massa sulla tubercolosi viene utilizzato un test diagnostico allergico (2). Tuttavia, la comparsa di reazioni non specifiche di massa alla tubercolina negli animali non tubercolari non consente di diagnosticare la tubercolosi negli allevamenti prosperi sulla base di un test positivo alla tubercolina (1; 2).

Per differenziare le reazioni tubercoliniche aspecifiche, viene eseguito un test simultaneo (prototipo) con due allergeni: PPD per i mammiferi e l'allergene KAM costituito da diversi ceppi di micobatteri atipici (2; 3; 4).

Il test allergologico simultaneo viene utilizzato per la diagnosi iniziale di tubercolosi nei bovini, nei piccoli ruminanti e nei polli negli allevamenti prosperi e se le reazioni alla tubercolina sono causate da micobatteri atipici e saprofiti acido-resistenti (3).

I proprietari di mucche ad alto rendimento contestano la legalità del controllo e della macellazione diagnostica degli animali che hanno dato una reazione positiva al test della tubercolina e richiedono metodi diagnostici a vita per riesaminare gli animali altamente produttivi per la tubercolosi. L'utilizzo del “Metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi animale” da noi proposto chiarisce questa questione controversa, poiché consente di stabilire inequivocabilmente la specificità o aspecificità della reazione dell'organismo animale alla somministrazione intradermica di tubercolina e infine di effettuare un diagnosi.

Inoltre, è consentito un test simultaneo 30 o più giorni dopo l'ultima tubercolinizzazione degli animali, che non soddisfa i requisiti per la diagnosi precoce (preclinica) della tubercolosi in un breve periodo di studio.

Pertanto, gli svantaggi dei metodi noti per diagnosticare la tubercolosi sono la complessità, i lunghi periodi di ricerca e l'impossibilità di determinare il tipo di micobatteri nei primi giorni dopo l'infezione.

Il metodo si basa sull'aumento immediato della sensibilità dei leucociti al contatto ripetuto con un antigene (allergene) esterno al corpo. Lo scopo dell'invenzione è quello di sviluppare un nuovo metodo. Questo compito viene raggiunto utilizzando la reazione di lisi specifica dei leucociti (RSLL).

Il metodo viene eseguito esaminando il sangue di RSLL di animali che reagiscono positivamente alla tubercolina, identificati in allevamenti e cortili prosperi da studi allergici pianificati, utilizzando la tubercolina (PPD per i mammiferi, PPD per gli uccelli e CAM) come diagnostico.

Inoltre, quando si diagnostica la tubercolosi nei bovini, la RSLL viene eseguita con tubercolina PPD per i mammiferi, tubercolina PPD per gli uccelli e KAM, un allergene complesso da micobatteri atipici.

La diagnosi di tubercolosi nei suini viene eseguita con la tubercolina PPD per i mammiferi e con la tubercolina PPD per gli uccelli.

La PPD-tubercolina per mammiferi viene utilizzata nella diagnosi della tubercolosi nei cani e nei carnivori.

La diagnosi della tubercolosi nei conigli e negli animali da pelliccia RSLL viene effettuata con la tubercolina PPD per i mammiferi, la tubercolina PPD per gli uccelli e la CAM.

Organizzazione della ricerca sulla tubercolosi RSLL

Negli esperimenti su conigli, cani, maiali e vitelli, sono stati utilizzati micobatteri vivi del ceppo vaccinale BCG-1 per la sensibilizzazione dell'organismo animale in dosi vaccinali: uno (0,05 mg), due (0,1 mg), tre (0,15 mg), cinque (0,25 mg) e dieci (0,50 mg).

Gli studi sono stati condotti in condizioni sperimentali su leucociti del sangue di animali intatti vaccinati con BCG e in condizioni di produzione - mucche che hanno dato due volte una reazione positiva all'iniezione intradermica di PPD-tubercolina per mammiferi, nella fattoria "Dawn" di Matveevo-Kurgan regione.

L'obiettivo principale della ricerca è utilizzare i risultati dell'RSLL per la diagnosi differenziale e la determinazione di:

1) sensibilizzazione dei leucociti dell'organismo animale da parte dei micobatteri del vaccino BCG;

2) infezione di mucche che hanno dato una reazione doppia positiva alla tubercolina;

3) reazioni non specifiche alla tubercolina quando somministrata per via intradermica.

Nell'esperimento sono stati selezionati animali intatti clinicamente sani, che sono serviti come controllo di fondo. I gruppi sono stati formati da animali in cui sono stati ottenuti valori stabili dei parametri ematologici (numero di leucociti,% di lisi, ecc.) durante uno studio triplo di campioni di sangue.

In ciascun gruppo sperimentale sono stati inseriti almeno tre animali. Da ciascun animale è stato prelevato il sangue, che è stato suddiviso in campioni di controllo e sperimentali. Nel campione di controllo è stata aggiunta al sangue una soluzione fisiologica di cloruro di sodio allo 0,9% e nei campioni di sangue sperimentali - tubercolina - PPD per i mammiferi, PPD per gli uccelli e CAM.

Per escludere errori nell'attenzione della tecnica di conteggio degli elementi formati e ottenere valori medi affidabili dei valori degli indicatori di reazione del sangue, ciascun campione (controllo e sperimentale) è stato esaminato in tre ripetizioni.

La procedura per condurre uno studio sulla tubercolosi RSLL

Lo studio degli animali per la tubercolosi viene effettuato innanzitutto con il metodo della tubercolinizzazione nei modi e nei termini previsti dalla "Controllo delle epizoozie e diagnosi della tubercolosi negli animali di diverse specie" (2).

Come diagnostici vengono presi la tubercolina PPD per i mammiferi, la tubercolina PPD per gli uccelli e un allergene complesso dei micobatteri atipici (CAM).

Nelle mandrie, nei gruppi e nei singoli animali esenti da tubercolosi, il principale metodo di ricerca è il test intradermico della tubercolina. Se vengono rilevati animali che rispondono alla tubercolina, gli animali che rispondono positivamente vengono isolati, messi al guinzaglio e da loro viene prelevato il sangue per la ricerca nella reazione di lisi specifica dei leucociti (RSLL) con la seguente diagnostica:

Nei bovini viene prelevato il sangue anticoagulante nella RSLL

a) soluzione salina di cloruro di sodio (campione di controllo);

d) PPD-tubercolina per uccelli.

Allo stesso tempo, gli animali che hanno dato risultati positivi allo studio RSLL con tubercolina PPD per i mammiferi sono considerati tubercolari.

Nei suini viene prelevato il sangue anticoagulante nella RSLL

a) soluzione salina fisiologica;

b) PPD-tubercolina per i mammiferi;

c) PPD-tubercolina per uccelli.

I suini positivi alla PPD-tubercolina RLSL dei mammiferi sono considerati tubercolosi, mentre quelli positivi alla PPD-tubercolina RLL aviaria sono considerati infetti da micobatteri aviari;

Nei cani e in altri piccoli animali viene prelevato RSLL

a) soluzione fisiologica;

b) PPD-tubercolina per i mammiferi;

Nei conigli viene prelevato il sangue anticoagulante nella RSLL

a) soluzione salina di cloruro di sodio;

b) PPD-tubercolina per i mammiferi;

c) PPD-tubercolina per uccelli;

Allo stesso tempo, i conigli che hanno dato un RLLS positivo con PPD-tubercolina per i mammiferi sono considerati infetti dalla specie bovina dell'agente eziologico della tubercolosi e dalla PPD-tubercolina per gli uccelli - infetti dalla specie aviaria dell'agente patogeno, con CAM - micobatteri atipici non tubercolari sensibilizzati.

Lo scopo dell'invenzione è ridurre il tempo di rilevamento dell'agente causale della tubercolosi negli animali e determinare il tipo di micobatteri che hanno causato la sensibilizzazione.

Il raggiungimento di questo obiettivo si basa sul fenomeno dell'acquisizione immediata dopo l'introduzione dell'agente patogeno da parte delle cellule immunocompetenti di una maggiore sensibilità del corpo, rilevata dall'esposizione ripetuta all'esterno del corpo dello stesso antigene ai leucociti del sangue. L'ipersensibilità post-infezione è un fenomeno cellulare in cui le cellule effettrici che interagiscono con la tubercolina all'esterno del corpo sono leucociti del sangue sensibilizzati, che differisce dall'ipersensibilità di tipo ritardato (HRHT) del corpo, che si sviluppa negli animali 2-3 settimane dopo l'infezione con l'agente eziologico della tubercolosi.

Implementazione del metodo

Il metodo di diagnosi precoce della tubercolosi negli animali viene effettuato come segue. Nel pozzetto della compressa contenente 0,05 ml di una soluzione al 3,8% di citrato di sodio (eparina, Trilon B o qualsiasi altro anticoagulante) aggiungere 0,1 ml del sangue analizzato e una dose di lavoro di tubercolina in un volume di 0,05 ml (provette) . Le provette di controllo vengono riempite nello stesso volume con soluzione fisiologica senza tubercolina. Il sangue nei pozzetti della compressa viene incubato per 2 ore a t=37°C, agitando ogni 30 minuti. Successivamente, dai pozzetti di controllo e sperimentali, si trasferiscono 0,02 ml di sangue in un pozzetto con 0,4 ml di liquido di Turk (soluzione di acido acetico al 3-5%, colorata con qualche goccia di soluzione di blu di metilene) per distruggere gli eritrociti e colorare il nuclei dei leucociti. Il numero di leucociti viene contato (nella camera di Goryaev) in tutti i pozzetti e le velocità di reazione della lisi specifica dei leucociti vengono calcolate (in percentuale) secondo la formula

dove L a e L circa - il numero assoluto di leucociti nei campioni di controllo e sperimentali. RSLL è considerato positivo ad un tasso del 10% o più.

Esempio 1. Dose di lavoro di tubercolina

Schema di esperimenti per determinare la dose di lavoro di tubercolina (il rapporto tra anticoagulante, sangue e tubercolina)

Nello schema degli esperimenti per determinare la dose di lavoro delle tubercoline, è stato dimostrato che i rapporti volumetrici dell'anticoagulante e del sangue nei campioni sono rimasti gli stessi e le dosi di tubercoline sono aumentate: 0,05; 0,1 e 0,15ml

Tabella 1 Determinazione della dose di lavoro di tubercolina (media del gruppo) per bovini e suini nell'RSLL
Dose di antigene	BESTIAME	MAIALI
	Il numero di leucociti durante l'interazione "in vitro" (10 9// l)	RSLL in %	Il numero di leucociti durante l'interazione "in vitro" (10 9 / l)	RSLL in %
Soluzione fisica	PPD, ml.	KAM	uccelli	PPD, ml.	KAM	uccelli	Fis. rr	PPD ml.	uccelli	PPD ml.	uccelli
0,05	9,5	9,6	9,4	9,5	-1%	1%	0	9,3	9,2	9,4	1%	1%
0,1	9,5	9,5	9,4	9,4	0%	1%	1	8,6	8,7	8,7	1%	1%
0,15	9,3	9,0	9,1	9,2	3%	2%	1	8,7	8,4	8,8	3%	2%

Come si può vedere dalle tabelle 1 e 2, l'RSLL in tutti i campioni non supera il 3% nei bovini, nei suini, il 7,4% nei cani e il 2% nei conigli, pertanto è più economico utilizzare una dose di 0,05 ml di tubercolina come soluzione dose di lavoro, perché Il suo RSLL era inferiore rispetto alla dose di 0,15. E il suo valore era quasi lo stesso per l’RPM dei mammiferi, l’RTP degli uccelli e il CA.

Pertanto, la dose operativa di tubercolina è determinata dal valore di 0,05 ml per RSLL.

Esempio 2. Specificità e attività di RSLL nel sangue di tori vaccinati con BCG-1

Negli esperimenti su tori di 4-6 mesi sono state studiate la specificità e l'attività di RSLL. Per fare ciò, agli animali sono stati iniettati micobatteri vivi del ceppo vaccinale BCG-1 in dosi vaccinali: 0,05 mg, 0,15 mg, 0,25 mg e 0,50 mg (una, tre, cinque, dieci dosi), quindi è stato esaminato il sangue. nelle RSLL il giorno della vaccinazione e ogni 24 ore per 10 giorni (240 ore).

Il numero di leucociti nei campioni di sangue con PPD per i mammiferi variava da 8,2 a 9,1·10 9 /l. È interessante notare che nei campioni di sangue di tori vaccinati con BCG, quando interagiscono con DAA per i mammiferi, è stata osservata una diminuzione del numero di leucociti 48-120 ore dopo la somministrazione del vaccino rispetto ad altri campioni, ma il loro numero era entro i limiti intervallo normale.

Nelle stesse ore successive all'introduzione di micobatteri vivi nei campioni di sangue con soluzione fisiologica PPD per uccelli e CAM, il numero di leucociti era quasi lo stesso e variava da 9,2 a 11,3·10 9 /l, cioè trovato leucocitosi, che era tanto più forte quanto maggiore era la dose di inoculazione del vaccino contro i micobatteri pz. BCG-1.

Come si può vedere dalla Tabella 3, nei campioni di sangue con PPD per i mammiferi, l'RSLL positivo è stato rilevato già 24 ore dopo la sensibilizzazione dei bovini con il vaccino BCG, nei campioni di sangue con PPD per gli uccelli e CAM, gli indicatori RSLL erano negativi.

Tabella 3 Indici RSLL in bovini sensibilizzati con vaccino BCG con tubercolina: DAA per i mammiferi, DAA per gli uccelli e CAM
Tempo dopo la vaccinazione, h
	Uno (0,05 mg)	Tre (0,15 mg)	Cinque (0,25 mg)	Dieci (0,50 mg)
PPD ml.	PPD venerdì	KAM	PPD ml.	PPD venerdì	KAM	PPD ml.	PPD venerdì	KAM	PPD ml.	PPD venerdì	KAM
il giorno della sensibilizzazione	1	0	0	0	0	1	1,2	0	1	0	0	1
24	14	0	1	14,3	0	0	16,2	1	1	34,3	1	1
48	27	0	0	32,5	0	0	28,6	1	0	48,3	0	0
72	23	0	1	25,5	0	1	21,6	-1	1	41,3	-1	1
96	17	0	0	10,8	0	0	19,5	0	0	35	0	1
120	13	0	0	5	1	0	10,3	0	0	24,2	0	1
144	7	1	1	1	0	0	6,3	0	1	20	1	1
168	1	0	0	0	0	1	2,4	0	1	15,1	0	1
192				1	0	0	1,2	0	1	8,6	0	1
216				0	0	0				6	-1	1
240										0	0	0
- PPD ven. - PPD per gli uccelli

I risultati ottenuti dagli studi indicano la specificità della RLLS. RSLL può essere utilizzato per rilevare animali sensibilizzati da micobatteri con antigeni correlati alla tubercolina.

L'attività di RSLL è caratterizzata dal fatto che con un aumento della dose di micobatteri vivi del vaccino pz. BCG-1 da 0,05 mg a 0,50 mg per animale aumenta l'indice RSLL.

Pertanto, si è riscontrato che quando vaccinati con una singola dose di BCG-1, il tasso più alto di RLLS con PPD per i mammiferi era 48-72 ore dopo l'iniezione (27-23%)

Quando si sensibilizzano i bovini con tre dosi di vaccinazione, si osservano contemporaneamente anche valori RSLL positivi. La percentuale massima di lisi raggiunge il 32,5% dopo l'introduzione del vaccino BCG.

Con l'introduzione di cinque dosi di vaccinazione negli animali, la lisi dei leucociti è stata più lunga e tendeva ad aumentare l'indice. Questa tendenza è stata osservata in modo particolarmente chiaro quando sono state somministrate agli animali 10 dosi di vaccino BCG, quando la lisi dei leucociti 48 ore dopo l'iniezione del vaccino ha raggiunto il 48,3% ed è stata più lunga, vale a dire all'aumentare del numero delle dosi vaccinali aumentava la percentuale di leucociti sensibilizzati e ciò influiva sugli indicatori di RSLL (Tabella 3).

I risultati degli indicatori RSLL, a seconda del numero di dosi di vaccino BCG-1, indicano un'attività pronunciata dell'RSLL.

Pertanto, il tasso medio giornaliero di RSLL con PPD per i mammiferi per 120 ore con una dose di vaccinazione di micobatterio BCG è stato del 18,8%, tre - 20,8%, cinque - 19,24% e dieci - 32,2%. Con dieci dosi di vaccinazione di BCG, i tassi positivi di RLLS con DAA per i mammiferi vengono estesi a sette giorni.

Studi effettuati con iniezioni di vaccini contro micobatteri vivi pz. BCG ha permesso di stabilire la specificità e l'attività di RSLL, necessaria per la diagnosi differenziale delle reazioni specifiche e non specifiche alla tubercolina.

Esempio 3. Studio per determinare la sensibilizzazione nei suini causata dall'introduzione di micobatteri vivi nel pezzetto di vaccino. BCG-1

Gli esperimenti sono stati condotti su suinetti svezzati di tre gruppi, ai quali sono state iniettate una, tre e cinque dosi di vaccino BCG. Il numero di leucociti nei suini sensibilizzati con una singola dose di vaccino BCG con PPD nei mammiferi variava da 7,2 a 8,8 10 9 /l, e con PPD salina per gli uccelli, le fluttuazioni variavano da 8,7 a 14,3 10 9 /l. Il numero più alto di leucociti è stato raggiunto 48 ore dopo la vaccinazione. Lo stesso andamento è stato notato con l'introduzione di tre e cinque dosi di vaccino BCG, dove il numero di leucociti con soluzione salina e PPD per gli uccelli dopo 48 ore ha raggiunto rispettivamente 15,4 e 18,6·10 9 /l. Di conseguenza, il tasso di RSLL con DAA per i mammiferi nei suini sensibilizzati dopo 24 ore con una dose di vaccinazione è stato del 26,9%, tre - 28,9%, cinque - 38,1%. Il tasso più alto di RSLL è stato 48-72 ore dopo la sensibilizzazione e ammontava al 46,6-49,7%; 41,5-46,7%; 49,7-55,4% a seconda delle dosi (Tabella 4).

Tabella 4 Indici RSLL nei suini sensibilizzati con vaccino BCG con tubercolina: DAA per i mammiferi, DAA per gli uccelli
Tempo dopo la vaccinazione, h	Numero di dosi di vaccino BCG
	Uno (0,05 mg)	Tre (0,15 mg)	Cinque (0,25 mg)
PPD ml.	uccelli	PPD ml.	uccelli	PPD ml.	uccelli
il giorno della sensibilizzazione	-1	0	0,9≈1	0	0	1
24	26,9	1	28,9	1	38,1	0
48	49,65	1	46,7	1	55,4	0
72	46,61	0	41,5	1	49,7	1
96	34,45	0	26,9	1	19	0
120	17,82	0	20,9	1	13	0
144	1,15	-1	7,8	0	6,4	1
168	0	0	1,8	1	1,8	-1
192					0	1
-PPDml. - PPD per i mammiferi
- PPD ven. - PPD per gli uccelli

Nei suinetti vaccinati, indicatori RSLL positivi sono stati riscontrati 24-120 ore dopo la somministrazione di una, tre e cinque dosi di vaccino BCG.

L'RSLL con DPD per gli uccelli è risultato negativo, il che conferma la specificità dell'RSL con DPD per i mammiferi.

Esempio 4. Studio per determinare la sensibilizzazione nei cani causata dall'introduzione di pezzetti vaccinali di micobatteri vivi. BCG-1

Negli esperimenti sui cani dopo l'introduzione di una, tre, cinque dosi di vaccino BCG, si è riscontrato che dopo 24-72 ore, quando il sangue interagiva con la soluzione salina, il numero di leucociti era 5,2-6,2 10 9 /l, e con PPD per i mammiferi 3 ,4-4,7 10 9 /l, cioè è stata notata leucopenia.

Il numero di leucociti con soluzione fisiologica è aumentato rispetto alla norma di due o più volte. Di conseguenza, gli indicatori di RSLL ammontavano al 14-25% con una dose, al 20,8-60,6% con tre e al 22-68% con cinque. Il tasso più alto di RSLL è stato 48 ore dopo la vaccinazione. Valori RSLL positivi sono stati rilevati ad una dose dopo 24-96 ore, a tre dopo 24-120 ore, a cinque dopo 24-240 ore, cioè con un aumento della dose del vaccino, la durata della sensibilizzazione dei leucociti è aumentata e l'attività è aumentata - indicatori di RSLL (tabella 5).

Tabella 5 Indici RSLL in cani e conigli sensibilizzati con il vaccino BCG
Tempo dopo la vaccinazione (ore)	Numero di dosi di vaccino BCG
	CANI	CONIGLI
	uno (0,05 mg)	tre (0,15 mg)	cinque (0,25 mg)	cinque (0,25 mg)	dieci (0,50 mg)
PPD ml.	PPD ml.	PPD ml.	PPD ml.	uccelli	KAM	PPD ml.	uccelli	KAM
Il giorno della sensibilizzazione	1	0	0,7	1	0	1	0	0	1
24	24	45,9	60,5	58	1	0	56	1	0
48	25	60,6	68	71	0	0	72	0	0
72	23	50	63,8	71	0	1	41	1	0
96	14	43,6	62,6	36	1	0	26	1	0
120	1,9	20,8	57,4	2	0	1	30	0	1
144	1	3,4	54,9	0	1	0	25	0	0
168	1	1	41,2	0	0	0	19	0	1
192			0	0	0	0	17	1	1
216			32	0	0	1	17	0	0
240			22	0	1	0	13,7	0	0
264			0	0	1	1	16,0	1	0
288			1,4	0	0	0	0	0	1
336				1	0	1	0	0	0
408							23	1	1
672							1	0	0
-PPDml. - PPD per i mammiferi
- PPD ven. - PPD per gli uccelli

Esempio 5. Studio per determinare la sensibilizzazione nei conigli causata dall'introduzione di micobatteri vivi nel pezzo di vaccino. BCG-1

Quando si vaccinano conigli con cinque dosi di vaccino BCG, il contenuto più basso di leucociti nel sangue quando interagiscono con la PPD per i mammiferi è stato riscontrato dopo 24 e 72 ore (4,6-4,7 10 9 /l), e a dieci dosi, il numero più piccolo del numero di leucociti quando interagiscono con PPD per i mammiferi è stato dopo 24 ore (3,8 10 9 /l) e 48 ore (4,7 10 9 /l). La particolarità è che durante l'interazione del sangue con la PPD nei mammiferi dopo 72-264 ore e 408 ore dopo la vaccinazione, il numero di leucociti era molte volte superiore al normale e ammontava a 11-28,5 10 9 /l, cioè . è stata notata leucocitosi invece di leucopenia. Allo stesso tempo, il numero di leucociti nei campioni con soluzione fisiologica (campioni di controllo) superava significativamente il numero dei leucociti nei campioni sperimentali e ammontava a 25,0-38,7 10 9 /l. È stato stabilito che, sullo sfondo della leucocitosi causata dall'introduzione di grandi dosi di vaccino BCG, la RSLL nei conigli era positiva e variava dal 13,7 al 72% (Tabella 5).

Esempio 6. Esame di campioni di sangue di mucche RSLL che hanno dato una doppia reazione positiva alla tubercolina

La diagnosi delle reazioni tubercolari di lisi specifica dei leucociti RSLL in condizioni di produzione è stata eseguita nella SEC "Dawn" della regione di Matveevo-Kurgan.

Nell'ottobre 2006, sette delle 198 mucche testate hanno risposto positivamente alla tubercolina in un allevamento precedentemente riuscito. Con ripetute tubercolinizzazioni dopo 45 giorni, hanno nuovamente dato una reazione positiva. La somministrazione intradermica di tubercolina ha provocato la formazione di rigonfiamenti diffusi di consistenza irritabile, la plica cutanea si è ispessita di 5-10 mm.

Prima della macellazione, le mucche venivano dissanguate per testare la reazione di lisi leucocitaria specifica (RSLL). I risultati degli studi sul numero di leucociti e sugli indicatori di RSLL nelle mucche con una reazione pronunciata alla tubercolina sono presentati nella Tabella 6.

Tabella 6 Dati RSLL e patoanatomici nelle mucche che hanno reagito positivamente alla tubercolina
Numeri di inventario delle mucche	Il numero di leucociti e l'indice del sangue RSLL quando si interagisce con
	Fisiologico soluzione	PPD per ml.	PPD per gli uccelli	KAM
numero di laghi	numero di laghi	RSLL%	numero di laghi	RSLL%	numero di laghi	RSLL%
1	2	3	4	5	6	7	8
6827	7,7	5,5	29	7,6	1	7,55	2
071	11,0	7,1	36	11,0	0	10,5	1
4006	5,05	5,0	1	5,0	1	5,05	1
4018	9,5	2,75	71	9,35	2	9,4	1
162	5,0	4,8	4	4,9	1	4,9	1
109	5,0	4,9	2	5,0	0	4,9	1
148	5,75	4,2	27	5,7	1	5,7	1

Come si può vedere dalla Tabella 6, delle sette mucche che hanno risposto alla somministrazione intradermica di tubercolina, solo quattro delle RSLL sono risultate positive (Inventario n. 6827; N. 071; N. 4018; N. 148) quando i campioni di sangue hanno interagito con PPD-tubercolina per i mammiferi. I campioni di sangue con tubercolina PPD per uccelli e CAM hanno dato indicatori negativi di RSLL.

Un esame veterinario del controllo e della macellazione diagnostica delle mucche che rispondevano positivamente alla tubercolina ha mostrato che su quattro animali con indicatori positivi di RLLS, solo due presentavano cambiamenti nei linfonodi caratteristici della tubercolosi: in una carcassa nella zona sottomandibolare e faringea, e in i secondi linfonodi mediastinici e mesenterici. Nelle carcasse di due mucche con una reazione positiva al test della tubercolina e indicatori positivi di RSLL, i cambiamenti patoanatomici caratteristici della tubercolosi non sono stati rilevati visivamente negli organi interni e nei linfonodi. Ciò è probabilmente dovuto alla recente infezione di animali con l'agente eziologico della tubercolosi e non si sono ancora formati cambiamenti patologici. Inoltre, durante il controllo post mortem e l'esame diagnostico, si è constatato che due mucche di vitello profondo (7-8,5 mesi di gravidanza) e una con endometrite acuta con infezione da streptococco hanno dato reazioni positive alla somministrazione intradermica di tubercolina. I cambiamenti patologici nelle mucche che hanno risposto positivamente alla tubercolina sono mostrati nella Tabella 7.

Tabella 7 Cambiamenti patologici e anatomici nelle mucche che hanno reagito positivamente alla tubercolina
numero di mucche	Cambiamenti patologici
6827	Non sono stati riscontrati cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi.
071	Il linfonodo sopraarterioso è iperimposto, il linfonodo epatico presenta focolai sebacei sul taglio, non sono state riscontrate altre alterazioni patologiche negli organi interni e nei linfonodi.
4006	Non sono stati rilevati endometrite postpartum, altri cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi
4018	Il linfonodo sottomandibolare sinistro sull'incisione presentava focolai necrotici grigio-bianchi, non sono stati riscontrati altri cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi
162	Non sono stati rilevati cambiamenti anatomici patologici negli organi interni e nei linfonodi, gravidanza 7 mesi
109	Non sono stati rilevati cambiamenti anatomici patologici negli organi interni e nei linfonodi, gravidanza 7,5 mesi
148	Non sono stati riscontrati cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi, gravidanza 8 mesi

L'esame di controllo e diagnostico delle vacche macellate che hanno reagito positivamente alla tubercolina ha mostrato che in quattro casi su sette un test tubercolinistico positivo coincideva con un RSLL positivo (B=4:7=0,57); in un caso (B=1:7=0,14) di tre vacche con una gravidanza di 7-8 mesi. il test positivo alla tubercolina coincideva con la profondità (8 mesi; B=1:3=0,33); in un caso - con infezione da streptococco (endometrite acuta; B=1:7=0,14).

RSLL in due casi su quattro gli indicatori positivi coincidevano con il rilevamento di alterazioni pato-anatomiche caratteristiche della tubercolosi (B=2:4=0,5), e in due casi su quattro (B=2:4=0,5) i dati visivo-patoanatomici non corrispondevano si è riscontrato che non può costituire la base per escludere un'infezione precoce da micobatteri, quando non si sono ancora formate alterazioni patologiche.

Letteratura

1. Diagnosi di tubercolosi. // V.P.Urban, M.A.Safin, A.A..Sidorchuk, M.V.Kharitonov, R.S.Sigbatulin, F.G. Akberov. // Workshop su epizootologia e malattie infettive con servizi igienico-sanitari veterinari. Manuale. Mosca: Kolos, 2003, pp. 82-86.

2. Controllo epizootologico e diagnosi della tubercolosi in animali di diverse specie. Prevenzione e controllo delle malattie infettive comuni all'uomo e agli animali. Raccolta di norme sanitarie e veterinarie. Ed. ufficiale. Goskomsanepidnadzor della Russia. Ministero dell'Agricoltura della Russia. Mosca. 1996, pp. 164-167.

3. Istruzioni per l'esecuzione di un test simultaneo utilizzando la tubercolina e un allergene complesso da micobatteri atipici (AM) nella diagnosi della tubercolosi animale. Legislazione veterinaria. Volume 3. Mosca: Kolos, 1981, pp. 220-224.

4. Sharov A.N. Manuale sui "preparati veterinari" per la tubercolosi (sotto la direzione del dottore in scienze biologiche D.F. Osidze). Mosca: Kolos, 1981, p.192-201.

1. Un metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi negli animali, compreso il rilevamento di animali reattivi alla tubercolina in allevamenti e cortili prosperi mediante test allergici pianificati, caratterizzato dal fatto che il sangue degli animali che rispondono positivamente alla tubercolina viene esaminato mediante la reazione specifica di lisi leucocitaria (RSLL) utilizzando la tubercolina PPD come diagnostico per i mammiferi, PPD per gli uccelli e KAM.

2. Metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che nella diagnosi della tubercolosi nei bovini la RSLL viene effettuata con PPD-tubercolina per i mammiferi, PPD-tubercolina per gli uccelli e allergene del complesso KAM da micobatteri atipici.

3. Metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che nella diagnosi della tubercolosi nei suini, la RSLL viene eseguita con PPD-tubercolina per i mammiferi e PPD-tubercolina per gli uccelli.

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