Quantificazione delle vitamine. Vitamine, minerali e fibre alimentari

GOST R54635-2011

Gruppo H59

STANDARD NAZIONALE DELLA FEDERAZIONE RUSSA

PRODOTTI ALIMENTARI FUNZIONALI

Metodo per la determinazione della vitamina A

prodotti alimentari funzionali. Metodo di determinazione della vitamina A

OKS 67.050
OKSTU9109

Data di introduzione 2013-01-01

Prefazione

Gli obiettivi e i principi della standardizzazione nella Federazione Russa sono stabiliti dalla legge federale N 184-FZ "Sulla regolamentazione tecnica" del 27 dicembre 2002 e dalle regole per l'applicazione delle norme nazionali della Federazione Russa - GOST R 1.0-2004 " Standardizzazione nella Federazione Russa. Disposizioni fondamentali"

A proposito della norma

1 SVILUPPATO dall'Istituto di ricerca sulla nutrizione dell'Accademia russa delle scienze mediche

2 INTRODOTTO dal Comitato Tecnico per la Normazione TC 36 “Alimenti Funzionali”

3 APPROVATO ED ATTIVO con ordinanza dell'Agenzia federale per la regolamentazione tecnica e la metrologia del 12 dicembre 2011 N 784-st

4 INTRODOTTO PER LA PRIMA VOLTA


Le informazioni sulle modifiche a questo standard sono pubblicate nell'indice informativo pubblicato annualmente "Norme nazionali" e il testo delle modifiche e degli emendamenti - negli indici informativi pubblicati mensilmente "Norme nazionali". In caso di revisione (sostituzione) o cancellazione della presente norma, un avviso corrispondente sarà pubblicato nell'indice informativo pubblicato mensilmente "Norme nazionali". Informazioni, notifiche e testi rilevanti sono pubblicati anche nel sistema informativo pubblico - sul sito web ufficiale dell'Agenzia federale per la regolamentazione tecnica e la metrologia su Internet

1 zona di utilizzo

1 zona di utilizzo

Questo standard si applica agli alimenti funzionali e stabilisce un metodo per determinare la frazione di massa della vitamina A sotto forma di retinolo, retinolo acetato, retinolo palmitato utilizzando la cromatografia liquida ad alta prestazione (di seguito denominata HPLC).

L'intervallo di misurazione della frazione di massa della vitamina A va da 0,5 a 10,0 ppm.

NOTA Questo standard può essere applicato ai prodotti alimentari soggetti all'intervallo di misurazione.

2 Riferimenti normativi

Questo standard utilizza riferimenti normativi ai seguenti standard:

GOST R 8.563-2009 Sistema statale per garantire l'uniformità delle misurazioni. Tecniche (metodi) di misurazione

GOST R 12.1.019-2009 Sistema di standard di sicurezza sul lavoro. Sicurezza elettrica. Requisiti generali e nomenclatura dei tipi di protezione

GOST R ISO 5725-6-2002 Accuratezza (correttezza e precisione) dei metodi e dei risultati di misurazione. Parte 6. Utilizzo dei valori di precisione nella pratica

GOST R ISO/IEC 17025-2006 * Requisiti generali per la competenza dei laboratori di prova e taratura
________________
GOST ISO/IEC 17025-2009

GOST R 51652-2000 Alcool etilico rettificato da materie prime alimentari. Specifiche

GOST R 52062-2003 Oli vegetali. Regole di accettazione e metodi di campionamento

GOST R 52179-2003 Margarine, grassi per l'industria della cucina, dolciaria, della panificazione e lattiero-casearia. Regole di accettazione e metodi di controllo

GOST R 52349-2005 Prodotti alimentari. Prodotti alimentari funzionali. Termini e definizioni

GOST R 53228-2008 Scale di azione non automatica. Parte 1. Requisiti metrologici e tecnici. Test

GOST 12.1.004-91 Sistema di standard di sicurezza sul lavoro. Sicurezza antincendio. Requisiti generali

GOST 12.1.005-88 Sistema di norme sulla sicurezza del lavoro. Requisiti sanitari e igienici generali per l'aria dell'area di lavoro

GOST 12.1.007-76 Sistema di standard di sicurezza sul lavoro. Sostanze nocive. Classificazione e requisiti generali di sicurezza

GOST 427-75 Misurazione dei righelli metallici. Specifiche

GOST 1770-74 (ISO 1042-83, ISO 4788-80) Misurazione della vetreria da laboratorio. Cilindri, bicchieri, beute, provette. Specifiche generali

Reagenti GOST 4166-76. Solfato di sodio. Specifiche

Reagenti GOST 4517-87. Metodi per la preparazione dei reagenti ausiliari e delle soluzioni utilizzate nell'analisi

GOST 6709-72 Acqua distillata. Specifiche

GOST 9293-74 Azoto gassoso e liquido. Specifiche

GOST 12026-76 Carta da filtro da laboratorio. Specifiche

GOST 13496.0-80 * Mangimi composti, materie prime. Metodi di campionamento
________________
*Il documento non è valido sul territorio della Federazione Russa. È valida la norma GOST R ISO 6497-2011, di seguito nel testo. - Nota del produttore del database.

GOST 14919-83 Stufe elettriche domestiche, stufe e forni elettrici. Specifiche generali

GOST 16317-87 Apparecchi elettrici di refrigerazione domestici. Specifiche generali

GOST 18300-87 Alcool etilico tecnico rettificato. Specifiche

GOST 19627-74 Idrochinone (paradiossibenzene). Specifiche

Reagenti GOST 24363-80. idrossido di potassio. Specifiche

GOST 25336-82 Vetreria e attrezzature da laboratorio. Tipologie, parametri fondamentali e dimensioni

GOST 26809-86 Latte e prodotti lattiero-caseari. Regole di accettazione, metodi di campionamento e preparazione dei campioni di fognature

Reagenti GOST 27025-86. Linee guida generali per i test

GOST 28498-90 Termometri in vetro liquido. Requisiti tecnici generali. Metodi di prova

GOST 29227-91 (ISO 835-1-81) Vetreria da laboratorio. Pipette graduate. Parte 1. Requisiti generali

Nota - Quando si utilizza questo standard, è consigliabile verificare la validità degli standard di riferimento nel sistema di informazione pubblica - sul sito web ufficiale dell'Agenzia federale per la regolamentazione tecnica e la metrologia su Internet o secondo l'indice informativo pubblicato annualmente "Norme nazionali ", che è stato pubblicato a partire dal 1 gennaio dell'anno in corso, e secondo i corrispondenti cartelli informativi pubblicati mensilmente pubblicati nell'anno in corso. Se lo standard di riferimento viene sostituito (modificato), quando si utilizza questo standard è necessario essere guidati dallo standard sostitutivo (modificato). Se la norma richiamata viene cancellata senza sostituzione, si applica la disposizione in cui è dato il riferimento alla stessa, nella misura in cui tale riferimento non viene pregiudicato.

3 Termini e definizioni

Questo standard utilizza i termini secondo GOST R 52349, nonché il seguente termine con la definizione appropriata:

4 Essenza del metodo

La determinazione della vitamina A nell'estratto ottenuto dal campione analizzato viene effettuata mediante separazione HPLC seguita da rilevazione fotometrica o fluorimetrica. Se necessario, l'estratto viene ottenuto dopo idrolisi alcalina del campione analizzato.

L'analisi quantitativa viene effettuata mediante il metodo di uno standard esterno utilizzando l'area o l'altezza dei picchi di retinolo, retinolo acetato, retinolo palmitato.

5 Requisiti di sicurezza

5.1 Condizioni per un lavoro sicuro

Quando si eseguono i test, è necessario rispettare i requisiti di sicurezza antincendio stabiliti da GOST 12.1.004, sicurezza elettrica - GOST R 12.1.019, precauzioni di sicurezza quando si lavora con reagenti - GOST 12.1.007, nonché i requisiti stabiliti in la documentazione tecnica per lo spettrofotometro, il cromatografo e altri dispositivi e apparecchiature.

Il locale in cui vengono effettuate le prove deve essere dotato di ventilazione di mandata e di scarico. Il controllo sul contenuto di sostanze nocive nell'aria dell'area di lavoro deve essere effettuato in conformità con i requisiti di GOST 12.1.005.

Quando lavori con le bombole di gas, devi essere guidato.

5.2 Requisiti di qualificazione dell'operatore

Sono autorizzate a eseguire test ed elaborare i risultati persone con formazione professionale superiore o secondaria specializzata: chimico, ingegnere chimico, tecnico, assistente di laboratorio, con esperienza in un laboratorio chimico. Il primo utilizzo del metodo in laboratorio deve essere effettuato sotto la supervisione di un tecnico HPLC qualificato.

6 Condizioni di prova

6.1 Condizioni generali

I test vengono eseguiti in normali condizioni di laboratorio: temperatura ambiente - (25±5) °C; umidità relativa - (65±15)%; Frequenza CA - (50±5) Hz; tensione di rete - (220±10) V.

Durante la preparazione e la conservazione delle soluzioni, è necessario seguire i requisiti di GOST 27025, GOST 4517.

Per prevenire la distruzione della vitamina A, l'analisi del materiale di prova e degli standard viene effettuata in presenza di un antiossidante (acido ascorbico, idrochinone, pirogallolo), proteggendo i campioni dalla luce solare diretta.

6.2 Condizioni per le misurazioni fotometriche

Le condizioni per le misurazioni fotometriche sono riportate nella Tabella 1.


Tabella 1 - Condizioni per le misurazioni fotometriche

Vitamina A	Solvente	Lunghezza d'onda, nm	Coefficiente di assorbimento specifico
Retinolo
Acetato di retinolo
Palmitato di retinolo	2-propanolo

6.3 Condizioni per l'analisi cromatografica

Temperatura della colonna cromatografica: 25 °C o temperatura ambiente.

Portata della fase mobile: 0,7 cm/min (valore indicativo).

Il volume del campione iniettato: 50 10 cm.

Fase mobile: miscela di acetonitrile, alcool metilico, cloruro di metilene in rapporto in volume 50:45:5.

Il controllo delle condizioni ottimali per la separazione cromatografica viene effettuato mediante analisi cromatografica di una soluzione mista di retinolo, retinolo acetato, retinolo palmitato con una concentrazione in massa di ciascuna sostanza di almeno 0,4 µg/cm. Questa soluzione mista viene preparata da soluzioni madre di retinolo, retinolo acetato, retinolo palmitato analogamente alla procedura per la preparazione delle soluzioni di lavoro secondo 8.1.2. L'efficienza della separazione cromatografica è considerata soddisfacente se il coefficiente di separazione dei picchi adiacenti di retinolo, retinolo acetato, retinolo palmitato è almeno 1,3. Altrimenti, per ottenere l'efficienza di separazione richiesta, la portata della fase mobile viene selezionata sperimentalmente o vengono testate altre colonne.

7 Strumenti di misura, dispositivi ausiliari, reagenti e materiali

7.1 Per determinare il contenuto della frazione di massa della vitamina A, vengono utilizzati i seguenti strumenti di misurazione, apparecchiature ausiliarie e materiali:

- bilance conformi a GOST R 53228, che forniscono precisione di pesatura con i limiti dell'errore assoluto consentito di ± 0,1 mg;

- uno spettrofotometro con un intervallo spettrale compreso tra 190 e 1100 nm, l'errore principale nelle misurazioni della trasmittanza non è superiore all'1%;

- cuvette in quarzo con cammino ottico di 1 cm;

- cromatografo liquido ad alta prestazione, comprendente i seguenti elementi: pompa; dispositivo di campionamento; rilevatore fluorimetrico (lunghezze d'onda, nm: eccitazione - 325 nm, emissione - 470 nm) o rilevatore spettrofotometrico (lunghezza d'onda di rilevamento - 325 nm) con un livello di rumore non superiore a 10 unità di densità ottica e un relativo errore di misurazione non superiore a 10 %; una colonna analitica per HPLC del diametro di 0,30-0,46 cm, della lunghezza di 10-25 cm, riempita con gel di silice ottadecile con granulometria di 5 μm; un dispositivo di registrazione - un integratore o un registratore che consente di misurare l'area (o l'altezza) di un picco con un errore non superiore all'1%; Software per l'elaborazione dei risultati di misurazione ottenuti;

- filtri per filtrare la fase mobile e le soluzioni analizzate (ad esempio, con una dimensione dei pori di 0,45 μm);

- microsiringa tipo "Hamilton" con una capacità di 0,1 cm3 per l'introduzione di campioni in un cromatografo liquido;

- pipette graduate 1(2.3)-1(2)-1-0.5(1.2.5.10.25) conformi a GOST 29227 o distributori automatici con volumi di dose simili o variabili con un errore di dosaggio relativo non superiore a ± 1%;

- cilindri 1-50(100.250)-1(2) secondo GOST 1770;

- matracci tarati 2-50(100,250,500,1000)-2 secondo GOST 1770;

- tubi di misura con tappi smerigliati P-2-5(10.15.20.25)-0.1(0.2)XC secondo GOST 1770;

- vetri В(Н)-1-50(100,150,250)ТХС secondo GOST 25336;

- palloni a fondo tondo K-1-100(250.500)-29/32TS secondo GOST 25336;

- imbuti V-36(56)-80XC, V-75-110(140)XC, V-100-150XC secondo GOST 25336;

- un righello di metallo con un prezzo di divisione di 1 mm secondo GOST 427;

- un agitatore per palloni e provette con una gamma di frequenza di vibrazioni della piattaforma di 100-150 vibrazioni al minuto;

- centrifuga, fornendo 4-6 mila giri al minuto;

- un bagnomaria con regolatore di riscaldamento, mantenendo la temperatura da 40° a 100°C;

- un bagno da laboratorio ad ultrasuoni con un volume di lavoro di almeno 2 dm3;

- evaporatore rotante con range di pressione di esercizio da 7 mm Hg. fino a 760 mmHg (da 9 10 Pa a 10 10 Pa) o pompa a getto d'acqua secondo GOST 25336;

- frigoriferi da laboratorio in vetro secondo GOST 25336;

- termometro liquido da laboratorio con intervallo di temperatura da 0 °C a 100 °C, con divisione della scala di 1 °C secondo GOST 28498;

- una bombola con azoto gassoso conforme a GOST 9293, grado di purezza speciale e secondo;

- carta da filtro da laboratorio secondo GOST 12026;

- stufa elettrica di tipo chiuso secondo GOST 14919;

- mulino elettrico da laboratorio;

- frigorifero domestico secondo GOST 16317.

7.2 Quando si eseguono misurazioni, vengono utilizzati i seguenti reagenti e materiali:

- alcol etilico assoluto () con una frazione di massa della sostanza principale pari ad almeno il 99,9%;

- alcol etilico rettificato () con una frazione di massa della sostanza principale pari ad almeno il 96% o secondo GOST R 51652, GOST 18300;

- alcol metilico () con una frazione di massa della sostanza principale pari ad almeno il 99,9%;

- la frazione di massa dell'acetonitrile () della sostanza principale non è inferiore al 99,8%;

- la frazione di massa del cloruro di metilene () della sostanza principale non è inferiore al 99,8%;

- la frazione di massa n-esano () della sostanza principale non è inferiore al 99%;

- la frazione di massa dell'etilacetano () della sostanza principale non è inferiore al 99% o secondo GOST 8981;

- la frazione di massa del propanolo-2 () della sostanza principale non è inferiore al 99%;

- etere di petrolio, distillato alla temperatura di (50 ± 10) °C, purificato dai perossidi;

- etere etilico, purificato dai perossidi, contenente 0,1% pirogallolo, secondo;

- idrossido di potassio (KOH) secondo GOST 24363, chimicamente puro o grado analitico, soluzione KOH, frazione in massa 50%;

- la frazione di massa anidra del solfato di sodio () della sostanza principale non è inferiore al 99,5% o secondo GOST 4166, chimicamente pura;

- acqua distillata secondo GOST 6709;

- acido ascorbico () secondo o, chimicamente puro;

- idrochinone () con una frazione di massa della sostanza principale pari ad almeno il 99% o secondo GOST 19627;

- la frazione di massa del pirogallolo () della sostanza principale non è inferiore al 99%;

- la frazione di massa del butilidrossitoluene () della sostanza principale non è inferiore al 99%;

- retinolo ()=286,5 g/mol, la frazione in massa della sostanza principale non è inferiore al 90%;

- retinolo acetato () = 328,5 g / mol, la frazione di massa della sostanza principale non è inferiore al 90% o ;

- retinolo palmitato () = 524,9 g / mol, la frazione in massa della sostanza principale non è inferiore al 90% o .

7.3 È consentito utilizzare altri strumenti di misurazione, apparecchiature ausiliarie che non siano inferiori a quanto sopra in termini di caratteristiche metrologiche e tecniche e forniscano la necessaria precisione di misurazione, nonché reagenti e materiali di qualità non peggiore di quanto sopra.

8 Preparazione per effettuare le misurazioni

8.1 Preparazione delle soluzioni

8.1.1 Soluzioni standard di base

Sciogliere circa 50 mg di retinolo (o retinolo acetato, o retinolo palmitato) in 50 ml di alcool etilico assoluto. La concentrazione in massa di retinolo (o retinolo acetato o retinolo palmitato) in soluzione è di circa 1,0 mg/cm. Successivamente, 2 ml di una soluzione di retinolo (o retinolo acetato, o retinolo palmitato) vengono posti con una pipetta in un matraccio tarato da 50 ml e portati a volume con alcool etilico assoluto. La concentrazione in massa dei composti nelle soluzioni standard basiche ottenute è di circa 40 µg/cm.

8.1.2 Soluzioni di calibrazione

Dalle principali soluzioni standard, vengono preparate almeno quattro soluzioni di calibrazione di retinolo (o acetato di retinolo, o palmitato di retinolo) nell'intervallo di concentrazione in massa di 0,4-4,0 µg/cm mediante diluizione esatta delle principali soluzioni standard con alcol etilico assoluto in un matraccio tarato con una capacità di 50 cm3.

La determinazione della concentrazione in massa di retinolo (o acetato di retinolo o palmitato di retinolo) (μg/cm) viene effettuata dopo aver misurato la densità ottica delle soluzioni di calibrazione in una cuvetta di quarzo con uno strato assorbente dello spessore di 1 cm su uno spettrofotometro alla lunghezza d'onda ottimale ed è calcolata dalla formula

dov'è il valore della densità ottica della soluzione di calibrazione;

- il valore della densità ottica della soluzione di calibrazione in concentrazione di massa di etanolo assoluto o 2-propanolo di 1 g in 100 cm con uno spessore dello strato assorbente di 1 cm, riportato nella tabella 1;

10 - fattore di conversione;

- coefficiente che tiene conto dell'assorbimento dei componenti correlati durante la misurazione, calcolato dalla formula

dov'è l'area del picco della sostanza standard durante l'analisi HPLC, mAU·s (AU·s);

- la somma delle aree dei picchi dei componenti associati durante l'analisi HPLC della sostanza standard, mAU·s (AU·s).

Tutte le soluzioni sono accuratamente protette dalle radiazioni ultraviolette durante la preparazione e l'analisi. Le soluzioni di retinolo vengono conservate a temperature inferiori a 4 °C per 2 mesi. Per le misurazioni vengono utilizzate soluzioni appena preparate di retinolo acetato o retinolo palmitato per 2-3 ore a temperatura ambiente.

8.2 Campionamento e preparazione

8.2.1 Il campionamento viene effettuato secondo GOST 13496.0, GOST 26809, GOST R 52062, GOST R 52179.

8.2.2 Le particelle grossolane di un campione medio isolate mediante quartizzazione da un campione di laboratorio vengono frantumate utilizzando un'attrezzatura adeguata (ad esempio un mulino da laboratorio) in uno stato tale che tutto il prodotto passa attraverso un setaccio con fori di 1 mm di diametro. Il campione macinato viene accuratamente miscelato.

I campioni analizzati vengono omogeneizzati, evitando l'esposizione a temperature elevate.

8.2.3 Alimenti a base di grassi con un contenuto di acqua pari o inferiore all'1%, arricchiti con retinolo acetato o retinolo palmitato

2-5 g del campione analizzato vengono trasferiti in un matraccio tarato della capacità di 25 ml, sciolti in 10-15 ml di n-esano, utilizzando un bagno ad ultrasuoni per accelerare la dissoluzione. La soluzione è stata portata a volume con n-esano. Se necessario, la soluzione può essere utilizzata per la successiva diluizione con n-esano. Quindi un'aliquota della soluzione esana è stata evaporata in una corrente di azoto, ed il residuo secco è stato ridisciolto nell'eluente.

8.2.4 Prodotti alimentari a base di grassi con non più del 20% di acqua, in massa, arricchiti con retinolo acetato o retinolo palmitato

2-5 g del campione analizzato vengono sciolti sotto vigorosa agitazione in 10-15 ml di n-esano, utilizzando un bagno ad ultrasuoni per accelerare la dissoluzione. Rimuovere l'acqua in eccesso aggiungendo solfato di sodio anidro. Il contenuto del pallone viene filtrato su filtro di carta per separare il precipitato insolubile. Il pallone viene lavato due volte con 5 ml di n-esano. Si raccolgono i filtrati in un matraccio tarato da 25 ml e si porta a volume la soluzione con n-esano. Quindi un'aliquota della soluzione esana è stata evaporata in una corrente di azoto, ed il residuo secco è stato ridisciolto nell'eluente.

8.2.5 Altri alimenti arricchiti con retinolo acetato o retinolo palmitato

Per effettuare l'idrolisi alcalina, 1-30 g del campione analizzato di materiale secco o liquido vengono posti in un pallone a fondo tondo con una capacità di 100-500 ml entro 5 minuti. Aggiungere quindi 50-150 cm 3 di alcool etilico rettificato (o alcool metilico), 0,2-1,0 g di un antiossidante (acido ascorbico, idrochinone, butilidrossitoluene), 4-40 cm 3 di una soluzione di idrossido di potassio al 50% e scaldare per 15- 45 minuti a bagnomaria a riflusso ad una temperatura di 80 °C-100 °C.

I rapporti consigliati tra materiale di prova e reagenti sono riportati nella Tabella 2.


Tabella 2 – Rapporti consigliati tra materiale di prova e reagenti

Frazione di massa della vitamina A, milioni	Campione del materiale testato, g	Il volume di etanolo, cm	Volume della soluzione di KOH al 50%, cm
Da 0.1-1.0 compreso
St. 1.0-5.0 incl.
St. 5.0-10.0 incl.

Quando l'idrolisi alcalina viene effettuata a temperatura ambiente per almeno 16 ore, vengono utilizzati i rapporti di materiale e reagenti sopra indicati.

Se, dopo il raffreddamento, sulla superficie della miscela rimane uno strato di olio o grasso, il volume della soluzione KOH aggiunta e il tempo di idrolisi alcalina vengono aumentati.

Una volta completata l'idrolisi, il contenuto del pallone viene rapidamente raffreddato a (20 ± 5) °C e trasferito quantitativamente in un imbuto separatore. Si risciacqua il pallone con acqua, il cui volume è pari al volume di alcol etilico (o metilico) aggiunto, e si versa l'acqua nello stesso imbuto. La vitamina A viene estratta con etere etilico (o di petrolio), n-esano, n-esano con l'aggiunta di etere dietilico (o di petrolio) in rapporto in volume 1:1 per due minuti. Per tenere conto della possibile estrazione incompleta della vitamina A, dovrebbe essere utilizzato il metodo di aggiunta standard.

L'estrazione viene ripetuta tre o quattro volte con porzioni estraenti di 50-100 cm.

Per eliminare l'acqua, l'estratto viene filtrato su un filtro con 2-5 g di solfato di sodio anidro. Successivamente, l'estratto viene evaporato a secchezza utilizzando un evaporatore rotante ad una temperatura non superiore a 50 °C e quindi ridisciolto nell'eluente. Se necessario, la soluzione può essere utilizzata per la successiva diluizione.

La soluzione ottenuta secondo 8.2.3 (8.2.4, 8.2.5) viene analizzata mediante HPLC. La massa del campione analizzato e il volume del solvente sono selezionati in modo tale che la concentrazione degli analiti nella soluzione analizzata sia compresa tra 0,4 e 4,0 µg/cm.

8.3 Preparazione del cromatografo liquido

La preparazione del cromatografo liquido per il funzionamento viene eseguita in conformità con il manuale di istruzioni dell'apparecchiatura. Prima di iniziare il lavoro, la colonna viene lavata con l'eluente.

8.4 Costruire una curva di calibrazione

Le procedure per costruire la dipendenza dalla calibrazione vengono eseguite in conformità con il manuale operativo dell'apparecchiatura. Effettuare un'analisi cromatografica di tutte le soluzioni di calibrazione preparate secondo 8.1.2.

Il grafico di calibrazione è costruito nelle coordinate "segnale analitico" - "concentrazione di massa di vitamina nella soluzione di calibrazione, µg/cm". Per ciascuna soluzione di calibrazione analizzata vengono effettuate due misurazioni parallele e viene ricavato il valore medio aritmetico. La differenza tra i valori misurati dei segnali analitici e i valori del tempo di ritenzione non deve superare il 5% dei valori medi. I segmenti lineari della curva di calibrazione devono corrispondere all'intero intervallo di concentrazioni di massa determinate di vitamina A.

Il coefficiente della curva di calibrazione, μg/cm/(mAU s) o μg/cm/(AU s) è determinato come media aritmetica dei coefficienti calcolati dalla formula

dove è la concentrazione in massa delle sostanze standard nella esima soluzione di calibrazione, µg/cm;

- area (altezza) del segnale analitico nell'analisi della soluzione di calibrazione, mAU s (AU s) o altezza del picco, mm.

La correttezza della costruzione della dipendenza dalla calibrazione è controllata dal valore di un'approssimazione affidabile di 0,997.

La calibrazione viene eseguita nei seguenti casi: nella fase di padronanza del metodo, quando cambiano le condizioni dell'analisi cromatografica o quando i risultati del controllo operativo o dell'audit interno non soddisfano i requisiti metrologici.

9 Effettuare le misurazioni

Volumi uguali di soluzioni di test e di calibrazione vengono introdotti in sequenza nella colonna del cromatografo. Come soluzione di calibrazione, viene selezionata una soluzione la cui altezza del picco è meno diversa dall'altezza del picco della soluzione testata. La concentrazione di vitamina A () nella soluzione utilizzata per la calibrazione è specificata il giorno del suo utilizzo secondo 8.1.2.

Per identificare i picchi, confrontare i tempi di ritenzione del retinolo (o acetato di retinolo o palmitato di retinolo) della soluzione di prova e della soluzione standard e aggiungere anche una soluzione standard con un contenuto simile di vitamina A alla soluzione di prova.

10 Elaborazione e presentazione dei risultati

La frazione di massa della vitamina A, milioni, è calcolata con le formule:

dove è il coefficiente della curva di calibrazione secondo 8.4;


- volume di diluizione, cm;

- massa del campione analizzato, g.

Utilizzando una soluzione di calibrazione

dove è la concentrazione in massa della soluzione di calibrazione, µg/cm;

- volume di diluizione, cm;

- media aritmetica dei risultati della misurazione dell'area (altezza) del picco del componente analizzato per due analisi cromatografiche parallele della soluzione in esame, mAU·s (AU·s) o altezza del picco, mm;

- massa del campione analizzato, g;

- media aritmetica dei risultati delle misurazioni dell'area (altezza) del picco del componente analizzato per due analisi cromatografiche parallele della soluzione di calibrazione, mAU·s (AU·s) o altezza del picco, mm.

Il risultato viene calcolato alla terza cifra decimale e arrotondato alla seconda cifra decimale.

Quando si analizza ciascun campione, vengono eseguite due determinazioni parallele, iniziando con il prelievo di un campione del campione da analizzare.

La discrepanza tra i risultati di due misurazioni replicate (come percentuale del valore medio), eseguite da un operatore utilizzando reagenti e apparecchiature identiche e nel più breve periodo di tempo possibile, non deve superare (il limite di ripetibilità è riportato nella tabella 3 ) con un livello di confidenza del 95%.

Se questa condizione è soddisfatta, come risultato finale del test viene preso il valore della media aritmetica.

I limiti dell'errore relativo nel determinare la frazione di massa della vitamina A (), come percentuale del risultato del test e con un livello di confidenza del 95% non devono superare i valori specificati nella Tabella 3.

Il risultato della determinazione della vitamina A è presentato nella seguente forma:

Milioni al 95%, (6)

dove è la media aritmetica dei risultati di due determinazioni parallele, milioni;

- il valore del limite dell'errore assoluto delle definizioni, milioni, calcolato dalla formula

I risultati del test sono registrati nel protocollo, che indica:

- un riferimento a tale norma;

- tipologia, origine e nome del campione;

- modalità e data del campionamento;

- data di ricevimento e analisi del campione;

- risultati della ricerca;

- ragioni degli scostamenti nella procedura di determinazione dalle condizioni stabilite.

Biochimico sufficienza vitaminica- la concentrazione di una vitamina o del suo metabolita (forma coenzima) nei fluidi biologici, la quantità di escrezione nelle urine, l'attività degli enzimi vitamina-dipendenti, ecc.

Criterio di sicurezza adeguato vitamina (limite inferiore della norma) - un valore specifico di ciascun indicatore, rispetto al quale viene valutata la fornitura di vitamina al corpo.

Per la determinazione quantitativa delle vitamine, vengono utilizzati metodi:

1. Metodi fisici e chimici per determinare il contenuto di vitamine come sostanze chimiche (ng, µg, mg).

2. Metodi microbiologici: in base al tasso di crescita dei microrganismi in presenza di una vitamina, viene giudicata la sua quantità.

3. Metodi biologici: determinare la quantità minima di cibo o farmaco in grado di proteggere l'animale (che segue una dieta priva della vitamina in studio) dalle malattie. Questa quantità di cibo o preparato vitaminico viene assunta come unità vitaminica.

L'efficacia dell'arricchimento viene valutata determinando gli indicatori dell'apporto vitaminico prima e dopo l'assunzione di vitamine.

Vitamine liposolubili

Le vitamine liposolubili includono le vitamine A, D, E e K.

Vitamina A (retinolo, antixeroftalmico)

1. Struttura. La vitamina A lo è poliisoprenoide contenente anello cicloesenilico. Il gruppo della vitamina A comprende retinolo, retinale E acido retinoico. Solo il retinolo ha la piena funzione della vitamina A. Il termine "retinoidi" comprende forme naturali e sintetiche di retinolo. Il precursore vegetale β-carotene ha 1/6 dell'attività della vitamina A.

2. Trasporto e metabolismo. Gli esteri del retinolo sono solubili nei grassi alimentari, emulsionati dagli acidi biliari e assorbiti dall'epitelio intestinale. risucchiato b-carotene si divide in due molecole di retina. Nelle cellule epiteliali, la retina viene ridotta a retinolo e una piccola parte della retina viene ossidata ad acido retinoico. La maggior parte del retinolo è esterificato dagli acidi grassi saturi e, come parte dei chilomicroni, entra nel sangue attraverso la linfa. Dopo la trasformazione lipolitica, i residui dei chilomicroni vengono assorbiti dal fegato. La vitamina A viene immagazzinata nel fegato sotto forma di esteri. Per il trasporto ai tessuti periferici, gli esteri del retinolo vengono idrolizzati e il retinolo libero si lega nel siero sanguigno per proteina plasmatica legante il retinolo(PRSP). L'acido retinoico viene trasportato albumina. All'interno delle cellule periferiche, il retinolo si lega a proteina cellulare legante il retinolo(KRSP). L'effetto tossico della vitamina A si manifesta quando compare una forma libera della vitamina, cioè dopo l'esaurimento del potere del KRSP. Il retinolo e la retina vengono interconvertiti l'uno nell'altro dalle deidrogenasi o reduttasi NADP-dipendenti. L'acido retinoico non può essere convertito in retinolo o retinale, quindi l'acido retinoico può supportare la crescita e la differenziazione dei tessuti, ma non può sostituire il retinolo nella vista o il retinolo nel funzionamento degli organi riproduttivi.

Retina
Acido retinoico

3. ruolo biologico.

3.1. Retinolo agisce come ormoni penetrando nella cellula - si lega alle proteine ​​nucleari e regola l'espressione di alcuni geni. Il retinolo è essenziale per la normale funzione riproduttiva.

3.2. Retina partecipa a atto della vista. L'11-cis-retinale si lega alla proteina opsina e forma rodopsina. Alla luce, la rodopsina si dissocia e la cis-retinica diventa trans-retinica. La reazione è accompagnata da cambiamenti conformazionali nelle membrane dei bastoncelli e dall'apertura dei canali del calcio. Il rapido ingresso degli ioni calcio avvia un impulso nervoso che viene trasmesso all'analizzatore visivo. In caso di percezione ripetuta (cioè al buio), il transretinale viene ridotto dall'alcool deidrogenasi a transretinolo (qui sono possibili perdite di vitamina A). Il trans-retinolo si isomerizza in cis-retinolo (qui è possibile reintegrare la perdita di vitamina A). Il cis-retinolo viene ossidato a cis-retinale, che si combina con l'opsina per formare rodopsina. Il sistema di percezione della luce è pronto a percepire il prossimo quanto di luce.

3.3. Acido retinoico partecipa a sintesi glicoproteica, rafforza altezza E differenziazione dei tessuti.

3.4. Retinoidi possedere antitumorale attività e indebolire azione agenti cancerogeni.

3.5. b-carotene – antiossidante ed è in grado di neutralizzare i radicali liberi del perossido (ROO) nei tessuti con bassa pressione parziale di ossigeno.

4. Fonti. La vitamina A si trova solo nei prodotti di origine animale (fegato, reni, burro, olio di pesce). Dal fegato dei pesci d'acqua dolce è stata isolata la vitamina A 2, che si distingue per la presenza di un altro doppio legame in posizione 3-4 e si chiama 3-deidroretinolo. L'attività biologica della vitamina A 2 per i mammiferi corrisponde a circa il 40% dell'attività della vitamina A 1 . Le piante hanno pigmenti - a-, b- e g-carotene, che possono essere convertiti in vitamina A (carote, pomodori).

5. fabbisogno giornaliero. 1-2,5 mg di vitamina A (5000-7000 UI). 1 UI = 0,344 microgrammi di retinolo acetato. Parte del fabbisogno di vitamina A può essere coperto dal carotene (2-5 mg), con 1 mg di carotene = 0,67 mg di retinolo.

6. Ipovitaminosi. Si manifesta sotto forma di deficit visivo in condizioni di scarsa illuminazione - cecità notturna - emeralopia. Questo è il primo segno di carenza di vitamina A: una persona vede normalmente alla luce del giorno e distingue molto male gli oggetti in condizioni di scarsa illuminazione(al crepuscolo). L'avitaminosi è caratterizzata da perdita di peso, crescita stentata, proliferazione e cheratinizzazione dell'epitelio, secchezza della pelle e delle mucose, desquamazione dell'epitelio, compromissione della funzione riproduttiva. Si chiama secchezza della cornea xeroftalmia(da qui il nome della vitamina - antixeroftalmico). Il danno all'epitelio delle vie urinarie, l'intestino porta allo sviluppo di malattie infiammatorie. La causa più importante della carenza di vitamina A è l’alterato assorbimento e trasporto dei lipidi. Con l'introduzione di alte dosi di vitamina A, si sviluppa l'ipervitaminosi A.

Vitamina D (calciferolo, antirachitico)

1. Struttura. I prodotti a base di erbe contengono ergosterolo che, sotto l'azione dei raggi ultravioletti, viene convertito in vitamina D 2 (ergocalciferolo). Distribuito nei tessuti animali 7-deidrocolesterolo, che nella pelle, irradiata dai raggi ultravioletti, viene convertita in vitamina D 3 ( colecalciferolo) (Fig. 27.1).

2. Metabolismo. La vitamina D dal cibo viene assorbita nelle micelle. Nel sangue viene trasportato in connessione con una specifica globulina di trasporto. È idrossilato negli epatociti 25-idrossicolecalciferolo (25-OH- D 3) . È la principale forma di riserva della vitamina D nel fegato e di trasporto nel sangue.Una parte della 25-OH-D 3 interviene nella circolazione enteroepatica (come gli acidi biliari). Se viene violato, può verificarsi una carenza di vitamina D. Nei reni, nella placenta e nelle ossa, il 25-OH-D 3 può essere idrossilato in posizione 1 con la formazione 1,25-diidrossicolecalciferolo O calcitriolo. La produzione di calcitriolo è regolata dalla sua stessa concentrazione, dall'ormone paratiroideo e dai fosfati sierici.

3. ruolo biologico. Il calcitriolo funziona come ormoni penetranti. Calcitriolo - l'unico regolatore del movimento del calcio attraverso la membrana degli enterociti contro il gradiente di concentrazione. Il calcitriolo stimola la biosintesi delle proteine ​​leganti il ​​calcio negli enterociti, che garantisce l'assorbimento di calcio e fosfato nell'intestino tenue. La vitamina D 3 migliora il riassorbimento dei fosfati nei tubuli renali, che aiuta a mantenere un rapporto normale di Ca 2+ e HPO 4 3- nel plasma e nei fluidi extracellulari. Ciò è necessario per la calcificazione del tessuto osseo giovane in crescita.

Riso. 10.1. Schema di formazione della vitamina D e della sua forma attiva calcitriolo.

Segni: 7-deidrocolesterolo; Raggi ultravioletti; Provitamina D3; Vitamina D3 (Colecalciferolo); Calcitriolo (1,25-diidrossicolecalciferolo)

4. Fonti: olio di pesce, fegato di pesci e animali, burro, tuorlo d'uovo, latte.

5. fabbisogno giornaliero. Il fabbisogno di vitamina D dipende dall'età e dalle condizioni del corpo ed è di 12-25 mcg (500-1000 UI) al giorno (1 mcg = 40 UI).

6. Ipovitaminosi. La carenza di vitamina D provoca malattie nei bambini rachitismo: violazione della mineralizzazione ossea, sviluppo tardivo dei denti, ipotensione muscolare. Si sviluppa una carenza di vitamina D negli adulti osteoporosi. Per la prevenzione dell'ipovitaminosi D viene utilizzata l'irradiazione ultravioletta della pelle e del cibo. Con un sovradosaggio di vitamina D (in dosi superiori a 2-3 mila volte terapeutiche 1.500.000 UI) si sviluppa ipervitaminosi: nei bambini, arresto della crescita, vomito, emaciazione, aumento della pressione sanguigna, agitazione con passaggio allo stupore. La base è l'ipercalcemia e la calcificazione degli organi interni.

Vitamina E (tocoferolo, antisterile)

1. Struttura. La vitamina E comprende un gruppo di composti: derivati ​​del tocolo con attività vitaminica. Sono noti 8 tipi di tocoferoli: α, β, γ, δ, ecc. L'α-tocoferolo (5,7,8-trimetiltocolo) ha l'attività più elevata.

2. Trasporto e metabolismo. La vitamina E non viene metabolizzata nel corpo. Il malassorbimento dei lipidi può portare a una carenza di tocoferolo perché il tocoferolo si dissolve nei grassi alimentari, viene rilasciato e assorbito durante la digestione. Il tocoferolo viene assorbito nell'intestino e, come parte dei chilomicroni, entra nel sangue attraverso la linfa. Il tocoferolo entra nei tessuti, nei capillari dei quali i chilomicroni sono stati esposti all'azione della lipoproteina lipasi e la vitamina E entra nel fegato come parte dei resti dei chilomicroni. Il tocoferolo viene trasportato dal fegato ai tessuti periferici come parte delle VLDL. depositato vitamina B tessuto adiposo, fegato E muscoli.

3. ruolo biologico.

3.1. La vitamina E si accumula nelle membrane cellulari e agisce come antiossidante, interrompendo la catena di reazioni dei radicali liberi. L'effetto antisterile è associato all'effetto antiossidante della vitamina E, quando essa, prevenendo il danno del perossido alle membrane, garantisce il normale contatto tra le cellule (impedisce la separazione prematura degli spermatogoni durante la maturazione degli spermatozoi o garantisce l'impianto di un ovulo fecondato nella mucosa uterina) .

A differenza di altre vitamine, la vitamina E non viene riutilizzata e dopo la sua azione deve essere sostituita da nuove molecole di tocoferolo.

L'azione antiossidante del tocoferolo è efficace in elevata concentrazione di ossigeno, quindi, si trova nelle membrane delle cellule con un'elevata pressione parziale di ossigeno (membrana degli eritrociti, cellule degli organi respiratori). Il fabbisogno di vitamina E aumenta con l’aumento dell’apporto di acidi grassi insaturi.

3.2. Vitamina E e selenio(Se) agiscono come sinergisti. Il Se è un componente della glutatione perossidasi, che neutralizza i radicali perossido. Se è necessario per il normale funzionamento del pancreas. Se la sua funzione è disturbata, la digestione e l'assorbimento dei lipidi e, secondariamente, della vitamina E sono disturbati.

3.3. La vitamina E può essere coinvolta funzionamento degli enzimi contenenti SH, influenzano la biosintesi del CoQ, partecipano ai meccanismi di trasferimento degli elettroni lungo la catena respiratoria dei mitocondri

4. fonte la vitamina E per l'uomo sono oli vegetali, nonché prodotti a base di cereali, rosa canina, lattuga, cavoli.

5. fabbisogno giornaliero. 20-30mg.

6. Carenza di vitamina E. Con una carenza di vitamina E, la formazione degli spermatozoi negli uomini e lo sviluppo del feto nelle donne vengono interrotti. Ci sono cambiamenti degenerativi nelle cellule degli organi riproduttivi, distrofia muscolare, cambiamenti degenerativi nelle cellule del midollo spinale, degenerazione grassa del fegato e dislipoproteinemia. L'anemia può svilupparsi nei neonati, quindi la vitamina E dovrebbe essere aggiunta alla dieta delle donne incinte e che allattano. L'anemia si sviluppa a causa di una diminuzione della produzione di emoglobina e di una riduzione della durata della vita dei globuli rossi. In violazione della digestione e dell'assorbimento dei lipidi, si sviluppa l'ipovitaminosi E, che porta a malattie neurologiche.

Vitamina K (fillochinone, antiemorragico)

1. Struttura. Tre composti hanno l’attività biologica della vitamina K. Vitamina K1(fillochinone) è un derivato del 2-metil-1,4-naftochinone contenente una catena laterale (fitolo) in posizione 3. Selezionato dall'erba medica. Vitamina K2(menachinone) isolato dalla farina di pesce in decomposizione. Sintetizzato dalla microflora intestinale. Si differenzia dalla vitamina K 1 per la struttura della catena laterale, rappresentata dal farnesildigeranil. Vitamina K3(menadione, sintetico) non ha una catena laterale in posizione 3. Sulla base di esso, A.B. Palladin ha sintetizzato un preparato idrosolubile vikasol (sale sodico del derivato bisolfito del 2-metil-1,4-naftochinone).

2. Trasporto e metabolismo. Gli acidi biliari sono necessari per l'assorbimento delle vitamine naturali del gruppo K (naftachinoni). Entrano nel sangue come parte dei chilomicroni attraverso la linfa. Vikasol può essere assorbito senza acidi biliari ed entra direttamente nella vena porta e nel fegato. La vitamina K viene inizialmente immagazzinata nel fegato, ma si esaurisce rapidamente.

3. ruolo biologico.

3.1. La vitamina K stimola la biosintesi nel fegato quattro fattori della coagulazione delle proteine(II-protrombina; VII-proconvertina; IX-fattore di Natale, o globulina antiemofila B; X-fattore di Stuart-Prower).

3.2. La vitamina K funziona come cofattore della carbossilasi sul palco modificazione post-traduzionale dei residui di glutammina della protrombina. La protrombina contiene 10 di questi residui, che vengono carbossilati dalla carbossilasi vitamina K-dipendente. Si forma il γ-carbossiglutammato, che viene poi chelato con il calcio, importante per la coagulazione del sangue.

3.3. La reazione di carbossilazione richiede CO 2 e la forma ridotta (idrochinoide) della vitamina K. Nel reticolo endoplasmatico avviene un ciclo di riduzione del prodotto della reazione carbossilasi della vitamina K (cioè da chinoide a idrochinoide). Il posto centrale è occupato da due reazioni della reduttasi (la prima utilizza un agente riducente del ditiolo, la seconda utilizza la reduttasi NADP-dipendente).

3.4. Vengono descritti la partecipazione della vitamina K alla fosforilazione ossidativa, la sua azione anabolica multilaterale e il funzionamento come parte delle membrane.

5. Fonte principale vitamina K - microflora intestinale. Forse l'assunzione di naftochinoni con gli alimenti (spinaci, zucca, cavoli, bacche di sorbo, fegato di animali).

6. fabbisogno giornaliero. Il fabbisogno giornaliero è convenzionalmente espresso in 0,2-0,3 mg.

7. Carenza di vitamina K. Con una normale microflora intestinale negli adulti non vi è carenza di vitamina K. La causa principale dell'ipovitaminosi K è la sterilizzazione intestinale con antibiotici e sulfamidici. Nei neonati è possibile una carenza di vitamina K, poiché la placenta non la lascia passare e l'intestino è sterile. I livelli plasmatici di vitamina K diminuiscono dopo il parto, ma vengono ripristinati dopo i pasti. Se il livello di protrombina è basso, può svilupparsi la sindrome emorragica. L'ipovitaminosi K si manifesta con malassorbimento, disfunzione del sistema epato-biliare e pancreatico, con atrofia della mucosa intestinale. Le principali manifestazioni dell'ipovitaminosi K sono associate ad alterata coagulazione intravascolare e sanguinamento.

Vitamine solubili in acqua

Le vitamine idrosolubili includono le vitamine B, C, P e H.

n C (acido ascorbico, vitamina antiscorbutica)

1. Struttura. La struttura della vitamina C è un g-lattone con 2 atomi di carbonio asimmetrici. Biologicamente attiva è la forma L dell'acido ascorbico.

Acido ascorbico Acido deidroascorbico

Le proprietà acide dell'acido ascorbico sono dovute alla presenza 2 gruppi idrossilici enolici. L'acido L-ascorbico viene ossidato reversibilmente per formare acido deidroascorbico sotto l'azione di un enzima ascorbato ossidasi. La riduzione dell'acido deidroascorbico in acido ascorbico viene effettuata con la partecipazione della reduttasi e del glutatione ridotto. Ascorbico E deidroascorbico gli acidi sono forme biologicamente attive della vitamina. Quando idratato in presenza di ossigeno, l'acido deidroascorbico viene ossidato irreversibilmente in acido 2,3-dichetogulonico, che non ha attività biologica e si decompone in acidi ossalico e treonico. Il tasso di distruzione delle vitamine aumenta con l'aumentare della temperatura, in un ambiente alcalino, sotto l'azione dei raggi UV, in presenza di sali di metalli pesanti (ad esempio rame). L'acido ascorbico viene distrutto durante la cottura e la conservazione degli alimenti.

2. Metabolismo. L'acido ascorbico viene assorbito per semplice diffusione in tutto il tratto gastrointestinale, ma principalmente nell'intestino tenue. Non si accumula nel corpo.

3. ruolo biologico.

3.1.Reazioni redox. L'acido ascorbico è un forte agente riducente con un potenziale redox di +0,08 V ed è coinvolto nella riduzione dell'ossigeno molecolare, dei nitrati e dei citocromi UN E Con.

3.2.La vitamina C è coinvolta idrossilazione avanzi prolina E lisina durante la biosintesi del collagene. I gruppi OH dell'idrossiprolina sono necessari per stabilizzare la struttura del collagene formando legami idrogeno tra le catene della tripletta elica del collagene maturo. L'idrossilisina nel collagene serve a formare siti di legame dei polisaccaridi. La vitamina C è essenziale per la formazione delle ossa poiché i componenti principali del tessuto osseo sono la matrice organica, il collagene, il calcio inorganico e il fosfato.

3.3.La vitamina C è coinvolta metabolismo della tirosina. Durante la sintesi delle catecolamine, noradrenalina e adrenalina dalla tirosina nelle ghiandole surrenali e nel sistema nervoso centrale, Cu+ viene ossidato a Cu 2+; per il processo inverso di riduzione del rame è necessario l'acido ascorbico. Inoltre, l'acido ascorbico è necessario per l'ossidazione del p-idrossifenilpiruvato in acido omogentisico.

3.4.La vitamina C è essenziale per idrossilazione del triptofano in idrossitriptofano durante la biosintesi serotonina.

3.5. La vitamina C è coinvolta nella biosintesi acidi biliari dal colesterolo.

3.6.Sintesi degli ormoni corticosteroidi. La corteccia surrenale contiene un’alta concentrazione di vitamina C, soprattutto durante i periodi di stress. Si ritiene che la vitamina C sia essenziale per la sintesi dei corticosteroidi.

3.7.Metabolismo del ferro e dell'emoglobina. L'acido ascorbico aumenta l'assorbimento del ferro da parte dell'intestino riducendolo a Fe 2+. La vitamina C è coinvolta nella formazione della ferritina e nel rilascio del ferro dalla sua associazione con la transferrina, proteina di trasporto del sangue. La vitamina C contribuisce ripristino della metaemoglobina V emoglobina e partecipa alla degradazione dell'emoglobina in pigmenti biliari.

3.8.Metabolismo dell'acido folico. La forma attiva dell'acido folico è l'acido tetraidrofolico (THFA). La vitamina C è essenziale per la formazione di THFA. Insieme al THFC, l'acido ascorbico è coinvolto nella maturazione degli eritrociti.

3.9. La vitamina C lo è antiossidante idrosolubile e protegge le cellule dai danni dei radicali liberi. La funzione antiossidante dell'acido ascorbico è spiegata dalla sua capacità di donare facilmente due atomi di idrogeno utilizzati nelle reazioni di neutralizzazione dei radicali liberi.

4. Fonti. Negli esseri umani, nelle scimmie, nelle cavie e in alcuni uccelli, la vitamina C non viene sintetizzata. La fonte di vitamina C sono gli alimenti vegetali. Particolarmente ricchi di peperoni, ribes nero, aneto, prezzemolo, cavoli, acetosa, agrumi, fragole.

5. fabbisogno giornaliero 70-120 mg.

6. Ipovitaminosi. Manifestato da aumento dell'affaticamento, diminuzione dell'appetito, ridotta resistenza al raffreddore, gengive sanguinanti. L'avitaminosi porta alla malattia dello scorbuto (scurbut). I principali sintomi dello scorbuto sono la ridotta permeabilità capillare dovuta all'insufficiente idrossilazione della prolina e della lisina nel collagene, l'allentamento e la perdita dei denti, gonfiore e dolore alle articolazioni, danni alle ossa, compromissione della guarigione delle ferite. La morte avviene solitamente per emorragia nella cavità pericardica. Con l'ipovitamiasi C, l'anemia da carenza di ferro si sviluppa a causa del ridotto assorbimento del ferro e dell'utilizzo delle sue riserve nella sintesi dell'emoglobina.

Vitamina B 1 (tiamina, vitamina antineuritica)

1. Struttura. La vitamina B 1 è stata la prima vitamina isolata in forma cristallina da K. Funk nel 1912. Successivamente è stata effettuata la sua sintesi chimica. Ha preso il nome - tiamina - dalla presenza di un atomo di zolfo e di un gruppo amminico nella sua molecola. La tiamina è costituita da 2 anelli eterociclici: aminopirimidina e tiazolo. Quest'ultimo contiene un gruppo funzionale cataliticamente attivo: il carbanione (carbonio relativamente acido tra zolfo e azoto).

La tiamina è stabile in un ambiente acido e resiste al riscaldamento ad alte temperature. In un ambiente alcalino, la vitamina viene rapidamente distrutta.

2. Trasporto e metabolismo. Nel tratto gastrointestinale, varie forme di vitamina vengono idrolizzate per formare tiamina libera. La maggior parte della tiamina viene assorbita nell'intestino tenue mediante uno speciale meccanismo di trasporto attivo, il resto viene scomposto dalla tiaminasi dei batteri intestinali. Con il flusso sanguigno, la tiamina assorbita entra prima nel fegato, dove viene fosforilata e poi trasferita ad altri organi e tessuti.

tiamina pirofosfato chinasi

ATP + tiamina tiamina pirofosfato + AMP

La vitamina B 1 è presente in vari organi e tessuti sia sotto forma di tiamina libera che dei suoi esteri fosforici: tiamina monofosfato, tiamina difosfato e tiamina trifosfato. La principale forma di coenzima (60-80% del totale intracellulare) è difosfato di tiamina, O pirofosfato di tiamina(TDF o TPF). Il ruolo della tiamina monofosfato e della tiamina trifosfato è ancora sconosciuto. Forse loro e la forma adenilata della tiamina trifosfato sono coinvolti nelle reazioni adattative, cambiando i flussi metabolici dei carboidrati.

Dopo la scomposizione dei coenzimi, la tiamina libera viene escreta nelle urine e viene determinata come tiocromo.

3. Ruolo biologico

3.1. Il TPP è un coenzima di 3 complessi polienzimatici che catalizzano la decarbossilazione ossidativa dei chetoacidi:

- Complesso della piruvato deidrogenasi partecipa alla decarbossilazione ossidativa del piruvato, che è una delle reazioni chiave nel metabolismo dei carboidrati. Come risultato di questa reazione, si forma l'acetil-CoA, che è incluso nel ciclo dell'acido tricarbossilico, dove viene ossidato in anidride carbonica e acqua. Grazie a questa reazione si creano le condizioni per la completa ossidazione dei carboidrati e l'utilizzo di tutta l'energia in essi contenuta. Inoltre, l'acetil-CoA risultante funge da fonte per la sintesi di molti prodotti biologici: acidi grassi, colesterolo, ormoni steroidei, corpi chetonici, ecc.

2-Complesso dell'ossoglutorato deidrogenasi fa parte del TCA e catalizza la decarbossilazione ossidativa del 2-ossoglutarato con formazione di succinil-CoA.

- Chetoacido deidrogenasi a catena ramificata coinvolto nel metabolismo di valina, isoleucina e leucina.

3.2. Il TPP è un coenzima transchetolasi- un enzima della via del pentoso fosfato dell'ossidazione dei carboidrati, i cui prodotti principali sono NADPH e ribosio.

3.3. La vitamina B 1 prende parte alla sintesi acetilcolina, catalizzando la formazione di acetil-CoA nella reazione della piruvato deidrogenasi.

4. Fonti. Gran parte della vitamina si trova nel pane integrale, nel guscio dei semi di cereali, nella soia, nei fagioli, nei piselli e nel lievito. Tra i prodotti di origine animale, i più ricchi di tiamina sono il fegato, il maiale magro, i reni, il cervello, il tuorlo d'uovo.

5. fabbisogno giornalieroè 2-3 mg.

6. Ipovitaminosi. Manifestato da debolezza, perdita di appetito, nausea, sensibilità periferica ridotta, intorpidimento delle dita, sensazione di gattonare, dolore lungo i nervi. Con l'avitaminosi, la malattia si sviluppa prendere, prendere, che in indiano significa pecora, poiché l'andatura di una persona malata somiglia all'andatura di una pecora. Nei pazienti affetti da beriberi, le concentrazioni di piruvato e 2-ossoglutarato nel sangue sono più elevate del normale. La bassa attività della transchetolasi negli eritrociti è un criterio di laboratorio per il beriberi. Caratteristico è il danno al sistema cardiovascolare e nervoso. La particolare sensibilità del tessuto nervoso alla carenza di tiamina è spiegata dal fatto che la forma coenzimatica di questa vitamina è necessaria affinché le cellule nervose assorbano il glucosio.

Vitamina B2 (riboflavina)

1. Struttura. La vitamina B 2 differisce dalle altre vitamine in giallo (flavus - giallo). La riboflavina è stata isolata per la prima volta dal siero di latte fermentato. La molecola di riboflavina è costituita da un nucleo eterociclico di isoallossazina, al quale è attaccato in nona posizione l'alcool ribitolo (un derivato del D-ribosio). Il termine flavine si riferisce a molti derivati ​​dell'isoallossazina con attività vitaminica B 2 .

La biosintesi delle flavine è svolta dalle cellule vegetali e da molte cellule batteriche, oltre che da muffe e lieviti. A causa della biosintesi microbica della riboflavina nel tratto gastrointestinale, i ruminanti non necessitano di questa vitamina. In altri animali e nell’uomo le flavine sintetizzate nell’intestino non sono sufficienti a prevenire l’ipovitaminosi. La vitamina B 2 è altamente solubile in acqua, stabile in un ambiente acido, ma facilmente distrutta in ambiente neutro e alcalino, nonché sotto l'azione della luce visibile e UV. La vitamina B 2 subisce facilmente una riduzione reversibile, aggiungendo idrogeno nel sito dei doppi legami (1 e 10), trasformandosi da una soluzione giallo-arancione in una forma leuco incolore.

2. Metabolismo. Negli alimenti la vitamina B 2 si trova principalmente nelle sue forme coenzimatiche associate alle proteine: le flavoproteine. Sotto l'influenza degli enzimi digestivi, la vitamina viene rilasciata e assorbita per semplice diffusione nell'intestino tenue. Nelle cellule della mucosa intestinale, del sangue, del fegato e di altri tessuti, la riboflavina viene fosforilata in flavina mononucleotide (FMN) e flavina adenina dinucleotide (FAD).

3. Ruolo biologico. Il significato principale della vitamina B 2 è che fa parte dei coenzimi flavini - FMN e FAD. Esistono due tipi di reazioni catalizzate dalle flavoproteine:

3.1. Apparati respiratori semplici- questa è l'ossidazione diretta del substrato con la partecipazione di ossigeno, il trasferimento ad esso di atomi di idrogeno con la formazione di H 2 O 2 e il rilascio di energia sotto forma di calore: ossidasi degli amminoacidi L e D, xantina ossidasi(distruzione delle basi azotate puriniche), aldeide deidrogenasi(degradazione delle aldeidi).

3.2. Coinvolto nei sistemi respiratori complessi

FAD nel secondo complesso della catena di trasporto degli elettroni nella membrana interna dei mitocondri ( succinato deidrogenasi E acil-CoA deidrogenasi- deidrogenazione del metabolita CTK succinato e acil-CoA durante l'ossidazione degli acidi grassi);

- NADH deidrogenasi(trasferimento di protoni ed elettroni dalla matrice NADH+H+ all'FMN del primo complesso della catena di trasporto degli elettroni nella membrana interna dei mitocondri);

- diidrolipoil deidrogenasi(Il FAD è un cofattore dell'enzima di decarbossilazione ossidativa degli α-chetoacidi piruvato e 2-ossoglutarato).

4. Fonti. Le principali fonti di riboflavina sono il fegato, i reni, il tuorlo d'uovo, la ricotta. Il latte acido contiene più vitamine del latte fresco. C'è poca vitamina B 2 nei prodotti vegetali (un'eccezione sono le mandorle). Parzialmente, la carenza di riboflavina viene reintegrata dalla microflora intestinale.

5. fabbisogno giornaliero 2-3mg.

6. Ipovitaminosi. La mancanza di vitamina B 2, come di altre vitamine, si manifesta con debolezza, aumento dell'affaticamento e tendenza al raffreddore. Manifestazioni specifiche della carenza di riboflavina comprendono processi infiammatori nelle mucose. La mucosa delle labbra e della cavità orale si secca, la lingua acquisisce un colore rosso vivo, compaiono delle crepe agli angoli della bocca. C'è una maggiore desquamazione dell'epitelio della pelle, soprattutto sul viso.

Vitamina PP (acido nicotinico, nicotinamide, niacina; vitamina antipellagrica)

1. Struttura. La vitamina PP fu isolata da K. Evelheim nel 1937. La sua somministrazione preveniva o curava la pellagra. PP significa antipellagrico (pellagra preventiva).

L'acido nicotinico è un acido piridina-3-carbossilico, la nicotinammide è la sua ammide. Entrambi i composti nel corpo vengono facilmente convertiti l'uno nell'altro e quindi hanno la stessa attività vitaminica.

La vitamina PP è scarsamente solubile in acqua, ma bene in soluzioni acquose di alcali.

2. Metabolismo. La vitamina PP fornita con gli alimenti viene rapidamente assorbita nello stomaco e nell'intestino, principalmente per semplice diffusione. Con il flusso sanguigno l’acido nicotinico entra nel fegato e in altri organi, mentre la nicotinammide penetra in essi un po’ più lentamente. Nei tessuti, entrambi i composti vengono utilizzati principalmente per la sintesi di forme di coenzima. OLTRE + E NADP+. Alcuni dei coenzimi della nicotinammide sono sintetizzati negli animali da triptofano. Tuttavia, questa via, che coinvolge fino al 2% del pool metabolico del triptofano, ha un’efficienza significativamente inferiore alla prima (cioè, da un precursore vitaminico diretto).

3. ruolo biologico. Il valore della vitamina PP è determinato dal ruolo dei coenzimi NAD+ e NADP+.

3.1.OLTRE + parte delle deidrogenasi che catalizzano redox trasformazioni di piruvato, isocitrato, 2-ossoglutarato, malato, ecc. Queste reazioni sono più spesso localizzate nei mitocondri e servono a rilascio di energia nelle catene mitocondriali coniugate di trasporto di protoni ed elettroni.

3.2.NADP+ fa parte di deidrogenasi (reduttasi), che sono più spesso localizzati nel citosol o nel reticolo endoplasmatico e servono a sintesi riducenti(deidrogenasi NADP-dipendenti della via dei pentoso fosfati, sintesi degli acidi grassi e del colesterolo, sistemi di monoossigenasi mitocondriali per la sintesi degli acidi biliari, ormoni corticosteroidi) e la neutralizzazione degli xenobiotici (ossidazione microsomiale, ossigenasi a funzione mista).

3.3.OLTRE + E NADP+- regolatori allosterici degli enzimi del metabolismo energetico.

4. Fonti. Prodotti animali (fegato, carne) e prodotti vegetali (riso, pane, patate). Il latte e le uova contengono tracce di niacina, ma contengono triptofano, che può compensare un apporto alimentare insufficiente di nicotinamide.

5. fabbisogno giornalieroè 15-25 mg.

6. Ipovitaminosi. Un segno caratteristico della carenza di vitamina PP è il complesso dei sintomi delle “tre D”: dermatiti, diarrea e demenza. La base della malattia è una violazione dell'attività proliferativa e dell'energia delle cellule. La dermatite si nota più spesso sulle aree aperte della pelle, che diventa rossa sotto l'influenza della luce solare, si copre di macchie senili (sul viso sotto forma di ali di farfalla) e si stacca. La lingua diventa rossa brillante e dolorosa, si ispessisce e appaiono delle crepe. L'indigestione si manifesta con nausea, mancanza di appetito, dolore addominale. La funzione dei nervi periferici e del sistema nervoso centrale è compromessa.

I sintomi dell'ipovitaminosi si sviluppano:

1. Negli individui con carenza di proteine ​​nella dieta. Ciò è spiegato dal fatto che le proteine ​​animali contengono la quantità ottimale dell'aminoacido triptofano, della vitamina B 6 e di alcuni altri componenti necessari per la sintesi della niacina.

2. Con una dieta costante a base di mais, dove la niacina è in forma legata.

3. Con un'alimentazione costante di sorgo, i cui chicchi contengono un'alta concentrazione di leucina, un inibitore dell'enzima chiave che converte il triptofano in NAD+.

4. Con una carenza di vitamina B 6 e della sua forma coenzimatica di piridossal fosfato, necessaria per la sintesi delle forme coenzimatiche di vitamina PP dal triptofano.

Acido pantotenico

L'acido pantotenico è ampiamente distribuito in natura, da cui il nome pantos- ovunque. La vitamina fu scoperta da R. Williams nel 1933, un decennio dopo era già sintetizzata chimicamente.

1.Struttura. L'acido pantotenico è costituito da acido pantoico (acido α,γ,-diidrossi-β,β-dimetilbutirrico) e β-alanina.

L'acido pantotenico è un liquido viscoso di colore giallo chiaro, altamente solubile in acqua. È instabile e facilmente idrolizzabile nel sito del legame peptidico sotto l'azione di acidi e alcali deboli.

2. Metabolismo. L'acido pantotenico con il flusso sanguigno entra nei tessuti dopo l'assorbimento in tutto l'intestino tenue e nell'intestino crasso (a seconda della concentrazione mediante diffusione semplice o trasporto attivo). L'acido pantotenico viene fosforilato utilizzando l'ATP 4'-fosfopantotenato. L'aggiunta di cisteina e la sua decarbossilazione porta alla formazione di tioetanolammina, da cui 4'-fosfopantoteina- gruppo prostetico coenzima A(HS-CoA) e proteina che trasporta acile(APB).

3. ruolo biologico. Il gruppo tiolo in HS-CoA e ACP agisce come trasportatore del radicale acilico.

HS-CoA è coinvolto nei processi metabolici più importanti:

a) nel metabolismo dei carboidrati - decarbossilazione ossidativa del piruvato in acetil-CoA e del 2-ossoglutarato in succinil-CoA;

b) nella β-ossidazione degli acidi grassi negli stadi di attivazione fino alla formazione di acil-CoA e scissione tiolitica con rilascio di acetil-CoA e acil-CoA accorciato di 2 atomi di carbonio;

c) sotto forma di acetil-CoA, il residuo di acetile viene ceduto alla colina con formazione del mediatore acetilcolina;

d) il succinil-CoA è coinvolto nella sintesi delle porfirine;

e) nella biosintesi degli acidi grassi, la funzione di trasportatore di metaboliti nel complesso palmitato sintasi è svolta dalla 4-fosfopantetina;

g) l'acetil-CoA è utilizzato per la sintesi di corpi chetonici, colesterolo e ormoni steroidei.

Acetil-CoA Occupa un posto centrale nei processi di interconnessione tra gli scambi di carboidrati, aminoacidi e acidi grassi.

4. Fonti. L'acido pantotenico è ampiamente distribuito nei prodotti di origine animale (fegato, reni, uova, carne, latte, ecc.) e vegetale (patate, cavoli, frutta, ecc.). Sintetizzato dalla microflora intestinale.

5. fabbisogno giornaliero. 10-15mg

6. Ipovitaminosi. A causa dell’ampia distribuzione della vitamina negli alimenti, il beriberi non è presente. I sintomi dell'ipovitaminosi non sono specifici: dermatiti, neuriti, ulcere delle mucose del tratto digestivo, violazioni della produzione di ormoni steroidei, ecc.

Vitamina B 6 (piridossina, piridossilo, vitamina antidermatite)

1. Struttura. La vitamina B 6 comprende tre derivati ​​naturali della piridina con la stessa attività vitaminica: piridossina, piridossale, piridossamina, che differiscono tra loro per la presenza rispettivamente di un gruppo alcolico, aldeidico o amminico. La vitamina B6 fu scoperta nel 1934 da A. Szent-Gyorgyi. La piridossina è altamente solubile in acqua ed etanolo, stabile in ambienti acidi e alcalini, ma facilmente distrutta dalla luce a pH 7,0.

2 Metabolismo. Tutte le forme della vitamina, dopo essere state assorbite nell'intestino tenue, vengono trasportate attraverso il flusso sanguigno ai tessuti e, penetrando nelle cellule, vengono fosforilate con la partecipazione dell'ATP. Le funzioni coenzimatiche sono svolte da due derivati ​​fosforilati della piridossina: piridossal fosfato E piridossamina fosfato.

3. ruolo biologico. La vitamina B6 è caratterizzata da un ampio spettro di azione biologica. Partecipa alla regolazione del metabolismo delle proteine, dei carboidrati e dei lipidi, alla biosintesi dell'eme e delle ammine biogene, degli ormoni tiroidei e di altri composti biologicamente attivi. Le forme coenzimatiche della vitamina B 6 fanno parte dei seguenti enzimi:

- aminoacidi aminotransferasi, catalizzando il trasferimento reversibile del gruppo NH 2 dall'amminoacido all'α-chetoacido (formazione di amminoacidi non essenziali, deaminazione indiretta e amminazione riduttiva degli amminoacidi).

- Decarbossilasi degli amminoacidi scindendo il gruppo carbossilico degli amminoacidi, che porta alla formazione di ammine biogene.

- Enzimi che svolgono deaminazione non ossidativa serina, treonina, triptofano, aminoacidi contenenti zolfo.

- Fosforilasi muscolare(decomposizione del glicogeno).

4. Fonti. La vitamina B6 è ricca di legumi, cereali, prodotti a base di carne, pesce e patate. È sintetizzato dalla microflora intestinale, coprendo parzialmente il fabbisogno di questa vitamina da parte dell'organismo.

5. fabbisogno giornaliero. 2-3mg

6. Ipovitaminosi. Le principali manifestazioni della carenza di vitamina B6 sono l'anemia ipocromica e le convulsioni. Si nota lo sviluppo di dermatite seborroica secca, stomatite e glossite. Molto spesso si osserva una carenza di piridossina:

a) nei bambini piccoli con alimentazione artificiale con latte sterilizzato (la vitamina B 6 viene distrutta), nelle donne in gravidanza con tossicosi;

b) con carenza di gruppo di vitamine del gruppo B;

c) quando la microflora intestinale viene soppressa dagli antibiotici;

d) negli alcolisti, poiché l'acetaldeide stimola la defosforilazione del piridossal fosfato.

Vitamina H (biotina)

La biotina è la prima sostanza identificata come fattore di crescita essenziale per i microrganismi. Successivamente è stato dimostrato l'effetto tossico dell'albume d'uovo crudo sui ratti. L'uso del fegato o del lievito eliminava questo effetto. Il fattore che previene lo sviluppo della tossicosi era chiamato vitamina H o biotina (dal greco. bios- vita).

Struttura. La molecola di biotina è composta da imidazolo E tiofene anelli e catena laterale, rappresentato dal resto acido valerico. Negli alimenti la biotina è rappresentata dalla biocitina, che viene rilasciata mediante proteolisi.

2.Metabolismo

2.1. La biotina non viene modificata nel corpo, ma si lega covalentemente agli enzimi in cui svolge la sua funzione gruppo prostetico.

2.2. La biotina si lega tramite un gruppo carbossilico libero a un residuo di lisina dell'apoenzima. Il complesso biotina-enzima interagisce con la CO 2 in presenza di ATP (una fonte di energia) per formare un complesso carbossibiotina-enzima.

2.3. Biotinidasi catalizza la rimozione della biotina dall'enzima durante il metabolismo delle proteine, consentendo il riutilizzo della biotina.

3. ruolo biologico. La biotina agisce come un coenzima di reazione carbossilazione, in cui funge da trasportatore di CO 2 . Nel corpo, 4 enzimi utilizzano la biotina come coenzima.

- Piruvato carbossilasi. Come risultato della carbossilazione del piruvato, si forma l'ossalacetato, che viene utilizzato nella gluconeogenesi e nel TCA.

- Acetil-CoA carbossilasi catalizza la carbossilazione dell'acetil-CoA per formare malonil-CoA. La reazione viene utilizzata nella biosintesi degli acidi grassi superiori.

- Propionil-CoA carbossilasi converte il propionil-CoA in D-metilmalonil-CoA, che viene convertito in succinato (entra in TCA).

- β-metil-crotonil-CoA-carbossilasi coinvolto nel catabolismo della leucina e delle sostanze contenenti strutture isoprenoidi.

4. Fonti. La biotina è sintetizzata in quantità sufficiente dalla microflora intestinale. Fonti alimentari: fegato, cuore, tuorlo d'uovo, crusca, fagioli, soia, cavolfiore, ecc.

5. fabbisogno giornaliero. 150-200 microgrammi.

6. Disavanzo. Le cause dell’ipovitaminosi sono:

a) l'uso di antibiotici che inibiscono la crescita della microflora intestinale;

b) ingestione di una grande quantità avidina- una glicoproteina presente nelle proteine ​​delle uova di gallina, che interrompe l'assorbimento della biotina a causa della formazione di un complesso insolubile;

c) nutrizione parenterale a lungo termine;

d) un difetto ereditario nell'enzima che lega la biotina ai residui di lisina dell'apoenzima.

Sintomi L'ipovitaminosi comprende dermatite seborroica, nausea, perdita di capelli, dolore muscolare.

Acido folico (folacina, vitamina B9, vitamina Bc)

La vitamina fu scoperta nel 1930 quando fu dimostrato che le persone affette da un certo tipo di anemia megaloblastica potevano essere curate includendo lievito o estratto di fegato nella loro dieta. Nel 1941, l'acido folico fu isolato dalle foglie verdi (lat. folium - foglia, da cui il nome della vitamina). Questo composto è stato chiamato vitamina Bc per la sua capacità di curare l'anemia nei polli (dall'inglese pollo - pollo).

1. Struttura. L'acido folico è costituito da pteridina legata all'acido p-aminobenzoico (PABA) e all'acido glutammico.

L'acido folico è scarsamente solubile in acqua e solventi organici, ma bene in soluzioni alcaline. Viene distrutto dall'azione della luce, durante la lavorazione e la conservazione delle verdure.

2. Metabolismo. Il folato è presente negli alimenti sotto forma di poliglutammato. I residui esterni di glutammato vengono rimossi nell'intestino prima dell'assorbimento, principalmente nell'intestino tenue. Forma coenzimatica L'acido folico è l'acido 5,6,7,8-tetraidrofolico (THFA), che si forma dall'acido folico per azione dell'enzima diidrofolato reduttasi e utilizzando NADPH+H+ come donatore di atomi di idrogeno.

3. ruolo biologico.

3.1. L'acido folico è un trasportatore di radicali monocarbonio (gruppi): metile(-CH 3), metilene(= canale 2), metenile(≡CH), formile(-CHO), idrossimetil (-CH 2 OH) e formimina(-CH=NH). I frammenti ad un carbonio si legano al THPA nelle posizioni N 5 o N 10. L'aggiunta di un radicale formile in posizione 5 porta alla formazione di N 5 -formilTHPA, noto come folinico acido. Il metileneTHFA è formato dall'interazione del THFA con glicina, serina o colina.

3.2. Il folato è necessario per la sintesi dei nucleotidi purinici (2 e 8 atomi di carbonio) e per la sintesi della timina. N 5 ,N 10 -metileneTHFC introduce un gruppo metilico durante la sintesi del timidilato, necessario per la sintesi del DNA e la formazione dei globuli rossi.

3.3. Partecipa a metabolismo di glicina, serina ed etanolamina.

3.4. La N-formilmetionina lo è amminoacido iniziante nella sintesi proteica nei procarioti.

3.5. Il THFA è presente nel sangue come N 5 -metilTHFA. La vitamina B 12 è necessaria per la conversione di N 5 -metilTHFC in THFC nella reazione di conversione dell'omocisteina in metionina. Questa reazione è necessaria per il rilascio di THPA libero e il riutilizzo nel metabolismo di un carbonio. In caso di carenza di vitamina B 12 la conversione dell'N 5 -metilTHFC in THFC ("trappola del folato") viene bloccata.

4. Fonti: microflora intestinale, verdure fresche - lattuga, cavoli, carote, pomodori, cipolle.

5. fabbisogno giornaliero: 50-200 mcg.

6. Disavanzo. Con una carenza di THPA, la sintesi di purine e timina viene ridotta, il che porta ad una compromissione della sintesi del DNA. Ciò si manifesta nello sviluppo anemia megaloblastica, che è caratterizzato dalla comparsa nel sangue di forme nucleate immature di eritrociti.

Vitamina B 12 (cobalamina, vitamina antianemica)

L'anemia perniciosa (morbo di Addison-Birmer) rimase una malattia mortale fino al 1926, quando per la prima volta fu usato il fegato crudo per curarla. La ricerca di un fattore antianemico contenuto nel fegato portò al successo e nel 1955 Dorothy Hodgkin decifrò la struttura di questo fattore e la sua configurazione spaziale utilizzando il metodo dell'analisi della diffrazione dei raggi X.

1.Struttura. La struttura della vitamina B 12 è diversa dalla struttura di tutte le altre vitamine. la presenza di uno ione metallico nella molecola- cobalto. Il cobalto è legato da legami di coordinazione con atomi di azoto che fanno parte di quattro anelli pirrolici, che formano una struttura planare (piatta) chiamata corrin. Gli anelli pirrolici I, II, III sono collegati tramite ponti di metilene, IV e I - direttamente. Perpendicolare al piano della corrina si trova un nucleotide contenente 5,6-dimetilbenzimidazolo, α-D-ribosio e un residuo di acido fosforico, che è legato mediante un legame di coordinazione all'atomo di cobalto (Fig. 10.2). Negli alimenti, la cobalamina contiene un atomo di cobalto ossidato (III). Per la formazione di forme coenzimatiche attive, l'atomo di cobalto viene ridotto a Co (I).

Nella vitamina B 12, gli atomi di carbonio degli anelli pirrolici sono sostituiti da radicali metile, acetamide e propionammide. Il radicale propionammide nell'anello IV è legato tramite alcol isopropilico al residuo fosfato del nucleotide.

L'atomo di cobalto è trivalente ed è legato covalentemente al gruppo CN. L'intera struttura è stata denominata cianocobalamina o cobalamina perché si ritiene che lo ione cianuro sia un artefatto dipendente dal metodo di isolamento.

Le cobalamine sono solubili in acqua, termostabili e stabili in presenza di soluzioni acide a pH 4,0.

2. Trasporto e metabolismo

2.1. La vitamina B 12 presente negli alimenti si chiama Il fattore esterno del castello. La vitamina viene assorbita nell'intestino tenue in combinazione con Fattore intrinseco del castello(una glicoproteina secreta dalle cellule parietali dello stomaco).

La vitamina B 12 si trova negli alimenti in combinazione con le proteine. Nello stomaco, sotto l'azione dell'acido cloridrico e della pepsina, la vitamina B 12 viene rilasciata dal complesso con le proteine ​​e si lega a cobalofilina(proteina R, aptocorrina) - una proteina secreta dalla saliva. Nel duodeno il complesso si decompone, la cobalofilina viene idrolizzata dalle proteasi pancreatiche, la vitamina B 12 si lega al fattore interno di Castle. Il complesso vitamina B 12-fattore interno Castle viene assorbito nell'ileo distale attraverso i recettori ( cubilini) che legano il complesso ma non legano il fattore libero o la vitamina libera. L'altra proteina megalina- si associa alla cubilina e provvede al processo di endocitosi per l'assorbimento del complesso

Riso. 10.2. Vitamina B12.

2.2. La vitamina viene trasportata nel sangue in combinazione con proteine ​​chiamate transcobalamine e viene convertito in metilcobalamina e 5-deossiadenosilcobalamina nel fegato, nelle cellule del midollo osseo e nei reticolociti. Transcobalamina I partecipa all'immagazzinamento e alla riserva di vitamina idrosolubile nel fegato e nel plasma sanguigno (riserva circolante). Transcobalamina II trasporta la vitamina nel sangue. Il complesso transcobalamina II-vitamina B 12 entra nelle cellule periferiche per endocitosi. Nei lisosomi cellulari la transcobalamina II viene distrutta, la vitamina viene rilasciata sotto forma di idrossicobalamina, che viene convertita nel citosol in metilcobalamina o nei mitocondri in 5-deossiadenosilcobalamina. Circa 4-5 mg di vitamina vengono immagazzinati nel fegato e queste riserve sono sufficienti per fornire all'organismo la vitamina per 4-6 anni.

3. ruolo biologico.

Nel corpo umano, la vitamina è necessaria per 2 reazioni più importanti:

3.1. 5-deossiadenosilcobalaminaè un coenzima mutasi metilmalonil-CoA, che converte il metilmalonil-CoA in succinil-CoA. Il metilmalonil-CoA si forma come intermedio nel catabolismo della valina e nella carbossilazione del propionil-CoA, sintetizzato dal catabolismo dell'isoleucina, del colesterolo, degli acidi grassi con un numero dispari di atomi di carbonio, o direttamente dall'acido propionico (un prodotto dell'attività microbiologica fermentazione nell'intestino). Come risultato di questa reazione, il metilmalonil-CoA viene convertito in succinil-CoA.

3.2. Metilcobalaminaè un coenzima dell'omocisteina metiltransferasi, un enzima che catalizza la metilazione dell'omocisteina a metionina. La cobalamina prende i gruppi metilici dall'acido N 5 -metiltetraidrofolico e lo converte in tetraidrofolato. Il significato metabolico di questa reazione è che vengono preservate le riserve di metionina e tetraidrofolato, necessarie per la sintesi di purina, nucleotidi pirimidinici e la sintesi degli acidi nucleici. In caso di carenza di vitamina B 12, il folato è costantemente sotto forma di N 5 -metil-THFA ("folato" o trappola metilica).

3.3. La vitamina B12 è necessaria per la conversione dei D-ribonucleotidi in desossi-D-ribonucleotidi. Questa reazione nei procarioti è catalizzata da una specifica ribonucleotide reduttasi.

4. Fonti. I microrganismi sono la principale fonte di vitamina. Negli alimenti vegetali la vitamina B 12 è assente. In piccole quantità, la vitamina è prodotta dai batteri sulla superficie dei frutti. Una quantità significativa di vitamina si trova nel fegato, nel lievito, nel latte, nel tuorlo d'uovo.

5. fabbisogno giornaliero. 2-5 mg.

6. Disavanzo.

1. La circolazione enteroepatica della vitamina B12 fornisce all'organismo quantità sufficienti di vitamina e si può sviluppare una carenza se la vitamina non è presente nella dieta per diversi anni. Nelle malattie dello stomaco o dell'ileo, la carenza vitaminica può svilupparsi più rapidamente.

2. L'anemia perniciosa è una conseguenza della carenza di vitamina B 12 ed è caratterizzata da una violazione della sintesi del DNA, dalla formazione di eritrociti e dalla comparsa di forme nucleari immature di eritrociti (megaloblasti).

3. Il vegetarianismo prolungato può portare a una carenza di vitamina B12.

Sostanze simili alle vitamine

Oltre alle vitamine sopra descritte, negli alimenti sono presenti altri componenti che sono fattori indispensabili.

Colina

Best e Huntsman (1934) scoprirono che la carenza di colina nei ratti provoca fegato grasso. Tuttavia, la colina può essere adeguatamente sintetizzata nell'organismo (dalla serina) ed è presente in molti alimenti (latte, uova, fegato, cereali, ecc.).

1.Struttura. Secondo la struttura chimica, la colina è un alcol amminoetilico contenente 3 gruppi metilici nell'atomo di azoto.

2.ruolo biologico.

2.1. È un componente dei fosfolipidi (lecitine), che sono componenti delle membrane e sono coinvolti nel trasporto dei lipidi.

2.2. Previene l'accumulo di lipidi nel fegato (fattore lipotropico), che si spiega con la partecipazione alla sintesi di fosfolipidi e lipoproteine ​​che trasportano i grassi dal fegato.

2.3. Partecipa al metabolismo dei radicali monocarbonici grazie alla presenza di tre gruppi metilici nella struttura.

2.4. Un precursore per la sintesi dell'acetilcolina, coinvolta nella trasmissione dell'impulso nervoso.

3. Le fonti alimentari sono carne e cereali. Il fabbisogno giornaliero è in media di 0,5 g.

4. Fallimento. Non sono state descritte manifestazioni di carenza di colina nell'uomo. Negli animali si notano infiltrazioni grasse del fegato e danni ai vasi sanguigni.

Inositolo

1.Struttura. Secondo la sua struttura chimica, è un alcol ciclico a sei atomi di cicloesano, altamente solubile in acqua.

2.ruolo biologico.

2.1. Necessario per la sintesi del fosfatidilinositolo (un componente delle membrane cellulari).

2.2. Agisce come fattore lipotropico (insieme alla colina) e previene l'accumulo di grassi nel fegato.

2.3. Media l'azione di alcuni ormoni (inositolo-1,4,5-trifosfato). L'inositolo trifosfato promuove il rilascio di calcio dal reticolo endoplasmatico.

2.4. È stata notata un'elevata concentrazione nel muscolo cardiaco, sebbene la funzione non sia nota.

3. . L'inositolo si trova in tutti i prodotti di origine animale e vegetale, soprattutto nel fegato, nel cervello, nella carne, nel tuorlo d'uovo, nonché nel pane, nelle patate, nei piselli, nei funghi. Il fabbisogno giornaliero è di circa 1,0 -1,5 g.

4.Fallimento L'inositolo negli animali si manifesta con la degenerazione grassa del fegato e una diminuzione del contenuto di fosfolipidi in esso contenuti, calvizie e anemia. I giovani mostrano un ritardo nella crescita

Acido lipoico (vitamina N)

1.Struttura. Nel 1951 fu isolata una sostanza che era attivamente coinvolta nel metabolismo del piruvato e dell'acetil-CoA, i metaboliti chiave della cellula. È stato chiamato acido lipoico perché è altamente solubile nei solventi non polari (lipidi - grassi). Chimicamente, l'acido lipoico è un acido grasso contenente zolfo (acido 6,8-ditioottanoico). Esiste in forme ossidate e ridotte.

2. ruolo biologico.

2.1. Partecipa alle reazioni di decarbossilazione ossidativa insieme ad altre vitamine (tiamina, niacina, riboflavina e acido pantotenico), a seguito delle quali il piruvato viene convertito in acetil-CoA e il 2-ossoglutarato in succinil-CoA.

2.2. È un antiossidante ed è efficace nel proteggere il corpo dagli effetti dannosi delle radiazioni e delle tossine.

3. Ipo e ipervitaminosi acido lipoico negli esseri umani non sono stati descritti.

4.fabbisogno giornaliero. Fonti. Lievito, prodotti a base di carne, latte sono i più ricchi di acido lipoico. Il fabbisogno giornaliero è presumibilmente di 1-2 mg.

Acido para-amminobenzoico (PABA)

1.Struttura.È un componente strutturale dell'acido folico. Struttura chimica del PABA:

Il PACB è scarsamente solubile in acqua, bene in alcool ed etere, chimicamente stabile.

2.ruolo biologico.

2.1. Le proprietà vitaminiche del PABA sono legate al fatto che fa parte della molecola dell'acido folico e, quindi, prende parte a tutte le reazioni metaboliche in cui è necessario l'acido folico.

2.2. Ha un effetto antiipossico, antiaterogenico, previene l'ossidazione dell'adrenalina e ha un effetto positivo sulla funzione della ghiandola tiroidea.

3.fabbisogno giornaliero. Fonti. Il PABA si trova in quasi tutti gli alimenti. I più ricchi sono il fegato, la carne, il latte, le uova, il lievito. Il fabbisogno giornaliero non è stato stabilito.

Vitamina P (rutina, bioflavonoidi)

1.Struttura. Nel 1936 A. Szent-Gyorgyi isolò dalla buccia di un limone un principio attivo che riduce la fragilità e la permeabilità dei capillari. Si chiamava vitamina P (da permeabilità- permeabilità).

I bioflavonoidi sono un gruppo eterogeneo di composti polifenolici vegetali la cui struttura è basata su uno scheletro carbonioso difenilpropano.

Nelle piante sono stati trovati oltre 4.000 flavonoidi con una struttura chimica identificata. Si dividono in 6 gruppi: flavonoli, flavoni, flavononi, catechine, antraglicosidi, antociani.

2.ruolo biologico.

2.1. I bioflavonoidi possono essere utilizzati per sintetizzare composti biologicamente importanti nella cellula (ad esempio l'ubichinone).

2.2. Rutina e quercetina sono polifenoli con attività di vitamina P. antiossidanti efficaci. I flavonoidi (catechine) del tè verde sono in grado di avere un pronunciato effetto citoprotettivo, che si basa sulla loro capacità di neutralizzare i radicali liberi. A differenza della vitamina E, i bioflavonoidi, oltre ad esercitare un'azione antiradicalica diretta, possono legare anche ioni metallici a valenza variabile, inibendo così il processo di perossidazione lipidica delle membrane.

2.3. Sufficientemente studiato è l'effetto di rafforzamento capillare della vitamina P, grazie alla sua capacità di regolare la formazione del collagene (sinergismo con la vitamina C) e di prevenire la depolimerizzazione della sostanza principale del tessuto connettivo da parte della ialuronidasi.

3.fabbisogno giornaliero. Fonti. Le sostanze vitaminiche P si trovano negli stessi prodotti vegetali della vitamina C. I più ricchi sono l'aronia, il ribes nero, le mele, l'uva, i limoni, le foglie di tè e la rosa canina. Il bioflavonoide del cedro conferisce alla scorza del limone il suo colore giallo. Il consumo di flavonoidi negli alimenti naturali (frutta, succhi e vini d'uva), dove possono essere trovati come complessi con i metalli, può essere più efficace rispetto all'utilizzo di preparati vitaminici purificati. Il fabbisogno giornaliero è di 25-50 mg.

4.Ipovitaminosi. I sintomi della carenza di bioflavonoidi si riducono ai fenomeni di aumento della permeabilità e fragilità dei capillari, petecchie (emorragie puntiformi), gengive sanguinanti.

Vitamina U

1.Struttura. La vitamina U fu scoperta nel 1950 nelle verdure crude. Poiché il succo delle verdure crude, in particolare del cavolo, aveva la capacità di prevenire o ritardare lo sviluppo di ulcere gastriche sperimentali, la vitamina da esso isolata fu chiamata antiulcera, O vitamina U(dal lat. Ulco-ulcera). Secondo la struttura chimica, è S-metilmetionina:

La vitamina U è altamente solubile in acqua. Durante la cottura gli alimenti si distruggono facilmente, soprattutto in un ambiente neutro e alcalino.

2.ruolo biologico.

Come la metionina, la vitamina U è un donatore di gruppi metilici nella sintesi di colina e creatina.

3.carenza vitaminica non descritto negli esseri umani. I polli nutriti con l'alcaloide zincofene per simulare le ulcere gastriche guarivano se al loro mangime veniva aggiunto succo di verdura fresca.

4.fabbisogno giornaliero. Fonti. Fonti di vitamina U sono cavoli freschi, prezzemolo, carote, cipolle, peperoni, tè verde, latte fresco, fegato.

Vitamina F

Il gruppo della vitamina F comprende gli acidi grassi polienici: linoleico, linolenico, arachidonico. Con un apporto sufficiente di acidi linoleico e linolenico viene sintetizzato l'acido arachidonico, che è un precursore degli eicosanoidi (prostaglandine, prostacicline, trombossani e leucotrieni). Una delle fonti efficaci di acidi grassi polinsaturi ω3 è l'olio di semi di lino (acido α-linolenico - 52%). Per stabilizzare gli acidi grassi insaturi, nell'olio sono presenti lignani, che hanno effetti antiossidanti ed estrogenici.

Coenzima Q

Il gruppo del coenzima Q comprende gli ubichinoni. L'ubichinone Q 10 può essere sintetizzato nelle fasi finali della sintesi del colesterolo. Pertanto, quando si utilizzano statine classiche (inibitori della HMG reduttasi), possono verificarsi gli effetti del deficit di coenzima Q. Attualmente sono state sviluppate statine di seconda generazione che bloccano la sintesi del colesterolo a valle del ramo di sintesi del coenzima Q.

Il coenzima Q si trova nelle membrane, è un trasportatore di elettroni nella fase lipidica delle membrane (catene di trasporto degli elettroni). L'insufficienza del coenzima Q si manifesta sotto forma di uno stato ipoenergetico e di vari disturbi funzionali ad esso associati.

Il coenzima Q è incluso in molti integratori alimentari per ottimizzare il supporto nutrizionale per il metabolismo.

Informazioni simili.

Le sostanze alimentari essenziali, riunite sotto il nome generico di "vitamine", appartengono a diverse classi di composti chimici, il che di per sé esclude la possibilità di utilizzare un unico metodo per la loro determinazione quantitativa. Tutti i metodi analitici noti per le vitamine si basano o sulla determinazione delle proprietà biologiche specifiche di queste sostanze (biologiche, microbiologiche, enzimatiche), o sull'uso delle loro caratteristiche fisico-chimiche (metodi fluorescenti, cromatografici e spettrofotometrici), o sulla capacità di alcune vitamine a reagire con alcuni reagenti per formare composti colorati (metodi colorimetrici).

Nonostante i progressi compiuti nel campo della chimica analitica e applicata, i metodi per determinare le vitamine nei prodotti alimentari richiedono ancora molto tempo e manodopera. Ciò è dovuto a una serie di ragioni oggettive, le principali delle quali sono le seguenti.

1. La determinazione di un certo numero di vitamine è spesso complicata dal fatto che molte di esse si trovano in natura allo stato legato sotto forma di complessi con proteine ​​o peptidi, nonché sotto forma di esteri del fosforo. Per la determinazione quantitativa è necessario distruggere questi complessi e isolare le vitamine in forma libera, disponibili per l'analisi fisico-chimica o microbiologica. Ciò si ottiene solitamente utilizzando condizioni di lavorazione speciali (idrolisi acida, alcalina o enzimatica, autoclavaggio).

2. Quasi tutte le vitamine sono composti altamente instabili, facilmente soggetti a ossidazione, isomerizzazione e completa distruzione sotto l'influenza di alte temperature, ossigeno atmosferico, luce e altri fattori. È necessario osservare le precauzioni: ridurre al minimo il tempo per la preparazione preliminare del prodotto, evitare forte calore ed esposizione alla luce, utilizzare antiossidanti, ecc.

3. Nei prodotti alimentari, di norma, si ha a che fare con un gruppo di composti che hanno una grande somiglianza chimica e allo stesso tempo differiscono nell'attività biologica. Ad esempio, la vitamina E comprende 8 tocoferoli che sono simili nelle proprietà chimiche ma differiscono nell'azione biologica; Il gruppo dei caroteni e dei pigmenti carotenoidi comprende fino a 80 composti, di cui solo 10 hanno proprietà vitaminiche in un modo o nell'altro.

4.Le vitamine appartengono a diverse classi di composti organici. Pertanto, non possono esserci reazioni di gruppo comuni e metodi di ricerca comuni per loro.

5. Inoltre, l'analisi rende difficile la presenza di sostanze concomitanti nel campione di prova, la cui quantità può superare molte volte il contenuto della vitamina determinata (ad esempio steroli e vitamina D). Per eliminare possibili errori nella determinazione delle vitamine nei prodotti alimentari, gli estratti vengono solitamente accuratamente purificati dai composti correlati e la vitamina viene concentrata. A tale scopo vengono utilizzati vari metodi: precipitazione di sostanze che interferiscono con l'analisi, metodi di adsorbimento, cromatografia a scambio ionico o di partizione, estrazione selettiva dell'analita, ecc.

Negli ultimi anni, l'HPLC è stata utilizzata con successo per determinare le vitamine nei prodotti alimentari. Questo metodo è il più promettente, poiché consente di separare, identificare e quantificare simultaneamente varie vitamine e le loro forme biologicamente attive, riducendo i tempi di analisi.

Metodi fisico-chimici per lo studio delle vitamine. I metodi si basano sull'utilizzo delle caratteristiche fisico-chimiche delle vitamine (la loro capacità di fluorescenza, assorbimento della luce, reazioni redox, ecc.). Grazie allo sviluppo della chimica analitica e della strumentazione, i metodi fisico-chimici hanno quasi completamente soppiantato i metodi biologici, lunghi e costosi.

Determinazione della vitamina C. La vitamina C (acido ascorbico) può essere presente negli alimenti sia in forma ridotta che ossidata. L'acido deidroascorbico (DAC) può formarsi durante la lavorazione e la conservazione dei prodotti alimentari a seguito dell'ossidazione, il che rende necessaria la sua determinazione. Quando si determina la vitamina C nei prodotti alimentari, vengono utilizzati vari metodi: metodi di analisi colorimetrica, fluorescente, volumetrica basati sulle proprietà redox dell'AA e HPLC.

Il punto cruciale nella determinazione quantitativa dell'AA è la preparazione dell'estratto del campione. L'estrazione deve essere completa. Il miglior estraente è una soluzione al 6% di acido metafosforico, che ha la capacità di precipitare le proteine. Vengono utilizzati anche acidi acetico, ossalico e cloridrico, nonché loro miscele.

1. Per la determinazione totale e separata delle forme ossidate e ridotte di AA, viene spesso utilizzato il metodo Rohe utilizzando un reagente 2,4-dinitrofenilidrazina. L'AA (acido gulonico) sotto l'azione di agenti ossidanti passa nel DAK, e poi nell'acido 2,3-dichetogulonico, che forma composti di colore arancione con 2,4-dinitrofenilidrazina. La stessa 2,4-dinitrofenilidrazina è una base che non può esistere nella forma aci. Tuttavia, i corrispondenti idrazoni sotto l'influenza degli alcali vengono convertiti in sali aci intensamente colorati. Quando si determina la vitamina C, questo metodo interferisce con la presenza di agenti riducenti (glucosio, fruttosio, ecc.). Pertanto, con un elevato contenuto di zucchero nel prodotto in esame, viene utilizzata la cromatografia, che complica la determinazione.

Acidoformio nitroformio

2. Recentemente è stato riconosciuto un metodo fluorescente molto sensibile e accurato per determinare il contenuto totale di vitamina C (la somma di AA e DAA). DAK, condensando con o-fenilendiammina, forma un composto fluorescente, la chinossalina, che ha la massima fluorescenza ad una lunghezza d'onda di eccitazione di 350 nm.

o-fenilendiammina DAC chinossalina

L'intensità della fluorescenza della chinossalina in un mezzo neutro a temperatura ambiente è direttamente proporzionale alla concentrazione di DAA. Per la determinazione quantitativa dell'AA, questo viene ossidato preliminarmente in DAA. Lo svantaggio di questo metodo è l'attrezzatura piuttosto costosa.

Metodi basati sulle proprietà redox dell'AA.

3. Tra i metodi basati sulle proprietà redox dell'AA, il metodo di titolazione con una soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo, che ha un colore blu, ha trovato la maggiore applicazione. Il prodotto dell'interazione dell'AA con il reagente è incolore. Il metodo può essere utilizzato nell'analisi di tutti i tipi di prodotti. Quando si analizzano prodotti che non contengono pigmenti naturali nelle patate, nel latte, viene utilizzata la titolazione visiva. In caso di presenza di coloranti naturali, utilizzare la titolazione potenziometrica o il metodo di estrazione con indofenolo-xilene. Quest'ultimo metodo si basa sulla decolorazione quantitativa del 2,6-diclorofenolindofenolo con acido ascorbico. Il colorante in eccesso viene estratto con xilene e la densità ottica dell'estratto viene misurata a 500 nm.

Solo AK reagisce. DAK è preridotto con cisteina. Per separare l'AA dagli agenti riducenti presenti negli alimenti trattati termicamente o negli estratti conservati a lungo termine, questi vengono trattati con formaldeide. La formaldeide, a seconda del pH del mezzo, interagisce selettivamente con AA e impurità estranee degli agenti riducenti (pH = 0). Il metodo specificato determina la quantità di AK e DAK.

Il 2,6-diclorofenolindofenolo può essere utilizzato anche per la determinazione fotometrica dell'AA. La soluzione reagente ha un colore blu e il prodotto dell'interazione con AA è incolore, ad es. a seguito della reazione l'intensità del colore blu diminuisce. La densità ottica è misurata a 605 nm (pH = 3,6).

4. Un altro metodo basato sulle proprietà riducenti dell'AA è il metodo colorimetrico, che sfrutta la capacità dell'AA di ridurre Fe(3+) a Fe(2+) e la capacità di quest'ultimo di formare sali di colore rosso intenso con 2,2'- dipiridile. La reazione viene condotta a pH 3,6 e ad una temperatura di 70ºС. L'assorbanza della soluzione viene misurata a 510 nm.

5. Metodo fotometrico basato sull'interazione dell'AA con il reagente di Folin. Il reagente di Folin è una miscela di acidi fosfomolibdici e fosfotungstici, cioè questo è un metodo noto basato sulla formazione di blu di molibdeno che assorbono a 640–700 nm.

6. Il metodo HPLC altamente sensibile e specifico può essere utilizzato con successo per la determinazione della vitamina C in tutti i prodotti alimentari. L'analisi è abbastanza semplice, solo che quando si analizzano prodotti ricchi di proteine ​​è necessario prima rimuoverle. La rilevazione viene effettuata mediante fluorescenza.

Oltre ai metodi sopra descritti per determinare la vitamina C, esistono numerosi metodi, ad esempio l'ossidazione con cloruro d'oro e la formazione di acidi idrossamici, ma questi metodi non hanno alcuna importanza pratica.

Determinazione della tiamina (B 1 ). Nella maggior parte dei prodotti naturali, la tiamina si presenta sotto forma di estere difosforico - cocarbossilasi. Quest'ultimo, essendo il gruppo attivo di numerosi enzimi del metabolismo dei carboidrati, è in determinati legami con le proteine. Per la determinazione quantitativa della tiamina è necessario distruggere i complessi e isolare la vitamina studiata in forma libera, disponibile per l'analisi fisico-chimica. A tale scopo viene effettuata l'idrolisi acida o l'idrolisi sotto l'influenza di enzimi. Gli oggetti ricchi di proteine ​​vengono trattati con enzimi proteolitici (pepsina) in un mezzo di acido cloridrico. Gli oggetti ad alto contenuto di grasso (carne di maiale, formaggi) vengono trattati con etere per rimuoverlo (la tiamina è praticamente insolubile nell'etere).

1. Per determinare la tiamina nei prodotti alimentari, di norma, viene utilizzato un metodo fluorescente, basato sull'ossidazione della tiamina in un mezzo alcalino con esacianoferrato di potassio (3+) per formare un composto tiocromico altamente fluorescente alla luce ultravioletta. L'intensità della sua fluorescenza è direttamente proporzionale al contenuto di tiamina (la lunghezza d'onda della luce eccitante è 365 nm, la lunghezza d'onda della luce emessa è 460–470 nm (fluorescenza blu)). Quando si utilizza questo metodo, sorgono difficoltà a causa della presenza di composti fluorescenti in numerosi oggetti. Vengono rimossi mediante purificazione su colonne con resine a scambio ionico. Quando si analizzano carne, latte, patate, pane integrale e alcune verdure, non è necessaria alcuna purificazione.

Tiamina Tiocromo

2. La tiamina è caratterizzata dal proprio assorbimento nella regione UV (240 nm in soluzione acquosa, 235 nm in etanolo), il che significa che può essere determinata mediante spettrofotometria diretta.

3. Per la determinazione simultanea di tiamina e riboflavina viene utilizzata l'HPLC.

Determinazione della riboflavina (B 2 ). Negli alimenti la riboflavina è presente principalmente come esteri del fosforo legati alle proteine ​​e pertanto non può essere determinata senza una precedente digestione proteolitica. La riboflavina libera si trova in quantità significative nel latte.

Quando si determina la riboflavina, i metodi di analisi microbiologici e fisico-chimici (fluorescenti) sono i più utilizzati. Il metodo microbiologico è specifico, altamente sensibile e accurato; applicabile a tutti i prodotti, ma è lungo e richiede condizioni speciali.

Il metodo fisico-chimico è stato sviluppato in due versioni, che differiscono nel metodo di valutazione delle sostanze fluorescenti:

variante della fluorescenza diretta (determinazione dell'intensità della fluorescenza della riboflavina) e

Variante lumiflavina.

1. La riboflavina libera e i suoi esteri fosforici mostrano una caratteristica fluorescenza giallo-verde ad una lunghezza d'onda di eccitazione di 440–500 nm. Questa proprietà è alla base del metodo fluorescente più utilizzato per la determinazione della riboflavina. La riboflavina e i suoi esteri danno spettri di fluorescenza molto simili con un massimo a 530 nm. La posizione del massimo non dipende dal pH. L'intensità della fluorescenza dipende in modo significativo dal pH e dal solvente (diverso per la riboflavina ed i suoi esteri), quindi gli esteri vengono preliminarmente distrutti e si analizza la riboflavina libera. Per questo vengono utilizzati l'idrolisi con acido cloridrico e tricloroacetico, l'autoclavaggio e il trattamento con preparati enzimatici.

L'intensità della fluorescenza giallo-verde della riboflavina alla luce UV dipende non solo dalla sua concentrazione, ma anche dal valore del pH della soluzione. L'intensità massima viene raggiunta a pH=6-7. Tuttavia, la misurazione viene effettuata a pH compreso tra 3 e 5, poiché in questo intervallo l'intensità della fluorescenza è determinata solo dalla concentrazione di riboflavina e non dipende da altri fattori: valore del pH, concentrazione di sali, ferro, impurità organiche , eccetera.

La riboflavina viene facilmente distrutta alla luce, la determinazione viene effettuata in luogo protetto dalla luce e ad un pH non superiore a 7. Si tenga presente che il metodo della fluorescenza diretta non è applicabile ai prodotti a basso contenuto di riboflavina.

2. La variante luminflavina si basa sullo sfruttamento della proprietà della riboflavina, dopo irradiazione in un mezzo alcalino, di trasformarsi in lumiflavina, la cui intensità di fluorescenza viene misurata dopo la sua estrazione con cloroformio (fluorescenza blu, 460–470 nm). Poiché in determinate condizioni il 60–70% della riboflavina totale passa in lumiflavina, durante l'analisi è necessario osservare condizioni di irradiazione costanti, le stesse per la soluzione test e standard.

Riboflavina Lumiflavina

Determinazione della vitamina B6 . Per determinare la vitamina possono essere utilizzati i seguenti metodi:

1. Spettrofotometria diretta. La piridossina cloridrato è caratterizzata dal proprio assorbimento a 292 nm (e = 4,4·10·3) a pH = 5.

2. Metodo Kjeldahl. La determinazione viene effettuata mediante l'ammoniaca, che si forma durante l'ossidazione della vitamina.

3. Metodo fotometrico basato sulla reazione con 2,6-diclorochinone clorimina (reattivo di Gibbs) a pH 8-10, che dà luogo alla formazione di indofenoli blu. Gli indofenoli vengono estratti con metiletilchetone e la densità ottica dell'estratto viene misurata a 660–690 nm (la reazione di Gibbs fornisce fenoli con una posizione para libera).

Indofenolo

4. Un metodo fluorescente basato sul fatto che quando irradiato con piridossina e piridossamina si osserva una fluorescenza blu e con piridossale una fluorescenza blu.

Determinazione della vitamina B 9 . La determinazione dei folati negli alimenti nei tessuti e nei fluidi corporei presenta notevoli difficoltà, perché in questi oggetti sono solitamente presenti in forma legata (come poliglutammati); inoltre, la maggior parte delle forme è sensibile agli effetti dell'ossigeno atmosferico, della luce e della temperatura. Per proteggere i folati dall'idrolisi, si raccomanda l'idrolisi in presenza di acido ascorbico.

Negli alimenti, i folati possono essere determinati con metodi fisici, chimici e microbiologici. Il metodo colorimetrico si basa sulla scissione dell'acido pteroilglutammico con formazione di acido p-aminobenzoico e sostanze correlate e loro ulteriore trasformazione in composti colorati. Tuttavia, a causa della mancanza di specificità, questo metodo viene utilizzato principalmente per l'analisi dei prodotti farmaceutici.

Per la separazione, purificazione e identificazione dei folati sono stati sviluppati anche metodi cromatografici su colonne, carta e in uno strato sottile di adsorbente.

Determinazione della vitamina PP. Nei prodotti alimentari l'acido nicotinico e la sua ammide si trovano sia in forma libera che legata, facendo parte dei coenzimi. I metodi chimici e microbiologici per la determinazione quantitativa della niacina comportano l'isolamento e la conversione più completi delle sue forme legate, che fanno parte della complessa materia organica delle cellule, in acido nicotinico libero. Forme legate di niacina vengono rilasciate mediante esposizione a soluzioni acide o idrossido di calcio quando riscaldate. L'idrolisi con una soluzione di acido solforico 1 M in un'autoclave per 30 minuti ad una pressione di 0,1 MPa porta al rilascio completo delle forme legate di niacina e alla conversione della nicotinamide in acido nicotinico. È stato stabilito che questo metodo di lavorazione fornisce idrolizzati meno colorati e può essere utilizzato nell'analisi di prodotti a base di carne e pesce. L'idrolisi con idrossido di calcio è preferibile nella determinazione della niacina in farina, cereali, prodotti da forno, formaggi, concentrati alimentari, verdure, bacche e frutta. Ca(OH) 2 forma composti con zuccheri e polisaccaridi, peptidi e glicopeptidi che sono quasi completamente insolubili in soluzioni raffreddate. Di conseguenza, l'idrolizzato ottenuto dal trattamento con Ca(OH) 2 contiene meno sostanze che interferiscono con la determinazione chimica rispetto all'idrolizzato acido.

1. La base del metodo chimico per la determinazione della niacina è la reazione di Koenig, che procede in due fasi. Il primo stadio è la reazione dell'interazione dell'anello piridinico dell'acido nicotinico con il bromuro di cianogeno, il secondo è la formazione di un derivato colorato dell'aldeide glutaconica a seguito dell'interazione con le ammine aromatiche. (Immediatamente dopo l'aggiunta del bromuro di cianogeno all'acido nicotinico, appare il colore giallo della glutaconaldeide. Come risultato della sua interazione con le ammine aromatiche introdotte nella miscela di reazione, si formano dianili, che sono intensamente colorati di giallo, arancione o rosso, a seconda l'ammina (benzidina - rosso, acido solfanilico - giallo). La reazione di Koenig viene utilizzata per la determinazione fotometrica della piridina e dei suoi derivati ​​con posizione A libera. Lo svantaggio del metodo è la sua durata, poiché la velocità di reazione è bassa.

La determinazione quantitativa dell'acido ascorbico nel materiale di prova viene spesso effettuata utilizzando una soluzione di sodio 2,6-diclorofenolindofenolo, che è blu in un mezzo alcalino e rosa in un mezzo acido. La chimica della reazione può essere espressa come la seguente equazione.

Il principio del metodo si basa sulla capacità dell'acido ascorbico di ripristinare il reagente indofenolo. Quando si titola l'estratto del materiale in esame con una soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo, l'acido ascorbico viene ossidato ad acido deidroascorbico e il reagente indofenolo viene ridotto. La fine della titolazione può essere determinata dal cambiamento di colore. La forma ossidata del 2,6-diclorofenolindofenolo ha un colore blu in un mezzo neutro e alcalino, la forma ridotta acquisisce un colore rosa in un mezzo acido.

L'acido ascorbico viene estratto dal materiale in esame con una soluzione all'1% di acido cloridrico e titolato con una soluzione del reagente indofenolo. Il contenuto di acido ascorbico si calcola dalla quantità di vernice utilizzata per la titolazione.

Va notato che altre sostanze facilmente ossidabili, come il glutatione, la cisteina, ecc., interferiscono con l'esatta determinazione del contenuto di acido ascorbico negli oggetti biologici.

7.7.1. DETERMINAZIONE DELLA VITAMINA C B

MATERIALE VEGETALE

Prelevare un campione del materiale da testare 5-20 g (a seconda del contenuto previsto di acido ascorbico), tagliarlo a pezzetti (patate, carote, aglio orsino, mele, ecc.) macinare accuratamente in un mortaio con un pizzico di vetro o sabbia di quarzo, aggiungendo in porzioni di 4 -5 ml di una soluzione con una frazione in massa di acido metafosforico o cloridrico del 2% fino ad ottenere una sospensione liquida omogenea. La miscela della malta è stata trasferita quantitativamente utilizzando una soluzione dell'acido utilizzato per la macinazione in un matraccio tarato della capacità di 100 ml e il volume totale dell'estratto è stato portato a volume con la stessa soluzione acida. Il contenuto è ben miscelato, infuso per 5-7 minuti e filtrato attraverso un filtro di carta. Il filtrato risultante dovrebbe essere completamente trasparente.

Gli acidi utilizzati per l'estrazione (cloridrico, metafosforico, ossalico) estraggono sia l'acido ascorbico libero che quello legato dal materiale di prova e contribuiscono anche alla stabilità dell'acido ascorbico negli estratti.

Si prendono due matracci conici con una capacità di 100-150 ml e ad uno si aggiungono con una pipetta 20 ml del filtrato risultante e nell'altro 20 ml della soluzione acida utilizzata per macinare il materiale in esame. Il contenuto dei coni viene titolato con il reagente indofenolo finché non viene mantenuto un colore rosa tenue per 30 secondi. Si registrano i risultati e si ripete la titolazione con nuove porzioni dello stesso filtrato. In base al valore medio ottenuto da 2-3 determinazioni, il contenuto di acido ascorbico viene calcolato utilizzando la formula:

,

(a-b)è la differenza tra i volumi del reagente indofenolo utilizzato per la titolazione dei campioni sperimentali (a) e di controllo (b), in ml;

u è il volume totale dell'estratto, ml;

u 1 è il volume del filtrato prelevato per la titolazione, ml;

m è la massa del materiale in esame, g,

100 - ricalcolo per 100 g di materiale.

I tessuti vegetali contengono alcune quantità di altre sostanze riducenti che riducono il 2,6-diclorofenolindofenolo, quindi se è necessaria un'analisi particolarmente accurata, è opportuno tenerne conto. Per fare ciò, 0,1 o 0,2 ml di una soluzione al 10% di solfato di rame vengono aggiunti ad altre due porzioni di 10-20 ml dell'estratto studiato e riscaldati in un termostato o in un forno per 10 minuti ad una temperatura di 110 ˚С. Raffreddare e titolare con il reagente indofenolo. In presenza di sali di rame e quando riscaldato, l'acido ascorbico viene completamente distrutto. La correzione risultante viene sottratta dai dati di titolazione dei campioni sperimentali.

Analizzando molti frutti e bacche, alcune verdure, si ottengono estratti colorati, il che rende difficile determinare l'acido ascorbico. Per determinare l'acido ascorbico, l'estratto colorato viene trasferito in un'ampia provetta, si aggiungono 2-5 ml di dicloroetano o cloroformio e si titola agitando con una soluzione di reagente indofenolo finché nello strato di dicloroetano o cloroformio appare un colore rosa, che non non scomparire per 30 secondi.

Durante la determinazione, è necessario tenere conto della capacità riducente degli acidi utilizzati per l'estrazione (una miscela di 20 ml di acido cloridrico all'1% e 80 ml di acido metafosforico al 2% o ossalico all'1%). Per fare ciò, due porzioni della miscela di acidi, da 10 ml ciascuna, vengono titolate con un reagente indofenolo fino ad ottenere una colorazione rosa. La correzione risultante (solitamente non superiore a 0,08-0,10 ml di soluzione di vernice) viene sottratta dai dati di titolazione delle soluzioni sperimentali.

+

7.7.2. DETERMINAZIONE DELLA CONCENTRAZIONE DELLA SOLUZIONE

SODIO 2,6-DICLOROFENOLINDOFENOLO (ACIDO ASCORBICO)

: R4–CH | NH | CO | R3-CH | NH | CO | R2-CH | NH | CO | R1-CH | NH | CO:

NaOH (eccesso) Сu 2+

Due palloni vengono riempiti con 5 ml di una soluzione con una frazione in massa di acido metafosforico o cloridrico del 2% e 2 ml di una soluzione standard di acido ascorbico (esperimento di base). Il contenuto di ciascun pallone viene titolato con il reagente indofenolo finché persiste una colorazione rosa tenue per 30 secondi. Parallelamente all'esperimento principale, viene eseguita una determinazione di controllo, in cui vengono prelevati anche due coni e 7 ml di una soluzione con una frazione in massa di acido metafosforico o cloridrico del 2% e acqua in un volume pari al volume dell'indofenolo a ciascuno vengono aggiunti i reagenti utilizzati per la titolazione nell'esperimento principale. Il contenuto di questi palloni viene titolato con il reagente indofenolo finché persiste una colorazione rosa tenue per 30 secondi.

La massa di acido ascorbico (in mg) corrispondente a 1 ml del reagente indofenolo (una soluzione di sodio 2,6-diclorofenolindofenolo) si calcola con la formula:

dove M è la massa di acido ascorbico in mg, corrispondente a 1 ml di reagente indofenolo;

(u-u 1) - la differenza tra i volumi del reagente indofenolo utilizzato per la titolazione del campione con acido ascorbico (u) e il campione senza acido ascorbico (u 1), ml;

2 - la massa di acido ascorbico in mg contenuta nel campione sperimentale (esperimento principale).

7.7.3. DOSAGGIO DELLA VITAMINA C NEL LATTE

Per determinare l'acido ascorbico nel latte, le proteine ​​vengono preliminarmente precipitate.

Versare in un pallone 50 ml di latte e aggiungere 4 ml di una soluzione satura di acido ossalico, agitare, aggiungere 10 ml di una soluzione satura di cloruro di sodio, agitare e lasciare a temperatura ambiente per 5 minuti. Successivamente si filtra il contenuto del pallone su filtro pieghettato di carta, si misurano con una pipetta 20 ml del filtrato e si titolano con il reagente indofenolo finché persiste una colorazione leggermente rosata per 30 secondi. Prelevare altri 20 ml del filtrato e ripetere la titolazione. Per il calcolo, prendi il risultato medio.

Parallelamente, viene eseguita una determinazione di controllo, per la quale in un pallone vengono mescolati 50 ml di acqua, 4 ml di una soluzione satura di acido ossalico e 10 ml di una soluzione satura di cloruro di sodio. Quindi procedere come nell'esperimento principale.

,

Dove (a-b)è la differenza tra i volumi del reagente indofenolo utilizzato per la titolazione dei campioni sperimentali e di controllo, in ml;

64 è il volume totale del latte dopo l'aggiunta dei precipitanti proteici e grassi;

M è la massa di acido ascorbico corrispondente a 1 ml di reagente indofenolo (vedi paragrafo 7.7.2.), mg;

u è il volume del filtrato prelevato per la titolazione, ml;

u 1 - il volume di latte prelevato per l'analisi, ml.

REAGENTI. Acqua distillata; latte fresco; patate (limoni, carote, mele, cavoli, aglio selvatico, ecc.); soluzione con una frazione in massa di acido metafosforico o cloridrico al 2%; soluzione satura di acido ossalico; soluzione satura di cloruro di sodio; soluzione standard appena preparata di acido ascorbico (in un matraccio tarato con una capacità di 100 ml, aggiungere 100 mg di acido ascorbico della qualifica "medica" e, sciogliendosi, portare il volume al segno con una soluzione con una frazione di massa di metafosforico oppure acido cloridrico al 2%; reagente indofenolo (in un matraccio tarato da 500 ml, aggiungere 140-150 mg di 2,6-diclorofenolindofenolo sodico e 200-300 ml di acqua, agitare vigorosamente fino a scioglimento della vernice, portare il volume fino a raggiungere la tacca con acqua, mescolare e filtrare con filtro di carta in una bottiglia di vetro scuro asciutta; conservare la soluzione in frigorifero per non più di tre giorni).

Introduzione……………………………2

1. Panoramica generale dei metodi per la determinazione delle vitamine…………………3

2. Metodi cromatografici per la determinazione delle vitamine…………5

3. Metodi elettrochimici per la determinazione delle vitamine…………10

4. Metodo voltammetrico di stripping per la determinazione

vitamine idrosolubili B 1 B 2 negli alimenti………..13

Conclusione…………………...................................18

introduzione

Attualmente sul mercato è apparso un numero enorme di prodotti alimentari arricchiti per l'uomo e l'alimentazione animale, che sono miscele secche multicomponenti. La gamma di tali prodotti è presentata abbastanza ampiamente. Si tratta innanzitutto di integratori alimentari biologicamente attivi, premiscele, mangimi composti per animali e uccelli, preparati multivitaminici. Il criterio per la qualità di tali prodotti può essere la loro analisi del contenuto di vitamine e, soprattutto, di quelle vitali come le vitamine idrosolubili e liposolubili, la cui quantità è regolata da documenti normativi e standard di qualità sanitaria.

Per determinare le vitamine vengono utilizzati vari metodi. I metodi ottici di analisi ampiamente utilizzati sono laboriosi, richiedono molto tempo e richiedono reagenti costosi; l’uso dei metodi cromatografici è complicato dall’uso di apparecchiature costose. Ogni anno l'assortimento si amplia e aumenta la produzione di prodotti alimentari, la ricetta delle pappe viene migliorata. Ciò, a sua volta, pone maggiori esigenze sul controllo della qualità dei prodotti e sul miglioramento dei metodi per la determinazione delle vitamine. I requisiti biomedici e gli standard sanitari per la qualità delle materie prime alimentari e dei prodotti alimentari caratterizzano il valore nutrizionale della maggior parte dei tipi e gruppi di alimenti per l'infanzia per vari scopi.

1. Panoramica generale dei metodi per determinare le vitamine

Quasi tutte le vitamine vengono facilmente ossidate, isomerizzate e distrutte sotto l'influenza di alte temperature, luce, ossigeno atmosferico, umidità e altri fattori.

Tra i metodi esistenti per determinare la vitamina C (acido ascorbico), il metodo più utilizzato è la titolazione visiva e potenziometrica con una soluzione di 2,6-diclorofenolindofenolo secondo GOST 24556-81, basata sulle proprietà riducenti dell'acido ascorbico e sulla sua capacità ridurre il 2,6-DCPIP. Il colore blu scuro di questo indicatore diventa incolore quando viene aggiunto acido ascorbico. La preparazione di un estratto del prodotto in esame è importante. Il miglior estraente è una soluzione al 6% di acido metafosforico, che inattiva l'ascorbato ossidasi e fa precipitare le proteine.

Il carotene nelle materie prime vegetali, nei concentrati e nelle bevande analcoliche è controllato con il metodo fisico-chimico secondo GOST 8756.22-80. Il metodo si basa sulla determinazione fotometrica della frazione massica di carotene in una soluzione ottenuta nel processo di estrazione da prodotti con un solvente organico. La soluzione viene preliminarmente purificata dalle sostanze coloranti associate mediante cromatografia su colonna. Il carotene si dissolve facilmente nei solventi organici (etere, benzina, ecc.) E conferisce loro un colore giallo. Per la determinazione quantitativa del carotene si utilizza la cromatografia ad adsorbimento su colonne con ossido di alluminio e ossido di magnesio. Tale determinazione dei pigmenti su una colonna dipende dall'attività dell'adsorbente, dalla quantità di pigmenti e dalla presenza di altri componenti nella miscela da separare. Una miscela secca di ossido di alluminio trattiene il carotene, mentre una miscela umida consente ad altri coloranti di passare nella soluzione.

La tiamina si trova principalmente allo stato legato sotto forma di estere difosforico - cocarbossilasi, che è il gruppo attivo di numerosi enzimi. Con l'aiuto dell'idrolisi acida e sotto l'influenza degli enzimi, la tiamina viene rilasciata dallo stato legato. Questo metodo determina la quantità di tiamina. Per calcolare il contenuto di vitamina B1, viene utilizzato il metodo fluorimetrico, utilizzato per determinare la tiamina nei prodotti alimentari. Si basa sulla capacità della tiamina di formare tiocromo in un mezzo alcalino con ferricianuro di calcio, che conferisce un'intensa fluorescenza nell'alcol butilico. L'intensità del processo è controllata sul fluorimetro EF-ZM.

Negli alimenti e nelle bevande la riboflavina è presente allo stato legato, cioè sotto forma di esteri del fosforo associati ad una proteina. Per determinare la quantità di riboflavina nei prodotti, è necessario liberarla dallo stato legato mediante idrolisi acida e trattamento con preparati enzimatici. La vitamina B1 nelle bevande analcoliche viene calcolata utilizzando un metodo chimico per determinare la quantità di forme di riboflavina facilmente idrolizzabili e strettamente legate nei tessuti. Il metodo si basa sulla capacità della riboflavina di fluorescenza prima e dopo la sua riduzione con iposolfito di sodio. Determinazione del contenuto totale di composti fenolici. Per questo viene utilizzato il metodo colorimetrico Folin-Denis, che si basa sulla formazione di complessi blu durante la riduzione dell'acido tungstico sotto l'azione dei polifenoli con un reagente in un mezzo alcalino. I composti fenolici vengono determinati mediante acido clorogenico mediante fotometria di fiamma su uno strumento EKF-2.

2. Metodi cromatografici per la determinazione delle vitamine

Recentemente, il metodo della cromatografia liquida ad alte prestazioni si è sviluppato rapidamente all'estero. Ciò è dovuto, innanzitutto, all'avvento dei cromatografi liquidi di precisione e al miglioramento delle tecniche di analisi. L'uso diffuso del metodo HPLC nella determinazione delle vitamine si riflette anche nel numero di pubblicazioni. Ad oggi, più della metà di tutti i lavori pubblicati sull'analisi delle vitamine idrosolubili e liposolubili sono dedicati all'uso di questo metodo e vari tipi di cromatografia si sono diffusi nella determinazione delle vitamine.

Per purificare il tocoferolo dalle impurità, viene utilizzata la cromatografia su strato sottile. In combinazione con metodi spettrofotometrici e fluorimetrici, questo metodo viene determinato quantitativamente anche la vitamina E. Durante la separazione, vengono utilizzate piastre con silufol, kieselgel

L'analisi degli isomeri del tocoferolo nell'olio di oliva viene effettuata mediante cromatografia gas-liquido. I metodi di analisi GC e GLC richiedono la preparazione di derivati ​​volatili, cosa estremamente difficile nell'analisi delle vitamine liposolubili. Per questo motivo questi metodi di determinazione non sono ampiamente utilizzati. La determinazione della vitamina E in prodotti alimentari, prodotti farmaceutici e oggetti biologici viene effettuata in modalità gradiente e isocratica, sia in condizioni di fase normale che di fase inversa. Come adsorbenti vengono utilizzati gel di silice (SG), farina fossile, silasorb, ODS-Hypersil e altri veicoli. Per monitorare continuamente la composizione dell'eluato in cromatografia liquida nell'analisi delle vitamine e aumentare la sensibilità della determinazione, spettrofotometria UV (A, = 292 nm), fluorescente (X, = 280/325 nm) ), rivelatori elettrochimici, PMR e spettroscopici di massa.

La maggior parte dei ricercatori preferisce utilizzare la cromatografia ad adsorbimento per separare le miscele di tutti gli otto isomeri dei tocoferoli e dei loro acetati. In questi casi, la fase mobile è solitamente costituita da idrocarburi contenenti quantità minori di qualsiasi etere semplice. I metodi elencati per determinare la vitamina E, di norma, non prevedono la saponificazione preliminare dei campioni, il che riduce significativamente i tempi di analisi.

La separazione con contemporanea determinazione quantitativa del contenuto delle vitamine liposolubili (A, D, E, K) nella loro presenza congiunta nei preparati multivitaminici viene effettuata sia in fase diretta che inversa. In questo caso, la maggior parte dei ricercatori preferisce utilizzare la versione in fase inversa dell'HPLC. Il metodo HPLC consente di analizzare le vitamine idrosolubili B1 e B2 sia simultaneamente che separatamente. Per separare le vitamine, vengono utilizzate le versioni HPLC a fase inversa, a coppia ionica e a scambio ionico. Applicare sia la modalità isocratica che quella gradiente della cromatografia. La separazione preliminare degli analiti dalla matrice viene effettuata mediante idrolisi enzimatica e acida del campione.

Vantaggi del metodo della cromatografia liquida:

Definizione di più componenti contemporaneamente

Eliminazione dell'influenza dei componenti interferenti

Il complesso può essere rapidamente riconfigurato per eseguire altre analisi.

Composizione e caratteristiche dell'apparecchiatura e del software per cromatografo liquido "Chromos ZhKh-301":

Tabella 1

Vantaggi del cromatografo "Chromos ZhKh-301":

L'elevata stabilità e precisione nel mantenimento della portata dell'eluente sono garantite dalla progettazione delle pompe ad alta pressione.

Il facile accesso alle colonne è garantito dal design del dispositivo.

L'efficienza della separazione è garantita dall'uso di colonne cromatografiche ad alte prestazioni.

Un'ampia gamma lineare del segnale di misurazione dei rilevatori senza modificare il limite di misurazione, che consente di misurare picchi di concentrazioni sia alte che basse con elevata precisione.

Analisi cromatografica delle vitamine idrosolubili:

1 acido ascorbico (C),
2 acido nicotinico (niacina),
3 piridossina (B6),
4 tiamina (B1),
5 nicotinammide (B3),
6 acido folico (M),
7 cianocobalamina (B12),
8 riboflavina (B2).