Metodi diretti
Microscopia in campo oscuro
Il Treponema pallidum non può crescere su terreni nutritivi e non viene visualizzato al microscopio ottico. Poiché il rilevamento dell'agente patogeno mediante la microscopia convenzionale è impossibile, viene utilizzato uno speciale microscopio a campo oscuro, dove l'agente patogeno è visibile sotto forma di spirale su uno sfondo scuro.
Per condurre la microscopia, il biomateriale viene prelevato da una lesione sospetta. La microscopia in campo oscuro è un possibile modo per valutare lesioni cutanee come il sifiloma della sifilide primaria o il condiloma della sifilide secondaria. Se il materiale della lesione maculopapulare è secco, viene esaminato l'aspirato linfonodale.
Un risultato negativo non esclude un processo patologico; statisticamente il rilevamento dell'agente patogeno è possibile solo nell'80%.
Diagnostica PCR
Una reazione mirata ad un aumento multiplo del DNA di Treponema pallidum consente di trarre una conclusione sull'infezione da sifilide o sulla sua assenza.
Il biomateriale da analizzare può essere qualsiasi cosa: sangue, contenuto di sifilide, liquido cerebrospinale, ecc. Il test è adatto per il periodo di incubazione.
La PCR è completamente specifica.
Test sierologici indiretti per la sifilide: test treponemici e non treponemici
I test sierologici (DSR o un complesso di reazioni sierologiche) sono considerati il metodo più comune per diagnosticare tutti gli stadi della sifilide. Si distinguono le seguenti reazioni:
- agglutinazione;
- precipitazione;
- immunofluorescenza;
- test immunoenzimatico, ecc.
Anche i test sierologici per la sifilide si dividono in treponemici e non treponemici.
Non treponemico
Se si sospetta la sifilide acquisita, vengono eseguiti i test di screening, per i quali vengono utilizzati test non treponemici , che rilevano anticorpi contro antigeni lipidici di tessuti ospiti o patogeni in varie modificazioni. Nella Federazione Russa viene eseguita di routine una reazione di microprecipitazione (MPR), che consente il rilevamento di anticorpi contro le cellule danneggiate dagli agenti patogeni nel sangue. L'affidabilità dello screening è elevata, ma la specificità è bassa, pertanto il test è adatto allo screening primario di massa a scopo preventivo.
Si stima che la sensibilità dei test rapidi sia del 78-86% per rilevare la sifilide primaria, del 100% per la sifilide secondaria e del 95-98% per rilevare la sifilide terziaria.
Specificità - dall'85 al 99%, a volte inferiore, che si verifica nelle seguenti condizioni:
- gestazione;
- mestruazioni;
- oncologia;
- malattie del tessuto connettivo;
- malattie virali;
- malattie del fegato;
- vaccinazione;
- MI “fresco”;
- tifo, ecc.
Inoltre, l'eccesso di grassi nella dieta, il consumo di bevande alcoliche e l'assunzione di alcuni farmaci possono portare a risultati falsi positivi.
I risultati dei test di screening diventano positivi 1-2 settimane dopo la formazione del sifiloma. I test non treponemici danno una risposta negativa qualche tempo dopo il trattamento. In caso di sieropositività, gli anticorpi non treponemici possono essere rilevati per un lungo periodo, talvolta per tutta la vita (come confermato dai risultati di un corrispondente studio randomizzato).
Altri tipi di test non treponemici: VDRL, test della plasmoreagina (RPR), test del rosso di toluidina, reazione di fissazione del complemento con antigene cardiolipina (PCR).
Reazione di Wasserman (RW)
La fissazione del complemento è la risposta del sistema immunitario all'infezione; il risultato varia da negativo (mettere "-") a nettamente positivo "++++" o 4 più.
Nella fase iniziale della sifilide primaria, RW è negativo.
Treponemico
A causa della possibilità di risultati falsi positivi, per confermare qualsiasi risultato positivo o dubbio del test non treponemico, utilizzare test treponemici:
- reazione di immunofluorescenza (RIF);
- emoagglutinazione (HRHA),
- test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) per immunoglobuline G (IgG) e immunoglobuline M (IgM);
- immunoblotting;
- RIBT/RIT (reazione di immobilizzazione del treponema pallido).
I test treponemici non vengono utilizzati per valutare l’efficacia della terapia.
Il RIF per la determinazione degli anticorpi treponemici della classe IgG viene utilizzato dopo un risultato positivo dei test rapidi (sensibilità 84% per la sifilide primaria e 100% per gli altri stadi, specificità 96%). Non applicabile per la diagnosi nei neonati.
Alcuni laboratori utilizzano test di screening “inversi”.
Il CDC (Centri per il controllo e la prevenzione delle malattie, USA) raccomanda studi tradizionali, con verifica mediante test quantitativi non treponemici, e se il risultato è positivo si procede al trattamento.
Reazione di immunofluorescenza (RIF)
Sul materiale raccolto viene applicato il siero con anticorpi marcati con fluorocromo specifici per l'antigene del Treponema pallidum; l'agente patogeno attrae gli immunocomplessi, motivo per cui inizia a brillare al microscopio a fluorescenza.
Reazione di emoagglutinazione passiva o RPHA
Prima che compaia l'emoagglutinazione (incollaggio) dei globuli rossi, devono trascorrere almeno 4 settimane dal momento dell'introduzione del Treponema pallidum.
I globuli rossi preparati con frazioni proteiche fisse dell'agente patogeno interagiscono con il plasma; se sono presenti anticorpi contro la sifilide, si verifica una reazione.
Adatto per confermare qualsiasi stadio della malattia.
Saggio immunoassorbente collegato
Si basa sulla reazione antigene-anticorpo. Vengono rilevati anticorpi di varie classi, che possono essere quantificati.
I risultati ottenuti consentono di giudicare la durata del processo patologico, il successo del trattamento, lo stato immunologico e l'attività degli agenti patogeni.
L'immunoblotting è un tipo di ELISA, utilizzato per la diagnostica approfondita in caso di risultati dubbi.
La sensibilità e la specificità sono prossime al 100%, il metodo ultrasensibile odierno per l'identificazione delle proteine.
RIBT
Il metodo si basa sulla reazione antigene-anticorpo. L'antigene è Treponema pallidum, coltivato nei testicoli di coniglio. Quando interagiscono con gli anticorpi di una persona infetta, gli agenti patogeni perdono la loro mobilità. La reazione viene valutata mediante microscopia in campo oscuro.
Nota
Attualmente il RIBT viene utilizzato meno frequentemente a causa della sua complessità, ma l'analisi può essere utile per risolvere questioni controverse (reazioni false positive alla sifilide).
Diagnosi differenziale
La difficoltà maggiore è diagnosticare la sifilide terziaria, che è causata da sintomi del sistema cardiovascolare e nervoso, nonché da manifestazioni cutanee.
I pazienti devono essere esaminati per, e.
Elenchiamo le malattie con le quali viene effettuata la diagnosi differenziale per la sifilide:
- manifestazioni dermatologiche;
- verruche genitali ();
- donovanosi;
- linfogranuloma venereo;
- virus;
- imbardata.
Da dove inizia la diagnosi di sifilide?
Inizialmente, si tiene una conversazione con il paziente, durante la quale vengono chiariti i dettagli: quando c'è stato un contatto sessuale sospetto e quali lamentele ci sono.
Dopo aver raccolto l'anamnesi, si procede all'esame obiettivo, prestando particolare attenzione alle aree genitali e anali, alle mucose e ai linfonodi. Potrebbe essere già stata stabilita una diagnosi preliminare. La verifica finale avviene mediante test di laboratorio.
Per dirla semplicemente, alcuni test identificano l’agente eziologico della sifilide, mentre altri riflettono la reazione del corpo all’introduzione del Treponema pallidum.
Per stabilire una diagnosi definitiva, l'RPHA deve essere integrato con 1 analisi treponemica e 1 analisi non treponemica.
Diagnosi di sifilide nelle donne in gravidanza
I test obbligatori per la sifilide vengono eseguiti più volte durante la gravidanza.
Durante la prima visita di consultazione della donna viene emessa un’impegnativa per un test CSR e l’esame viene eseguito tre volte durante la gravidanza. I pazienti appartenenti ad un gruppo ad alto rischio con una storia medica complicata: antisociali, dipendenti, ecc. richiedono un'attenzione particolare.
Se i risultati del test sono positivi, viene effettuata una diagnosi più approfondita e il trattamento viene prescritto secondo le indicazioni, che dipendono dallo stadio e dalle manifestazioni cliniche.
Diagnosi di sifilide congenita
La maggior parte dei bambini nasce da madri che non ricevono cure o che ricevono le cure troppo tardi.
I test treponemici utilizzando il siero neonatale non sono raccomandati a causa del trasferimento passivo degli anticorpi IgG. Tutti i bambini nati da madri con sifilide dovrebbero essere testati con un test sierologico quantitativo non treponemico (RPR o VDRL) eseguito utilizzando siero neonatale.
Come interpretare i risultati degli studi sierologici
La reazione di microprecipitazione, RIF e RPGA sono negativi - normali, positivi - conferma della sifilide.
La reazione di microprecipitazione è negativa, il resto è positivo: una storia di sifilide dopo una terapia specifica o uno stadio avanzato.
RIF negativo con RPGA positivo e reazione di microprecipitazione: il risultato è dubbio, ripetere la valutazione completa.
Un risultato negativo di RIF e microprecipitazione, ma un RPHA positivo è una condizione dopo il successo della terapia antibiotica o un risultato falso positivo.
RIF positivo con RPGA negativo e reazione di microprecipitazione: stadio iniziale, trattamento eseguito o risultato inaffidabile.
Una reazione di microprecipitazione positiva, non confermata né da RPGA né da RIF, significa assenza di sifilide.
Esame strumentale per la sifilide
La diagnostica strumentale viene eseguita in base al coinvolgimento degli organi. Ad esempio, nell'addome si può osservare una malattia epatica granulomatosa.
I pazienti con sifilide terziaria possono mostrare dilatazione aortica. La calcificazione lineare lungo l'aorta indica un'aortite sifilitica.
La sifilide è una malattia ben nota e abbastanza comune. Nella stragrande maggioranza dei casi, si trasmette sessualmente, ma esistono altre opzioni, come la trasmissione attraverso una trasfusione di sangue, l'infezione attraverso contatti familiari o una malattia congenita acquisita dalla madre.
Per identificare o confermare questa malattia, potrebbe essere necessario sottoporsi al test per la sifilide. Molto spesso si consiglia di eseguire tali test durante le visite mediche, poiché ciò consente di identificare tempestivamente le persone infette. Ma devi capire che non esiste un'unica analisi che fornisca informazioni affidabili al 100%, quindi devi sempre effettuare diverse analisi aggiuntive.
Diagnosi di sifilide
La sifilide può essere diagnosticata mediante un esame del sangue e i sintomi, se presenti. Per ottenere un risultato più accurato, è necessario eseguire l'analisi correttamente. Il sangue deve essere donato al mattino e solo a stomaco vuoto. In modo che l'ultimo pasto avvenga almeno 8 ore prima del test. Alla vigilia del test non dovresti bere alcolici o liquidi diversi dall'acqua e non dovresti nemmeno fumare.
I moderni laboratori hanno la capacità di condurre diversi tipi di esami del sangue sierologici che rilevano la sifilide:
- Analisi del sangue RW consente di identificare la presenza dell'agente patogeno nel corpo umano e la sua attività, nonché di determinare l'efficacia del trattamento prescritto. Tale analisi talvolta produce risultati errati.
- Analisi del sangue RIF più sensibile e consente di rilevare la malattia nelle fasi iniziali. È adatto per diagnosticare la malattia nel periodo di latenza del suo decorso.
- Analisi ELISA consente di determinare la presenza nel corpo di anticorpi contro Treponema pallidum, l'agente eziologico della sifilide.
- Analisi RPGA effettuato per confermare lo stadio della malattia. Non viene utilizzato come test diagnostico indipendente, ma solo in combinazione con altri.
- Raccolta sangue RIBT utilizzato per riconoscere la reazione Wasserman falsa positiva.
Trascrizione dell'analisi
Tutti gli esami sierologici del sangue per la sifilide sono divisi in due grandi gruppi: non specifici (questo è un esame del sangue RW) e specifici (test RNGA, RIF, ELISA, RIBT).
- I test non specifici danno un risultato positivo solo quando una persona è malata e dopo il recupero daranno un risultato negativo.
- Test specifici possono determinare gli anticorpi contro la malattia nel sangue di una persona. Possono dare risultati positivi anche dopo il trattamento, quindi sono usati raramente come test diagnostici indipendenti.
Per ottenere i risultati più accurati, vengono solitamente utilizzati diversi test, quindi la decodificazione di un esame del sangue per la sifilide richiede un po' più tempo, ma l'efficacia diventa maggiore.
Reazione di Wasserman o RW
La reazione di Wasserman o RW può mostrare un risultato positivo circa 5-8 settimane dopo l'infezione, ma in alcuni pazienti si verifica più tardi. Quando gli agenti patogeni entrano nel sangue, il titolo aumenta. Raggiunge il suo massimo con la sifilide fresca secondaria. Poi c'è una diminuzione graduale del titolo anticorpale e nelle forme tardive della malattia la reazione di Wasserman è spesso negativa.
Se l'analisi mostra una forte diminuzione del titolo anticorpale durante il trattamento, ciò indica la sua efficacia. In genere, il risultato di un esame del sangue per la sifilide viene fornito sotto forma di un numero: 4 + - fortemente positivo, 3+ - positivo, 2+ o 1+ debolmente positivo o dubbio e il segno "-" indica un test negativo risultato.
Lo svantaggio principale del test RW è la sua mancanza di specificità. Abbastanza spesso dà risultati falsi positivi in pazienti con altre malattie. Ad esempio, tale analisi può essere positiva in pazienti con varie collagenosi (lupus eritematoso, sclerodermia, artrite reumatoide, ecc.), alcune malattie infettive, come la lebbra, mononucleosi, malaria, morbillo, ecc., nonché malattie del fegato, neoplasie maligne, infarto del miocardio. Risultati falsi positivi si verificano anche in persone che abusano di alcol e droghe, nonché in persone completamente sane. Pertanto, quando si riceve un test positivo per la sifilide, di solito si consiglia di condurre ulteriori ricerche utilizzando test treponemici.
Metodo di dosaggio immunoenzimatico
I test treponemici includono il metodo ELISA o il test immunoassorbente legato a un enzima. Quando si interpreta un esame del sangue utilizzando questo metodo, è possibile ottenere informazioni sugli anticorpi contro la sifilide, nonché sul loro titolo e sull'appartenenza a una classe specifica di immunoglobuline.
Per ottenere il risultato più accurato del test per la sifilide, si consiglia di eseguire un test non treponemico (RW) e due test treponemici. Se tutti e tre i test danno un risultato positivo, allora possiamo parlare della presenza della malattia nel paziente.
Se c'è il minimo sospetto di avere questa malattia a trasmissione sessuale, dovresti consultare immediatamente un medico. Consiglierà di sottoporsi al test per la sifilide e fornirà le indicazioni necessarie. Puoi sostenere questo test in modo completamente gratuito in qualsiasi clinica con un laboratorio attrezzato. Se vuoi farlo in modo anonimo, puoi visitare un laboratorio privato dove viene eseguita tale analisi pagando una piccola tassa.
4.25 su 5 (8 voti)L'analisi per la sifilide viene eseguita utilizzando molti metodi per rilevare l'agente patogeno. Con lo sviluppo della patologia compaiono un gran numero di segni specifici, pertanto, al fine di stabilire una diagnosi accurata, il malato viene esaminato in modo completo. Un esame del sangue generale non è molto informativo e non viene utilizzato per diagnosticare questa infezione a trasmissione sessuale.
Tipologie di ricerca e biomateriali da analizzare
Varie tecniche e biomateriali vengono utilizzati per identificare la malattia. Nelle fasi iniziali, la sifilide viene determinata utilizzando un test batterioscopico. I campioni vengono esaminati al microscopio. Il dispositivo consente di rilevare ceppi patogeni. Gli esami del sangue sierologici vengono eseguiti successivamente. Grazie a loro, gli antigeni e gli anticorpi della sifilide vengono rilevati nei campioni.
I metodi per determinare le infezioni a trasmissione sessuale sono suddivisi in 2 categorie:
- Microrganismi patogeni diretti e identificativi. Questi includono: microscopia in campo oscuro, analisi RIT (infezione di conigli con biomateriale per la ricerca), metodo PCR - reazione a catena della polimerasi (con il suo aiuto si trovano gli elementi genetici dell'agente patogeno).
- I test indiretti (sierologici) consentono il rilevamento degli anticorpi contro l'agente patogeno. Sono prodotti dal sistema immunitario come risposta alle infezioni.
Le tecniche sierologiche si dividono in 2 categorie: treponemiche e non treponemiche.
- Non treponemici, inclusi: test del rosso toluidina, analisi RSC, test RPR, esame del sangue utilizzando il metodo RMP espresso.
- Treponemico, tra cui: immunoblotting, test RSK, analisi RIT, studio RIF, test RPGA, analisi ELISA.
Il contenuto informativo dei test per l'infezione varia. Molto spesso vengono eseguiti i principali tipi di test per la sifilide, che includono metodi sierologici.
Biomateriale per la ricerca
Per identificare il Treponema pallidum, un agente patogeno che assomiglia a una spirale e causa la sifilide, vengono prelevati campioni:
- sangue venoso;
- liquido cerebrospinale (secrezione dal canale spinale);
- contenuto dei linfonodi;
- tessuto ulcerato.
Se è necessario condurre test per rilevare la sifilide, il sangue viene donato non solo dalla vena cubitale, ma anche dal dito. La scelta del biomateriale e il metodo di esame sono influenzati dalla gravità dell'infezione e dall'attrezzatura del centro diagnostico.
Ricerca diretta
La prova convincente della sifilide è l'identificazione degli agenti infettivi al microscopio. In questo modo l'agente patogeno viene riscontrato in 8 soggetti su 10. Un risultato negativo nei restanti 2 pazienti non significa che non siano infetti.
Lo studio viene effettuato negli stadi primari e secondari (stadi) della malattia, che sono caratterizzati dalla comparsa di eruzioni cutanee e sifilomi (ulcerazioni) sui tessuti epiteliali o sulle mucose. Gli agenti patogeni che causano malattie sessualmente trasmissibili si trovano nelle secrezioni delle lesioni.
Più precisamente, un test complesso chiamato RIF, una reazione di immunofluorescenza, può rilevare i treponemi. Il campione per la ricerca è pretrattato con anticorpi fluorescenti. Composti che possono brillare si uniscono ai batteri. Esaminando i campioni al microscopio, in caso di infezione, il tecnico di laboratorio vede gli agenti patogeni scintillanti.
Il test viene utilizzato per la diagnosi precoce della malattia. Più a lungo dura la malattia, minore è la sensibilità dei metodi di ricerca. Inoltre, cade dopo aver trattato eruzioni cutanee e ulcere con antisettici e nei pazienti sottoposti a trattamento. Occasionalmente, il test produce risultati falsi negativi e falsi positivi.
L'analisi RIT è un metodo estremamente accurato per rilevare la sifilide. Quando si esegue un test, è necessario attendere molto tempo per i risultati. Fino a quando il coniglio infetto non mostra segni di infezione. Il test viene utilizzato molto raramente, nonostante sia estremamente accurato.
Usando reazione a catena della polimerasi La sifilide è determinata dagli elementi genetici dei patogeni. L’unico inconveniente della PCR è il suo costo elevato.
Test non treponemici
Tali esami del sangue aiutano a identificare gli anticorpi che compaiono in risposta alla cardiolipina, un composto correlato alla struttura generale delle membrane degli agenti patogeni.
Reazione Wasserman (RW o RW)
Il test più famoso per la sifilide è la reazione di Wasserman. Il RV è incluso nella categoria delle reazioni di fissazione del complemento (CFR). I nuovi metodi RSC presentano differenze significative rispetto ai tradizionali RW. Ma essi vengono designati, come prima, con il concetto di “reazione Wassermann”.
Il sistema immunitario sintetizza anticorpi (marcatori) in risposta all’invasione treponemica. Vengono rilevati da un esame del sangue per la sifilide utilizzando la reazione di Wasserman. Un risultato RW positivo conferma che il soggetto è infetto.
Reazione di emolisi – indice dell'analisi RT. Con esso interagiscono due sostanze: il siero emolitico e i globuli rossi di pecora. Il siero viene prodotto immunizzando un coniglio con globuli rossi di pecora. L'attività del fluido biologico viene ridotta dal riscaldamento.
Gli indicatori del ventricolo destro dipendono dal fatto che si sia verificata o meno l'emolisi. In un campione privo di marcatori si verifica l'emolisi. In questo caso, la reazione agli antigeni è impossibile. Il complemento viene speso interagendo con i globuli rossi delle pecore. Quando nel campione sono presenti marcatori, il complimento reagisce con gli antigeni. In questo caso, l'emolisi non si verifica.
Nella diagnosi sierologica della sifilide è molto importante ottenere un risultato affidabile e accurato.
Per migliorare la qualità dei dati vengono intraprese alcune azioni:
- Il siero del test viene diluito 200 volte (1:200) per evitare reazioni false positive. Poi dicono che è in corso test per la sifilide RIF 200.
- In un'altra opzione, quando si diluisce il siero 1:5, viene utilizzato inoltre uno speciale assorbente che raccoglie gli anticorpi "extra" in modo che non distorcano i risultati.
Anche la dimensione dei treponemi gioca un ruolo nelle mani dei ricercatori. Grandi corpi microbici di spirochete sono chiaramente visibili al microscopio a fluorescenza. Se le proteine marcate con fosforo del siero “si aggrappano” ad essi. L'uso di un antigene e di un siero standardizzati ci consente di massimizzare la sensibilità e la specificità del RIF nella diagnosi della sifilide.
Opzioni di analisi RIF private: assorbimento RIF
Uno dei metodi alternativi si chiama RIF-Abs. Si differenzia dal metodo abituale per la bassa diluizione del siero in esame: 1:5 contro 1:200, come al solito.
Il campione concentrato contiene molte molecole proteiche attive.
Per evitare e aumentare la sensibilità, il siero viene trattato con uno speciale assorbente costituito da frammenti di spirochete sifilitiche. L'assorbente raccoglie gli anticorpi eccessivamente attivi e quindi il campione viene trattato con un siero industriale marcato con fosforo. Grazie a questa preparazione preliminare vengono eliminate tutte le molecole non necessarie che potrebbero influenzare i risultati del test.
Viene posizionato secondo le seguenti indicazioni:
- Positivo in un contesto di benessere clinico e senza storia di rischi di infezione.
- RV positivo in pazienti affetti da malattie croniche.
- RV negativo quando compaiono sintomi sospetti di sifilide.
I primi risultati positivi compaiono già al 15-16esimo giorno dal momento dell'infezione. Se la reazione cambia da positiva a negativa, ciò segnala una cura completa per la sifilide. La probabilità di un risultato falso positivo è inferiore allo 0,4%.
Questa situazione può verificarsi durante l'esame di malati di cancro, alcolisti, donne incinte e persone che soffrono di disturbi immunitari.
Una certa percentuale è dovuta ad errori tecnici, poiché la produzione è piuttosto complessa. Ci sono momenti in cui è necessario distinguere una patologia congenita da una acquisita. Questo può essere fatto cercando diversi tipi di anticorpi nel sangue del paziente.
Gli anticorpi contro la sifilide di classe M (IgM) compaiono subito dopo l'infezione e sono molto più rapidi degli IgG. Permette di identificarli analisi per l'assorbimento del RIF della sifilide IgM. Se i risultati di questa reazione sono positivi, allora possiamo parlare di infezione recente. In questo modo è possibile distinguere i casi di reinfezione dalla recidiva o individuare l'infezione di un bambino dopo il parto.
Sulla base dei risultati di questa tecnica di analisi RIF, si trae anche una conclusione sull'efficacia del trattamento della sifilide precoce.
Se sospetti la sifilide, contatta un venereologo esperto.
In caso di sifilide primaria, si esaminano le secrezioni ulcerose o i linfonodi puntati per ricercare il treponema pallidum. In caso di sifilide secondaria, il materiale viene prelevato dalla superficie delle papule erose sulla pelle, dalle mucose, dalle crepe, ecc. Prima di prelevare il materiale per pulire da vari contaminanti, la superficie delle lesioni (erosioni, ulcere, crepe ) deve essere pulito accuratamente con un tampone di garza di cotone sterile, inumidito con una soluzione isotonica di cloruro di sodio o prescrivere lozioni con la stessa soluzione. La superficie pulita viene asciugata con un tampone asciutto e viene utilizzata un'ansa o una spatola di platino per irritare leggermente le aree periferiche, mentre allo stesso tempo si comprime leggermente la base dell'elemento con le dita in un guanto di gomma fino alla comparsa del fluido tissutale (siero), da cui viene preparata la preparazione per la ricerca. Ottenere il fluido tissutale è importante per diagnosticare la sifilide, poiché il treponema pallidum si trova nei lumi dei capillari linfatici, nelle fessure dei tessuti attorno ai vasi linfatici e sanguigni.Puntura dei linfonodi regionali
La pelle sopra i linfonodi viene trattata con alcol al 96% e soluzione alcolica di iodio al 3-5%. Quindi utilizzare la prima e la seconda dita della mano sinistra per fissare il linfonodo. Con la mano destra, prendere una siringa sterile con alcune gocce di soluzione isotonica di cloruro di sodio, che viene iniettata parallelamente all'asse longitudinale del linfonodo. L'ago viene spinto in diverse direzioni verso la parete opposta della capsula linfonodale e il contenuto della siringa viene iniettato lentamente. Usando le dita della mano sinistra, il linfonodo viene leggermente massaggiato. Quando l'ago viene ritirato lentamente, contemporaneamente viene estratto lo stantuffo della siringa, aspirando il contenuto del linfonodo. Il materiale viene applicato su un vetrino (se la quantità di materiale è piccola, viene aggiunta una goccia di soluzione isotonica di cloruro di sodio) e coperto con un coprioggetto. Lo studio del farmaco nativo viene effettuato in campo visivo oscuro utilizzando un microscopio ottico con condensatore a campo oscuro (obiettivo 40, 7x, 10x o 15x). Il Treponema pallidum si trova anche nei preparati colorati. Se colorati secondo Romanovsky-Giemsa, i treponemi pallidi sono colorati di rosa, secondo Fontan e Morozov - marrone (nero), secondo il metodo Burri, i treponemi non colorati si rivelano su uno sfondo scuro.Diagnosi sierologica
Le reazioni sierologiche standard (classiche) e specifiche sono di grande importanza nella diagnosi della sifilide, nella valutazione dell'efficacia del trattamento, nella definizione di un criterio di cura e nell'identificazione delle forme latenti e resistenti. Le reazioni sierologiche standard o classiche (SSR) includono:- Reazione di Wasserman (WR),
- reazioni sedimentarie di Kahn e Sachs-Vitebsky (citocoliche),
- reazione su vetro (metodo espresso),
- reazione di immobilizzazione del treponema pallido (reazione del treponema pallido),
- reazione di immunofluorescenza (RIF).
Reazione di Wasserman (WR)
- sviluppato da A. Wasserman insieme ad A. Neisser e C. Bruck nel 1906. La reazione di Wasserman si basa sul fenomeno della fissazione del complemento (reazione di Bordet-Gengou) e consente la determinazione di anticorpi antilipidi (reagine). Secondo i concetti moderni, la reazione Wasserman rileva gli anticorpi contro i lipidi del macroorganismo, non contro il Treponema pallidum, e la reazione rivela un processo autoimmune causato dalla denaturazione dei tessuti del macroorganismo da parte del Treponema pallidum con la formazione di un complesso lipoproteico ( coniugato), in cui i lipidi (apteni) sono un determinante.Il RV viene solitamente diagnosticato con due o tre antigeni. I più comunemente usati sono l'antigene cardiolipina altamente sensibile (estratto di cuore bovino arricchito con colesterolo e lecitina) e l'antigene treponemico (sospensione sonicata di treponemi pallidi coltivati anatogeni). Insieme alle reagine sieriche del paziente, questi antigeni formano un complesso immunitario capace di adsorbire e legare il complemento. Per determinare visivamente il complesso formato (reagine + antigene + complemento), come indicatore viene utilizzato il sistema emolitico (una miscela di eritrociti di pecora con siero emolitico). Se nella fase 1 della reazione (reagne + antigene + complemento) si lega il complemento, non si verifica emolisi: i globuli rossi precipitano in un precipitato facilmente visibile (PB positivo). Se nella fase 1 il complemento non si lega a causa dell'assenza di reagine nel siero in esame, verrà utilizzato dal sistema emolitico e si verificherà l'emolisi (RT negativo). Il grado di gravità dell'emolisi durante la stadiazione del RV è valutato in base ai vantaggi: completa assenza di emolisi ++++ o 4+ (RV è nettamente positivo); emolisi appena iniziata +++ o 3+ (RV positivo); emolisi significativa ++ o 2+ (RV debolmente positivo); quadro poco chiaro dell'emolisi ± (il RV è dubbio); emolisi completa - (reazione Wassermann negativa).
Oltre alla valutazione qualitativa del PB, esiste una valutazione quantitativa con varie diluizioni del siero (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Il titolo della reazione è determinato dalla diluizione massima che dà comunque un risultato nettamente positivo (4+). La stadiazione quantitativa del RV è importante nella diagnosi di alcune forme cliniche di infezione sifilitica, nonché nel monitoraggio dell'efficacia del trattamento. Attualmente, la reazione Wasserman viene eseguita con due antigeni (cardiolipina e ceppo di Reiter sonorato treponemico). Di norma, il RV diventa positivo 5-6 settimane dopo l'infezione nel 25-60% dei pazienti, 7-8 settimane - 75-96%, 9-19 settimane - 100%, anche se negli ultimi anni a volte prima o più tardi. Allo stesso tempo, il titolo della reagina aumenta gradualmente e raggiunge un valore massimo (1:160-1:320 e oltre) in caso di eruzioni cutanee generalizzate (sifilide fresca secondaria). Quando RV è positivo, viene fatta una diagnosi di sifilide sieropositiva primaria.
Con secondario fresco e sifilide ricorrente secondaria, il RV è positivo nel 100% dei pazienti, ma nei pazienti depleti con immunità indebolita si può osservare un risultato negativo. Successivamente il titolo della reagina diminuisce gradualmente e in caso di sifilide secondaria ricorrente solitamente non supera 1:80-1:120.
Per la sifilide terziaria Il RV è positivo nel 65-70% dei pazienti e solitamente si osserva un basso titolo di reagina (1:20-1:40). Nelle forme tardive di sifilide (sifilide degli organi interni, sistema nervoso), il RV positivo si osserva nel 50-80% dei casi. Il titolo della reazione varia da 1:5 a 1:320.
Per la sifilide latente RV positivo si osserva nel 100% dei pazienti. Il titolo della reazione va da 1:80 a 1:640 e con la sifilide latente tardiva da 1:10 a 1:20. Una rapida diminuzione del titolo della reagina (fino alla completa negatività) durante il trattamento indica l'efficacia del trattamento.
Svantaggi della reazione Wasserman- sensibilità insufficiente (negativa nella fase iniziale della sifilide primaria). Risulta negativo anche in 1/3 dei pazienti se sono stati trattati in passato con antibiotici, nei pazienti con sifilide terziaria attiva con lesioni della pelle e delle mucose, dell'apparato osteoarticolare, degli organi interni, del sistema nervoso centrale e con malattie congenite tardive. sifilide.
Mancanza di specificità- la reazione di Wasserman può essere positiva nelle persone che non hanno mai avuto e non hanno la sifilide. In particolare, risultati RV falsi positivi (non specifici) si osservano in pazienti che soffrono di lupus eritematoso sistemico, lebbra, malaria, neoplasie maligne, danni al fegato, infarto miocardico esteso e altre malattie, e talvolta in persone completamente sane.
Viene rilevata una reazione Wasserman falsa positiva a breve termine in alcune donne prima o dopo il parto, nelle tossicodipendenti, dopo l'anestesia o nel consumo di alcol. Di norma, il RV falso positivo è debolmente espresso, spesso con un titolo di reagina basso (1:5-1:20), positivo (3+) o debolmente positivo (2+). Durante le indagini sierologiche di massa, la frequenza dei risultati falsi positivi è dello 0,1-0,15%. Per superare la sensibilità insufficiente si utilizza il test del freddo (reazione di Kolyar) e contemporaneamente si esegue con altre reazioni sierologiche.
Reazioni sedimentarie di Kahn e Sachs-Vitebsky
La reazione Wasserman viene utilizzata in combinazione con due reazioni sedimentarie (Kahn e Sachs-Vitebsky), una volta messi in scena, vengono preparati antigeni più concentrati. Metodo Express (microreazione su vetro) - si riferisce alle reazioni lipidiche e si basa sulla reazione di precipitazione. Viene posto con uno specifico antigene cardiolipina, 1 goccia del quale viene miscelata con 2-3 gocce del siero del sangue in esame nei pozzetti di una speciale lastra di vetro.Vantaggio- velocità di ricezione della risposta (in 30-40 minuti). I risultati vengono valutati in base alla quantità di sedimento depositato e alla dimensione delle scaglie. L'espressività è definita come CSR - 4+, 3+, 2+ e negativa. Va notato che i risultati falsi positivi si osservano più spesso che con RV. Di norma, il metodo espresso viene utilizzato per esami di massa per la sifilide, per esami nei laboratori diagnostici clinici, nei reparti somatici e negli ospedali. Sulla base dei risultati del metodo express, la diagnosi di sifilide è vietata; è escluso il suo utilizzo nelle donne in gravidanza, nei donatori e anche per il controllo dopo il trattamento.
Reazione di immobilizzazione del Treponema pallido (TPI)
Reazione di immobilizzazione del Treponema pallido (TPI)- proposto nel 1949 da R. W. Nelson e M. Mayer. È il test diagnostico più specifico per la sifilide. Tuttavia, la complessità e l’alto costo di produzione ne limitano l’utilizzo. Nel siero dei pazienti vengono determinati anticorpi video-specifici (immobilisine), che portano all'immobilità del Treponema pallidum in presenza di complemento. L'antigene è il Treponema pallidum patogeno vivo isolato da conigli infetti da sifilide. Utilizzando un microscopio, viene contata la motilità persa (immobilizzata) del Treponema pallidum e vengono valutati i risultati del RIBT: l'immobilizzazione del Treponema pallidum dal 51 al 100% è positiva; dal 31 al 50% - debolmente positivo; dal 21 al 30% - dubbio; dallo 0 al 20% - negativo.RIBT è importante nella diagnosi differenziale per distinguere le reazioni sierologiche false positive dalle reazioni causate dalla sifilide. Tardi diventa positivo di RV, RIF e quindi non viene utilizzato per diagnosticare forme infettive di sifilide, sebbene nel periodo secondario della sifilide sia positivo nell'85-100% dei pazienti.
Nel periodo terziario della sifilide con danni agli organi interni, al sistema muscolo-scheletrico e al sistema nervoso, il RIBT è positivo nel 98-100% dei casi ( Il RV è spesso negativo).
Va ricordato che il RIBT può risultare falso positivo se il siero del test contiene farmaci treponemocidi (penicillina, tetraciclina, macroliti, ecc.), che causano l'immobilizzazione aspecifica del Treponema pallidum. A questo scopo, il sangue viene analizzato per RIBT non prima di 2 settimane dopo la fine dell'assunzione di antibiotici e altri farmaci.
RIBT, come RIF, viene lentamente negativizzato durante il processo di trattamento, quindi non viene utilizzato come controllo durante il processo di trattamento.
Reazione di immunofluorescenza (RIF)
Reazione di immunofluorescenza (RIF)- sviluppato nel 1954 da A.Coons e utilizzato per la prima volta per la diagnosi di infezione sifilitica da Deacon, Falcone, Harris nel 1957. Il RIF si basa su un metodo indiretto per la determinazione degli anticorpi fluorescenti. L'antigene per la produzione è il Treponema pallidum patogeno per i tessuti fissato su vetrini su cui viene applicato il siero da testare. Se il siero del test contiene anticorpi anti-treponema legati a IgM e IgG, si legano fortemente all'antigene - treponema, che viene rilevato al microscopio a fluorescenza utilizzando siero fluorescente anti-specie ("anti-umano").Risultati RIF vengono presi in considerazione dall'intensità del bagliore del treponema pallido nella preparazione (bagliore giallo-verde). In assenza di anticorpi antitreponemici nel siero, il treponema pallidum non viene rilevato. In presenza di anticorpi viene rilevato un bagliore di treponema pallido, il cui grado è espresso in più: 0 e 1+ - reazione negativa; da 2+ a 4+ - positivo.
RIF si riferisce a reazioni treponemiche di gruppo e viene somministrato in una diluizione di 10 e 200 volte del siero in esame (RIF-10 e RIF-200). RIF-10 è considerato più sensibile, ma spesso si ottengono risultati positivi non specifici rispetto a RIF-200 (ha una specificità più elevata). Generalmente, RIF diventa positivo prima di RV- positivo nella sifilide primaria sieronegativa nell'80% dei pazienti, nel 100% nel periodo secondario della sifilide, sempre positivo nella sifilide latente e nel 95-100% dei casi nelle forme tardive e nella sifilide congenita.
Specificità del RIF aumenta dopo il pretrattamento del siero in esame con un antigene treponemico assorbente-ultrasonico, che lega gli anticorpi del gruppo (RIF - abs).
Indicazioni per RIBT e RIF- diagnosi di sifilide latente per confermare la specificità del complesso di reazioni lipidiche in caso di sospetta infezione sifilitica sulla base di un RV positivo. RIBT e RIF positivi sono la prova di sifilide latente. In caso di RV falso positivo in varie patologie (lupus eritematoso sistemico, neoplasie maligne, ecc.) e se i risultati ripetuti di RIBT e RIF sono negativi, ciò indica la natura aspecifica del RV. Sospetto di lesioni sifilitiche tardive degli organi interni, del sistema muscolo-scheletrico, del sistema nervoso se i pazienti hanno RV negativo. Sospetto di sifilide sieronegativa primaria, quando in pazienti con studi ripetuti di secrezione dalla superficie di un'erosione (ulcera), puntura da linfonodi regionali ingrossati, non viene rilevato treponema pallidum - in questo caso viene dato solo RIF - 10.
Quando si esaminano persone con RV negativo che hanno avuto contatti sessuali e familiari a lungo termine con pazienti affetti da sifilide, tenendo conto della probabile possibilità di trattarli nel recente passato con farmaci antisifilitici che hanno causato la negatività del RV. Saggio immunoassorbente legato all'enzima (ELISA - saggio immunoassorbente legato all'enzima) - metodo sviluppato da E. Engvall et al., S. Avrames (1971). L'essenza consiste nel combinare un antigene sifilitico assorbito sulla superficie di un portatore in fase solida con un anticorpo del siero sanguigno in studio e identificare un complesso antigene-anticorpo specifico utilizzando siero sanguigno anti-specie marcato con enzima. Ciò consente di valutare visivamente i risultati ELISA in base al grado di cambiamento del colore del substrato sotto l'azione dell'enzima incluso nel coniugato. Risultati ELISA inaffidabili possono verificarsi a causa di una diluizione insufficiente degli ingredienti, di una violazione delle condizioni di temperatura e tempo, di un pH incoerente delle soluzioni, di contaminazione della vetreria di laboratorio e di una tecnica errata per il lavaggio dei terreni.
Reazione di emoagglutinazione passiva (RPHA)
Proposto come test diagnostico per la sifilide da T.Rathlev (1965,1967), T.Tomizawa (1966). La macromodificazione della reazione si chiama TRHA, la micromodifica è MNA-TR, la versione automatizzata è AMNA-TR, la reazione con macrocapsule di poliurea al posto dei globuli rossi è MSA-TR. La sensibilità e la specificità dell'RPGA sono simili a RIBT, RIF, ma l'RPGA ha meno sensibilità nelle forme precoci di sifilide rispetto ai RIF-abs e maggiore sensibilità nelle forme successive, sifilide congenita. RPGA viene fornito in versioni qualitative e quantitative.Tecnica di prelievo del sangue per test sierologici
Per studiare RV, RIF, RIBT, il sangue viene prelevato dalla vena ulnare a stomaco vuoto o non prima di 4 ore dopo un pasto utilizzando una siringa sterile o un ago (per gravità). Nel luogo di raccolta, la pelle viene pretrattata con alcol al 70%. La siringa e l'ago devono essere lavati con una soluzione isotonica di cloruro di sodio. 5-7 ml di sangue da analizzare vengono versati in una provetta pulita, asciutta e fredda. Sulla provetta viene incollato un foglio di carta bianco con il cognome, le iniziali, l’anamnesi o il numero della tessera ambulatoriale del paziente e la data del prelievo di sangue. Dopo il prelievo del sangue la provetta viene posta in frigorifero ad una temperatura di +4°+8°C fino al giorno successivo. Il giorno successivo, il siero viene drenato per essere analizzato. Se il sangue non viene utilizzato il giorno successivo, il siero deve essere drenato dal coagulo e conservato in frigorifero per non più di 1 settimana. Per il test RIBT, la provetta deve essere appositamente preparata e sterile. In caso di violazione delle regole per la raccolta del sangue a fini di ricerca, il mancato rispetto delle condizioni può comportare la distorsione dei risultati.Non è consigliabile prelevare il sangue per i test dopo aver mangiato, bevuto alcolici, assunto vari farmaci, dopo aver somministrato vari vaccini o durante il ciclo mestruale nelle donne.
Per la ricerca utilizzando il metodo express, il sangue è stato prelevato dalla punta del dito, come si fa quando lo si prende per la VES, ma il sangue è stato prelevato da 1 capillare in più. Il metodo express può essere eseguito anche con siero sanguigno ottenuto mediante venipuntura. Se è necessario eseguire analisi del sangue in laboratori remoti, è possibile inviare siero secco al posto del sangue (metodo goccia secca). Per fare ciò, il giorno successivo al prelievo del sangue, il siero viene separato dal coagulo e aspirato in una siringa sterile nella quantità di 1 ml. Quindi il siero viene versato sotto forma di 2 cerchi separati su una striscia di carta da lettere spessa (carta oleata o cellophane) di 6x8 cm Sul bordo libero del tampone vengono scritti il cognome, le iniziali del soggetto e la data del prelievo di sangue. carta. La carta con il siero viene protetta dalla luce solare diretta e lasciata a temperatura ambiente fino al giorno successivo. Il siero si asciuga sotto forma di piccoli cerchi di una pellicola vetrosa giallastra lucida. Successivamente, strisce di carta con siero essiccato vengono arrotolate come polvere farmaceutica e inviate al laboratorio, indicando la diagnosi e lo scopo per cui viene esaminato.
Resistenza sierologica
In alcuni (2% o più) pazienti affetti da sifilide, nonostante la terapia antisifilitica completa, si osserva un rallentamento (assenza) di reazioni sierologiche negative dopo la fine del trattamento fino a 12 mesi o più. Si verifica la cosiddetta resistenza sierologica, che negli ultimi anni è stata osservata frequentemente. Esistono forme di resistenza sierologica:- VERO(assoluto, incondizionato) - è necessario effettuare un ulteriore trattamento antisifilitico, combinandolo con una terapia non specifica per aumentare le forze immunitarie del corpo.
- Parente- dopo il trattamento completo, il treponema pallidum forma cisti o forme L, che si trovano nel corpo in uno stato a bassa virulenza e, di conseguenza, un trattamento aggiuntivo non modifica gli indicatori delle reazioni sierologiche, in particolare RIF e RIBT.
Pseudoresistenza- dopo il trattamento, nonostante le reazioni sierologiche positive, il Treponema pallidum è assente nell'organismo. Non c'è antigene nel corpo, ma continua la produzione di anticorpi, che vengono rilevati durante le reazioni sierologiche.
La resistenza sierologica può svilupparsi a causa di:
- trattamento inadeguato senza tener conto della durata e dello stadio della malattia;
- dose insufficiente e in particolare dovuta alla mancata considerazione del peso corporeo dei pazienti;
- violazione dell'intervallo tra la somministrazione del farmaco;
- persistenza del treponema pallidum nell'organismo nonostante un trattamento specifico completo, a causa della resistenza alla penicillina e ad altri farmaci chemioterapici in presenza di lesioni nascoste e incistate negli organi interni, nel sistema nervoso, nei linfonodi, che sono inaccessibili ai farmaci antibatterici (treponema pallidum si riscontrano spesso nei tessuti cicatriziali molti anni dopo la fine della terapia, nei linfonodi è talvolta possibile rilevare treponema pallidum 3-5 anni dopo la terapia antisifilitica);
- riduzione delle forze protettive in varie malattie e intossicazioni (endocrinopatie, alcolismo, tossicodipendenza, ecc.);
- esaurimento generale (mangiare cibi poveri di vitamine, proteine, grassi).
- concomitanti malattie non specifiche degli organi interni, disturbi del sistema cardiovascolare, reumatismi, disfunzione del sistema endocrino e nervoso, gravi dermatosi croniche, neoplasie maligne;
- danni al sistema nervoso (lesioni gravi, commozioni cerebrali, traumi mentali);
- gravidanza; intossicazione cronica da alcol, nicotina, droghe; malattie infettive (malaria, tubercolosi, epatite virale, dissenteria, tifo, febbre tifoide e ricorrente).
- In contatto con 0
- Google+ 0
- OK 0
- Facebook 0
