Installazione in laboratorio della rabbia negli animali. Diagnosi di laboratorio della rabbia

Causato dal virus della rabbia. Inoltre, non solo per l'animale stesso, ma anche per il suo ambiente (il proprietario e gli altri membri della famiglia). Il virus provoca infiammazione del cervello negli esseri umani e negli animali. Particolarmente sensibili alla malattia sono volpi, lupi, gatti, bovini grandi e piccoli, cani, pecore, capre, cavalli, ecc.. Gli animali domestici e gli esseri umani si infettano quando mordono animale con la rabbia o dalla saliva che entra in contatto con la pelle rotta, le mucose o gli occhi. La saliva può diventare contagiosa fino a 10 giorni prima che compaiano i segni della rabbia.
Attualmente esistono descrizioni di altre vie di trasmissione: il metodo aereo (alimentare - attraverso cibo e acqua) e il metodo transplacentare (attraverso la placenta durante la gravidanza).
Il virus, diffondendosi lungo le vie nervose, raggiunge le ghiandole salivari e le cellule nervose della corteccia cerebrale e, colpendole, provoca gravi danni irreversibili.

malattia della rabbia animale registrati in tutto il mondo (le uniche eccezioni sono Giappone, Australia e Regno Unito).

Sfortunatamente, la Russia non è inclusa nell’elenco delle eccezioni. Mosca e la regione di Mosca sono anche un ambiente favorevole per la comparsa della rabbia negli animali domestici e selvatici.
Il virus è instabile nell'ambiente esterno: muore se riscaldato a 56 gradi in 15 minuti e quando bollito in 2 minuti. Il virus della rabbia è anche sensibile ai raggi ultravioletti e alla luce solare diretta. Tuttavia, il virus della rabbia è resistente alle basse temperature e agli antibiotici.

Il periodo di incubazione durante l'infezione da rabbia può durare da diversi giorni a diversi mesi (in media 3-6 settimane). La rabbia negli esseri umani può durare fino a un anno. La manifestazione del quadro clinico è preceduta da un periodo di latenza (incubazione). Anche l'animale è pericoloso in questo momento.

Sintomi e segni della rabbia negli animali

Segni di rabbia può comparire in un animale un paio di settimane dopo il morso di un animale rabbioso o il contatto con il virus. Presta attenzione al comportamento del tuo animale domestico. Qualsiasi comportamento inadeguato e innaturale dell'animale dovrebbe avvisarti ed essere più attento. In alcuni casi, la temperatura potrebbe aumentare.
Come sai, gli animali selvatici hanno paura degli umani. In caso di malattia gli animali selvatici possono avvicinarsi alla casa e attaccare anche il bestiame e le persone. Pertanto, se il tuo animale domestico inizia a comportarsi in modo aggressivo o eccessivamente affettuoso, allora questo è un serio campanello d'allarme per non correre rischi e chiamare un veterinario per un esame e una diagnosi della probabilità di rabbia.

Spesso sintomi aspecifici e diagnosi intravitali inaffidabili dovrebbero escludere opzioni "a caso", perché si tratta di conseguenze fatali non solo per l'animale, ma con un'alta probabilità anche per il proprietario.

Diagnosi della rabbia negli animali

La diagnosi viene effettuata sulla base di dati complessi e test di laboratorio. Oggi non esiste un metodo affidabile al 100% per la diagnosi a vita della rabbia negli animali utilizzati nella pratica veterinaria.
L'antigene virale vitale può essere rilevato utilizzando l'MFA nelle impronte della cornea degli animali affetti da rabbia. Inoltre, il virus può essere isolato da alcuni tessuti e fluidi corporei. Tuttavia, un risultato negativo di questo metodo non esclude la possibilità di infezione da rabbia.
Nella diagnosi post mortem della rabbia negli animali, i risultati sono più accurati, perché. vengono applicati altri metodi. Ad esempio, una delle diagnosi patoanatomiche esatte nello studio del cervello è il rilevamento di inclusioni specifiche (corpi di Babes-Negri). Inoltre, il metodo più importante rimane il test biologico: l'infezione intracerebrale.
Un ostacolo alla diagnosi della rabbia negli animali è anche la presenza di varie forme della malattia. I veterinari dividono convenzionalmente la manifestazione della rabbia in tre forme (alcune forme hanno stadi diversi).

Forme di sviluppo e decorso della rabbia negli animali (quadro clinico):

Forma violenta di rabbia:
1 fase. L'animale evita le persone, si nasconde in un luogo buio e appartato. Può apparire un comportamento atipico: aumento dell'affetto o aggressività passiva. In questo caso, può comparire prurito nel sito del morso. L'animale può leccare o mordere il punto di ingresso del virus (lesione). L'appetito diminuisce. Compaiono vomito, salivazione e allucinazioni. L'atto della deglutizione è difficile.
Fase 2. C'è un'aggressività pronunciata. L'ansia cresce, c'è la tendenza a mangiare oggetti non commestibili. Desiderio inconscio di muoversi. L'animale può mordere il proprio corpo (autolesionismo), rosicchiare oggetti circostanti, munizioni, terra. Attacco ad altri animali e persino al proprietario. L'animale non può ingoiare l'acqua. Per questo motivo, salivazione abbondante e incontrollata. Non è possibile mangiare. Manifestazione di convulsioni. Si verifica una paralisi parziale dei muscoli del viso e dei gruppi degli arti. Di conseguenza, si sviluppa lo strabismo, la mascella inferiore si abbassa, la lingua cade fuori dalla bocca.
3 fase (terminale - paralitico). Stato depressivo. Grave esaurimento del corpo, sviluppo della paralisi. L'animale mente quasi costantemente e cade in coma e coma. La morte avviene a seguito di arresto respiratorio dovuto alla paralisi dei muscoli respiratori.

Forma silenziosa di rabbia:
La forma silenziosa è caratterizzata dallo sviluppo di paralisi, salivazione, incapacità di mangiare. Dopo 2-4 giorni l'animale muore. La fase di eccitazione (furia) è di breve durata o assente.

Forma atipica di rabbia:
Forma atipica (viene diagnosticato il complesso). Possono verificarsi diarrea o atonia intestinale. Potrebbe esserci un miglioramento a breve termine della condizione, seguito da sintomi neurologici progressivi. Di conseguenza, l'animale muore. Questa fase del decorso della rabbia può durare fino a 3 mesi o più.

Nel bestiame prevale la forma silenziosa. L'eccitazione in questo caso è debolmente espressa, si notano muggiti rauchi, salivazione, andatura instabile, si sviluppa rapidamente la paralisi degli arti. Spesso si sviluppa un decorso atipico: rifiuto del cibo, atonia del proventricolo, frequente bisogno di defecare, convulsioni, quindi paralisi. In forma violenta, al momento di una crisi, gli animali si liberano dal guinzaglio, ruggiscono, scavano il terreno, si gettano sui muri, attaccano altri animali della loro specie e sono particolarmente aggressivi nei confronti dei cani.
Nelle pecore e nelle capre la malattia procede quasi come nei bovini, ma la paralisi si sviluppa più velocemente (il secondo giorno).
Nei cavalli e nei maiali prevale la forma violenta.

Prevenzione della rabbia negli animali

Il più efficiente ed efficace metodo di prevenzione della rabbia animaleè la vaccinazione. Secondo la legge della Federazione Russa, la vaccinazione annuale è obbligatoria per tutti gli animali domestici e da allevamento. Oggi esiste un'ampia selezione di vaccini contro la rabbia negli animali, sia importati che nazionali. I vaccini moderni forniscono la formazione dell’immunità entro tre anni. La vaccinazione annuale contro la rabbia animale non rappresenta un pericolo per un animale domestico sano.

Appartiene al genere Lyssavirus (greco lyssa - rabbia). Provoca un'infezione mortale negli animali e nell'uomo, caratterizzata da danni irreversibili ai neuroni del sistema nervoso centrale. Nel 1885 L. Pasteur confermò sperimentalmente il metodo di attenuazione di un agente patogeno ancora sconosciuto e ricevette un vaccino antirabbico. Nel 1892 V. Babes e nel 1903 A. Negri descrissero specifiche inclusioni nei neuroni del cervello di animali uccisi dalla rabbia (corpi di Negri). Sono noti diversi biovarianti correlati dell'agente patogeno: il virus "selvatico" dei cervi, delle volpi artiche e delle volpi nell'Artico, il virus dei pipistrelli in America, il virus del "cane pazzo" nell'Africa occidentale, ecc.

Coltivazione e riproduzione

Il virus della rabbia viene coltivato in una coltura cellulare di reni di criceti neonati, in cellule diploidi umane. L'attività citopatogena è instabile. Il virus può adattarsi agli embrioni di pollo e anatra infettando il sacco vitellino.

Patogenesi e immunità

Alla porta d'ingresso dell'infezione, il virus rimane per diversi giorni. La riproduzione primaria sembra avvenire nelle cellule muscolari nel sito del morso. Quindi le particelle virali raggiungono le estremità dei nervi periferici sensibili, si muovono lungo i loro cilindri assiali e gli spazi perineurali (fino a 3 mm all'ora), colpendo i neuroni del midollo spinale e del cervello. Le diverse velocità con cui il virus si muove lungo i tronchi nervosi possono spiegare la durata del periodo di incubazione dell'infezione. È minimo (fino a 10-14 giorni) quando l'agente patogeno penetra nella pelle della testa e del viso e più lungo (1,5 mesi o più) con morsi agli arti (mani, piedi). Nei neuroni si verifica una riproduzione intensiva del virus, che porta alla comparsa di corpi citoplasmatici di Babes-Negri contenenti nucleocapsidi virali. I neuroni del corno di ammonio, del midollo allungato e delle cellule di Purkinje del cervelletto sono particolarmente colpiti, mentre nell'organismo vengono sintetizzati anticorpi neutralizzanti il ​​virus che possono avere un effetto protettivo prima che l'agente patogeno penetri nelle cellule del sistema nervoso centrale.

Epidemiologia

Il serbatoio del virus in natura sono vari animali a sangue caldo. I pipistrelli possono sviluppare infezioni croniche asintomatiche. Cani, volpi, lupi, sciacalli, nonché gatti e linci sono i più sensibili all'agente eziologico della rabbia. Molto spesso, una persona viene infettata dalla rabbia nelle volpi e nei gatti, meno spesso - dai cani e altri animali in cui il virus è contenuto nelle ghiandole salivari ed escreto nell'ambiente esterno con la saliva. Il virus si trasmette tramite morsi e saliva sulla pelle e sulle mucose danneggiate. L'uomo è un vicolo cieco nella circolazione del virus; la trasmissione dell'agente patogeno da persona a persona è estremamente rara. Il virus della rabbia è sensibile al calore. A 56°C l'inattivazione avviene in 60 minuti, a 80-100°C - in 1 minuto. Viene rapidamente inattivato in soluzioni di alcali, iodio, detergenti e radiazioni UV. L'essiccazione lenta porta all'inattivazione dell'agente patogeno nel materiale in pochi giorni e, in condizioni di liofilizzazione, il virus dell'antigene persiste per anni nei tessuti interessati, utilizzando una reazione di immunofluorescenza. Nella saliva dei malati e nel cervello dei morti, la presenza del virus può essere determinata dall'infezione intracerebrale dei topi bianchi, che sviluppano la paralisi degli arti e presto muoiono.

Prevenzione

Attualmente vengono utilizzati vaccini vivi e inattivati.

Rabbia

Il virus della rabbia appartiene al genere Lyssavirus della famiglia Rhabdoviridae, ha una caratteristica forma sferica con un'estremità piatta e l'altra arrotondata. Esistono due versioni del virus: quella stradale (selvaggia), che circola in natura tra gli animali, e quella attenuata: Virus fixe, ottenuto da JI. Pasteur attraverso ripetuti passaggi attraverso il cervello dei conigli. La rabbia è più comune nei cani, nei lupi, nelle volpi, negli sciacalli, nei gatti, meno spesso nelle mucche, nelle puzzole, nei coyote e nei pipistrelli. L'infezione umana avviene attraverso i morsi di animali malati e anche quando sbavano graffi sulla pelle o sulle mucose. La malattia nell'uomo termina sempre con esito fatale, i principali metodi per diagnosticare la rabbia sono post mortem, sebbene siano stati sviluppati anche alcuni test intravitali.

Diagnostica di laboratorio

La diagnostica di laboratorio si basa sull'uso di metodi virusoscopici, biologici e sierologici. Il materiale per lo studio è il cervello di animali e persone morte, saliva, tessuto delle ghiandole salivari, che vengono inviati al laboratorio in un contenitore sterile con glicerina e rivestito di ghiaccio.

Metodo con anticorpi fluorescenti

Il metodo degli anticorpi fluorescenti è il metodo più rapido e accurato per la diagnosi di laboratorio della rabbia. Per rilevare l'antigene virale nelle impronte del cervello, nelle ghiandole salivari e nella cornea dell'occhio (test intravitale), vengono utilizzate reazioni di immunofluorescenza dirette e indirette. Gli strisci vengono fissati in acetone freddo per 8-10 ore a 4°C e trattati in una camera umida per 30 minuti con immunoglobulina antirabbica marcata FITC, lavati con tampone fosfato, essiccati ed esaminati al microscopio a fluorescenza. Gli antigeni del virus si osservano sotto forma di granuli verdi di varie forme e dimensioni.

Rilevamento dei corpi di Babes-Negri

Anche il rilevamento dei corpi di Babes-Negri negli strisci, nelle sezioni istologiche del cervello e nel tessuto delle ghiandole salivari è un metodo rapido per diagnosticare la rabbia. Dal cervello di una persona o animale deceduto, con forbici sterili, vengono tagliate fette spesse 3-4 mm nella direzione trasversale dal midollo allungato, dal corno di Amone e dal cervelletto. Il vetrino viene premuto contro la superficie tagliata per prendere l'impronta del tessuto. Nei preparati colorati secondo Muromtsev o Seller, i corpi hanno dimensioni diverse (4-10 mm), rotondi o ovali rosso porpora, e il citoplasma e i nuclei delle cellule nervose sono blu. Le sezioni istologiche vengono colorate secondo Romanovsky-Giemsa, Mann o Turevich. Una cella può contenere uno o più corpi. Sono circondati da un guscio ben definito e hanno una struttura interna sotto forma di granularità basofila, spesso situata vicino al nucleo.

Metodo di rilevamento delle inclusioni di Babes-Negri

Il metodo di rilevamento delle inclusioni di Babes-Negri è abbastanza specifico per la rabbia, sebbene sia meno sensibile del metodo con anticorpi fluorescenti. Nel tessuto cerebrale dei cani si trovano corpi nel 90-95% dei casi e nelle persone morte di rabbia nel 70%, pertanto l'assenza di corpi di Babes-Negri non esclude la diagnosi di rabbia. In tali casi, è necessario utilizzare altri metodi di ricerca.

Saggio biologico sui topi

Il metodo biologico viene utilizzato per isolare il virus della rabbia dai tessuti cerebrali, dalle ghiandole salivari dei cadaveri e dalla saliva di malati e animali (test a vita). I più adatti all'infezione sono i topi allattati. Per impostare un saggio biologico vengono utilizzati 15-20 animali. L'infezione viene effettuata in anestesia mediante iniezione intracerebrale di 0,03 ml di una sospensione del materiale in esame. È possibile sottoporre un campione biologico ai criceti siriani, infettandoli con il materiale per via intramuscolare: se nel materiale del test è presente il virus della rabbia, i topi sperimentano tremori muscolari e paralisi. Nella maggior parte dei casi, gli animali muoiono entro cinque giorni. La presenza del virus della rabbia nei topi infetti e morti deve essere confermata mediante un test di immunofluorescenza diretta o mediante la rilevazione di corpi di Babes-Negri. L'identificazione del virus della rabbia rilevato viene effettuata anche mediante un test di neutralizzazione su topi bianchi.

Studi sierologici

Vengono effettuati studi sierologici per determinare l'immunità post-vaccinazione. Gli anticorpi contro il virus della rabbia si trovano nelle reazioni di neutralizzazione, fissazione del complemento, immunofluorescenza. Le reazioni immunoassorbenti (saggi immunoenzimatici e radioimmuni) sono sensibili.

Rabbia(La rabbia) è una malattia infettiva pericolosa per gli animali e l'uomo. Questa malattia si verifica in tutti i paesi del mondo. È caratterizzato da un risultato letale al 100%.

Patogeno- Un virus contenente RNA appartenente alla famiglia dei Rhabdovirus. Questo virus ha un tropismo per il tessuto nervoso. I titoli più alti si trovano nel cervello di animali malati. Inoltre, i virus si trovano anche nel midollo spinale, nelle ghiandole salivari e lacrimali.
Distinguere:

1. Virus “selvaggio” che circola in condizioni naturali ed è caratterizzato da elevata patogenicità per l’uomo e gli animali.
2. E "fissato", ottenuto in laboratorio, non patogeno per gli animali e per l'uomo se somministrato per via extraneurale.

Il virus della rabbia non resiste alle alte temperature: a 60°C circa si inattiva dopo 10 minuti, a 100°C circa quasi istantaneamente. Ma in un cervello congelato, può rimanere vitale fino a diversi mesi. Inoltre persiste per diversi mesi nei tessuti in decomposizione. Resistente alle soluzioni di iodio. Ma viene rapidamente inattivato dai disinfettanti a base di formalina, cloramina e alcali.

dati epidemiologici.

Tutti gli animali a sangue caldo sono sensibili al virus della rabbia. I più sensibili sono i canidi selvatici (come: volpi, volpi artiche, lupi, cani procione, sciacalli), mustelidi, roditori gatti. Gli uccelli sono meno sensibili.

In natura, i serbatoi del virus della rabbia sono animali predatori e pipistrelli, in città - cani randagi.
La fonte dell'infezione sono animali malati in cui il virus viene escreto con la saliva. La presenza del virus nella saliva si nota già 8-10 giorni prima della comparsa dei segni della malattia. L'infezione avviene attraverso un morso, quando la saliva penetra nelle mucose o nelle aree danneggiate della pelle.

Patogenesi .

Dopo essere entrato nel corpo, il virus inizia a moltiplicarsi nel sito di introduzione. E dopo 24 ore inizia a penetrare nel tessuto nervoso. Nei nervi si sposta verso il midollo spinale e il cervello ad una velocità di 7 cm al giorno. Dopo aver raggiunto il cervello, il virus inizia a moltiplicarsi intensamente, quindi il virus entra in tutti gli organi lungo i nervi e, prima di tutto, nelle ghiandole salivari e negli occhi. Il periodo di incubazione (dal momento dell'infezione alla comparsa dei segni clinici) è in media di 14-60 giorni, a volte può raggiungere i 6-12 mesi.
Segni clinici.

Esistono 3 tipi di decorso della malattia.

1. Flusso classico a tre stadi o forma violenta. Inizialmente si verifica un cambiamento nel comportamento dell'animale (fase 1), diventa molto affettuoso o, al contrario, timido, poco socievole. Questa fase può durare da alcune ore a 4 giorni. Poi arriva la fase successiva: l'eccitazione (fase 2), che dura 1-4 giorni. Gli animali diventano aggressivi, inclini a movimenti erranti e ad attaccare animali e persone. Si sviluppano anoressia, ansia, salivazione. E 3-4 giorni prima della morte si sviluppa uno stadio paralitico o depressivo, caratterizzato da paralisi progressiva.
2. Forma paralitica o silente.È caratterizzato dallo sviluppo della paralisi senza una precedente fase di eccitazione. Con questa forma si notano salivazione, abbassamento della mascella inferiore, difficoltà di deglutizione, anoressia. Quindi si sviluppa la paralisi dei muscoli del tronco e degli arti. La morte dell'animale avviene in 3-4 giorni.
3. "Rabbia atipica". Questo è un decorso cronico subclinico (senza sviluppo di sintomi) della malattia, che può durare fino a 3 mesi.

Diagnosi.

La diagnosi preliminare viene fatta sulla base dell'anamnesi e dei sintomi clinici. Se si sospetta la rabbia, dopo la morte dell'animale, il cadavere dell'animale viene inviato al laboratorio. Se ciò non è possibile, la testa o il cervello. Quando si preleva il materiale è necessario osservare rigorose precauzioni!
La diagnosi di laboratorio della rabbia comprende diversi metodi di ricerca.

1. Rilevamento dei corpi di Babes-Negri. Per diagnosticare la rabbia in laboratorio, viene effettuato un esame istologico del cervello di un animale deceduto. Si nota la presenza di noduli della rabbia nelle strutture del fondo del quarto ventricolo del cervello e la presenza di corpi di Babes-Negri (inclusioni eosinofile citoplasmatiche costituite da particelle del virus della rabbia) nel cervello. Si possono trovare nell'ippocampo, nelle strutture corticali e staminali del cervello, nel cervelletto e nei gangli dorsali del midollo spinale e nell'epitelio della cornea dell'occhio. Tuttavia, se non vengono rilevati corpi di Babesh-Negri, non si può escludere la rabbia.
2. Rilevazione dell'antigene mediante anticorpi fluorescenti (MFA) o mediante analisi immunofluorescente (ELISA). Oltre a queste reazioni, è attualmente in fase di sviluppo un nuovo metodo diagnostico nella reazione a catena della polimerasi (PCR).
3. Un test biologico con infezione di topi neonati con un virus proveniente da una sospensione del cervello, ghiandole salivari.

Secondo la legislazione della Federazione Russa, in caso di morsi di persone da parte di cani o altri animali (ad eccezione di quelli ovviamente malati di rabbia), le vittime devono contattare immediatamente le istituzioni mediche. E gli animali che li hanno morsi devono essere portati all'istituto veterinario statale più vicino per un esame da parte di specialisti e una quarantena per 10 giorni.

Per prevenire la diffusione della rabbia è prevista la vaccinazione annuale obbligatoria di cani e gatti con vaccini antirabbici.

Attualmente, per l'importazione di animali in diversi paesi, è richiesto un documento che confermi la quantità di anticorpi validi contro il virus della rabbia. Per una protezione efficace contro la rabbia, il livello minimo di anticorpi neutralizzanti il ​​virus nel sangue dovrebbe essere di almeno 0,5 UI / ml. Questo tipo di studio non è diagnostico e mira solo a determinare l'intensità dell'immunità contro la rabbia.
A Mosca, puoi donare il sangue per determinare il titolo degli anticorpi contro il virus della rabbia presso il Centro di diagnostica molecolare, situato sull'autostrada Zvenigorodskoye, 5. CDM ha ricevuto l'accreditamento internazionale per questo test e rilascia certificati internazionali validi per tutta la vita dell'animale, soggetti ai termini di rivaccinazione.

La determinazione dei titoli anticorpali viene effettuata non prima di 30 giorni dopo la vaccinazione. Pertanto, se prevedi di viaggiare con i tuoi animali domestici nell'UE o in altri paesi, devi occuparti in anticipo della vaccinazione e della donazione di sangue per questo test (i risultati vengono rilasciati entro 7-14 giorni).

Medico di laboratorio veterinario
"BioVetLab" Lazareva N.V.

La rabbia (R) è una malattia acuta degli animali a sangue caldo caratterizzata da danni al sistema nervoso centrale. Gli animali domestici e selvatici di tutti i tipi, così come gli esseri umani, sono sensibili.

La malattia è registrata in varie regioni del globo. Non ci sono stati casi di diffusione della malattia in Australia, Gran Bretagna, Giappone. La malattia termina quasi sempre con la morte. Esistono infatti casi documentati di guarigione dalla rabbia nell'uomo e nel cane dopo un'infezione sperimentale.

Il virus della rabbia (virus della rabbia) appartiene alla famiglia Rhabdoviridae, genere Lyssavirus. È ormai accertato che la VB possiede 4 sierotipi, il che sembra dovuto alla differenza nella composizione delle proteine ​​di membrana. Tutte le varianti di VB sono immunobiologicamente correlate, ma differiscono nella virulenza. WB ha proprietà GA e GAD. Esiste una relazione lineare tra l’attività infettiva e quella GA. Gli animali immunizzati contro la rabbia producono anticorpi VNA, KSA, antiHA e litici (che distruggono le cellule infettate dal virus in presenza del complemento).

La diagnosi viene effettuata sulla base dei dati epidemiologici, dei sintomi della malattia, dei cambiamenti patologici (sono di minore importanza) e, principalmente, dei risultati degli esami di laboratorio.

Diagnostica di laboratorio consiste nello studio del cervello di animali per la rilevazione dell'AG virale in IF, RDP, nella rilevazione dei corpi di Babes-Negri e in un saggio biologico su topi bianchi.

Nella Federazione Russa, la produzione di kit per la diagnosi di B in IF e RDP è attualmente organizzata presso VNITIBP e KazNIVI.

Isolamento del virus. Cadaveri freschi di piccoli animali vengono inviati al laboratorio per la ricerca, da animali di grandi dimensioni: la testa o il cervello. In alcuni casi è consentito l'inscatolamento del cervello in glicerina al 50%. Il cadavere o la testa devono essere accuratamente imballati in un sacchetto di plastica, il cervello in un barattolo con un tappo di vetro o gomma smerigliato, pieno di paraffina. Il materiale è imballato in un contenitore a prova di umidità. Solo i cervelli non conservati sono adatti per studi virologici. Va ricordato che l'autopsia, l'estrazione del cervello e altre operazioni con materiale patologico devono essere eseguite in condizioni di sterilità e rigorosa osservanza delle misure di prevenzione personale: fissare saldamente la testa dell'animale, proteggere le mani con 2 paia di guanti ( chirurgico e anatomico), indossare occhiali per proteggere gli occhi e una benda di garza a 6 strati sul naso e sulla bocca.

Ricerca di laboratorio sui materiali la rabbia viene eseguita fuori turno; i risultati vengono immediatamente comunicati al medico aziendale e al primario del distretto (città).

Indicazione e identificazione del virus. L'ordine della ricerca: da ciascuna parte del cervello dei lati sinistro e destro (corno di Ammon, cervelletto, corteccia cerebrale e oblongata), vengono preparate 4 impronte per l'IF e il rilevamento dei corpi di Babesh-Negri; con il tessuto cerebrale mettere RDP; con risultati negativi, viene effettuato un test biologico.

Rilevazione di corpi inclusi specifici. Le macchie di impronte sono colorate secondo Sellers, Muromtsev o altri metodi. Dopo la colorazione i preparati vengono osservati al microscopio ottico con sistema ad immersione. La presenza di specifici corpi Babesh-Negri è considerata un risultato positivo (se colorato secondo Sellers - formazioni granulari ovali o oblunghe chiaramente definite di colore rosa-rosso nel protoplasma, quando colorato secondo Muromtsev - viola chiaro con inclusioni blu scuro di Babesh -Corpi Negri, più spesso si trovano all'esterno delle cellule nervose.

La caratteristica più caratteristica dei corpi di Babesh - Negri è la loro struttura interna, che permette loro di essere differenziati con assoluta precisione. All'interno sono visibili piccoli grani: grani basofili di colore blu scuro, anche nero, di dimensioni 0,2-0,5 micron.

Il valore diagnostico dell'individuazione dei corpi inclusi come prova dell'infezione da WB è generalmente riconosciuto. Tuttavia, negli animali sani, soprattutto nei gatti e nei topi bianchi, sono presenti formazioni la cui presenza può causare difficoltà diagnostiche. In alcuni casi, nel cervello del gatto, è possibile differenziare con sicurezza tali inclusioni dai corpi di Babes-Negri, e qui si consiglia di utilizzare metodi di identificazione, in particolare IF. Allo stesso modo, nei cani morti a causa di avvelenamento da veleno di serpente o scossa elettrica, si possono trovare corpi inclusi che ricordano i corpi di Babes-Negri. I corpi di Babesh-Negri vengono rilevati solo nel 65-85% dei casi di rabbia, quindi la loro assenza non è una risposta negativa e il materiale viene esaminato in altri test (IF, RDP, test biologico).

SE. Uno dei test principali nella diagnosi di B. Con prestazioni altamente qualificate, si ottiene una coincidenza del 99-100% con il metodo di dosaggio biologico. Di solito nella pratica diagnostica viene utilizzato il metodo diretto dell'IF, che viene effettuato utilizzando Ig fluorescenti antirabbica. La fissazione dei preparati in acetone refrigerato (8-10°C) viene effettuata per almeno 4 ore. Come controllo negativo vengono utilizzate strisci-impronte del cervello di topi bianchi sani. I risultati vengono presi in considerazione visivamente in un microscopio a fluorescenza sulla base della valutazione dell'intensità del bagliore del complesso AG-AT. AH VB viene rilevato come granuli giallo-verdi o verdi brillanti di varie forme e dimensioni nelle cellule (più spesso all'esterno delle cellule). La diagnosi è considerata confermata se in diversi campi visivi si trova un numero sufficiente (almeno 10) di granuli tipici con una luce verde brillante o molti piccoli punti, mentre nel controllo non dovrebbe esserci tale luce.

Per dimostrare la specificità della fluorescenza del complesso AG-AT viene utilizzato il metodo di soppressione IF, che consiste nella capacità degli AG della rabbia associati ad AT non fluorescenti di non ricombinarsi con AT specifici fluorescenti. Per fare ciò, preparazioni fisse preparate dal cervello in studio vengono rivestite con Ig antirabbica non fluorescente al 5%, incubate per 30 minuti a 37°C in una camera umida, lavate con soluzione salina e quindi colorate con antirabbico fluorescente Ig con il metodo diretto convenzionale. Non dovrebbe esserci fluorescenza nei preparati trattati in questo modo.

Il metodo IF consente di rilevare il WB nelle cellule della cornea degli occhi e di effettuare una diagnosi preliminare in vivo: durante la malattia degli animali, nonché 1-2 giorni o più prima della sua manifestazione clinica. Il metodo può essere utilizzato per studiare animali sospettati di malattia B, nonché cani e gatti clinicamente sani che hanno morso persone e animali. Per fare questo, vengono preparate le impronte della cornea, osservando tutte le regole di sicurezza personale, si apre la fessura palpebrale dell'animale con il pollice e l'indice e si preme la superficie del vetrino sul bulbo oculare leggermente sporgente, ritirandosi di 0,5 cm da fine. È necessario assicurarsi che l'animale non sbatta le palpebre con la terza palpebra, poiché le cellule epiteliali vengono rimosse dal vetro e si ottiene uno striscio di scarsa qualità. Da ciascun occhio vengono effettuate almeno 2 preparazioni contenenti 2 impronte. Per il controllo, le impronte corneali di animali sani vengono preparate in modo simile. Possono essere cucinati in fattoria. Le stampe vengono asciugate all'aria, fissate in acetone per 4 ore a 4°C, confezionate e inviate al laboratorio. Preparazioni di colorazione, come in IF, secondo il metodo generalmente accettato.

Nei preparati ottenuti da animali malati o alla fine del periodo di incubazione della malattia, nel citoplasma di molte cellule epiteliali si osservano granuli luminosi di varie dimensioni e forme diverse, da punti simili a polvere a 2 micron o più. Per ottenere risultati affidabili, in ciascuna preparazione vengono esaminate 50-100 cellule e in totale almeno 200-400 cellule dell'animale. I risultati della microscopia sono considerati positivi se nelle impronte della cornea dell'animale si trovano l'11% o più di cellule con caratteristici focolai di luminescenza. Va tenuto presente che nei preparati provenienti da animali sani (controllo), a causa dell'autofluorescenza, possono essere presenti singole cellule con focolai simili per forma e luminescenza.

È importante notare che l'IF consente di accelerare la risposta alla diagnosi finale mediante saggio biologico, poiché la diagnosi di B può essere stabilita solo dal 4° all'8° giorno dopo l'infezione dei topi con il materiale del test e il periodo di incubazione del la malattia nei topi può raggiungere i 20 giorni. L'IF può rilevare il WB nei tessuti della ghiandola salivare sottomandibolare. Gli strisci vengono preparati dalle ghiandole salivari sottomandibolari, prelevando materiale da almeno 6 diverse parti della ghiandola, poiché la distribuzione del virus al suo interno non è uniforme. Spesso, per ottenere un'impronta, è necessario esercitare una forte pressione, perché a causa dell'abbondanza di mucina, sul vetro rimane poco materiale.

È stata dimostrata la possibilità di identificare il VB nella pelle con il metodo IF: a questo scopo vengono prelevati campioni del cuoio capelluto, nonché follicoli piliferi sensoriali e tattili del muso o papille sensoriali laterali (sulla guancia del cane). I campioni vengono conservati a -20 o -70°C. Da essi vengono effettuate criosezioni, che vengono trattate con globulina fluorescente. I risultati dell'analisi IF ottenuti dall'identificazione del VB nella pelle sono in elevata correlazione con i dati ottenuti dallo studio del cervello dello stesso animale. È stata dimostrata una stretta correlazione tra il rilevamento del virus AH nei campioni cerebrali e nei tessuti delle labbra mediante il metodo IF.

PSR. Viene utilizzato per rilevare AH VB nel cervello non conservato di animali morti di rabbia stradale o di topi utilizzati in un test biologico. L'RDP viene posizionato mediante micrometodo su vetrini utilizzando un gel di agar all'1-1,5% secondo il metodo generalmente accettato. La percentuale più alta di risultati positivi si rileva utilizzando il seguente stencil: A - corno di ammonio (lato destro); B - corteccia cerebrale (lato destro); C - cervelletto (lato destro);
D - midollo allungato (lato destro); + (più) - controllo positivo; - (meno) - controllo negativo; 1, 2, 3, 4 - pozzetti con diluizione dell'immunoglobulina specifica 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, rispettivamente

Utilizzando una pinzetta, da ciascuna parte del cervello viene preparata una massa pastosa omogenea, che viene posizionata nei pozzetti corrispondenti. Dai topi, viene esaminato l'intero cervello. Dalle regioni cerebrali del lato sinistro, l'AG viene preparato in modo simile (per ogni esame sono necessari un totale di 4 vetrini con gel di agar). La reazione viene presa in considerazione dopo 6, 24, 48 ore.Se tra i pozzetti contenenti AG e immunoglobulina sono presenti 1 o 2-3 linee di precipitazione, la reazione è considerata positiva.

L'RDP è semplice da eseguire e specifico, ma la percentuale di rilevamento dell'AG virale nel materiale del test è 45-70. Nello studio del cervello dei topi ottenuto con un test biologico positivo, l'RDP rivela fino al 100% dei casi. L'assenza di corpi di Babesh-Negri, fluorescenza specifica e RDP negativo nel materiale in esame non danno motivo di escludere la presenza del virus. In questo caso, la diagnosi finale si basa sui risultati di un test biologico su topi bianchi, seguito dall’identificazione del virus.

Saggio biologico.È generalmente accettato che il test biologico sia un metodo più efficace rispetto alla rilevazione dei corpi di Babesh - Negri, IF, ecc. Tuttavia, in alcuni casi si è rivelato negativo, nonostante la conferma della diagnosi di B mediante la rilevazione di corpi inclusi e SE. La percentuale di risultati negativi del test biologico variava da 1,3 a 12.

Le informazioni sulla diversa efficienza di un test biologico possono essere spiegate da una serie di fattori: la scelta degli animali da esperimento, il loro numero nell'esperimento, il metodo di infezione, il metodo e il periodo di conservazione del materiale prima di entrare in laboratorio. Anche il fenomeno dell'interferenza delle particelle infettive con particelle inattive può svolgere un ruolo se per l'inoculazione viene utilizzato materiale non sufficientemente diluito.

Nel cervello e nelle ghiandole salivari delle volpi e delle puzzole morte di rabbia, è stata trovata una sostanza che inibisce l'infettività del virus, il che rende impossibile diagnosticare la malattia in questi animali mediante infezione intracerebrale dei topi. La presenza di una sostanza inibitrice nel materiale in esame non impedisce il rilevamento dell'AG virale da parte dell'IF; per le puzzole e le volpi, questo è il metodo diagnostico più sensibile.

Tra gli animali di tutte le specie (conigli, porcellini d'India, topi bianchi adulti e criceti) utilizzati per il test biologico, molti preferiscono i topi allattati perché sono più sensibili ai diversi ceppi di VB e meno pericolosi con cui lavorare. I criceti siriani non sono inferiori ai topi in termini di sensibilità, ma sono meno accessibili.

RSK. Il rilevamento dell'AH specifico nell'RSK nella diagnosi della rabbia viene utilizzato meno frequentemente rispetto ad altri metodi. L'AG viene preparato dal cervello inviato per la ricerca. A tale scopo, il tessuto cerebrale (particolarmente ricco di AG, leganti del complemento, pezzi del talamo e del tronco encefalico) viene triturato in tampone veronal in un rapporto di 1:10 e lasciato a temperatura ambiente per 1 ora, dopodiché la sospensione viene inattivato a 56°C per 5 ore.Tale trattamento uccide il virus e rimuove gli anticomplementari del tessuto cerebrale senza danneggiare l'antigene specifico. La sospensione viene centrifugata per 15 minuti a 3500 min-1 dal surnatante, che è un materiale per testare la presenza di AG, vengono preparate diluizioni crescenti di 2 volte da 1:2 a 1:64 e utilizzate per la ricerca nel CSC .

ELISA. Nell'ELISA, la colorazione specifica di AG nelle cellule cerebrali di animali morti di rabbia viene rilevata sia in campioni appena prelevati, conservati in glicerolo, sia in campioni conservati senza glicerolo a 20 ° C per 8-18 ore.Questo test è adatto per la diagnosi di routine della rabbia negli animali, per rilevare l'AG WB nelle sezioni di paraffina dei tessuti durante la fissazione dei preparati con una soluzione di formalina al 10% con pH 5,3 e il successivo trattamento dei preparati inclusi in paraffina con pepsina.

A differenza del ROP nei topi e nelle colture cellulari, l'ELISA può rilevare l'AT negli animali entro poche ore, l'ELISA è il metodo di laboratorio più promettente per rilevare l'AT e indicare il virus stesso. Un metodo rapido per diagnosticare la rabbia è la tecnica di cattura e il metodo IF per rilevare AH BB. È stato dimostrato che il metodo per rilevare AH VB in sezioni paraffinate mediante il metodo perossidasi-antiperossidasi è significativamente superiore al metodo ELISA. Nel 1987 è stato creato un kit per l'immunodiagnosi rapida enzimatica della rabbia (RREID), adatto per studi epidemiologici e di laboratorio.

Identificazione delle varianti tramite mAT. Con l'aiuto di mAbs per le glicoproteine ​​VB, sono state selezionate varianti AG, tra le quali sono state identificate varianti fenotipicamente termolabili (avirulente). Utilizzando 2 gruppi di mAb, è stato dimostrato che i ceppi di diluizione differiscono dai pz. Ceppi Fixe (Pasteur), CVS, Flury HEP, ERA e "duck" per i determinanti AH. Lo studio di 7 ceppi isolati da pazienti con persone B che utilizzavano mAb ha permesso di identificare alcune differenze tra questi e il ceppo vaccinale in relazione ai determinanti AH.

È generalmente accettato che le differenze AT tra ceppi wild-type possano essere rilevate utilizzando mAb contro il nucleocapside AT N, che reagisce con inclusioni citoplasmatiche di cellule infettate dal virus; anti-glicoproteine ​​(G AG), che reagiscono con le membrane delle cellule infette, lisano queste cellule in presenza di complemento e neutralizzano il virus. In relazione alla possibile variabilità dell'AH della glicoproteina di superficie WB proveniente da diverse aree geografiche, come AG protettivo è stata utilizzata una ribonucleoproteina caratterizzata dal conservatorismo della struttura AG. Pertanto, non solo la proteina G, ma anche l'RNP VB hanno attività protettiva.

Sierodiagnosi e diagnosi retrospettiva. Questi metodi non sono tipici della rabbia, poiché vengono utilizzati solo allo scopo di testare l'immunità post-vaccinazione. Per la rilevazione e la titolazione degli anticorpi post-vaccinazione viene utilizzato il pH, che viene impostato mediante il metodo generalmente accettato. Un WB fisso viene utilizzato come AG. L'RN sulle cellule BHK-21 era più sensibile dell'IF indiretto nel rilevare l'AT nei sieri delle volpi vaccinate. Inoltre, sono stati proposti RTGA ed ELISA.

RTGA. Non ha ancora trovato ampia applicazione nella pratica diagnostica a causa della presenza di inibitori non specifici nei sieri del sangue, ai quali WB è altamente sensibile e, soprattutto, GA AG, che non è stato sottoposto a sufficiente purificazione, aveva una bassa sensibilità. Per la preparazione di HA AG WB si propone di utilizzare pz. Mosca coltivata in coltura cellulare VNK-21 dopo il trattamento con saponina seguito da purificazione e concentrazione. L'HA viene separato dagli altri componenti del virione mediante ultracentrifugazione. La preparazione risultante aveva un grado di purificazione del 99,92%, aveva un'elevata attività GA (1:128), ben conservata per 1 mese a pH 5-9.

Prima di allestire RTGA, dovrebbe essere effettuata una moderata tripsinizzazione di 2 volte degli eritrociti d'oca per la loro sensibilizzazione. Quando si utilizza una sospensione allo 0,25% di eritrociti trypsinizzati (preferibilmente 10 7 cellule per 1 ml), la sensibilità dell'RTGA aumenta di 4 volte. Per diluire AG e sieri si utilizza una soluzione di sale borato (pH 9) con l'aggiunta dello 0,4% di albumina sierica bovina. Una sospensione di eritrociti viene preparata in una soluzione salina a pH acido, in modo che dopo la combinazione con una miscela di virus e siero, il cui pH è 9, il pH finale sia fissato entro 6,2. Dopo aver aggiunto la sospensione eritrocitaria nei pozzetti, il pannello viene agitato, sigillato con una pellicola trasparente e posto in ghiaccio. I risultati di RTGA vengono presi in considerazione dopo 40-50 minuti e con eritrociti di polli di 2 giorni o scimmie rhesus - dopo 1-1,5 ore.

È stato sviluppato un test radioimmunologico basato sulla capacità dell'AT di legarsi al 125 1-AG WB marcato. Le IgG marcate isolate dal siero iperimmune antirabbico possono essere utilizzate per rilevare l'AG WB con RIA in fase solida. I migliori risultati sono stati ottenuti utilizzando una soluzione di sale fosfato (pH 6,0) con forza ionica di 0,01 M e marcata IgG con un'attività di 200-250 mila impulsi / min.

La RIA competitiva in fase solida è applicabile per il rilevamento di anticorpi antirabbica nei surnatanti di siero e ibridomi.

Diagnosi differenziale. È necessario escludere la malattia di Aujeszky, in cui gli animali malati non sono aggressivi, non c'è perversione dell'appetito. Nei cani è esclusa la forma nervosa della peste. La rabbia è sospettata nell'encefalomielite infettiva equina. Un complesso di test di laboratorio consente di effettuare una diagnosi accurata della rabbia. È stato proposto un nuovo metodo per differenziare diversi ceppi di VB basato sulla scissione della restrittasi dei prodotti di amplificazione nella PCR del segmento del gene N.

La rabbia è una malattia infettiva acuta che si manifesta con gravi danni al sistema nervoso, solitamente con esito fatale.

Gli esseri umani e tutti gli animali a sangue caldo sono sensibili. La rabbia è registrata in diversi paesi del mondo.

Caratteristica dell'eccitatore. Il virus appartiene alla famiglia Rhabdoviridae, genere Lyssavirus. contenente RNA. Il genoma è rappresentato da una singola molecola lineare unidirezionale meno RNA. I virioni del virus sono costituiti da un nucleocapside a simmetria elicoidale e da un involucro lipoproteico con sporgenze glicoproteiche a forma di clava. Il virione è a forma di proiettile, la sua dimensione media è di 180-175 nm.

Resistenza alle influenze fisiche e chimiche. Le basse temperature preservano il virus. Per questo le alte temperature (80-100°C) sono dannose; il virus può persistere nel materiale in decomposizione fino a due settimane. I disinfettanti (soluzioni di formaldeide, alcali caustici, candeggina) in concentrazioni normali sono dannosi per il virus.

Struttura antigenica. I virioni del virus della rabbia contengono antigeni glicoproteici (esterni) e nucleocapsidici (interni). L'antigene glicoproteico induce la formazione di anticorpi neutralizzanti il ​​virus e antiemoagglutinanti e garantisce lo sviluppo dell'immunità negli animali, e l'antigene nucleocapside - anticorpi che fissano e precipitano il complemento.

Il virus della rabbia ha 4 sierotipi (prototipi): virus della rabbia, Lagos, Mokola, Duvenheydzh. I ceppi epizootici del virus della rabbia sono immunobiologicamente correlati, ma differiscono nella virulenza. Tutti i ceppi virali isolati sono divisi in 5 gruppi in base alla virulenza. I ceppi del primo gruppo sono caratterizzati da un'elevata virulenza, mentre il quinto gruppo da una bassa virulenza.

Lo spettro di patogenicità del virus è strettamente correlato alla sua ecologia, che ha le sue peculiarità. Pertanto, è necessario distinguere tra due manifestazioni epizootiche principali e indipendenti dell'infezione da lyssavirus:

1) epizoozie della rabbia sostenute da animali terrestri (volpi, lupi, cani procione, sciacalli, manguste, puzzole, procioni striati, ecc.);

2) epizoozie di origine chirotterica sostenute da vampiri, pipistrelli insettivori e carnivori.

A partire dagli anni ’60, la rabbia degli animali selvatici è diventata predominante. Le volpi e altri animali selvatici si sono rivelati il ​​principale serbatoio e fonte di infezione. La malattia in essi può procedere in modo latente, garantendo la persistenza del virus in condizioni naturali. La rabbia nei cani durante le epizoozie urbane, di regola, finisce con la loro morte.

Attività antigenica. Gli animali immunizzati contro la rabbia producono anticorpi neutralizzanti, fissatori del complemento, precipitanti, antiemoagglutinanti e litici (che distruggono le cellule infettate dal virus in presenza del complemento).

Il virus ha proprietà emoagglutinanti contro gli eritrociti di oche, polli, porcellini d'India, pecore, esseri umani (gruppo 0). Solitamente la reazione di emoagglutinazione viene eseguita con eritrociti d'oca a 0-4 °C, pH 6,2-6,4. Esiste una relazione lineare tra attività infettiva ed emoagglutinante.

Coltivazione di virus. In condizioni di laboratorio, il virus può essere coltivato su animali da laboratorio (topi, conigli, criceti, porcellini d'India, ecc.) utilizzando il metodo di combattimento intracerebrale. Il virus si riproduce in colture cellulari primarie e trapiantate (reni di criceto siriano, embrioni di pecora e vitello, BHK-21, cellule di neuroma del nodo di Gasser di ratto, ecc.). Nei primi passaggi il virus si moltiplica lentamente, senza provocare CPP. Anche gli embrioni di pollo sono sensibili al virus della rabbia dopo l'adattamento preliminare.

infezione sperimentale. Facilmente riproducibile su tutti i tipi di animali a sangue caldo.

Segni clinici. La durata del periodo di incubazione dipende dalla sede del morso, dalla natura della ferita, dalla quantità e dalla virulenza del virus entrato nella ferita, dal tipo, dall'età e dalla resistenza dell'animale morso. Il periodo di incubazione dura da una settimana a un anno o anche di più. La manifestazione clinica della malattia è sostanzialmente la stessa in tutti gli animali, ma è più tipica nei cani, nei quali si può osservare un decorso della malattia sia violento che silenzioso (paralitico). Nei bovini la rabbia può manifestarsi in modo atipico (perdita dell'appetito, atonia del rumine, paralisi della faringe, salivazione). Potrebbe non esserci alcuno stadio di eccitazione.

Cambiamenti patologici. È vietato sezionare sul campo animali sospettati di avere la rabbia.

Nei mangiatori di carne (soprattutto cani) si possono trovare corpi estranei nello stomaco.

Localizzazione dei virus. Il virus della rabbia ha una neuroprobasia pronunciata. Penetrando centripetamente dalla periferia (il sito del morso) lungo i tronchi nervosi nel sistema nervoso centrale, nel corpo si diffonde centrifugamente lungo i nervi periferici ed entra in vari organi, comprese le ghiandole salivari.

Nel corpo, il virus è localizzato principalmente nel sistema nervoso centrale, così come nelle ghiandole salivari e nella saliva. È stata dimostrata la presenza del virus in alcuni organi interni. Escreto dal corpo con la saliva, attraverso i polmoni, l'intestino e l'urina.

Fonte di infezione- animali malati. Trasmettono il virus quando mordono. L'infezione è possibile attraverso la salivazione della pelle danneggiata. I carnivori possono infettarsi mangiando il cervello e il midollo spinale di animali morti di rabbia. È stata dimostrata la possibilità di infezione da rabbia per via aerogena (in luoghi dove sono presenti pipistrelli). Fino agli anni '60, la principale fonte di rabbia erano cani e gatti, successivamente volpi, lupi, corsacchi e altri animali selvatici.

Diagnostica. La diagnosi di rabbia viene effettuata sulla base di dati epidemiologici, clinici e di laboratorio, che sono di importanza decisiva.

Quando si lavora con animali malati e materiale infetto, è necessario osservare rigorosamente le misure di sicurezza personale: indossare guanti di gomma, camici con maniche lunghe, grembiule di gomma o polietilene, stivali di gomma, occhiali protettivi e una maschera facciale.

Diagnostica di laboratorio. Per la ricerca sulla rabbia, vengono inviati al laboratorio cadaveri freschi di piccoli animali nel loro insieme e di animali di taglia grande e media: la testa con le prime due vertebre cervicali. I cadaveri di piccoli animali vengono trattati con insetticidi prima di essere inviati alla ricerca.

Il materiale patologico è confezionato in sacchetti di plastica, posti in scatole ermeticamente chiuse con un tampone assorbente imbevuto di disinfettante. Tramite corriere viene inviato il materiale e una lettera di accompagnamento, nella quale è indicato il mittente e il suo indirizzo, la tipologia dell'animale, i dati anamnestici e il motivo per cui si sospetta la rabbia dell'animale, la data e la firma del medico.

La diagnostica di laboratorio comprende: rilevamento dell'antigene virale in RIF e RDP, corpi di Babesh-Negri e test biologico su topi bianchi.

Barriera corallina. Per questa reazione, la bioindustria produce una γ-globulina fluorescente antirabbica.

Su vetrini sgrassati vengono preparate impronte o strisci sottili provenienti da varie parti del cervello sui lati sinistro e destro (corno di Ammon, corteccia cerebrale, cervelletto e midollo allungato). Preparare almeno due preparati di ciascuna parte del cervello. Puoi anche esaminare il midollo spinale, le ghiandole salivari sottomandibolari. Per il controllo, i preparati vengono preparati dal cervello di un animale sano (di solito un topo bianco).

I preparati vengono essiccati all'aria, fissati in acetone refrigerato (meno 15-20°C) per 4-12 ore, essiccati all'aria, viene applicata la specifica γ-globulina fluorescente e posti in una camera umida a 37°C per 25-25 ore. 30 minuti. Quindi lavato accuratamente con soluzione salina o tampone fosfato a pH 7,4, risciacquato con acqua distillata, asciugato all'aria, applicato con un olio da immersione non fluorescente e osservato al microscopio a fluorescenza. Nelle preparazioni contenenti l'antigene del virus della rabbia, nei neuroni si osservano granuli fluorescenti giallo-verdi di varie dimensioni e forme, ma più spesso all'esterno delle cellule. Nel controllo non dovrebbe esserci tale bagliore, il tessuto nervoso di solito brilla di un colore grigiastro o verdastro opaco. L'intensità del bagliore viene valutata in croci. Un risultato negativo è considerato in assenza di fluorescenza specifica.

Il materiale proveniente da animali vaccinati contro la rabbia non può essere esaminato nel RIF 3 mesi dopo la vaccinazione, poiché potrebbe essere presente fluorescenza dell'antigene del virus vaccinale.

Nel RIF non sono soggetti ad esame i tessuti conservati con glicerina, formalina, alcool, ecc., nonché il materiale che presenti segni di decadimento anche lieve.

RDP in gel di agar. Il metodo si basa sulla capacità degli anticorpi e degli antigeni di diffondere in un gel di agar e, quando si incontrano, di formare linee di precipitazione visivamente visibili (complesso antigene + anticorpo). Viene utilizzato per rilevare l'antigene nel cervello di animali morti a causa del virus della rabbia di strada o durante un'infezione sperimentale (test biologico).

La reazione viene posta su vetrini su cui vengono versati 2,5-3 ml di soluzione fusa di agar all'1,5%.

Gel di agar: agar Difco - 15 g, cloruro di sodio - 8,5 g, soluzione all'1% di arancio metilico in etanolo al 50% - 10 ml, mertiolato - 0,01 g, acqua distillata - 1000 ml.

Dopo la solidificazione nell'agar, vengono praticati dei fori secondo uno stampino del diametro di 4-5 mm, posto sotto un vetrino con agar. Le colonne di agar vengono estratte con la penna di uno studente. I pozzetti nell'agar vengono riempiti con i componenti secondo lo schema.

Dagli animali di grandi dimensioni, vengono esaminate tutte le parti del cervello (lati sinistro e destro), da animali di taglia media (ratti, criceti, ecc.) - tre parti qualsiasi del cervello, nei topi - l'intero cervello. Utilizzando una pinzetta, dal cervello viene preparata una massa pastosa, che viene posizionata negli appositi pozzetti.

I controlli con antigeni positivi e negativi vengono posizionati su un vetro separato secondo lo stesso stencil.

Dopo aver riempito i pozzetti con i componenti, i preparati vengono posti in una camera umida e posti in termostato a 37°C per 6 ore, quindi lasciati a temperatura ambiente per 18 ore.I risultati vengono registrati per 48 ore.

La reazione è considerata positiva quando tra i pozzetti contenenti la sospensione cerebrale e la γ-globulina antirabbica compaiono una o due o tre linee di precipitazione di qualsiasi intensità.

La contaminazione batterica e il decadimento del cervello non ne impediscono l'utilizzo per l'RDP. Il materiale conservato con glicerina, formalina e altri mezzi non è adatto per RDP.

Rilevamento dei corpi di Babes-Negri. Strisci o impronte sottili vengono realizzati su vetrini di vetro da tutte le parti del cervello (come per RIF), almeno due preparati da ciascuna parte del cervello e colorati secondo uno dei metodi (secondo Sellers, Muromtsev, Mann, Lenz , eccetera.).

Un esempio di colorazione di Sellers: si applica un colorante su un preparato fresco, non essiccato (una parte di una soluzione all'1% di fucsina basica mescolata con due parti di blu di metile all'1%), coprendo con esso l'intero preparato, incubato per 10- 30 secondi e lavato via con tampone fosfato (pH 7,0-7,5), asciugato in posizione verticale a temperatura ambiente (in un luogo buio) e osservato al microscopio a immersione in olio.

Un risultato positivo è la presenza di corpi di Babes-Negri - formazioni granulari ovali o oblunghe chiaramente definite di colore rosa-rosso, situate nel citoplasma delle cellule o all'esterno di esse.

Questo metodo ha valore diagnostico solo quando vengono rilevate inclusioni specifiche tipiche.

saggio biologico. È più efficiente di tutti i metodi sopra indicati. Viene messo quando si ottengono risultati negativi con i metodi precedenti e in casi dubbi.

Vengono selezionati topi bianchi del peso di 16-20 g per il test biologico. Il tessuto nervoso di tutte le parti del cervello viene macinato in un mortaio con sabbia sterile, viene aggiunta soluzione salina per ottenere una sospensione al 10%, lasciata riposare per 30-40 minuti e il surnatante viene usato per infettare i topi. Se si sospetta una contaminazione batterica, si aggiungono 500 unità di penicillina e streptomicina per 1 ml di sospensione e si incubano per 30-40 minuti a temperatura ambiente.

Per un test biologico, vengono infettati 10-12 topi: metà intracerebrale, 0,03 ml, metà sottocutanea nel naso o nel labbro superiore, 0,1-0,2 ml.

I topi infetti vengono posti in barattoli di vetro (preferibilmente acquari) e osservati per 30 giorni, registrando quotidianamente. La morte dei topi entro 48 ore è considerata non specifica e non viene presa in considerazione nella valutazione dei risultati. In presenza del virus della rabbia nel materiale patologico, dal 7 al 10 giorno dopo l'infezione, nei topi si osservano i seguenti sintomi: pelo arruffato, una sorta di gobba della schiena, compromissione della coordinazione dei movimenti, paralisi della parte posteriore, poi arti anteriori e morte. Nei topi morti, il cervello viene esaminato nel RIF, per rilevare i corpi di Babes-Negri e viene posizionato l'RDP.

Un test biologico per la rabbia è considerato positivo se si trovano corpi di Babesh-Negri nei preparati del cervello di topi infetti o se l'antigene viene rilevato con metodi RIF o RDP. Diagnosi negativa: nessuna morte dei topi entro 30 giorni.

Si raccomanda per la diagnosi precoce mediante un metodo di analisi biologica (questo è particolarmente importante quando l'animale in studio ha morso una persona) di utilizzare non 10-12, ma 20-30 topi per l'infezione e dal terzo giorno dopo l'infezione, macellare 1 -2 topi al giorno per esaminare il loro cervello in REEF. Ciò consente (nei casi positivi) di ridurre di diversi giorni il periodo di studio.

Nella pratica di laboratorio viene talvolta utilizzato il cosiddetto metodo di saggio biologico specifico. La sua essenza è che i topi si ammalano se infettati dal tessuto cerebrale di animali affetti da rabbia e non si ammalano se questo tessuto viene pretrattato (10 minuti a 37 ° C) con siero antirabbico.

Alcuni ricercatori raccomandano la diagnosi in vivo della rabbia studio di immunofluorescenza impronte corneali di animali sospettati di avere la rabbia, ma l'efficacia di questo metodo è bassa.

Di solito, un laboratorio conduce uno studio nella seguente sequenza: vengono eseguiti strisci cerebrali per il RIF e il rilevamento dei corpi di Babes-Negri, viene posizionato l'RDP e, quando si ottengono risultati negativi, viene eseguito un test biologico.

Con prestazioni altamente qualificate del RIF, si ottiene una coincidenza del 99-100% con il saggio biologico. I corpi di Babes-Negri vengono rilevati solo nel 65-85% dei casi di rabbia, in RDP - dal 45 al 70%.

Profilassi specifica. Attualmente, per prevenire la rabbia vengono utilizzati vaccini inattivati ​​e vivi. Convenzionalmente i vaccini possono essere suddivisi in:

per i vaccini di prima generazione preparati dal cervello di animali infettati da un virus fisso della rabbia;

vaccini di seconda generazione, preparati da ceppi di virus della rabbia adattati alla coltura cellulare;

vaccini di terza generazione, ottenuti utilizzando metodi di ingegneria genetica.

All'estero è stato sviluppato un vaccino ricombinante, utilizzato con successo in alcuni paesi, che contiene un virus del vaiolo ricombinante che trasporta il gene per la glicoproteina dell'involucro principale del virus della rabbia.

Attualmente è iniziato lo sviluppo ed è stata dimostrata la possibilità di utilizzare vaccini a DNA per la prevenzione della rabbia. In Russia e nella CSI è ampiamente utilizzato un vaccino inattivato del ceppo Schelkovo-51, preparato utilizzando una coltura cellulare VNK-21.

I progressi scientifici nella vaccinazione orale delle volpi in condizioni naturali rappresentano una pietra miliare significativa nella lotta contro i focolai naturali di infezione.

Se trovi un errore, evidenzia una parte di testo e fai clic Ctrl+Invio.