La rabbia è un virus trasmesso all’uomo attraverso un animale infetto attraverso un morso o una saliva contaminata. Questa malattia non può essere curata perché finora la medicina non ha trovato una contromisura a tale infezione. La rabbia inizia a manifestarsi solo dopo pochi giorni e la morte avviene un paio di giorni dopo l'inizio dell'infezione. Per evitare questo problema, è possibile prevenirne la comparsa mediante la vaccinazione. Inoltre la vaccinazione può avere un effetto contrastante nelle prime ore dopo il morso.

Se un animale viene morso è necessario sottoporsi immediatamente al test della rabbia. Questo virus viene trasmesso all'uomo da un animale infetto. I casi più comuni di infezione provengono da animali selvatici non vaccinati (volpe, lupo, topo, procione) o da animali domestici che non sono stati vaccinati entro un anno (cane, gatto, bovino).

Puoi essere infettato da un animale malato nelle seguenti circostanze:

• durante un morso di un animale infetto;
• quando le secrezioni salivari entrano in contatto con la mucosa di una persona o con aree danneggiate della pelle. Potrebbe essere una ferita o un graffio normale.

In caso di qualsiasi tipo di contatto con la saliva di un animale infetto, è necessario contattare immediatamente un istituto medico per misure preventive, poiché questo tipo di infezione non può essere curata. L'infezione è possibile attraverso l'inalazione di aria o particelle di polvere che contengono infezione; nella pratica medica si verificano casi di infezione durante la lavorazione delle pelli di volpe. Il contatto con le feci o l'urina di un animale malato non provoca malattie, e lo stesso vale per la pelle intatta. La carne non trasformata non contiene il virus; non è necessaria la prevenzione dopo aver mangiato carne non trasformata.

È importante sapere che il virus della rabbia non viene trasmesso da persona a persona, quindi non è necessario aver paura di una persona del genere, è necessario aiutarla in modo tempestivo.

Sintomi

L'infezione non è immediatamente accompagnata da sintomi; potrebbero essere necessari diversi giorni per identificarli, ma in questa fase qualsiasi azione di soccorso sarà inutile. Il periodo di incubazione è in media di circa un mese, ma può raggiungere un anno. Come si manifesta la rabbia? I segni più pronunciati:

• gonfiore, prurito, arrossamento nel sito del morso dell'animale;
• febbre, aumento della temperatura corporea;
• mancanza di forza, stanchezza costante, malessere;
• frequenti mal di testa;
• disturbo del sonno normale, insonnia;
• esacerbazione degli stimoli visivi e uditivi;
• convulsioni;
• umore depresso, sensazione di apatia;
• cambiamento costante dalla paura e dall'ansia all'aggressività e all'ansia;
• disturbi all'apparato respiratorio e problemi di deglutizione;
• aumento della frequenza cardiaca, mancanza di respiro;
• aumento della salivazione;
• confusione, allucinazioni;
• paralisi degli arti o di altre parti del corpo.

Periodo di incubazione

Questo periodo rappresenta il periodo che va dall'infezione del virus fino alla comparsa dei primi segni della malattia. Dura un mese, ma l'intervallo va da un paio di giorni a un anno intero. Tali casi sono estremamente rari e si verificano una volta su un milione.

La velocità di sviluppo del periodo di incubazione dipende direttamente dalla posizione dell'infezione nel cervello. Più il virus è vicino, più velocemente si verificherà la morte inevitabile. Un morso al viso o alla spalla contribuirà a uno sviluppo più rapido degli eventi; il periodo di incubazione in questo caso può iniziare entro un paio di giorni. Questo periodo è estremamente importante per una persona, perché durante questo periodo è necessario avere tempo per donare il sangue e scoprire i risultati di un test per la rabbia in una persona. La vaccinazione tempestiva offre la possibilità di salvare vite umane.

Sintomi successivi

Dopo le prime manifestazioni visibili si manifestano segni di infezione più pronunciati. Esistono due tipi di rabbia che progrediscono:

• nella maggior parte dei casi, in 80 su 100, si manifesta una rabbia violenta;
• rabbia silenziosa, detta anche rabbia paralitica. È meno comune.

Lo stadio finale è un periodo neurologico acuto.

Tipo di infezione violenta

Durante i periodi di rabbia violenta, le persone possono sperimentare un comportamento iperattivo insolito per loro, che viene sostituito da una relativa calma a breve termine. Le persone si comportano in modo strano in questo momento. Possono apparire i seguenti segni di questo tipo:

• eccitazione, spesso al limite dell’aggressività e della rabbia. Una persona può iniziare una rissa, causare danni, senza pensare alle conseguenze;
• aumento della salivazione, incontrollabile;
• febbre, temperatura corporea elevata, febbre;
• sudorazione eccessiva;
• esplosioni allucinogene, confusione nella realtà;
• pelle d'oca, i peli sulla pelle si rizzano;
• erezione persistente negli uomini.

Durante la furia, le persone infette dal virus della rabbia possono sviluppare la paura dell'acqua: l'idrofobia. Sorgono difficoltà nel sistema respiratorio e compaiono difficoltà con la deglutizione. Durante la deglutizione, i muscoli vanno in spasmo, rendendo impossibile l'esecuzione di un riflesso così familiare. Lo spasmo può durare solo pochi secondi, ma si ripete la prossima volta che ci provi. Successivamente, la persona ha paura di fare tentativi per paura di sperimentare nuovamente uno spasmo. Possono manifestarsi anche altre fobie, ad esempio la paura dell'aria o della luce intensa.

Entro un paio di giorni la persona cade in coma, il corpo sperimenta insufficienza polmonare o cardiaca e presto muore.

Furia silenziosa

Questo tipo è causato dalla debolezza della struttura muscolare. I muscoli non solo perdono forza, ma mancano anche di sensibilità e talvolta sono parzialmente paralizzati. Ad esempio, può verificarsi un lieve intorpidimento delle mani o dei piedi, che sfocia nell'incapacità di muovere alcuni elementi degli arti. Un tale disturbo può diffondersi in tutto il corpo e immobilizzare completamente una persona.

Le fobie di solito non si verificano con questo tipo di rabbia. Anche il destino di una persona è predeterminato: prima il coma, poi la morte.

Test diagnostici

Affinché un medico possa diagnosticare la rabbia, deve essere confermata con i seguenti dati:

1. Il fatto di interagire con un animale infetto o randagio che non è stato vaccinato entro un anno. Per contatto si intende l'interazione con la saliva di un animale malato, un morso, la cura di ferite, ecc.
2. I primi segni di infezione.
3. Materiali per l'analisi di un animale infetto o sospetto, se possibile.
4. Risultati dell'esame di una persona con segni di rabbia.

Durante la diagnosi, vengono utilizzati i seguenti metodi di esame:

1. Raccolta di tessuti da un'area cutanea per rilevare gli anticorpi nella lotta contro una malattia virale. Il tessuto viene prelevato dalla parte posteriore del collo o come materiale viene utilizzata un'impronta della cornea dell'occhio.
2. PCR. Il materiale per la ricerca è la saliva o il liquido cerebrospinale. Ma tale analisi è piuttosto costosa e non viene eseguita in tutti i laboratori.
3. Esame del liquido cerebrospinale e analisi del sangue per determinare il livello dei monociti.
4. È stato dichiarato uno studio delle aree del cervello, disponibile solo dopo la morte del paziente. Quando si conferma la diagnosi, si trovano punti nelle cellule nervose - corpi di Negri, che indicano chiaramente la rabbia.

Trattamento dell'infezione

L'umanità non ha ancora scoperto metodi efficaci per curare la rabbia. In precedenza, tutte le persone, indipendentemente dall'accesso tempestivo a un medico, finivano con la morte. Ma la medicina moderna suggerisce di utilizzare la vaccinazione non solo come misura preventiva, ma anche come contromisura durante il periodo di incubazione dell’infezione.

Nella storia, ci sono solo un paio di casi di recupero dopo un complesso di trattamenti farmacologici antivirali, ma nella vita reale funziona estremamente raramente e quasi non salva nessuno dalla morte.

L'efficacia del trattamento è possibile solo immediatamente dopo il morso, durante il processo di infezione. Un’azione tempestiva può proteggere dallo sviluppo di sintomi e dalla morte, ma non bisogna esitare. Quando si viene infettati dal virus della rabbia, ogni minuto è importante, perché può costare una vita umana.

Linee guida per gli studenti per la lezione pratica n. 5.

Soggetto:

Bersaglio: Studio della diagnostica di laboratorio e della prevenzione specifica della rabbia.

Modulo 3 . Virologia generale e speciale.

Argomento 5: Diagnosi di laboratorio della rabbia.

Pertinenza dell'argomento:La rabbia è una malattia virale che provoca gravi danni al sistema nervoso e di solito termina con la morte.

La malattia è nota all'umanità da diversi millenni. Descritto per la prima volta da C. Celso nel I secolo. ANNO DOMINI Nel 1885, L. Pasteur ricevette e utilizzò con successo un vaccino per salvare le persone morse da animali rabbiosi. La natura virale della malattia fu dimostrata nel 1903 da P. Remlenger.

Rabbia (sinonimi: rabbia, Lyssa, idrofobia - idrofobia) particolarmente pericolosouna malattia infettiva dell'uomo e degli animali a sangue caldo, trasmessa attraverso il contatto con un animale infetto (morso, salivazione di microdanni), caratterizzata da danno al sistema nervoso centrale e morte.

Tassonomia. L'agente eziologico della rabbia (virus della rabbia Neuroiyctes rabid) è un virus a RNA che appartiene alla famiglia Rhabdoviridae (dal greco rhabdos - ramoscello), al genere Lyssavirus.

Morfologia e composizione chimica.I virioni a forma di proiettile, di dimensioni 170x70 nm, sono costituiti da un nucleo circondato da un guscio lipoproteico con spine di natura glicoproteica. L'RNA è a filamento singolo, a filamento negativo.

Coltivazione.Il virus della rabbia viene coltivato nel tessuto cerebrale di topi bianchi, criceti siriani, conigli, ratti, porcellini d'India, pecore, ecc. Gli animali infetti sviluppano la paralisi degli arti e poi muoiono. Il virus della rabbia può essere adattato alle colture cellulari primarie e continue e agli embrioni di pollo. Nel citoplasma delle cellule cerebrali di animali o colture di tessuti infettate dal virus si formano inclusioni specifiche, descritte per la prima volta da V. Babes (1892) e A. Negri (1903) e quindi chiamate corpi di Babes Negri. Le inclusioni di forma sferica o ovale, di dimensioni variabili da 0,5 a 20 micron, si colorano facilmente con coloranti acidi, contengono antigene virale e hanno valore diagnostico.

Il virus è patogeno per la maggior parte degli animali e degli uccelli a sangue caldo. Esistono virus della rabbia di strada (circolanti in natura) e virus della rabbia fissi mantenuti nei laboratori. Il virus fissato non viene escreto nella saliva e non può essere trasmesso durante un morso. Si moltiplica in varie colture di tessuti (principalmente trypsinizzati e trapiantati, in colture di cellule diploidi umane o fibroblasti di embrioni di criceto) e dopo l'adattamento su embrioni di pollo e di anatra, che viene utilizzato nella produzione di vaccini contro la rabbia. Il meccanismo di persistenza virale nelle colture cellulari è associato alla formazione e all'accumulo di particelle Di. La penetrazione del virus nelle cellule avviene attraverso l'endocitosi di adsorbimento; i virioni vengono rilevati sotto forma di inclusioni circondate da una membrana, adsorbite sui microtubuli e come parte dei lisosomi.

Struttura antigenica.Il virus della rabbia contiene antigeni centrali e superficiali. L'antigene glicoproteico (proteina della colonna vertebrale) ha proprietà immunogeniche pronunciate. Esistono due virus della rabbia identici nelle proprietà antigeniche: uno selvatico, circolante tra gli animali, patogeno per l'uomo, chiamato virus di strada, e un virus fisso (virus fixe), ottenuto da L. Pasteur in laboratorio mediante test a lungo termine passaggi di un virus di strada attraverso il cervello dei conigli. A causa della perdita di virulenza di quest'ultimo per l'uomo, L. Pasteur utilizzò questo virus come vaccino antirabbico.

Resistenza. Il virus della rabbia non è stabile nell'ambiente: muore rapidamente sotto l'influenza della luce solare e dei raggi UV, dei disinfettanti (fenolo, cloramina, formaldeide) ed è sensibile ai solventi grassi e alle soluzioni alcaline e all'essiccazione. Può essere conservato a lungo a basse temperature (-20 0C).

Il virus viene distrutto dagli acidi, dagli alcali e dal riscaldamento (a 56°C viene inattivato entro 15 minuti, mediante ebollizione - entro 2 minuti. Viene rapidamente inattivato dal sublimato (1:1000), dal lisolo (1-2%), acido fenico (3-5%) , cloramina (2-3%).

Epidemiologia. La rabbia è conosciuta fin dall'antichità. Si tratta di una tipica infezione zoonotica diffusa in tutto il mondo. Tutti gli animali a sangue caldo possono contrarre la rabbia. Tuttavia, a causa delle peculiarità del meccanismo di trasmissione (attraverso il morso), la circolazione del virus in natura è assicurata dai carnivori selvatici e domestici, principalmente cani, lupi, volpi, cani procioni, sciacalli e gatti. I focolai naturali della rabbia si trovano ovunque. L'uomo rappresenta un elemento casuale nel processo epidemico e non partecipa alla circolazione del virus in natura.

Il virus della rabbia si accumula e viene rilasciato attraverso le ghiandole salivari dell'animale durante la malattia e negli ultimi giorni del periodo di incubazione.Meccanismo di trasmissione degli agenti patogeni- contatto diretto, principalmente con morsi, in misura minore con eccessiva salivazione della pelle con graffi e abrasioni. Il ruolo di una persona malata come fonte di infezione è minimo, sebbene la sua saliva contenga il virus della rabbia. Esistono solo casi isolati di infezione da uomo a uomo. Sono stati descritti casi di malattie umane a seguito di morsi di un animale apparentemente sano che continua a rimanere tale per lungo tempo. Negli ultimi anni è stato dimostrato che oltre al contatto sono possibili vie di trasmissione del virus aerogeniche, alimentari e transplacentari. Sono stati descritti diversi casi di infezione umana a seguito di un intervento chirurgico di trapianto di cornea.

Patogenesi e quadro clinico.Il virus della rabbia ha proprietà neurotropiche pronunciate. Dal sito di introduzione, i virus entrano nel sistema nervoso centrale lungo le fibre nervose periferiche, si moltiplicano in esso e quindi si diffondono in modo centrifugo, colpendo l'intero sistema nervoso, compresi i gangli nervosi di alcuni organi ghiandolari, in particolare le ghiandole salivari. In quest'ultimo i virus si moltiplicano e vengono rilasciati nell'ambiente con la saliva.

Periodo di incubazionenel caso della rabbia nell'uomo, varia da 7 giorni a 1 anno o più, a seconda della localizzazione e della natura del danno, nonché della virulenza del ceppo. L'incubazione più breve si osserva con morsi estesi del viso, della testa, quindi delle estremità superiori e la più lunga con un morso delle estremità inferiori.

Nel quadro clinico della rabbia nell'uomo si distinguono i seguenti periodi: precursori (prodromici), eccitazione e paralisi. La malattia inizia con la comparsa di una sensazione di paura, ansia, irritabilità, insonnia, malessere generale e una reazione infiammatoria nella sede del morso. Nel secondo periodo della malattia, l'eccitabilità riflessa aumenta bruscamente, compaiono idrofobia (fobia dell'acqua), contrazioni spasmodiche dei muscoli della faringe e dei muscoli respiratori, che rendono difficile la respirazione; la salivazione aumenta, i pazienti sono eccitati, a volte aggressivi. Dopo alcuni giorni si verifica la paralisi dei muscoli degli arti, del viso e dei muscoli respiratori. La durata della malattia è di 3-7 giorni. Mortalità 100%.

Periodo di incubazionedura in media da 1 a 3 mesi (sono possibili fluttuazioni da 12 giorni a 1 anno o più). La durata del periodo di incubazione è influenzata dalla posizione del morso. L'incubazione più breve si osserva con un morso al viso, alla testa, quindi alle estremità superiori, mentre l'incubazione più lunga si osserva con un morso alle estremità inferiori.

Ci sono 3 stadi della malattia:I iniziale (depressione), II eccitazione, III paralisi.

Fase I . La malattia inizia con la comparsa di sensazioni spiacevoli nell'area del morso (bruciore, dolore fastidioso che si irradia al centro, prurito, iperestesia cutanea), sebbene la ferita possa già essere completamente guarita. A volte ricompare l'infiammazione locale, la cicatrice diventa rossa e si gonfia. Quando viene morso in faccia, si osservano allucinazioni olfattive e visive. La temperatura corporea diventa subfebbrile, solitamente 37.237,3°C. Allo stesso tempo compaiono i primi sintomi di un disturbo mentale: paura inspiegabile, malinconia, ansia, depressione e, meno spesso, maggiore irritabilità. Il paziente è chiuso, apatico, rifiuta di mangiare, dorme male e il suo sonno è accompagnato da sogni spaventosi. La fase iniziale dura 13 giorni. Quindi l'apatia e la depressione vengono sostituite dall'ansia, il polso e la respirazione accelerano e sorge una sensazione di oppressione al petto.

Fase II l'eccitazione è caratterizzata da una maggiore eccitabilità riflessa e da una acuta simpaticotonia. Il sintomo clinico più evidente della rabbia è la paura dell'idrofobia: quando si cerca di bere si verificano dolorose contrazioni spastiche dei muscoli della deglutizione e dei muscoli respiratori ausiliari. Questi fenomeni aumentano di intensità tanto che il solo ricordo dell'acqua o il rumore del liquido che versa provoca spasmi dei muscoli della faringe e della laringe. La respirazione diventa rumorosa sotto forma di respiri brevi e convulsi.

In questo momento, le reazioni a qualsiasi sostanza irritante peggiorano bruscamente. Un attacco di convulsioni può essere scatenato soffiando un getto d'aria in faccia (aerofobia), una luce intensa (fotofobia) o un suono forte (acusticofobia). Le pupille del paziente sono molto dilatate, si verifica l'esoftalmo e lo sguardo è diretto su un punto. Il polso è bruscamente accelerato, compaiono salivazione abbondante e dolorosa (scialorrea) e sudorazione. Al culmine dell'attacco si manifesta una violenta agitazione psicomotoria (attacchi di violenza, rabbia) con azioni violente e aggressive. I pazienti possono colpire, mordere gli altri, sputare e strapparsi i vestiti. La coscienza si oscura, si sviluppano allucinazioni uditive e visive di natura spaventosa. È possibile l'arresto cardiaco e respiratorio. Durante l'intervallo interictale, la coscienza di solito si schiarisce, i pazienti possono valutare correttamente la situazione e rispondere in modo intelligente alle domande. Dopo 2-3 giorni, l'eccitazione, se la morte non avviene al culmine di uno degli attacchi, viene sostituita dalla paralisi dei muscoli degli arti, della lingua e del viso.

Periodo di paralisiassociato alla perdita di attività della corteccia cerebrale e delle formazioni sottocorticali, caratterizzate da una pronunciata diminuzione delle funzioni motorie e sensoriali. Le convulsioni e gli attacchi di idrofobia si fermano. Le persone intorno spesso confondono questa condizione con un miglioramento delle condizioni del paziente, ma in realtà è un segno di morte imminente. La temperatura corporea sale fino a 4042°C, aumentano la tachicardia e l'ipotensione. La morte avviene entro 12 x 20 ore dalla paralisi del cuore o del centro respiratorio. La durata totale della malattia è di 5-8 giorni, raramente leggermente più lunga.

A volte la malattia inizia improvvisamente senza preavviso con lo stadio di eccitazione o la comparsa di paralisi. La rabbia nei bambini ha un periodo di incubazione più breve. Possono essere assenti attacchi di idrofobia e grave agitazione. La malattia si manifesta come depressione, sonnolenza, sviluppo di paralisi e collasso. La morte può verificarsi entro un giorno dall'esordio della malattia. Le varianti del decorso comprendono le forme bulbare, paralitica (tipo Landry), meningoencefalitica e cerebellare della malattia.

Immunità. L'immunità acquisita naturalmente non è stata studiata, poiché la malattia di solito termina con la morte. L'immunità acquisita artificialmente si verifica dopo la vaccinazione di persone morse da animali rabbiosi. È causato dalla produzione di anticorpi che persistono durante tutto l'anno, dalla formazione di interferone e da fattori di immunità cellulare.

Diagnostica di laboratorio.Gli studi di laboratorio vengono effettuati postumi. Pezzi di cervello e midollo spinale e ghiandole salivari sottomandibolari vengono utilizzati come materiale di prova in conformità con le regole previste per lavorare con materiale infettivo particolarmente pericoloso.

La diagnostica Express si basa sulla rilevazione di un antigene specifico utilizzando RIF ed ELISA e corpi di Babes-Negri. Il virus viene isolato utilizzando un test biologico su topi bianchi.

Prevenzione e trattamento specifici.I vaccini contro la rabbia sono stati sviluppati e proposti da L. Pasteur. I vaccini ottenuti dal cervello di animali infetti - conigli, pecore - possono causare complicazioni, quindi vengono utilizzati raramente. Nel nostro Paese si utilizza un vaccino concentrato antirabbico ottenuto dal ceppo Vnukovo-32 (derivato da un virus Pasteur fisso), inattivato dai raggi UV o gamma.

La vaccinazione terapeutica e profilattica viene somministrata alle persone morse o colpite da saliva da animali malati o sospettati di rabbia. Le vaccinazioni dovrebbero iniziare il prima possibile dopo il morso. Nei casi più gravi viene utilizzata la somministrazione combinata di immunoglobulina antirabbica e vaccino. Sono in fase di sviluppo vaccini contro la rabbia geneticamente modificati.

Trattamento. Non esistono trattamenti efficaci. La terapia sintomatica viene effettuata per ridurre la sofferenza del paziente. Il paziente viene posto in una stanza buia, silenziosa e calda. L'uso dell'immunoglobulina antirabbica in presenza di sintomi clinici della malattia è inefficace.

Previsione sempre sfavorevole. Esistono descrizioni di casi isolati di guarigione di pazienti che hanno ricevuto un ciclo completo di immunizzazione con il vaccino antirabbico e si sono ammalati dopo il suo completamento.

Prevenzione è quello di eliminare l’incidenza della rabbia tra gli animali e di prevenire la malattia nelle persone che sono state morse da animali infetti. Vaccinano i cani e distruggono gli animali randagi. Per i morsi, si consiglia di lavare la ferita con acqua calda bollita (con o senza sapone), quindi trattarla con alcol al 70% o tintura alcolica di iodio. Quindi, il siero antirabbico o l'immunoglobulina antirabbica vengono iniettati in profondità nella ferita e nei tessuti molli attorno alla ferita. Tutte queste misure, così come la successiva vaccinazione antirabbica, devono essere attuate il più rapidamente possibile.

Vaccinazioni contro la rabbia sono efficaci solo se iniziati entro e non oltre il 14° giorno dal momento del morso. Le vaccinazioni antirabbica si distinguono in base alle indicazioni incondizionate e condizionate.

Obiettivi specifici:

• Conoscere le proprietà biologicheTwami e la classificazione dei rabdovirus.
• Descrivere l’epidemiologia e la patogenesi del virus della rabbia.
• Metodi di studio della diagnosi microbiologica del virus della rabbia.
• Scopri i metodi per prevenire i rabdovirus.

Essere in grado di:

• Differenziare i rabdovirus.
  • Raccogliere materiale per la ricerca da pazienti affetti da malattie causate da rabdovirus.
  • Isolare e identificare i rabdovirus.
• Interpretare i risultatiesame microscopico del cervello di animali morti di rabbia.
• Evidenziare Corpi di Negri in strisci cerebrali di animali morti di rabbia.
• Interpretare i risultati di uno studio sierologico sul siero di pazienti con rabbia.

Domande teoriche:

1. Posizione sistematica e caratteristiche del virus della rabbia.
2. Virus stradali e fissi. Opere di L. Pasteur.
3. Serbatoio del virus in natura. Vie di trasmissione del virus all'uomo.
4. Patogenesi della rabbia ed elementi clinici.
5. Diagnosi di laboratorio della rabbia.
6. Prevenzione specifica della rabbia.

Attività pratiche svolte in classe:

1. .Analisi e registrazione di uno schema diagnostico di laboratorio per il virus della rabbia.
2. Microscopia e disegno di preparati dimostrativi.
3. Stesura di un protocollo di lavoro.

Letteratura:

1. Pyatkin K.D., Krivoshein Yu.S. Microbiologia con virologia e immunologia Kiev: Vishcha School, 1992. 431 p.
2. Vorobyov A.V., Bykov A.S., Pashkola E.P., Ribakova A.M. Microbiologia M.: Medicina, 1998. 336 p.
3. Microbiologia medica /A cura di V.I. Pokrovsky, M.: GEOTAR-MED, 2001. 768 p.
4. Microbiologia medica, virologia e immunologia / A cura dell'Accademico A.A. Vorobyova, M.: Agenzia di informazione medica, 2004. 691 p.
5. Note di lettura.

Letteratura aggiuntiva:

1. Ordine di ritiro per la preparazione prima dell'esame del test Krok-1. Formazione medica avanzata Kiev: Medicina, 2004.- P. 300-333.
2. Linee guida per insegnanti per lezioni pratiche di microbiologia medica, virologia e immunologia, Kharkov, 1986, 125 p.
3. Raccolta di compiti di test per lo studio autonomo in microbiologia medica e virologia Kharkov, 2005. 28 p.

Brevi linee guida per lavorare in una lezione pratica.

All'inizio della lezione viene verificato il livello di preparazione degli studenti alla lezione.

Il lavoro indipendente consiste nella microscopia dei preparativi dimostrativi. Gli studenti disegnano campioni microscopici in un album e forniscono le spiegazioni necessarie. Vengono registrate le tabelle diagnostiche di laboratorio.

Al termine della lezione vengono effettuati un test di controllo e un’analisi dei risultati finali del lavoro autonomo di ciascuno studente.

Mappa tecnologica per lo svolgimento di una lezione pratica

NO.	Fasi	Tempo minimo	Modi di apprendimento	Attrezzatura	Posizione
	Controllare e correggere il livello di preparazione in uscita per la lezione	20	Elementi di test di livello iniziale	Tabelle	Sala studio
	Lavoro indipendente	35	Grafico della struttura logica	Microscopio ad immersione, preparativi dimostrativi
	Automonitoraggio e correzione del materiale appreso	15	Programmi di formazione mirati
	Controllo della prova	15	Test
	Analisi dei risultati del lavoro

Obiettivo della formazione:

1. Il laboratorio di virologia ha ricevuto materiale per la ricerca (tessuto cerebrale) da una persona morta di rabbia. Quale delle seguenti reazioni può essere utilizzata per rilevare l'antigene del virus della rabbia negli strisci di impronte di sezioni cerebrali?

A. RIF B. RSK C. RGA D. RP E. RA

2. Con RIF direttoUna sezione del cervello di un cane con sospetta rabbia ha rivelato un bagliore. Cosa è determinato da questa reazione?

R. Virus

B. Anticorpi

S. Toro Babesha-Negri

Corpuscoli di D. Guarnieri

Il Toro di E. Paschen.

3. Per preparare i vaccini per prevenire la rabbia, viene utilizzato un virus fisso. Quale delle seguenti proprietà distingue il virus della rabbia fissa da quello di strada?

A. Composizione antigenica

B. Dimensioni

C. Grado di virulenza

D. Presenza di inclusioni di Guarnieri

E. Formazione di esotossina

4.B La vittima M è arrivata al centro traumatologico con ferite dovute a morsi inflitti da un cane randagio nella zona della testa (zona particolarmente pericolosa se infetta dalla rabbia). Dopo il primo trattamento chirurgico delle ferite, il medico ha prescritto alla vittima la somministrazione di un vaccino antirabbico. Quale farmaco aggiuntivo dovrebbe essere somministrato a questo paziente?

A. Plasma antistafilococcico

B. Anti-schiavi e immunoglobuline umane

C . Tossoide stafilococcico

D. Siero antigangrenoso

E. Tossoide cancrenoso.

5. Il cacciatore è stato morso sulla mano da una volpe. 10 anni fa la vittima ha ricevuto un ciclo completo di vaccinazioni antirabbica. Quale dovrebbe essere la tattica del medico per prevenire la rabbia in questo caso?

UN. Somministrazione combinata di antibiotici e tossoide tetanico.

IN. Somministrazione combinata di antibiotici e siero tetanico.

CON. Somministrazione combinata di tossoide tetanico e immunoglobuline antirabbica

D. Somministrazione combinata di immunoglobulina antirabbica e vaccino antirabbico

E. Somministrazione combinata di antibiotici, prot e dentro siero antirabbico, siero antirabbico e vaccino antirabbico

7. Il cacciatore ha cercato assistenza medica per morsi alle mani causati da una volpe ferita. Quale assistenza gli dovrebbe essere fornita ai fini della prevenzione specifica della rabbia?

UN . Trattamento chirurgico della ferita

B . Somministrazione di antibiotico

C . Trattamento della ferita con una soluzione alcolica di iodio

D . Somministrazione di immunoglobuline antirabbica

E. Lavare la ferita con acqua saponata

Algoritmo lavoro di laboratorio:

1. Studio della struttura del virus della rabbia.

2. Microscopia dei preparati dimostrativi.

1. Studio dei preparati immunobiologici per la diagnosi della rabbia:

a) siero antirabbico immunofluorescente per rilevare il virus nella reazione di immunofluorescenza.

1. Studio di farmaci immunobiologici per la prevenzione specifica della rabbia:

a) vaccino antirabbico in coltura inattivata;

b) immunoglobuline antirabbica.

1. .Studiare e registrare lo schema diagnostico di laboratorio per la rabbia.
2. Schizzo dei preparativi dimostrativi.
3. Stesura di un protocollo di lavoro.

SCHEMA DIAGNOSTICO DELLA RABBIA

Materiale per la ricerca:

cervello, ghiandole sottomandibolari(tratti, stampe, sezioni)

METODI DI RICERCA:

colorazione dei tratti:

Secondo Muromtsev, il farmaco viene applicato alle infezioni del nostro corpo

(celle - celle blu,collo fluorescente o coniglio

Inclusioni: viola con rosasiero antirabbico nel cervello

ombra) bocca e sguardo

Nel colore fluorescente

Secondo il microscopio del venditore

(cellule blu, inclusioni rosse) (il tessuto cerebrale si illumina di nero

lo sfondo è opaco, giallastro

Secondo Mann (sezioni) O colore;

Secondo Lenz virus + anticorpo brillante, verdastro

(cellule blu, inclusioni rosa) in giallo)

Secondo Turevich

(celle gialle,

Inclusioni rosso scuro)

I corpi di Negri si trovano nel 70% dei casi.

La loro assenza non rimuove la diagnosi!

ISTRUZIONI METODOLOGICHE
SULLA DIAGNOSTICA DI LABORATORIO DELLA RABBIA

1. La diagnosi di rabbia viene effettuata sulla base di un complesso di dati epizootici, clinici, patologici e principalmente sulla base di test di laboratorio.

2. Per la ricerca, vengono inviati al laboratorio con una consegna speciale: un cadavere fresco o la testa di un cane (gatto, volpe, volpe artica, pecora, vitello, ecc.), di animali di grandi dimensioni - una testa o cervello (fresco o conservato in soluzione di glicerina al 30 - 50%). Solo i cervelli non conservati sono adatti per gli studi sierologici.

3. La diagnosi di laboratorio della rabbia consiste in un esame microscopico del cervello (per rilevare i corpi di Babes-Negri), sierologia (rilevamento di uno specifico antigene della rabbia), nonché un test biologico su topi bianchi o conigli.

Ordine di ricerca.

4. Il cervello ricevuto per la ricerca viene prima inoculato su terreni nutritivi. La parte del cervello viene immediatamente posta in frigorifero e conservata nel caso in cui sia necessario un riesame. Dalla restante parte del cervello viene prelevato materiale per esami microscopici, reazioni sierologiche e campioni biologici.

Nota. L'autopsia del cadavere, la rimozione del cervello e altri lavori vengono eseguiti in condizioni sterili nel rigoroso rispetto delle misure preventive personali (ferma fissazione della testa dell'animale, protezione delle mani con due paia di guanti: chirurgico e anatomico; occhiali protettivi indossati per proteggere gli occhi e coprire il naso e la bocca con una benda di garza).

I. STUDI MICROSCOPICI

5. Per l'esame microscopico, vengono effettuate impronte e strisci da diverse parti del cervello.

6. Per preparare la stampa, pezzi di cervello (corno di ammonio, corteccia cerebrale, cervelletto, midollo allungato) vengono posizionati su carta da filtro piegata in 4 - 6 strati. La superficie del taglio viene toccata più volte (3 - 4) di seguito con un vetrino pulito, esercitando una leggera pressione, in modo da lasciare una sottile impronta sul vetro.

7. Gli strisci vengono effettuati dalle stesse aree del cervello. Per fare questo, pezzi di cervello vengono macinati in un mortaio e pestello di porcellana o in una provetta con una bacchetta di vetro fino a formare una massa omogenea, dalla quale vengono realizzati strisci grossolani su un vetrino di vetro privo di grassi.

Puoi fare le sbavature in un altro modo. Per fare ciò, un piccolo pezzo di cervello viene posizionato sul bordo di un vetrino e con un altro vetro viene schiacciato e spalmato da un bordo all'altro, risultando in una macchia sottile e uniforme sulla superficie del vetro.

8. I tratti o le stampe risultanti vengono colorati in uno dei seguenti modi:

a) colorazione secondo Muromtsev. Gli strisci o le impronte preparati, ancora umidi, vengono immediatamente fissati in alcool etilico o metilico oppure in una miscela di alcool a metà con etere o acetone (chimicamente puro) per 1 - 2 ore e poi lavati con acqua. Il contenitore con il fissativo deve essere ben chiuso per evitare l'evaporazione del liquido fissante. Dopo il lavaggio con acqua, gli strisci bagnati vengono posti per 5 - 10 minuti in una soluzione di vernice Munson diluita 1:40 con acqua. Successivamente si fa scolare la vernice e si immergono immediatamente gli strisci in una soluzione acquosa di tannino al 10% per 8 - 10 minuti fino alla comparsa di un colore bluastro. Successivamente gli strisci vengono lavati con acqua, asciugati con carta da filtro, passati attraverso una miscela di parti uguali di alcool con acetone (chimicamente puro) o alcool con xilene e nuovamente asciugati con carta da filtro. Lo striscio colorato dovrebbe avere uno sfondo azzurro, mentre i nuclei delle cellule nervose sono dipinti di blu, ei corpi di Babes-Negri sono viola pallido con inclusioni scure;

b) Colorazione dei venditori. Una miscela di reagente “A” (blu di metilene - 2 g, alcool metilico senza acetone - 100 ml) e reagente “B” (fucsina basica - 0,5 g, alcool etilico senza tracce di acetone) viene applicata sulla stampa bagnata o sullo striscio preparato per 4 - s - 100 ml). La soluzione colorante di lavoro è composta da 15 ml di reagente “A”, 2 - 4 ml di reagente “B” e 25 ml di alcol metilico. Dopo la colorazione il preparato viene lavato con acqua corrente ed asciugato. Nello striscio colorato, il citoplasma dei neuroni è blu brillante, i nucleoli sono blu scuro, gli eritrociti sono rosso mattone, i corpi Babes-Negri sono rosso porpora con una struttura basofila dei corpi chiaramente visibile;

c) colorazione secondo Mikhin. Le macchie o le impronte vengono fissate in una miscela di alcool ed etere (parti uguali) per 5 - 10 minuti, dopo di che vengono asciugate con carta da filtro e colorate per 30 - 40 minuti con vernice Giemsa (1 - 2 gocce per 1 ml di soluzione distillata acqua), lavato velocemente con alcool acidificato (1 goccia di acido acetico glaciale per 30 ml di alcool a 96°), e poi con acqua, asciugato con carta da filtro ed esaminato. Se il materiale era in glicerina, viene prima risciacquato bene in acqua e asciugato con carta da filtro.

In un campione colorato, all'esame microscopico, lo sfondo principale dovrebbe essere rosso con una sfumatura viola. Se predomina la tonalità blu, lo striscio viene nuovamente lavato con alcool acidificato e lavato con acqua. Le cellule nervose piramidali sono di colore bluastro con un nucleo intensamente nero, mentre i corpuscoli di Babes-Negri sono rosa-rossi con inclusioni punteggiate di blu scuro;

d) colorazione secondo Borman-Gainullina. Tratti o stampe sottili vengono fissati per 5 minuti in una miscela della seguente composizione: alcool ed etere (parti uguali) - 98 ml, acido acetico glaciale - 2 ml; dopo la fissazione, vengono immersi per 5 minuti in una soluzione al 10% di soda cristallina, quindi lavati con acqua ed essiccati all'aria. Gli strisci fissati vengono colorati per 2 minuti con la vernice preparata prima dell'uso (soluzione acquosa satura di blu di metilene - 3 gocce, soluzione basica satura di fucsina - 2 gocce, acqua di rubinetto - 20 ml). La soluzione di vernice viene versata sullo striscio, fissata sopra la fiamma del bruciatore, quindi la vernice viene lasciata per un altro minuto, dopodiché viene lavata con acqua e asciugata con carta da filtro. In uno striscio colorato, lo sfondo principale dovrebbe essere rosso vivo, il protoplasma delle cellule nervose dovrebbe essere colorato di blu-rossastro e i loro nuclei dovrebbero essere blu scuro, i corpi di Babes-Negri dovrebbero essere colorati di rosso fragola con una struttura tipicamente granulare. I globuli rossi sembrano cerchi incolori.

II. STUDI SIEROLOGICI

9. Reazione di precipitazione diffusa in gel di agar. La reazione viene utilizzata per rilevare l'antigene specifico della rabbia nel cervello non conservato di animali morti di rabbia stradale, nonché negli animali su cui è stato eseguito un test biologico. Per la reazione, puoi utilizzare un cervello stantio (fino a 1 mese).

La reazione viene condotta su vetrini scremati, sui quali vengono applicati 2,5 ml di gel di agar fuso e raffreddato a 60 ° C, preparato secondo la ricetta: agar-agar secco - 12 - 15 g; cloruro di sodio chimicamente puro - 8,6 g; Soluzione all'1% (filtrata) di arancio metilico in alcool a 50° - 5 - 10 ml; mertiolato - 0,01 g; acqua distillata - 1 l.

Nota. Per impostare la reazione è preferibile utilizzare l'agar-agar Difco; si dissolve completamente; non è necessaria alcuna filtrazione del terreno. Altre varietà di agar-agar richiedono un'attenta filtrazione.

Dopo che l'agar si è indurito, vengono realizzati dei pozzetti utilizzando un tubo di metallo o di vetro a pareti sottili con un diametro interno di 4 - 5 mm, posizionandoli secondo lo stencil (vedere Fig. -).

Per le reazioni negli animali di grandi dimensioni vengono utilizzati pezzi di cervello: corno di ammon, corteccia cerebrale, cervelletto, midollo allungato; nei ratti, roditori, porcellini d'India, criceti, ecc. - tre parti qualsiasi del cervello; nei topi, l'intero cervello.

Schema per l'impostazione della microprecipitazione:
UN - corteccia (emisfero sinistro); IN- corteccia (emisfero destro); CON- Corno di Ammon (a sinistra);
D- Corno di Ammon (a destra); E- cervelletto; E- midollo;
1 , 2 , 3 , 4 - diluizioni di globulina, rispettivamente 1:2, 1:4, 1:8, 1:16.

RP positivo con tutte le diluizioni di globulina
(corteccia cerebrale di pecora, rabbia di strada)

RP positivo con diluizioni di globulina 1:4; 1:8, 1:16
(Corno del cane di Ammon, rabbia di strada)

RP positivo con diluizioni di globulina 1:16,
non sono presenti linee di precipitazione con diluizioni 1:2, 1:4,
(cane midollo allungato, rabbia di strada)

Il cervello viene macinato in un mortaio e pestello di porcellana o nel cranio stesso fino a formare una “pasta”, che viene utilizzata per riempire i pozzetti per l'antigene. I restanti pozzetti vengono riempiti con globulina antirabbica precipitante a diluizioni di 1:2, 1:4, 1:8, 1:16. Il volume degli ingredienti utilizzati è 0,02 ml.

I controlli con antigeni positivi e negativi vengono posizionati contemporaneamente su un vetro separato utilizzando lo stesso agar utilizzando lo stesso stencil.

Dopo aver posizionato gli ingredienti della reazione negli appositi pozzetti, i vetrini vengono trasferiti in una camera umida (piastre Petri con carta da filtro umida o cotone idrofilo) e posti in un termostato per 6 ore ad una temperatura di 37 - 38 °C. Le tazze vengono poi lasciate a temperatura ambiente per altre 18 ore.

La reazione viene registrata 3, 6 e 24 ore dopo la sua esecuzione. Per evitare che l'agar si secchi, i bicchieri di reazione vengono posti nelle stesse piastre Petri contenenti cotone idrofilo inumidito dopo ogni osservazione.

Con una reazione di precipitazione positiva nell'agar si possono formare una, due e molto raramente tre linee di precipitazione parallele tra i pozzetti con la globulina e l'antigene. Le linee di precipitazione risultanti sono visibili visivamente quando gli occhiali sono illuminati con un illuminatore dal basso verso l'alto con un angolo di circa 45°.

Se la reazione di precipitazione è negativa, viene eseguito un test biologico.

10. Reazione di immunofluorescenza. Si basa sulla rilevazione mediante microscopi speciali (ML-1, ML-2, ML-3, ecc.) di un antigene virale che ha reagito con uno specifico siero antirabbico marcato con un colorante fluorescente.

Per la reazione, vengono realizzate stampe a strato sottile e uniforme su vetri accuratamente sgrassati di cervelli freschi o appena congelati. Le impronte vengono preparate da pezzi di cervello (corno di ammonio, corteccia cerebrale, cervelletto, midollo allungato) allo stesso modo dell'esame microscopico. Da ogni pezzo di cervello vengono preparati almeno 4 preparati. Per il controllo, i preparati vengono realizzati in modo simile dal cervello di un animale sano.

Dopo essiccamento all'aria, i preparati vengono fissati in acetone per 4 ore ad una temperatura non superiore a 4°C. Il contenitore con il fissativo deve essere ben chiuso per evitare l'evaporazione del liquido fissante. Dopo la fissazione con acetone, sui preparati vengono applicate alcune gocce del coniugato (gammaglobulina antirabbica fluorescente) in una diluizione di lavoro. Successivamente vengono posti in una camera umida (piastra Petri o cuvetta smaltata chiusa con fondo inumidito) per 20 - 30 minuti ad una temperatura di 25 °C.

Successivamente, i preparati vengono lavati con acqua o con una soluzione tampone fosfato (pH 7,2 - 7,4) per 1 ora, quindi risciacquati con acqua distillata, asciugati all'aria ed esaminati. Le preparazioni vengono visionate con un sistema ad immersione. Per l'immersione viene utilizzato olio non luminescente.

In un campione colorato, al microscopio a fluorescenza, il tessuto cerebrale emette fluorescenza (si illumina) con un colore giallo-grigiastro opaco. L'antigene del virus della rabbia viene rilevato in preparati sotto forma di granuli di colore verde-giallastro o verde brillante di varie forme e dimensioni, da appena percettibili a con un diametro di 15-20 micron.

Nella preparazione di controllo non si sono osservati granuli giallo-verdi intensamente luminosi.

Quando esaminata con il metodo degli anticorpi fluorescenti, la diagnosi di rabbia è considerata stabilita se in diversi campi visivi del microscopio viene rilevato un numero sufficiente (almeno 10) di granuli tipici con un bagliore verdastro brillante di varie dimensioni. Non dovrebbero esserci tali formazioni nel controllo.

In assenza di fluorescenza positiva, viene eseguito un test biologico.

III. CAMPIONE BIOLOGICO

11. Un test biologico per la rabbia viene eseguito se si ottiene un risultato negativo durante l'esame microscopico (non vengono rilevati corpi di Babes-Negri), con reazioni sierologiche (non viene rilevato l'antigene specifico della rabbia), nonché quando vengono rilevate inclusioni atipiche. I test biologici vengono eseguiti su topi bianchi o conigli.

12. Topi o conigli esperti vengono infettati con una sospensione al 10% del cervello testato in soluzione fisiologica o brodo di carne e peptone con un pH compreso tra 7,2 e 7,4. Per preparare la sospensione vengono utilizzate le stesse aree del cervello da cui è stato prelevato il materiale per gli studi microscopici e sierologici.

Le sezioni asportate del cervello vengono raccolte in una provetta sterile e pesate, quindi macinate accuratamente in mortaio e pestello, dopodiché viene aggiunta soluzione fisiologica o brodo carne-peptone per ottenere una sospensione al 10%. La sospensione risultante viene lasciata riposare per 10 minuti e il surnatante viene utilizzato per l'infezione.

Se il materiale patologico è stato contaminato, il liquido surnatante viene versato in un altro recipiente (provetta) e vengono aggiunte 500 - 1000 unità di penicillina e streptomicina per 1 ml di liquido, dopo di che viene lasciato per altri 30 minuti a temperatura ambiente temperatura e quindi utilizzato per l'infezione. La sospensione deve essere preparata in condizioni sterili e nel rigoroso rispetto delle regole di prevenzione personale.

Test biologico su topi bianchi. Per l'infezione vengono utilizzati topi bianchi del peso di 8-10 g, per ogni studio vengono prelevati 6 topi, 3 dei quali sono infetti nel cervello e 3 per via sottocutanea. Quando si infetta il cervello, l'ago viene inserito in un punto oltre la linea che collega gli angoli posteriori e leggermente lontano dalla linea che corre lungo il centro della testa. Il sito dell'infezione viene pulito con alcol. La sospensione viene somministrata in una dose di 0,03 ml. Per evitare che l'ago penetri in profondità nel cervello, sulla sua punta viene posizionato un limitatore: un piccolo pezzo di tubo di gomma, fissato a una distanza di 2-3 mm dall'estremità dell'ago. Per l'infezione sottocutanea, la sospensione viene iniettata nell'area della punta del naso (labbro superiore) in una dose di 0,05 ml. Si forma un leggero gonfiore nel sito di iniezione della sospensione. I topi infetti vengono posti in barattoli di vetro e osservati per 30 giorni. Se il risultato del test biologico è positivo, i topi sviluppano solitamente un quadro clinico di rabbia paralitica dal 7° al 15° giorno dopo l'infezione.

Inizialmente si notano letargia, pelo arruffato e una particolare gobba, oltre a una ridotta coordinazione dei movimenti. Poi arriva la paralisi degli arti posteriori e, successivamente, degli arti anteriori, che si trasforma in paralisi generale, che termina con la morte. La durata della malattia è di 2 - 3 giorni.

Con lo sviluppo della paralisi generale, i topi vengono uccisi utilizzando l'anestesia con etere o cloroformio. La cavità cranica dei topi morti e uccisi viene aperta, il cervello viene inoculato su mezzi nutritivi, dopo di che il cervello viene rimosso, da cui vengono preparati i preparati per studi microscopici e immunobiologici.

Se non ci sono manifestazioni cliniche della rabbia nei topi infetti, vengono distrutti entro 30 giorni. I barattoli in cui erano conservati vengono accuratamente disinfettati.

Test biologico sui conigli. Per eseguire un test biologico, prendere 4 conigli del peso di almeno 1,5 kg ciascuno. 2 conigli sono infetti al cervello e 2 per via intramuscolare nella zona della coscia. La sospensione viene somministrata per via intracerebrale alla dose di 0,2 ml e per via intramuscolare alla dose di 2 ml.

Se il risultato del test biologico è positivo, i conigli si ammalano entro 16-21 giorni. La rabbia si manifesta nei conigli in forma silente e paralitica, con esito fatale. Il cervello dei conigli morti viene rimosso e vengono eseguiti ulteriori esami come per i topi infettati. I conigli vengono monitorati per 45-50 giorni. Dopo il periodo specificato, i conigli vengono distrutti. Le gabbie in cui sono stati tenuti gli animali da esperimento vengono disinfettate.

IV. STUDIO ISTOLOGICO 1

1 L'esame istologico viene utilizzato come metodo aggiuntivo

Per l'esame istologico si prelevano pezzi di corno di Ammon, corteccia cerebrale, cervelletto, midollo allungato e si fissano in una o due porzioni di acetone in modo che la durata della fissazione sia compresa tra 6 e 18 ore.

È meglio lasciare il fissaggio in acetone durante la notte. Quindi il materiale viene fatto passare attraverso due porzioni di xilene, trattenendole per 30 minuti ciascuna, e attraverso due porzioni di paraffina, per 1 ora ciascuna. Le sezioni finite vengono deparaffinate con il metodo consueto e colorate secondo Lenz o Turevich:

Colorazione di Lenz. Le sezioni vengono colorate con soluzione di eosina per 1 - 3 minuti (0,5 g di eosina vengono sciolti in 100 ml di alcol etilico a 60°). L'eosina viene rapidamente lavata via con acqua e colorata con blu di metilene di Lefler per 1 minuto, lavata con acqua, asciugata accuratamente con carta da filtro e differenziata con una soluzione di unità. Soda in alcool assoluto (5 gocce di idrossido di sodio per 30 ml di alcool) fino al rosa pallido. Sul preparato si versa una soluzione di acido acetico (1 goccia di acido acetico glaciale per 60 ml di alcool assoluto) e si mantiene fino alla comparsa di un tenue colore azzurro, si lava rapidamente con alcool e si chiarisce con xilene per 4 - 5 minuti. I corpi di Babes-Negri sono dipinti di rosso vivo con inclusioni blu, il citoplasma delle cellule gangliari è blu pallido;

Colorazione secondo Turevich. Immediatamente dopo il passaggio attraverso alcoli e acqua distillata, le sezioni deparaffinate vengono colorate con ematossilina Weigert o Ehrlich e lavate con acqua distillata. Quindi colorare con una soluzione acquosa all'1% di fucsina acida per 1 minuto e lavare accuratamente con acqua distillata fino alla comparsa di una tinta rosa pallido. Dopo il lavaggio trattare con una miscela (in parti uguali) di una soluzione acquosa satura di acido picrico (25 - 30 g di acido picrico per 1 litro di acqua distillata calda) e alcool 96°. Durante la lavorazione si osserva la rimozione di nuvole di vernice rossa e dopo 10-20 s le sezioni acquisiscono una tinta gialla. Le sezioni vengono rapidamente risciacquate in acqua e leggermente asciugate con carta da filtro. Quindi, altrettanto velocemente, passare attraverso alcool assoluto o 96°, xilene fenico, xilene puro e racchiudere nel balsamo. I corpi di Babes-Negri sono di colore rosso ciliegia, i nuclei delle cellule sono neri o blu, a seconda dell'ematossilina con cui sono colorati. I corpi di Babes-Negri sono molto diversi per forma e dimensioni, si trovano nel citoplasma e nei processi delle cellule nervose sotto forma di numerose o singole copie. Molto spesso, i corpi di Babes-Negri si trovano in grandi cellule gangliari e le cellule che li contengono non presentano segni pronunciati di degenerazione.

Spesso si trovano altre inclusioni che, a causa di una serie di caratteristiche simili, vengono talvolta scambiate per corpi di Negri. Va tenuto presente che il cervello dei gatti sani e dei topi bianchi talvolta contiene corpi inclusi acidofili non specifici. Questi corpi si differenziano dai corpi Negri per l'assenza di granuli interni e per l'omogeneità della sostanza principale.

La rabbia è caratterizzata anche da segni di encefalomielite acuta: prevalentemente intorno alle piccole vene si trovano infiltrati perivascolari, costituiti principalmente da cellule linfoidi che sembrano accoppiamenti cellulari.

Nelle cellule gangliari cerebrali possono verificarsi cromatolisi, vacuolizzazione e rigonfiamento cellulare acuto, nonché morte cellulare individuale. Nell'area delle cellule nervose danneggiate, la reazione proliferativa della glia è abbastanza costante, assumendo la forma di una vera neuronofagia, seguita dalla sostituzione delle cellule nervose con elementi della glia moltiplicata. Un tale accumulo di cellule proliferative nel sito di una cellula nervosa disintegrata è chiamato "nodulo della rabbia" - il processo di sviluppo del nodulo può talvolta essere tracciato su una sezione (1).

Il test per la rabbia nei cani prevede l'esecuzione di speciali test rapidi per determinare la presenza di specifici anticorpi antirabbica nel sangue. A volte viene utilizzato nella diagnostica complessa quando si sospetta che gli animali domestici siano infetti dal virus della rabbia. Questa malattia rappresenta una minaccia per la vita degli animali e degli esseri umani, quindi gli allevatori di cani dovrebbero capire come si manifesta questa malattia. Se si sospetta un'infezione, se l'animale ha avuto contatti con un possibile portatore di batteri, è necessario portare immediatamente l'animale in un ospedale veterinario per una diagnostica di laboratorio, senza la quale è impossibile stabilire una diagnosi accurata.

(rabbia) è una malattia acuta degli animali a sangue caldo di eziologia infettiva, causata da un virus che colpisce il sistema nervoso centrale, causando gravi disturbi nel corpo. Sfortunatamente, al momento non è stato sviluppato alcun trattamento efficace, quindi l'infezione termina sempre con la morte.

L'agente eziologico della malattia infettiva è un virus RNA (rabdovirus). Colpisce gli animali domestici e selvatici. Esiste un cosiddetto virus “naturale” e un virus “di laboratorio”.

IMPORTANTE! LA RABBIA È UNA MALATTIA DI ZOOANTROPZOONOSI, CIOÈ L'INFEZIONE VIENE TRASMESSA ALL'UMANO. I FOCOLARI DI INFEZIONE SONO OVUNQUE. LA MALATTIA HA UN CARATTERE FOCALE NATURALE.

Il serbatoio naturale del rabdovirus sono i carnivori infetti. Il virus mortale è contenuto nella saliva degli individui infetti. L'infezione avviene attraverso il contatto, attraverso morsi, penetrazione della saliva nelle abrasioni e ferite sul derma.

Dopo essere penetrato nel corpo, il virus viaggia istantaneamente lungo le vie nervose fino al cervello, al midollo spinale e alle ghiandole salivari, dove successivamente si moltiplica.

Il rabdovirus compare nella saliva degli animali infetti circa tre-sette giorni prima della comparsa dei primi sintomi. Inoltre, l’individuo infetto è già portatore del virus e rappresenta una vera minaccia per l’uomo e gli altri animali domestici. Pertanto, l'infezione da rabbia può verificarsi anche se tu o il tuo animale domestico venite morsi da un animale apparentemente sano.

Forme, stadi della rabbia

Il periodo di incubazione dura da 2-7 giorni a diverse settimane. L'intensità dei sintomi dipende dall'età, dalla resistenza, dalla difesa immunitaria, dalla virulenza e dalla concentrazione di rabdovirus nell'organismo. Questa malattia mortale negli animali si manifesta in forme silenziose, violente e meno spesso in forme atipiche.

Nei cani si osserva una forma di infezione prevalentemente violenta, la cui durata va dai sei ai dieci giorni. Ha tre fasi di manifestazione:

• Prodromico. La durata della fase malinconica non supera i due giorni. In questa fase dell’infezione si nota un cambiamento nel comportamento del cane. Gli animali sono molto depressi, sembrano depressi, si nascondono in luoghi bui e appartati, sono riluttanti al contatto e reagiscono in modo inadeguato agli stimoli.
• Maniaco(fase di eccitazione). La durata del corso non supera i tre o quattro giorni. Gli animali malati mostrano un'aggressività irragionevole nei confronti dei loro compagni animali, altri animali domestici, persone, compreso il proprietario. L'aggressività è sostituita da un comportamento affettuoso. L'animale richiede attenzione, lecca le mani e il viso della persona. Gli animali malati mangiano oggetti non commestibili. Spesso i cani scappano di casa e possono correre instancabilmente 20-30 km.
• Paralitico(depressivo). Questa fase, che dura non più di sei giorni, è caratterizzata da gravi interruzioni nel funzionamento del sistema nervoso centrale. Si notano paralisi della faringe, della laringe, crampi muscolari e spasmi. La mascella inferiore cade. Non c'è alcun riflesso della deglutizione. La saliva scorre costantemente dalla bocca. I suoni forti e il rumore dell'acqua provocano un forte panico. La coordinazione del movimento è compromessa. L'animale cade in coma e muore per esaurimento, funzionalità respiratoria e cardiaca compromessa.

Vale la pena notare che un cane rabbioso, indipendentemente dalla forma e dallo stadio della malattia, morde persone e animali senza abbaiare per l'attacco.

Forma tranquilla e atipica

La forma silenziosa della malattia è caratterizzata dall'assenza di uno stadio di eccitazione. Durata: da due a cinque giorni. Caratterizzato da depressione generale, malinconia, mancanza di risposta agli stimoli esterni. Gli animali muoiono a causa della paralisi delle strutture muscolari del corpo e della faringe. La malattia finisce sempre con la morte.

Meno comunemente, nei cani si nota una forma atipica della malattia, che si manifesta con manifestazioni atipiche e insolite per questa infezione. Si manifesta in modo acuto, subacuto, meno spesso in modo cronico (da due a tre mesi). Negli animali si notano cambiamenti nel comportamento, interruzioni nel funzionamento del sistema nervoso centrale e del tratto gastrointestinale.

Se notate un comportamento insolito del vostro animale domestico, un cambiamento nelle abitudini, manifestazioni di aggressività o se il cane è entrato in contatto o è stato morso da animali senza casa o selvatici, dovreste assolutamente portare il vostro animale domestico in un ospedale veterinario e far controllare il cane. rabbia. Non dimenticare che i sintomi aumentano spontaneamente in una certa sequenza.

Tecniche diagnostiche

Quando si effettua una diagnosi preliminare, si dovrebbero prendere in considerazione i dati dell'anamnesi, i risultati anatomici del percorso, la situazione epidemiologica e i sintomi. Vengono effettuati una serie di studi di laboratorio, istologici, microscopici, batteriologici e test rapidi.

Considerando la somiglianza dei sintomi con altre infezioni, viene effettuata la diagnosi differenziale (ELISA, PCR). È necessario escludere la malattia di Aujeszky, la peste canina e l'encefalomielite.

Importante! Se c'è il sospetto di infezione o l'animale ha morso una persona, il cane viene posto in apposite scatole isolate e le sue condizioni vengono monitorate per dieci giorni fino a quando non sono pronti i risultati del test. Se la diagnosi viene confermata, purtroppo, si procede all’eutanasia. Gli animali vengono soppressi perché non esiste una cura per questa infezione.

Una diagnosi accurata può essere stabilita solo dopo la morte degli animali. Il materiale patologico risultante viene studiato utilizzando vari metodi.

Test diagnostici di base

Il metodo più affidabile, che conferma sempre la malattia, è l'esame microscopico del biomateriale per la presenza di inclusioni specifiche nel cervello: i corpi di Babes-Negri. Situato nelle corna di Ammon.

Per rilevare un antigene specifico nel cervello, viene utilizzata una reazione precipitazione diffusa, analisi in immunofluorescenza dell'impronta corneale.

Il metodo dell'immunofluorescenza consente di diagnosticare rapidamente la presenza del virus nel corpo dei cani. Il metodo rileva l'antigene virale nel 93-97% dei casi.

Esame del sangue per gli anticorpi

Considerando che il virus si propaga lungo i tronchi nervosi, è estremamente raro che sia rilevabile nel sangue. Di norma, se si sospetta un'infezione, viene esaminato il liquido cerebrospinale per i test.

Gli studi sierologici consistono nell'effettuare un esame del sangue biochimico generale. Si nota un cambiamento nella formula dei leucociti (leucocitosi), oliguria, albuminuria, glicosuria e un aumento della concentrazione dei monociti.

Puoi testare il tuo animale domestico per la rabbia e determinare la forza dell'immunità post-vaccinazione. test per la presenza di anticorpi specifici antirabbica nel sangue. Questa procedura viene eseguita solo nei laboratori accreditati e in alcune cliniche veterinarie. Vale la pena notare che il costo di questa analisi è piuttosto elevato. I risultati dopo la procedura saranno pronti in 10-20 giorni.

Oggi vengono eseguiti due tipi di test per gli anticorpi della rabbia: RFFIT (test di inibizione rapida del fuoco di fluorescenza) e FAVN - test degli anticorpi neutralizzanti il ​​virus fluorescente, che determina il titolo anticorpale in UI/ml. Queste tecniche vengono eseguite su colture viventi di strutture cellulari con l'aggiunta di un agente infettivo alla reazione. Dai cani vengono prelevati 0,5-1 ml di siero sanguigno.

Il test viene effettuato principalmente se vuoi portare il tuo animale domestico all'estero. Molti paesi dell'UE vietano l'importazione nel proprio territorio di animali che non sono stati vaccinati contro la rabbia, nonché di cani e gatti che non dispongono dei risultati di queste analisi.

Devi fare un test anticorpale quando il sangue del tuo cane ha sviluppato anticorpi contro questa infezione. L'immunità specifica dopo l'immunizzazione si forma un mese dopo la vaccinazione. D'ora in poi potrai portare il tuo animale domestico in laboratorio per sottoporlo al test degli anticorpi contro la rabbia. Inoltre, dopo l'immunizzazione, se è necessario effettuare questo test, non dovrebbe trascorrere più di un anno dalla data della vaccinazione. Il test deve essere sostenuto entro e non oltre un mese prima della data di rivaccinazione.

Se il titolo di anticorpi antirabbica è inferiore a 0,50 UI/ml il cane viene rivaccinato. Una nuova analisi viene effettuata un mese dopo. La produzione di anticorpi protettivi dopo l'immunizzazione è influenzata da diversi fattori: razza, età, caratteristiche individuali del corpo, frequenza dell'immunizzazione antirabbica. I veterinari raccomandano di monitorare il titolo anticorpale nei cani e nei gatti dopo la vaccinazione, anche se non intendono viaggiare all'estero.

Molti proprietari portano i loro animali domestici in campagna, nella natura, nella foresta o a caccia. Non dimenticare che un cane può essere morso da animali selvatici che potrebbero essere infetti o portatori del virus.

L'unico modo per proteggere un cane da un'infezione mortale è la vaccinazione tempestiva.

In futuro, a seconda del farmaco scelto, la rivaccinazione verrà effettuata una volta all'anno. Alcuni vaccini forniscono protezione immunitaria per tre anni. Il programma ottimale di vaccinazioni e rivaccinazioni sarà selezionato dal vostro veterinario.