Il crioprotocollo è una tecnica con la quale gli embrioni precedentemente congelati vengono trasferiti nella cavità uterina. Il suo principale vantaggio è la riduzione del carico di farmaci sul corpo femminile, nonché la riduzione degli interventi medici, poiché in questo caso non è necessaria la puntura del follicolo. Di conseguenza, i crioprotocolli IVF implicano uno schema diverso per la somministrazione di farmaci ormonali rispetto alla fecondazione in vitro standard.

Come funzionano i crioprotocolli IVF?

Nella pratica odierna vengono utilizzati diversi crioprotocolli:

1. nel ciclo naturale. Ad esempio, si tratta di preparare l'endometrio senza l'intervento farmacologico. In questo caso, è necessario eseguire più volte un'ecografia, durante la quale il medico monitora la crescita del follicolo e anche un esame del sangue per il contenuto dell'ormone luteinizzante. Quando raggiunge il suo picco in condizioni naturali, viene effettuata un'iniezione di hCG e gli embrioni, precedentemente scongelati, vengono trasferiti.
2. Con la terapia sostitutiva, disponibile in due varianti: senza blocco dell'ipofisi o con blocco. In questo caso, l'attività riproduttiva viene disattivata e il medico ha il controllo completo sul ciclo mestruale creato artificialmente. Tali programmi sono consigliati per le pazienti che non hanno cicli mestruali regolari o che presentano ovaie indebolite. La preparazione per il crioprotocollo IVF secondo questo schema assomiglia e presuppone:

— blocco della ghiandola pituitaria (circa il 20° giorno del ciclo);

- assumere estrogeni prima dell'ovulazione (dal giorno 2 del ciclo);

- assumere progesterone per poter mantenere la fase luteinica;

- trasferimento di embrioni;

— supporto ormonale fino alla determinazione dell'hCG.

Si noti che se il protocollo lungo ha l'obiettivo principale di far crescere diversi follicoli, la terapia sostitutiva con il crioprotocollo ha lo scopo di far crescere l'endometrio fino a uno stato in cui diventa capace di ricevere embrioni.

Recensioni sui crioprotocolli IVF

Per illustrare la descrizione dei crioprotocolli e le difficoltà che possono causare, ecco alcune recensioni dei pazienti:

Lena:“Mi è stato prescritto un protocollo di terapia sostitutiva. A quanto ho capito, questo rende più facile per il medico monitorare l'ovulazione. Sono stati prescritti vari farmaci: Proginova, Divigel, Utrozhestan e molti altri. Il risultato era lampante, ma il motivo è diventato chiaro solo dopo il test hCG. Abbiamo fatto un esame più approfondito e abbiamo trovato un utero a forma di sella.

Natalia:“Lo abbiamo fatto seguendo un ciclo naturale. Ogni tre giorni facevo un'ecografia per controllare l'ovulazione. Mi hanno collegato intorno al quindicesimo giorno. Non c’è stato alcun risultato, non hanno attecchito, ho capito che nel ciclo naturale è una roulette. Farò la seconda crioterapia con terapia sostitutiva”.

Svetlana:“Hanno fatto la crioterapia con il blocco del Diferelin. Ho anche fatto pretrattare gli embrioni perché la causa dell’infertilità sono anomalie cromosomiche e sono stati testati utilizzando la tecnologia più recente. Questo controllo è durato circa una settimana, quindi non è stato possibile ripiantarle fresche; quelle congelate sono state ripiantate. Alla fine, un embrione impiantato, sono felice!”

Maša:“In due anni ci sono stati tre protocolli, tutti infruttuosi, gli embrioni non hanno attecchito. Io e il dottore abbiamo deciso di fare un'isteroscopia prima della crioterapia per capire cosa stava succedendo. Tieni presente che dopo l'isteria, l'endometrio deve riprendersi per almeno due mesi, quindi non puoi fare la crioterapia subito dopo."

Valeria:“È molto importante come ti comporti dopo il trasferimento. Non puoi esercitarti, ma non consigliano di sdraiarsi senza muoversi. Assicurati di avere riposo sessuale e di assumere tutti i farmaci prescritti. Prima del test hCG, il medico è tenuto a concedere un congedo per malattia, quindi restate a casa”.

Speranza:“In generale nessuno può dire con certezza quale sarà il successo del congelamento e come verranno poi scongelati gli embrioni. Per la prima volta entrambi si sono scongelati perfettamente e sono diventati ancora più buoni. E la seconda volta, uno dei due è morto”.

Storia del paziente sul crioprotocollo

Statistiche dei crioprotocolli IVF nel 2013

In generale, questo è un metodo di grande successo che consente ulteriori tentativi di fecondazione in vitro per quelle coppie per le quali i medici sono riusciti a far crescere diversi embrioni di alta qualità, ma non sono riusciti a mettere radici. Tuttavia, in generale, le statistiche dei crioprotocolli IVF sono leggermente inferiori a quelle di quelli convenzionali.

Pertanto, nel 2013, l’ICRM ha registrato che nel corso di diversi anni la fecondazione in vitro riuscita è stata del 40-50%, mentre la quota dei protocolli di fecondazione in vitro riusciti è stata di circa il 30%. Gli esperti concordano sul fatto che è necessario concentrarsi principalmente sul medico, sulla sua esperienza e sul successo nel lavorare con gli embrioni congelati.

Per molte coppie la fecondazione in vitro è l’unica speranza per avere un figlio. In preparazione alla fecondazione in vitro, sia la donna che l'uomo si sottopongono a numerosi esami, fanno una serie di test e infine finiscono in uno studio dove il medico discute con loro i dettagli dell'imminente procedura e, tra le altre cose, può consigliare il ricorso a un crioprotocollo. In questo articolo esamineremo cos'è questo protocollo, quali sono i suoi vantaggi e svantaggi.

Cos'è un crioprotocollo?

Come sapete, durante la procedura di fecondazione in vitro, da una donna possono essere prelevati diversi ovuli, che verranno successivamente fecondati con successo. Allo stesso tempo, solo 1-2 embrioni possono essere trasferiti a una donna. Gli embrioni rimanenti possono essere conservati mediante crioconservazione e successivamente utilizzati per la rifecondazione in caso di fecondazione in vitro fallita o per una nuova gravidanza dopo la nascita del primo bambino.

La crioconservazione è una procedura che consente di mantenere vitali gli embrioni e successivamente di utilizzarli per il reimpianto. Solo gli embrioni di alta qualità del quinto giorno vengono selezionati per la crioconservazione. La durata di conservazione degli embrioni congelati è teoricamente illimitata, poiché alla temperatura di congelamento (meno 196 gradi) il metabolismo si ferma. Il costo di questa procedura, di norma, non è incluso nell'elenco dei servizi pagati con l'assicurazione medica obbligatoria.

Per la crioconservazione viene utilizzato il congelamento lento (programma) e veloce ().

La vetrificazione è la transizione di un liquido allo stato vetroso quando la temperatura diminuisce.

La tecnica del congelamento lento era popolare in precedenza, ma il metodo di vitrificazione è ampiamente utilizzato nella medicina moderna, poiché dopo lo scongelamento degli embrioni congelati con questo metodo, le possibilità di una gravidanza di successo sono molto alte.

Pertanto, il crioprotocollo è il trasferimento di embrioni congelati nella cavità uterina.

Tipi di crioprotocolli IVF

Esistono 3 tipi di crioprotocolli IVF:

• nel ciclo naturale;
• sulla terapia ormonale sostitutiva;
• in un ciclo stimolato.

Crioprotocollo in un ciclo naturale

Questo tipo di crioprotocollo è il più delicato per una donna e il più laborioso per un riproduttologo. Con questo metodo, la stimolazione di più follicoli è assente o ridotta al minimo, ma è possibile utilizzare l'indometacina o i farmaci antagonisti dell'ormone di rilascio delle gonadotropine per prevenire l'ovulazione prematura.

La fecondazione in vitro con ciclo naturale è indicata per le donne ad alto rischio di iperstimolazione o, al contrario, con una scarsa risposta alla stimolazione:

• il 1 ° giorno del ciclo mestruale inizia l'ecografia degli organi pelvici con follicolometria e contemporaneamente viene monitorata la condizione dell'endometrio;
• vengono effettuati test ormonali;
• possibile effettuare;
• 2-3 giorni dopo il picco ovulatorio, gli embrioni scongelati vengono trasferiti.

Lo svantaggio del crioprotocollo in un ciclo naturale è il rischio di perdere il momento dell'ovulazione o di ottenere un ciclo in cui non c'è il follicolo dominante o si forma una cisti del corpo luteo. Tutto ciò impedisce l'impianto dell'embrione e il normale corso della gravidanza.

Inoltre, questo schema è possibile solo se c'è un ciclo ovulatorio.

L'efficacia della fecondazione in vitro in un ciclo naturale è del 2-6%.

Crioprotocollo per la terapia ormonale sostitutiva

A differenza del precedente, il crioprotocollo per la TOS non dipende dall’ovulazione stessa della donna, ma è accompagnato dall’uso di farmaci ormonali.

Il crioprotocollo per la TOS può essere:

• con blocco della ghiandola pituitaria con farmaci ormonali;
• senza bloccare la ghiandola pituitaria.

Con questo schema si crea un ciclo mestruale artificiale con la correzione dei livelli ormonali attraverso l'uso di farmaci.

Questo tipo di crioprotocollo è possibile con:

• cicli mestruali irregolari;
• mancanza di ovulazione;
• assenza congenita o acquisita di ovaie;
• oltre i 35 anni di età.

Il crioprotocollo per la TOS con blocco ipofisario è il più carico, perché quando viene eseguito gli agonisti del GnRH vengono prescritti il ​​20° giorno del ciclo mestruale. Dopo la successiva mestruazione, viene prescritto un farmaco estrogeno da 2-3 giorni. Successivamente, i cambiamenti nello spessore endometriale vengono monitorati sotto controllo ecografico con Doppler. Quando l'endometrio raggiunge lo spessore richiesto, viene prescritto il progesterone. Gli embrioni scongelati vengono trasferiti dopo 3-5 giorni. Il supporto ormonale del progesterone continua per 8-10 settimane fino alla conferma della gravidanza.

Il crioprotocollo senza blocco ipofisario differisce dalla prima opzione solo perché non prevede l'uso di farmaci agonisti del GnRH.

Crioprotocollo in ciclo stimolato

Il crioprotocollo in ciclo stimolato viene utilizzato per:

• mancanza di effetto della TOS;
• crescita insufficiente dell’endometrio.

Con questo tipo di crioprotocollo, quando 1 o 2 follicoli sono maturati e l'endometrio ha uno spessore sufficiente, viene somministrato un farmaco hCG. Gli embrioni scongelati vengono trasferiti dopo 2 o 3 giorni.

Pro e contro del crioprotocollo

Il crioprotocollo IVF presenta numerosi vantaggi:

• intervento farmacologico minore nel ciclo mestruale di una donna;
• assenza;
• reimpianto dell'embrione in qualsiasi momento dopo la preparazione;
• la possibilità di una nuova gravidanza in futuro;
• costi materiali relativamente insignificanti rispetto ad altri tipi di fecondazione in vitro.

Tra le carenze, va notato:

• circa il 70% degli embrioni sono vitali dopo lo scongelamento;
• minore efficienza del crioprotocollo rispetto all’utilizzo di celle “fresche”.

Indicazioni per il crioprotocollo IVF

Tra le indicazioni per il crioprotocollo IVF ci sono:

• la presenza di embrioni di alta qualità dopo la procedura di fecondazione in vitro al fine di preservare il materiale genetico e trasferirli nella cavità uterina in caso di tentativo di fecondazione in vitro o di nuova gravidanza fallito;
• impossibilità di effettuare la fecondazione in vitro nel ciclo previsto a causa di controindicazioni della madre. Tale controindicazione potrebbe essere, ad esempio, il cancro e la chemioterapia imminente. In questo caso, alla donna viene offerto di congelare l'embrione per trasferirlo dopo aver subito il trattamento. La crioconservazione lascia la possibilità di scegliere il momento migliore per il trasferimento della blastocisti, che rappresenta il suo indubbio vantaggio.

Crioprotocollo dopo una fecondazione in vitro senza successo

Il crioprotocollo dopo una fecondazione in vitro senza successo consente di evitare stress ripetuti sul corpo femminile sotto forma di stimolazione ovarica e puntura dei follicoli. Gli embrioni congelati rimangono vitali per lungo tempo (nella pratica mondiale, ci sono casi di trasferimento di embrioni dopo 18 anni di congelamento).

Lo schema del crioprotocollo viene selezionato individualmente per ciascun paziente. Le possibilità di una gravidanza riuscita con un crioprotocollo sono paragonabili a quelle di altri metodi di fecondazione in vitro.

Per riassumere, il crioprotocollo è una buona opzione per le coppie che pianificano una gravidanza utilizzando la fecondazione in vitro. I bambini nati con il crioprotocollo non sono diversi dai loro coetanei e la gravidanza dopo questo metodo è generalmente migliore rispetto ad altre gravidanze IVF, poiché è possibile scegliere un momento favorevole al suo inizio.

Secondo le statistiche moderne, solo una donna su tre ha avuto successo al primo tentativo del protocollo IVF.

Per la restante metà dell'umanità si prevede di sottoporsi nuovamente a questa procedura.

In questa situazione, viene utilizzato un crioprotocollo dopo una fecondazione in vitro senza successo. Grazie a questo metodo specializzato, il processo è stato semplificato, cioè il trattamento è più facile da tollerare e offre maggiori possibilità di successo della gravidanza.

Indipendentemente dalle incertezze su quali protocolli di crioconservazione prevarranno, il futuro sembra puntare verso un maggiore successo e coerenza con la crioconservazione degli embrioni. La preparazione dell’utero in cui verranno infine collocati gli embrioni scongelati sembra essere un’area di ricerca meglio affrontata, poiché i cicli di sostituzione sia naturale che ormonale forniscono livelli comparabili di ricettività nelle donne con ciclo naturale, sebbene differiscano nel livello di praticità.

In effetti, i cicli preparati artificialmente possono persino eliminare efficacemente l’uso di agonisti dell’ormone di rilascio delle gonadotropine per ridurre i costi e migliorare la praticità senza sacrificare il successo. Perché congelare gli embrioni allo stadio di blastocisti?

Il ciclo abbreviato del programma è garantito dalla presenza di embrioni conservati che sono stati congelati nella fase precedente. Quando sarà possibile effettuare la crioconservazione dopo una fecondazione in vitro fallita, la analizzeremo in modo più dettagliato.

Caratteristiche della procedura ripetuta

Il programma standard di fecondazione in vitro, effettuato per la prima volta, comprende una procedura chiamata stimolazione ormonale dell'ovulazione. Ciò è necessario in tutti i casi tranne la fecondazione in vitro in ciclo naturale.

Nel giro di un anno circa furono emersi i primi progressi dall'uso del glicerolo per la crioconservazione delle blastocisti umane. Le variazioni di questi protocolli rimangono gli standard attuali per la crioconservazione degli embrioni umani. È sempre più visto come l’unico, o almeno il principale, stadio in cui è possibile congelarsi. La ragione di ciò è che se si vuole ottimizzare la selezione delle blastocisti, il congelamento degli embrioni in una fase precedente ridurrà il pool da cui è possibile selezionare blastocisti fresche per il trasferimento.

Le preoccupazioni che gli embrioni vengano in qualche modo "persi" nella coltura estesa perché nel complesso vengono utilizzati meno embrioni rispetto agli approcci precedenti che utilizzavano trasferimenti di due e tre giorni saranno mitigati da una maggiore consistenza della coltura estesa. L'obiettivo centrale del trasferimento di blastocisti in ogni caso è ridurre il numero di embrioni per trasferimento mantenendo buoni risultati della gravidanza.

Ciò contribuisce alla maturazione di un numero maggiore di ovuli, di cui ce ne sono molti da utilizzare nel ciclo attuale, quindi quelli rimanenti vengono congelati per essere utilizzati nella procedura di criotrasferimento dopo una fecondazione in vitro fallita. Questa opzione ha un effetto benefico sulla salute e sulle finanze delle donne.

Inoltre, il vantaggio più importante è che il biomateriale congelato non è in grado di “invecchiare”, poiché il metabolismo si ferma completamente.

Come funziona il crioprotocollo?

Congelamento regolare delle blastocisti. Tuttavia, diverse cliniche hanno riscontrato risultati incoerenti con il protocollo più recente e hanno avviato studi varianti per migliorare la coerenza. Per essere onesti, gran parte di ciò è probabilmente dovuto all’inesperienza di molti embriologi, sia nel selezionare blastocisti di qualità sufficiente da congelare, sia nel comprendere le complessità della crioconservazione e gli effetti che anche il più piccolo cambiamento, non importa quanto involontario, può avere consistenza .

Sono conservati in cannucce di plastica appositamente progettate ed etichettate, poste in azoto liquido, che ne garantisce la sicurezza e l'integrità a lungo termine. Non sarà difficile scongelarli, con un trauma minimo per loro.

Molte donne si interrogano sul protocollo IVF criogenico: quando possono iniziare dopo un protocollo fallito.

Come aumentare le possibilità di successo della fecondazione in vitro nel ciclo naturale?

La pratica più comune per migliorare la consistenza era quella di reintrodurre una o due fasi di concentrazione di glicerolo nello scongelamento con una o due diluizioni aggiuntive di saccarosio. Non è un cambiamento importante e non si tratta di un aumento eccessivo del tempo. Camere piccole ma non hanno cambiato nulla nel loro approccio.

Sorprendentemente, molte delle blastocisti inizialmente sopravvissero, ma dopo la successiva coltura per diverse ore le cellule diventarono sempre più degenerate. Successivamente, senza alcuna modifica oltre allo scongelamento del protocollo, abbiamo raggiunto un tasso di criosopravvivenza dell’80%, con cinque gravidanze su 13 scongelamenti. Molti fattori hanno chiaramente un impatto su queste esperienze, non ultime le differenze nei “mezzi di contenimento”, il congelamento in cannucce, fiale o ampolle e forse anche sotto forma di congelatore programmabile.

Non ci sono restrizioni speciali sui tempi, questo può essere fatto dopo un ciclo. Non puoi farlo subito per il prossimo, perché il corpo ha bisogno di riposare e avere tempo per prepararsi.

Se gli embrioni precedentemente congelati sono di buona qualità, non saranno necessari i seguenti passaggi:

Successivamente, abbiamo osservato altre variazioni nei risultati indipendentemente dalla qualità della blastocisti durante lo scongelamento rispetto al protocollo di sostituzione ormonale. In particolare, i cambiamenti nella supplementazione di progesterone sembravano avere un effetto profondo, tanto che con Crinone abbiamo ottenuto solo 3 gravidanze permanenti dopo uno scongelamento di 25 cicli con un tasso di impianto del 6%. Anche in questo caso i numeri sono piccoli e sembrano contraddire alcuni rapporti in letteratura che utilizzano geni o supposte del progesterone vaginale.

Principali vantaggi dei crioprotocolli

Ciò non serve a promuovere una mancanza di fiducia negli altri risultati, ma piuttosto a evidenziare la natura multifattoriale della riproduzione assistita in generale e come il più piccolo cambiamento nella pratica clinica possa avere un impatto significativo sui risultati.

1. stimolazione del processo di ovulazione;
2. puntura delle ovaie per estrarre gli ovociti;
3. concimarli;
4. coltivazione di embrioni.

Dopo una fecondazione in vitro senza successo, quando è possibile sottoporsi a un crioprotocollo, nel numero delle procedure è inclusa solo la fase preparatoria per l'endometrio. Successivamente viene selezionato il giorno più adatto per il successo dell’impianto e gli embrioni vengono trasferiti. Per determinare la data, il medico può fare affidamento sui risultati dei test ormonali e su altri parametri.

La blastocisti si schiude dopo lo scongelamento. Il congelamento degli ovociti umani è molto simile in linea di principio al congelamento precoce degli embrioni, ma con alcune differenze chiave adottate per garantire risultati più coerenti. Una volta caricate tutte le fiale, inserirle contemporaneamente nel Cryo-10. Fare clic sul pulsante Esegui all'avvio del timer. Cryo-10 passerà alla temperatura di semina. Dopo 2 minuti non dovrebbero essere rimasti cristalli. Portali al pozzo n. 1 quando li trovi. Trasferire gli embrioni nel pozzetto n. 2 e incubare per 3 minuti. Trasferire gli embrioni nel pozzetto n. 3 e lasciarli riposare per 2 minuti.

• Mettere in glicerolo al 5% per 8 minuti glicerolo al 10% saccarosio 2M per 8 minuti.
• Aggiungere 425 g di saccarosio a 50 ml di soluzione cryo#.
• Trasferire nel pozzetto n. 2 e incubare per 2 minuti.
• Trasferire gli embrioni nel pozzetto n. 3 e incubare per 10 minuti.
• Trasferire gli embrioni nel pozzetto n. 4 e impostare il timer per 10 minuti.
• Quando gli embrioni si depositano sul fondo dei piatti di caricamento nelle fiale.
• Lasciare trascorrere almeno 4 ore tra lo scongelamento e il trasferimento degli embrioni.
• Agitare delicatamente le fiale a bagnomaria.

Kuleshova L. et al.: Nascita dopo vitrificazione di un piccolo numero di ovociti umani.

Importante! Durante la procedura, la fase endometriale deve essere sincronizzata con lo sviluppo dell'embrione.

Se necessario, il crioprotocollo può essere combinato con la terapia ormonale sostitutiva. Molto spesso questo è necessario per l'infertilità endocrina. Potrebbe anche essere necessario eseguire la procedura in un ciclo con stimolazione.

Controindicazioni

Esistono diversi motivi per cui è impossibile eseguire questo processo con i propri embrioni.

Vengono creati più embrioni, alcuni dei quali non vengono immediatamente trasferiti nell'utero, creando la necessità di protocolli di crioconservazione migliorati. Un protocollo può comportare la crescita di embrioni per un altro stadio di sviluppo, consentendo di crioconservare solo gli embrioni con un comprovato potenziale di sviluppo.

Qui, abbiamo esaminato la sopravvivenza allo scioglimento, l'impianto e i tassi di fertilità degli embrioni crioconservati in diverse fasi. Abbiamo esaminato la sopravvivenza allo scioglimento, l'impianto e i tassi di fertilità degli embrioni crioconservati allo zigote, al terzo giorno o agli embrioni allo stadio di blastocisti.

• Debole risposta alla stimolazione precedente.
• Nessun embrione extra da congelare.
• La presenza di embrioni il cui sviluppo è stato insufficiente, per cui non sono sopravvissuti fino alla data del trasferimento.

Se queste situazioni si sono già verificate e si sono ripetute più di una volta, il successivo crioprotocollo potrà avere successo solo quando la procedura verrà eseguita con embrioni donati.

Come funziona il crioprotocollo per la TOS?

È stata eseguita l'analisi della varianza seguita dal test esatto di Fisher per confrontare la sopravvivenza post-scongelamento, l'impianto e il tasso di natalità tra i tre gruppi. I tassi di fertilità erano simili tra i tre gruppi. La crescita degli embrioni allo stadio di blastocisti prima della crioconservazione è associata a un minor numero di embrioni congelati ma non compromette le possibilità delle pazienti di ottenere una gravidanza.

Parole chiave: blastocisti, crioconservazione di embrioni, trasferimento di embrioni congelati, impianto, fecondazione in vitro, congelamento lento, zigote. Prima nascita da una blastocisti scongelata. L'episodio della fase di scissione si riferisce ad un embrione con 4-8 cellule di dimensioni approssimativamente uguali.

Come prepararsi per il processo

Quando si effettua la crioconservazione dopo una fecondazione in vitro fallita, la preparazione deve essere effettuata in modo molto più accurato. Solo questo ti aiuterà ad avere maggiori possibilità di un risultato positivo.

Per assicurarsi che le ovaie siano state ripristinate dopo l'ovulazione, che ha preceduto la stimolazione, è necessario:

IVF senza stimolazione

Una blastocisti si riferisce a un embrione cresciuto fino a 5 o 6 giorni che ha una cavità blastocele distinta, una massa cellulare interna e un trofocoderma. Lo scopo di questo studio era di determinare la relazione tra gli stadi di sviluppo al momento della crioconservazione e i successivi tassi di sopravvivenza e impianto.

Protocolli di iperstimolazione ovarica controllata

Per tutti i pazienti è stato ottenuto il consenso informato alla crioconservazione e al successivo scongelamento. Lo studio è stato approvato dall’Ufficio per la revisione della ricerca umana. Sono state escluse le pazienti che utilizzavano ovociti ottenuti da donatori. La maturazione follicolare finale è stata indotta da un'iniezione di α-coriogonadotropina da 250 μg quando almeno tre follicoli avevano un diametro superiore a 16 mm.

1. superare prove per le quali è prevista la prescrizione;
2. sottoporsi a esami a discrezione del medico;
3. e, soprattutto, scoprire la fonte del fallimento della fecondazione in vitro.

Ciò richiede la consultazione di un riproduttologo e, se necessario, di un embriologo, che studierà attentamente i metodi di stimolazione precedenti.

Successivamente prescriveranno un'ecografia e altri esami necessari per entrambi i coniugi. Ciò aiuterà a determinare il prossimo piano di lavoro. In alcuni casi può essere necessario un esame e una consultazione con esperti di altri settori.

Trasferimento di embrioni congelati in ciclo naturale

Il prelievo transvaginale degli ovociti è stato eseguito 36 ore dopo l’iniezione di α-coriogonadotropina. Gli ovociti sono stati inseminati 4-6 ore dopo il recupero mediante cocoltura con sperma mobile o iniezione intracitoplasmatica di sperma, a seconda della qualità dello sperma. Il trasferimento è stato eseguito il giorno 3 o ritardato fino al giorno 5 se erano disponibili per il trasferimento più di cinque embrioni a 8 cellule al giorno. Dopo una coltura estesa, le blastocisti che si sviluppavano nei giorni 5 o 6 venivano crioconservate per un uso successivo.

Quali sono le possibilità di un esito positivo?

Il crioprotocollo IVF ha una probabilità maggiore rispetto alla gravidanza in un nuovo ciclo, come mostrano le ultime statistiche mediche.

Ciò è facilitato da una preparazione lunga e approfondita, che comprende:

• sincronizzazione precisa dell'endometrio con lo stadio di sviluppo dell'embrione;
• mancanza di stimolazione dell'ovulazione mediante ormoni;
• tenendo conto delle ragioni dei precedenti fallimenti;
• carico di farmaci inferiore, poiché vengono prescritti farmaci necessari solo per la fase preparatoria dell'endometrio.

Inoltre, la ragione dell’elevato tasso di successo del crioprotocollo è che solo gli embrioni di altissima qualità vengono selezionati per la crioconservazione iniziale.

È facile perdere il momento dell'ovulazione naturale

Se si notava che il rivestimento uterino era inferiore a 5 mm, venivano somministrati per via vaginale ulteriori 2-4 mg di estradiolo. La gravidanza è stata inizialmente determinata dalla concentrazione sierica di gonadotropina corionica umana e confermata mediante ecografia transvaginale. Tutte le donne incinte hanno continuato la terapia con estradiolo e progesterone fino alla 9a settimana di gravidanza.

Metodi di crioconservazione degli embrioni e protocolli di trasferimento

Nel nostro programma, la crioconservazione degli embrioni è stata storicamente eseguita allo stadio di zigote, quando sono stati creati più di 15 zigoti. Sono stati crioconservati solo adesivi e blastocisti di buona qualità. I crioprotettori sono stati rimossi mediante diluizione seriale in soluzioni di scongelamento di embrioni o soluzioni di blastocisti contenenti concentrazioni decrescenti di crioprotettori. Gli zigoti sono stati scongelati 2 giorni prima del trasferimento previsto per il giorno 3 e lasciati crescere.

Nota! Dopo una fecondazione in vitro fallita, quando è possibile eseguire la crioterapia, il tasso di gravidanza può raggiungere il 70%! Questo è molto più di qualsiasi altro programma di fecondazione in vitro.

Conclusione

Negli ultimi decenni, migliaia di donne sono riuscite a rimanere incinte utilizzando con successo un crioprotocollo.

Il tasso di sopravvivenza allo scongelamento è stato calcolato come il numero di embrioni vitali o in via di sviluppo il giorno del trasferimento diviso per il numero totale di scongelamenti. Per questo studio, il tasso di impianto è stato definito come il numero di sacchi gestazionali per numero di embrioni trasferiti. Un parto vivo era definito come un feto che emerge dal corpo della madre e mostra segni di vita.

Crioprotocollo

Crioprotocollo

Crioprotocollo – trasferimento nell’utero degli embrioni congelati nel ciclo precedente.

L’applicazione dei crioprotocolli è ampia:

1. Una fornitura di embrioni in caso di tentativo fallito (in caso di fallimento è possibile scongelare gli embrioni conservati e seguire il programma in un ciclo abbreviato);
2. Nel caso in cui una coppia intenda avere uno o più figli in futuro;
3. Ci sono anche alcuni casi in cui l’endometrio o il contesto ormonale della donna non sono pronti per il trasferimento dell’embrione immediatamente dopo la fecondazione e si consiglia di attendere 1 o più cicli prima del trasferimento.

Accettiamo embrioni da altre cliniche!

Il crioprotocollo può essere effettuato sia con preparazione dell'endometrio che in ciclo naturale (senza preparazione ormonale dell'endometrio). In questo caso, il riproduttologo si concentra sui risultati dei test ormonali, sulla presenza dell'ovulazione o sul valore dell'hCG.

Prima del trasferimento dell’embrione si tiene rigorosamente conto del giorno e dello stadio dell’embrione durante la crioconservazione e di conseguenza l’endometrio viene preparato per lo stesso giorno.

L’utilizzo di embrioni congelati presenta numerosi vantaggi: il programma del criociclo è più economico, è meno capiente e il biomateriale congelato non subisce “invecchiamento” perché il metabolismo si ferma completamente.

Statistiche del crioprotocollo

Secondo gli ultimi dati scientifici, la probabilità di gravidanza in un criociclo è maggiore che nei cicli “freschi”. Il tasso di gravidanza presso VitroClinic nei programmi di crioprotocollo raggiunge il 70%.

Ciò si spiega con il fatto che gli embrioni della migliore qualità, sviluppati prima dei 4-5 giorni, vengono inizialmente selezionati per il trasferimento dalla crioconservazione.

Inoltre, nei cicli senza stimolazione con gonadotropine, si ottiene meglio la sincronizzazione dell'endometrio e dello stadio di sviluppo dell'embrione, il che porta ad un aumento della frequenza di impianto.

Pertanto, l’efficacia del crioprotocollo è superiore a qualsiasi altro programma di fecondazione in vitro.

Le statistiche del crioprotocollo per la TOS (sul blocco), nell'EC e nel ciclo stimolato sono approssimativamente le stesse. Le probabilità di un crioprotocollo saranno più elevate nelle donne più giovani (sotto i 35 anni) con infertilità dovuta al fattore tubarico.

Schemi di crioprotocolli

Il diagramma del crioprotocollo è la sequenza di utilizzo di farmaci ormonali per la maturazione endometriale prima del trasferimento di embrioni precongelati.

Il crioprotocollo nella fecondazione in vitro viene utilizzato abbastanza spesso, perché... Quasi tutte le persone che si sono sottoposte alla stimolazione dell'ovulazione rimangono con embrioni “extra”.

Il crioprotocollo consente, in caso di tentativo fallito di fecondazione in vitro, di trasferire embrioni senza stimolare l'ovulazione e, in caso di tentativo riuscito, di conservarli per il futuro. Esistono due metodi di congelamento: congelamento lento (software) e veloce (vetrificazione).

VitroClinic utilizza il metodo avanzato di vetrificazione (congelamento flash), grazie al quale la qualità delle cellule rimane al livello originale.

La vitrificazione consente di congelare gli embrioni in qualsiasi fase dello sviluppo ed è minimamente traumatica per loro.

Gli embrioni congelati vengono conservati in speciali cannucce di plastica etichettate poste in azoto liquido. Gli embrioni possono essere conservati in questo stato per lungo tempo. Nelle pubblicazioni sono riportate gravidanze avvenute dopo il trasferimento di embrioni conservati per più di 10 anni.

Indicazioni per la crioconservazione degli embrioni:

• Disponibilità di embrioni di buona qualità rimanenti dopo il trasferimento per il successivo utilizzo nei programmi di fecondazione in vitro (se la paziente desidera avere un altro figlio o il precedente tentativo di fecondazione in vitro non ha avuto successo);
• Rifiuto di trasferire gli embrioni in questo ciclo a causa delle condizioni cliniche della paziente (rischio di sviluppare la sindrome da iperstimolazione ovarica (OHSS), infezione, accumulo di embrioni con una “scarsa risposta”).

Al momento opportuno, la paziente può utilizzare gli embrioni conservati per sottoporsi al crioprotocollo

Il vantaggio principale del crioprotocollo è il minor carico di farmaco sul corpo della donna e l’assenza della necessità di puntura del follicolo. Inoltre, il costo del crioprotocollo è significativamente inferiore al costo di un programma di fecondazione in vitro standard.

Crioprotocollo in un ciclo naturale (NC)

Il crioprotocollo a ciclo naturale (NC) è un programma di fecondazione in vitro con embrioni crioconservati, che viene eseguito quasi senza l'uso di farmaci ormonali, in condizioni il più vicino possibile a quelle naturali.

In questo caso, alcuni giorni prima e dopo il trasferimento dell'embrione, vengono prescritti solo preparati a base di progesterone per sostenere la fase luteinica.

Il crioprotocollo del ciclo naturale (NC) è il più favorevole per il corpo della donna, ma è estremamente difficile per il medico e richiede da lui sufficiente esperienza. In un tale crioprotocollo, la preparazione dell'endometrio per ricevere un ovulo avviene praticamente in condizioni naturali senza l'uso di farmaci ormonali e il supporto farmacologico per la fase luteinica è minimo.

Indicazioni per il crioprotocollo nel ciclo naturale (NC):

• pazienti che hanno la propria ovulazione;
• giovane età dei pazienti;
• ciclo mestruale regolare.

Come funziona il crioprotocollo presso la CE:

Durante l'intero ciclo, il medico monitora la crescita del follicolo dominante e dell'endometrio mediante ultrasuoni. Se necessario, vengono determinati gli ormoni nel sangue. Vengono confrontati i dati degli ultrasuoni e dei test, da cui si trae una conclusione generalizzata sullo stato del corpo in un segmento specifico del ciclo.

Pochi giorni dopo la conferma dell’ovulazione, gli embrioni scongelati vengono trasferiti nell’utero.

Questo tipo di crioprotocollo è spesso consigliato alle giovani donne che hanno un ciclo mestruale stabile e un'ovulazione regolare.

I riproduttori di VitroClinic hanno una vasta esperienza nella conduzione di crioprotocolli nel ciclo naturale.

Crioprotocollo per la terapia ormonale sostitutiva (HRT)

Quando si utilizza un crioprotocollo per la terapia ormonale sostitutiva (HRT), viene creato un ciclo mestruale completamente artificiale, durante il quale l’attività ormonale del corpo viene integrata con l’aiuto di determinati agenti ormonali. A volte viene anche chiamato crioprotocollo sul blocco (dei propri ormoni).

Questo schema consente al medico di controllare quasi completamente i processi riproduttivi nel corpo di una donna. Un crioprotocollo per la TOS è indicato per le donne con ciclo mestruale irregolare, mancanza di ovulazione, diminuzione della riserva ovarica o assenza di ovaie.

Indicazioni per la prescrizione di un crioprotocollo per la TOS:

• la paziente non ovula;
• donne anziane (dopo 35 anni);
• ciclo mestruale irregolare;
• spessore insufficiente dell'endometrio nel ciclo naturale;
• funzione ovarica ridotta o impoverita

Schema del crioprotocollo per la terapia ormonale sostitutiva:

• assunzione di farmaci estrogeni sotto controllo della crescita endometriale mediante ultrasuoni (inizia dai primi giorni del ciclo mestruale);
• assunzione di farmaci a base di progesterone (prescritti quando l'endometrio raggiunge il suo spessore e struttura ottimali);
• trasferimento degli embrioni (giorno selezionato in base alla fase in cui gli embrioni sono stati congelati).
• supporto ormonale dopo il trasferimento (periodo a discrezione del medico).

La durata dell'uso dei farmaci ormonali è determinata individualmente dallo specialista della fertilità presente.

Come funziona il crioprotocollo per la terapia ormonale sostitutiva:

In precedenza venivano utilizzati crioprotocolli lunghi e corti. Il crioprotocollo IVF lungo non viene più utilizzato.

I crioprotocolli brevi si sono dimostrati più efficaci. Si effettuano così:

Dal 2 al 5 giorno del ciclo mestruale, la paziente inizia ad assumere farmaci contenenti estrogeni sotto il controllo della crescita endometriale mediante ultrasuoni fino al momento dell'ovulazione pianificata. Dopo che l'endometrio ha raggiunto lo spessore e la struttura più adatti all'impianto, vengono prescritti preparati di progesterone per supportare la fase luteinica.

Il terzo o il quinto giorno successivo, gli embrioni scongelati vengono trasferiti nell'utero e il supporto ormonale continua fino all'esecuzione di un test di gravidanza. In caso di test positivo, il supporto continua fino alla 10-12 settimana di gravidanza e viene gradualmente interrotto sotto il controllo degli ormoni del sangue.

Grazie alla tecnologia IVF, che consente la fecondazione al di fuori del corpo, le persone che hanno problemi di concepimento possono diventare genitori. All'attuale livello di sviluppo della medicina riproduttiva, l'efficacia della fecondazione in vitro è di circa il 50% se una donna ha meno di 30 anni. Dopo i 40 anni, questa percentuale si riduce a 15. Il crioprotocollo dopo una fecondazione in vitro fallita consente ripetuti tentativi di trasferimento di embrioni, congelandoli fino al momento desiderato, salvando la donna dalla stimolazione artificiale dell'ovulazione e dall'anestesia generale, utilizzate per il prelievo degli ovuli.

L'essenza del crioprotocollo

Un crioprotocollo è un tipo di fecondazione in vitro, un programma per preservare gli embrioni mediante crioconservazione con successivo trapianto. Durante la puntura ovarica vengono solitamente raccolti diversi ovociti. Dopo la fecondazione, gli embrioni vengono trasferiti nell'utero. Per evitare gravidanze multiple, secondo l'ordinanza del Ministero della Salute, il loro numero in un trapianto non dovrebbe superare i 4, ma in pratica raramente ne vengono trapiantati più di 2.

Per garantire che le rimanenti blastocisti di alta qualità non scompaiano e rimangano vitali fino ai tentativi successivi, nei giorni 3-5 vengono sottoposte a crioconservazione - conservazione a bassa temperatura a –196 °C. Gli embrioni di 5 giorni attecchiscono meglio degli embrioni di 3 giorni, ma non tutti gli esemplari sopravvivono fino a questa data.

Il congelamento consente, in caso di fallimento della fecondazione in vitro, di ricorrere successivamente al trapianto del biomateriale esistente, perché una volta scongelato ripristina le sue funzioni biologiche ed è pronto per il trasferimento nell'utero. Il medico decide quanto tempo deve trascorrere tra la fecondazione in vitro senza successo e il criotrasferimento. Se non ci sono ostacoli, il reimpianto può essere effettuato già dal mese prossimo.

Tipi di criotrasferimenti

Il criotrasferimento può essere effettuato durante un ciclo naturale o utilizzando la terapia ormonale sostitutiva se una donna ha problemi di ovulazione. In quest'ultimo caso, i medici prendono il controllo del ciclo attraverso i farmaci. La scelta del tipo di programma viene determinata da uno specialista in base alla regolarità del ciclo, al funzionamento delle ovaie e all'età della paziente.

Nel ciclo naturale (NC)

La crioconservazione a ciclo naturale è l’opzione migliore perché non richiede terapia ormonale. È riservato alle donne la cui età non supera i 30–35 anni e che hanno un ciclo mestruale regolare. Le blastocisti vengono scongelate e trasferite nella cavità uterina. Le qualifiche del medico svolgono un ruolo decisivo: la chiave del successo è una vasta esperienza nel lavoro con embrioni congelati e il momento giusto per il trasferimento.

Sulla terapia ormonale sostitutiva

Questa opzione è adatta alle donne di età superiore ai 35 anni con cicli mestruali irregolari o con ridotta funzionalità ovarica. Il medico monitora il ciclo bloccando o limitando la produzione di ormoni sessuali. Il blocco completo della loro sintesi può essere ottenuto con l'assunzione di agonisti dell'ormone di rilascio delle gonadotropine (GnRH), che vengono prescritti a partire dal 20° giorno del ciclo.

Nei giorni 2-3 del ciclo vengono somministrati preparati a base di estrogeni per stimolare la crescita dell'endometrio, le cui condizioni vengono costantemente monitorate mediante ultrasuoni. Dopo l'ovulazione vengono prescritti farmaci contenenti progesterone per il supporto ormonale. In caso di terapia ormonale sostitutiva senza blocco non vengono prescritti agonisti del GnRH; i restanti punti rimangono invariati.

Come viene calcolato il giorno per il criotrasferimento degli embrioni?

Quale giorno è considerato ottimale per piantare embrioni precedentemente scongelati in un ciclo naturale viene determinato dal medico individualmente, tenendo conto dell'età e delle caratteristiche dei precedenti tentativi falliti. Per fare ciò, un riproduttologo monitora dinamicamente la crescita del follicolo più sviluppato utilizzando gli ultrasuoni. Un test di ovulazione aiuta anche a determinare correttamente il momento del trasferimento. Si effettua quando la dimensione del follicolo dominante raggiunge i valori pre-ovulatori. Il leggero supporto della fase luteinica con farmaci a base di progesterone aiuta ad aumentare le possibilità di successo dell'impianto.

Algoritmo di esecuzione della procedura

Prima della procedura è necessario sottoporsi agli stessi esami della fecondazione in vitro. Se necessario, le malattie identificate vengono trattate o viene prescritta la terapia ormonale per preparare l'endometrio dell'utero all'impianto. La procedura in sé non richiede molto tempo e non provoca disagio. A volte dopo vengono prescritte iniezioni di hCG per stimolare il lavoro del corpo luteo e la sua produzione di progesterone, che aiuta a mantenere la gravidanza.

Preparazione per il processo

La preparazione alla procedura prevede il rifiuto dei farmaci concordati con il medico. Dovrebbe essere evitato fumare, bere alcolici, cibi grassi, salati e piccanti. La dieta dovrebbe contenere molta frutta e verdura fresca, carne magra, cereali e latticini. È importante mantenere un regime di consumo di alcol. Alcuni giorni prima della procedura è necessario astenersi dai rapporti sessuali, eliminare l'attività fisica e lo stress. Dovresti evitare l'ipotermia o il surriscaldamento e dormire bene la notte.

L'eccesso di peso non solo riduce la probabilità di concepimento del 30%, ma aumenta anche il rischio di aborto spontaneo e complica il processo del parto. È considerato normale un indice di massa corporea compreso tra 20 e 25. Se questo indicatore viene superato, è necessaria una consultazione con un nutrizionista, che elaborerà un piano d'azione per normalizzare il peso.

Per prepararsi al crioprotocollo dopo una fecondazione in vitro senza successo, è necessario sottoporsi a una serie di esami, tra cui esami del sangue, ecografia degli organi pelvici e esame di uno striscio vaginale. Utilizzando la colposcopia e la citologia, viene studiata la condizione della cervice ed è esclusa la presenza di tumori.

Se necessario, viene prescritta l'isteroscopia: un esame dettagliato della cavità uterina con la raccolta di biomateriale per l'analisi. Le esacerbazioni delle malattie croniche durante il trapianto possono svolgere un ruolo negativo, quindi prima del criotrasferimento è necessario assicurarsi che siano in remissione.

Se lo spessore dello strato interno dell'utero al momento del trasferimento è insufficiente (meno di 9 mm), vengono prescritti farmaci ormonali, analoghi dell'estradiolo, che stimolano la sua crescita e normalizzano la sua struttura. Per migliorare le condizioni dell'endometrio vengono utilizzati anche farmaci che attivano la microcircolazione della mucosa dell'organo.

Come avviene il criotrasferimento?

Le blastocisti vengono scongelate a temperatura ambiente diverse ore prima del trasferimento. Viene quindi valutata la loro vitalità e le membrane degli embrioni idonei vengono rimosse per facilitare l'impianto. Prima della procedura, il medico determina i parametri e la posizione dell'utero, della cervice e del canale cervicale per determinare la posizione del reimpianto. Viene eseguito sotto controllo ecografico e solitamente non provoca dolore. Gli embrioni vengono trasferiti attraverso un catetere che passa all'interno di un filo guida, che viene inserito nella vagina fino all'apertura esterna dell'utero.

Se l'embrione ha attecchito si saprà entro 2 settimane dal criotrasferimento, dopo aver donato il sangue per l'hCG. La probabilità di successo dell'impianto può aumentare se si escludono tutti i fattori negativi. Per fare ciò, è necessario seguire i seguenti consigli:

• non fumare, non bere alcolici;
• rinunciare ad allenamenti intensi e sport estremi;
• camminare di più all'aria aperta;
• dormi bene;
• evitare situazioni stressanti, non essere nervoso;
• aderire alle regole di una corretta alimentazione - escludere cibi con molto sale, zucchero, grassi, conservanti o coloranti.

Vantaggi e svantaggi del criotrasferimento

Il vantaggio del criotransfer è che, non essendo necessaria la puntura degli ovuli, il corpo della donna non è sottoposto allo stress dovuto al grande carico di farmaci. Il crioprotocollo prevede il trapianto di una o due blastocisti, il che riduce il rischio di nascite multiple.

Un altro vantaggio del programma è che il biomateriale può essere conservato a basse temperature per molti anni senza perdita di vitalità, quindi la scelta del momento per il trapianto non è limitata. Ciò è conveniente se il trasferimento viene rinviato per motivi oggettivi, ad esempio in caso di malattia o quando si pianifica una seconda gravidanza tra qualche anno. Dopo il congelamento, circa l'80% degli embrioni sopravvive, ma i medici non lo considerano un punto negativo, poiché la procedura di crioconservazione imita le condizioni della selezione naturale, quando rimangono vitali solo le blastocisti più forti.

Il crioprotocollo è più conveniente della fecondazione in vitro, poiché aiuta a evitare una serie di procedure costose. Dal 2018 il criotransfer è stato inserito nell’elenco dei servizi previsti dalla polizza di assicurazione medica obbligatoria. Va tuttavia tenuto presente che la conservazione del biomateriale viene pagata separatamente dai pazienti.