Le dimensioni del canale spinale sono normali cervicali. Dimensione sagittale del canale spinale

I terreni diagnostici differenziali sono miscele speciali di sostanze nutritive utilizzate per determinare le specie di microbi e studiarne le proprietà. Quando i batteri crescono su terreni diagnostici differenziali, si verificano processi chimici dovuti alla presenza di vari batteri nella cellula microbica. Alcuni di essi sono in grado di degradarsi, altri -, altri - provocando reazioni di ossidazione e riduzione, ecc. Grazie all'azione degli enzimi, si verificano cambiamenti corrispondenti nell'ambiente diagnostico differenziale.

Gli ambienti diagnostici differenziali possono essere suddivisi in quattro gruppi principali.

Riso. 1-6. Varie forme di decomposizione della gelatina. Riso. 7 - 9. Terreno liquido con carboidrati e indicatore Andrade: fig. 7 - nessuna fermentazione; riso. 8 - fermentazione con formazione di acido; riso. 9 - fermentazione con formazione di acido e gas. Riso. 10 - 12. Terreno semiliquido con carboidrati e indicatore BP (da terreno nutriente secco): fig. 10 - nessuna fermentazione; riso. 11 - fermentazione con formazione di acido; riso. 12 - fermentazione con formazione di acido e gas. Riso. 13-15. Siero di tornasole artificiale Seitz: Fig. 13 - nessuna fermentazione; riso. 14 - fermentazione con formazione di acido; riso. 15 - fermentazione con formazione. Riso. 16 e 17. Latte con blu di metilene: fig. 16 - mancanza di riduzione; riso. 17 - riduzione. Riso. 18 e 19. Mezzo di Simons: fig. 18 - mancata assimilazione del citrato; riso. 19 - assimilazione del citrato. Riso. 20 - 24. Latte di tornasole: riso. 20 - nessuna fermentazione; riso. 21 - fermentazione con formazione di acido; riso. 22 - fermentazione con formazione di alcali; riso. 23 - peptonizzazione; riso. 24 - riduzione. Riso. 25. Liquefazione di un prodotto a spirale (in luce trasmessa). Riso. 26. Emolisi su agar sangue (in luce trasmessa). Riso. 27. Terreno sangue con tellurito di potassio.

1. Terreni contenenti proteine ​​e che rivelano la capacità dei microbi di scomporre le proteine ​​(proprietà proteolitiche): “colonna di carne-peptone”, siero coagulato di cavallo o bovino, latte, agar sangue. Quando si inoculano i batteri mediante puntura nella gelatina di carne e peptone, in una "colonna", in caso di decomposizione proteica, si osserva la liquefazione del mezzo. Quando inoculato su un terreno con siero di latte coagulato, la degradazione proteica è determinata dalla liquefazione del terreno e dalla formazione di depressioni sulla sua superficie. La decomposizione del latte da parte di un microbo è rivelata dalla schiaritura o dissoluzione del latte inizialmente cagliato. La presenza di attività emolitica della coltura in esame viene verificata inoculandola su uno speciale agar sangue. Come risultato della distruzione intorno alle colonie (ad esempio, emolitiche o) si formano zone di schiarimento.

2. Terreni per identificare la capacità dei microbi di scomporre i carboidrati e quelli ad alto contenuto atomico (mezzo Endo, mezzo Levin, mezzo Russell, mezzo Drigalsky - Conradi, mezzo Rapoport - Weintraub, mezzo Shustov). Per identificare queste proprietà dei microrganismi viene utilizzata anche una serie “variegata”, cioè una serie di provette contenenti vari carboidrati, alcoli polivalenti e un indicatore. Come indicatori vengono utilizzati la tintura di tornasole o il blu di bromotimolo. La decomposizione di uno qualsiasi dei carboidrati con formazione di acido viene rilevata dal cambiamento del colore dell'indicatore, la formazione di gas viene rilevata riempiendosi di gas e facendo galleggiare uno speciale galleggiante di vetro in un mezzo liquido. Oppure utilizzare terreni Hiss semiliquidi (vedi) con agar allo 0,5% con zuccheri appropriati e indicatore Andrade. Dopo aver inoculato il microbo su questi terreni, la formazione di acido viene rilevata dall'arrossamento del terreno e la formazione di gas dalla comparsa delle sue bolle nell'agar o dalla rottura e dallo spostamento verso l'alto della colonna di agar. I terreni diagnostici differenziali del secondo gruppo includono anche l'agar dell'amido, che viene utilizzato per determinare la capacità dei microbi di scomporre l'amido, il terreno di Clark, ecc.

3. Terreni su cui viene rivelata la capacità dei microbi di decolorare i coloranti aggiunti al brodo: blu di metilene, tionina, tornasole, rosso neutro o altri (mezzo di Rothberger, mezzo di Omelyansky). Il terzo gruppo comprende anche i terreni con nitrati, che vengono utilizzati per determinare la capacità dei microbi di ridurre i sali dell'acido nitrico (nitrati) in sali dell'acido nitroso (nitriti) e quindi in ammoniaca o azoto libero.

4. Terreni che rivelano la capacità dei microbi di assimilare sostanze che non sono digeribili da altri microbi, ad esempio un terreno con citrato di sodio (agar citrato Simons) per distinguere l'Escherichia coli, che non ha la capacità di assimilare questo terreno, da altri batteri del gruppo intestinale, oppure un terreno con acido oleico sodico per la differenziazione del bacillo della difterite dalla falsa difterite e dai difteroidi (agar di Engering).

I terreni diagnostici differenziali includono anche terreni per la differenziazione degli anaerobi, terreni in tellurito per la differenziazione dei batteri della difterite, terreni con urea, terreni alcalini (agar Dieudonne) per la coltivazione di Vibrio cholerae, ecc. Vedi anche Identificazione dei microbi.

I terreni diagnostici differenziali sono miscele speciali di sostanze nutritive utilizzate per determinare le specie di microbi e studiarne le proprietà. Quando i batteri crescono su terreni diagnostici differenziali, si verificano processi chimici dovuti alla presenza di vari enzimi nella cellula microbica. Alcuni di essi sono in grado di scomporre le proteine, altri - carboidrati, altri - provocando reazioni di ossidazione e riduzione, ecc. Grazie all'azione degli enzimi, si verificano cambiamenti corrispondenti nell'ambiente diagnostico differenziale.

Gli ambienti diagnostici differenziali possono essere suddivisi in quattro gruppi principali.

Riso. 1-6. Varie forme di decomposizione della gelatina. Riso. 7 - 9. Terreno liquido con carboidrati e indicatore Andrade: fig. 7 - nessuna fermentazione; riso. 8 - fermentazione con formazione di acido; riso. 9 - fermentazione con formazione di acido e gas. Riso. 10 - 12. Terreno semiliquido con carboidrati e indicatore BP (da terreno nutriente secco): fig. 10 - nessuna fermentazione; riso. 11 - fermentazione con formazione di acido; riso. 12 - fermentazione con formazione di acido e gas. Riso. 13-15. Siero di tornasole artificiale Seitz: Fig. 13 - nessuna fermentazione; riso. 14 - fermentazione con formazione di acido; riso. 15 - fermentazione con formazione di alcali. Riso. 16 e 17. Latte con blu di metilene: fig. 16 - mancanza di riduzione; riso. 17 - riduzione. Riso. 18 e 19. Mezzo di Simons: fig. 18 - mancata assimilazione del citrato; riso. 19 - assimilazione del citrato. Riso. 20 - 24. Latte di tornasole: riso. 20 - nessuna fermentazione; riso. 21 - fermentazione con formazione di acido; riso. 22 - fermentazione con formazione di alcali; riso. 23 - peptonizzazione; riso. 24 - riduzione. Riso. 25. Liquefazione del siero di latte coagulato (in luce trasmessa). Riso. 26. Emolisi su agar sangue (in luce trasmessa). Riso. 27. Terreno sangue con tellurito di potassio.

1. Terreni contenenti proteine ​​e che rivelano la capacità dei microbi di scomporre le proteine ​​(proprietà proteolitiche): “colonna” di gelatina di carne e peptone, siero coagulato di cavallo o bovino, latte, agar sangue. Quando si inoculano i batteri mediante puntura nella gelatina di carne e peptone, in una "colonna", in caso di decomposizione proteica, si osserva la liquefazione del mezzo. Quando inoculato su un terreno con siero di latte coagulato, la degradazione proteica è determinata dalla liquefazione del terreno e dalla formazione di depressioni sulla sua superficie. La decomposizione del latte da parte di un microbo è rivelata dalla schiaritura o dissoluzione del latte inizialmente cagliato. La presenza di attività emolitica della coltura in esame viene verificata inoculandola in una capsula Petri su uno speciale agar sangue. Come risultato della distruzione dei globuli rossi attorno alle colonie (ad esempio, streptococco emolitico o stafilococco), si formano zone di compensazione.

2. Terreni per identificare la capacità dei microbi di scomporre carboidrati e alcoli ad alto contenuto atomico (mezzo Endo, mezzo Levin, mezzo Russell, mezzo Drigalsky - Conradi, mezzo Rapoport - Weintraub, mezzo Shustov). Per identificare queste proprietà dei microrganismi viene utilizzata anche una serie “variegata”, cioè una serie di provette contenenti terreni nutritivi, tra cui vari carboidrati, alcoli polivalenti e un indicatore. Come indicatori vengono utilizzati la tintura di tornasole o il blu di bromotimolo. La decomposizione di uno qualsiasi dei carboidrati con formazione di acido viene rilevata dal cambiamento del colore dell'indicatore, la formazione di gas viene rilevata riempiendosi di gas e facendo galleggiare uno speciale galleggiante di vetro in un mezzo liquido. Oppure utilizzare terreni Hiss semiliquidi (vedi) con agar allo 0,5% con zuccheri appropriati e indicatore Andrade. Dopo aver inoculato il microbo su questi terreni, la formazione di acido viene rilevata dall'arrossamento del terreno e la formazione di gas dalla comparsa delle sue bolle nell'agar o dalla rottura e dallo spostamento verso l'alto della colonna di agar. I terreni diagnostici differenziali del secondo gruppo includono anche l'agar dell'amido, che viene utilizzato per determinare la capacità dei microbi di scomporre l'amido, il terreno di Clark, ecc.

3. Terreni su cui viene rivelata la capacità dei microbi di sbiancare i coloranti aggiunti al brodo: blu di metilene, tionina, tornasole, carminio indaco, rosso neutro o altri (mezzo di Rothberger, mezzo di Omelyansky). Il terzo gruppo comprende anche i terreni con nitrati, che vengono utilizzati per determinare la capacità dei microbi di ridurre i sali dell'acido nitrico (nitrati) in sali dell'acido nitroso (nitriti) e quindi in ammoniaca o azoto libero.

4. Terreni che rivelano la capacità dei microbi di assimilare sostanze che non sono digeribili da altri microbi, ad esempio un terreno con citrato di sodio (agar citrato Simons) per distinguere l'Escherichia coli, che non ha la capacità di assimilare questo terreno, da altri batteri del gruppo intestinale, oppure un terreno con acido oleico sodico per la differenziazione del bacillo della difterite dalla falsa difterite e dai difteroidi (agar di Engering).

I terreni diagnostici differenziali includono anche terreni per la differenziazione degli anaerobi, terreni in tellurito per la differenziazione dei batteri della difterite, terreni con urea, terreni alcalini (agar Dieudonne) per la coltivazione di Vibrio cholerae, ecc. Vedi anche Identificazione dei microbi.

Sono utilizzati per distinguere tra singole specie o gruppi di microrganismi. Il principio di costruzione di questi terreni si basa sul fatto che diversi tipi di microrganismi differiscono tra loro nell'attività biochimica a causa di un diverso insieme di enzimi.

Il DDS comprende:

1. Base nutritiva che garantisce la proliferazione di microrganismi

2. Alcuni carboidrati: lattosio

3. Un indicatore il cui cambiamento di colore indica uno spostamento del pH del mezzo verso il lato acido dovuto alla fermentazione del carboidrato corrispondente.

Il DDS viene utilizzato attivamente per differenziare i tipi di microrganismi della famiglia intestinale.

Mezzi di coltura elettivi

Progettato per l'isolamento selettivo e l'accumulo di microrganismi di un certo tipo (o gruppo) da materiali contenenti una varietà di microflora estranea. Quando si creano questi ambienti, ci si basa sulle caratteristiche biologiche che distinguono i microrganismi dalla maggior parte degli altri. Ad esempio, si osserva una crescita selettiva di stafilococchi ad una maggiore concentrazione di sale e Vibrio cholerae - in un ambiente alcalino.

Versamento dei mezzi

1. Terreni agar in piastre Petri:

a) sciogliere a bagnomaria, raffreddare a 45-50ºС con MPA

b) posizionare la tazza con il coperchio alzato

c) prendere il recipiente con la mano destra, tenendolo vicino al fuoco

d) togliere la spina con la mano sinistra, tenendola con il mignolo e il palmo

e) bruciare il collo della bottiglia con il terreno e aprire leggermente il coperchio con due dita della mano sinistra

f) inserire sotto il collo della bottiglia, senza toccare il bordo della tazza, e versare 15-20 ml. ambiente.

Se la semina viene effettuata il giorno in cui viene versato il terreno, è necessario asciugarlo in un termostato per 20-30 minuti smontato, con il lato aperto rivolto verso il basso. Se la semina viene effettuata il giorno successivo, le tazze, senza asciugarsi, vengono avvolte nella stessa carta in cui sono state sterilizzate e poste in frigorifero.

2. Terreno agar in provette:

a) prendere una nave con un mezzo fuso e raffreddato a 45ºС

b) prendere la provetta con la mano sinistra

c) togliere il tappo dalla provetta con la mano destra, e con la mano sinistra dal recipiente con il terreno, tenendolo con il mignolo e il palmo

d) bruciare i bordi della provetta e del recipiente con il terreno, aggiungere 3-5 ml del terreno nella provetta

e) bruciare nuovamente il collo dei contenitori, chiuderli con tappi

I terreni di agar possono solidificarsi nelle provette sotto forma di:

1. Colonna smussata

2. Colonna combinata

3. Colonna

Per ottenere una colonna smussata e combinata, le provette con la massa di agar fusa vengono poste in posizione inclinata su un apposito supporto in modo che il terreno non si estenda per 2/3 della provetta e non bagni il tappo. Dopo che il mezzo si è solidificato, le provette vengono posizionate verticalmente in un rack e la condensa viene lasciata defluire. È impossibile utilizzare l'ambiente senza condensa. Dovrebbe essere nuovamente sciolto a bagnomaria e falciato.

Agar peptone di carne

In base allo scopo previsto, i terreni nutritivi sono suddivisi nelle seguenti categorie principali.

universale- terreni su cui crescono bene molti tipi di batteri patogeni e non patogeni. Questi includono: brodo di carne e peptone (MPB = acqua di carne + 1% peptone + 0,5% NaCl), agar carne e peptone (MPA = MPB + 2-3% agar).

Diagnostica differenziale- mezzi che consentono di distinguere una specie di batteri dalle altre in base alla loro attività enzimatica o manifestazioni culturali. Questi includono Endo, Levin, Ploskirev, Gissa e molti altri.

Selettivo(sinonimi: selettivo, elettivo, arricchimento) - terreni contenenti sostanze utilizzate da microrganismi di determinati tipi e che non favoriscono o addirittura impediscono la crescita di altri microrganismi. I media selettivi consentono di selezionare specificamente determinati tipi di batteri dal materiale in studio. Ciò include Muller, selenite, Rapoport, acqua peptonica all'1%, ecc.

Selettivo differenziale- ambienti che combinano le proprietà degli ambienti diagnostici differenziali e degli ambienti selettivi. Vengono utilizzati, in particolare, per accelerare la rilevazione e l'identificazione di batteri appartenenti a un gran numero di specie diffuse di enterobatteri e pseudomonadi (ambiente di Sivolodsky).

Speciale- terreni appositamente preparati per ottenere la crescita di quei batteri che non crescono o crescono molto male sui terreni universali. Questi includono i terreni McCoy-Chapin (per ottenere la crescita dell'agente eziologico della tularemia), l'MPA del sangue (per ottenere la crescita di streptococchi patogeni), il terreno Lowenstein-Jensen (per isolare l'agente eziologico della tubercolosi), ecc.

Sintetico- mezzi con una composizione chimica rigorosamente definita, che sono soluzioni di sali inorganici con l'aggiunta di composti chimici che fungono da fonte di carbonio o azoto. Un esempio di tale mezzo sintetico è il mezzo minimo M-9, in cui la fonte di energia e carbonio è il glucosio e l'azoto è NH4C1. I media sintetici possono avere una composizione più complessa con l'inclusione di vari aminoacidi, basi e vitamine.

Semi sintetico- mezzi sintetici a cui viene aggiunto un prodotto di origine naturale, ad esempio siero sanguigno. Esistono numerose opzioni di terreni di coltura diversi progettati per soddisfare le esigenze delle specie batteriche pertinenti e gli scopi diagnostici.

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Al brodo carne-peptone si aggiunge il 3-4% di agar, si regola il pH a 7,6, si versa in flaconi da 100 ml e si sterilizza, come al solito, in un'autoclave, conservato in questa forma fino alla preparazione dell'agar fucsina solfito. L'agar fucsina solfito viene preparato il giorno dell'utilizzo. Questo mezzo non può essere preparato o conservato per un uso futuro poiché diventa rapidamente rosso.

A 100 ml di agar peptone carne al 3-4% sciolti e raffreddati a 70°C si aggiunge sterilmente 1 g di lattosio, dopo averlo precedentemente sciolto e fatto bollire in 5 ml di acqua sterile. Inoltre, qui vengono aggiunti 0,5 ml di una soluzione alcolica satura filtrata di fucsina basica e 2,5 ml di una soluzione al 10% appena preparata di solfuro di sodio. Il solfuro di sodio (Na2SO3) in una quantità di 0,5 g viene sciolto in 5 ml di acqua e sterilizzato mediante ebollizione prima dell'uso.

Puoi farlo in modo leggermente diverso. La fucsina e il solfito di sodio vengono prima miscelati in una provetta: la soluzione di solfito di sodio viene aggiunta a 0,5 ml di soluzione di fucsina agitando fino a quando il liquido nella provetta diventa incolore o leggermente rosa. E questa miscela viene versata nell'agar fuso e leggermente raffreddato. Il pallone con il terreno viene agitato accuratamente per miscelare e il terreno viene versato nelle piastre Petri. Dopo che il mezzo si è indurito, viene essiccato in un termostato a 37 °C per 30 minuti.

Quando è caldo, il terreno dovrebbe essere leggermente rosato e, dopo il raffreddamento, completamente incolore. Lo scolorimento della fucsina nel mezzo di Endo è causato dall'introduzione di solfuro di sodio.

Mercoledì Simmons

Quando si identificano i microbi del gruppo coli (per distinguere la specie del suolo Escherichia coli aеrogenes dalla specie fecale Escherichia coli commune), viene utilizzato il terreno citrato di Simmons. In 1 litro di acqua distillata sciogliere 1,5 g di fosfato di sodio (o fosfato di ammonio monosostituito), 1 g di fosfato di potassio monosostituito (KH2PO4), 0,2 g di solfato di magnesio, 2,5-3 g di citrato di sodio cristallino, impostare il pH a 7,0 -7.2, aggiungere agar al 2% e, dopo aver sciolto il terreno, versarlo in palloni da 100 ml. Sterilizzare in autoclave per 15 minuti a 120°C.

Prima dell'uso, è necessario aggiungere un indicatore al mezzo. Puoi usare bromotimolo blau o fenolorot. L'indicatore viene aggiunto a 100 ml del mezzo fuso. Bromthymol blau viene assunto nella quantità di 1 ml di una soluzione alcolica all'1,5%. Il mezzo diventa verde oliva. Phenolrot viene aggiunto nella quantità di 2 ml di una soluzione alcolica all'1,5%. Il mezzo diventa giallo. Dopo l'aggiunta dell'indicatore, il terreno viene versato in provette e sterilizzato in autoclave a 120°C per 15 minuti.

Serie variegata di carboidrati, o mezzo Hiss

Per determinare la capacità enzimatica dei microrganismi, vengono utilizzati i mezzi Hiss. A seconda della presenza di un particolare enzima nella cellula microbica, è in grado di decomporre uno qualsiasi dei carboidrati con la formazione di determinati prodotti di decomposizione, quindi qualsiasi carboidrato viene introdotto nell'ambiente: lattosio, glucosio, mannitolo, saccarosio, ecc. Ad un insieme di tali mezzi è stato dato il nome di “serie variegata di carboidrati”.

Per prima cosa prepara l'acqua peptonica: prendi 10 g di peptone e 5 g di sale da cucina chimicamente puro per 1 litro di acqua distillata, fai bollire fino a quando il peptone si scioglie, filtra attraverso un filtro di carta (il filtrato deve essere completamente trasparente) e imposta il pH su 7.2-7.4. Successivamente, a 100 ml di acqua peptonica vengono aggiunti 0,5 g di uno dei carboidrati utilizzati e 1 ml di indicatore Andrede.

La composizione dell'indicatore Andrede comprende: 0,5 g di fucsina acida, 16 ml di 1 N. soluzione di idrossido di sodio (NaOH) e 100 ml di acqua distillata. Se necessario, l'indicatore può essere preparato in anticipo e conservato in un luogo buio, dopo averlo fatto bollire a 100 °C per 15 minuti. Dopo aver introdotto l'indicatore, il mezzo viene versato in provette con galleggianti e sterilizzato in una caldaia Koch tre volte per 30 minuti. Al termine della sterilizzazione i galleggianti devono essere immersi nel mezzo, altrimenti il ​​tubo non può essere utilizzato. I terreni Hiss con il reagente Andrede hanno un colore giallo paglierino senza sfumatura rosa. Quando i microrganismi si sviluppano nell'ambiente, questi ultimi, decomponendo lo zucchero per formare acido, provocano un cambiamento nella reazione. E poiché l'indicatore Andrede diventa rosso in un ambiente acido, ciò è la prova che il microrganismo utilizza questo zucchero per le sue funzioni vitali. L'assenza di rossore, al contrario, indica l'assenza nel complesso enzimatico del microbo in studio di un enzima che decompone il carboidrato presente nel mezzo.