Test a vita sugli animali per la rabbia. Ricerca per la rabbia

Rabbia(La rabbia) è una malattia infettiva pericolosa per gli animali e l'uomo. Questa malattia si verifica in tutti i paesi del mondo. È caratterizzato da un risultato letale al 100%.

Patogeno- Un virus contenente RNA appartenente alla famiglia dei Rhabdovirus. Questo virus ha un tropismo per il tessuto nervoso. I titoli più alti si trovano nel cervello di animali malati. Inoltre, i virus si trovano anche nel midollo spinale, nelle ghiandole salivari e lacrimali.
Distinguere:

Virus “selvaggio” che circola in condizioni naturali ed è caratterizzato da elevata patogenicità per l’uomo e gli animali.
E "fissato", ottenuto in laboratorio, non patogeno per gli animali e per l'uomo se somministrato per via extraneurale.

Il virus della rabbia non resiste alle alte temperature: a 60°C circa si inattiva dopo 10 minuti, a 100°C circa quasi istantaneamente. Ma in un cervello congelato, può rimanere vitale fino a diversi mesi. Inoltre persiste per diversi mesi nei tessuti in decomposizione. Resistente alle soluzioni di iodio. Ma viene rapidamente inattivato dai disinfettanti a base di formalina, cloramina e alcali.

dati epidemiologici.

Tutti gli animali a sangue caldo sono sensibili al virus della rabbia. I più sensibili sono i canidi selvatici (come: volpi, volpi artiche, lupi, cani procione, sciacalli), mustelidi, roditori gatti. Gli uccelli sono meno sensibili.

In natura, i serbatoi del virus della rabbia sono animali predatori e pipistrelli, in città - cani randagi.
La fonte dell'infezione sono animali malati in cui il virus viene escreto con la saliva. La presenza del virus nella saliva si nota già 8-10 giorni prima della comparsa dei segni della malattia. L'infezione avviene attraverso un morso, quando la saliva penetra nelle mucose o nelle aree danneggiate della pelle.

Patogenesi .

Dopo essere entrato nel corpo, il virus inizia a moltiplicarsi nel sito di introduzione. E dopo 24 ore inizia a penetrare nel tessuto nervoso. Nei nervi si sposta verso il midollo spinale e il cervello ad una velocità di 7 cm al giorno. Dopo aver raggiunto il cervello, il virus inizia a moltiplicarsi intensamente, quindi il virus entra in tutti gli organi lungo i nervi e, prima di tutto, nelle ghiandole salivari e negli occhi. Il periodo di incubazione (dal momento dell'infezione alla comparsa dei segni clinici) è in media di 14-60 giorni, a volte può raggiungere i 6-12 mesi.
Segni clinici.

Esistono 3 tipi di decorso della malattia.

Flusso classico a tre stadi o forma violenta. Inizialmente si verifica un cambiamento nel comportamento dell'animale (fase 1), diventa molto affettuoso o, al contrario, timido, poco socievole. Questa fase può durare da alcune ore a 4 giorni. Poi arriva la fase successiva: l'eccitazione (fase 2), che dura 1-4 giorni. Gli animali diventano aggressivi, inclini a movimenti erranti e ad attaccare animali e persone. Si sviluppano anoressia, ansia, salivazione. E 3-4 giorni prima della morte si sviluppa uno stadio paralitico o depressivo, caratterizzato da paralisi progressiva.
Forma paralitica o silente.È caratterizzato dallo sviluppo della paralisi senza una precedente fase di eccitazione. Con questa forma si notano salivazione, abbassamento della mascella inferiore, difficoltà di deglutizione, anoressia. Quindi si sviluppa la paralisi dei muscoli del tronco e degli arti. La morte dell'animale avviene in 3-4 giorni.
"Rabbia atipica". Questo è un decorso cronico subclinico (senza sviluppo di sintomi) della malattia, che può durare fino a 3 mesi.

Diagnosi.

La diagnosi preliminare viene fatta sulla base dell'anamnesi e dei sintomi clinici. Se si sospetta la rabbia, dopo la morte dell'animale, il cadavere dell'animale viene inviato al laboratorio. Se ciò non è possibile, la testa o il cervello. Quando si preleva il materiale è necessario osservare rigorose precauzioni!
La diagnosi di laboratorio della rabbia comprende diversi metodi di ricerca.

Rilevamento dei corpi di Babes-Negri. Per diagnosticare la rabbia in laboratorio, viene effettuato un esame istologico del cervello di un animale deceduto. Si nota la presenza di noduli della rabbia nelle strutture del fondo del quarto ventricolo del cervello e la presenza di corpi di Babes-Negri (inclusioni eosinofile citoplasmatiche costituite da particelle del virus della rabbia) nel cervello. Si possono trovare nell'ippocampo, nelle strutture corticali e staminali del cervello, nel cervelletto e nei gangli dorsali del midollo spinale e nell'epitelio della cornea dell'occhio. Tuttavia, se non vengono rilevati corpi di Babesh-Negri, non si può escludere la rabbia.
Rilevazione dell'antigene mediante anticorpi fluorescenti (MFA) o mediante analisi immunofluorescente (ELISA). Oltre a queste reazioni, è attualmente in fase di sviluppo un nuovo metodo diagnostico nella reazione a catena della polimerasi (PCR).
Un test biologico con infezione di topi neonati con un virus proveniente da una sospensione del cervello, ghiandole salivari.

Secondo la legislazione della Federazione Russa, in caso di morsi di persone da parte di cani o altri animali (ad eccezione di quelli ovviamente malati di rabbia), le vittime devono contattare immediatamente le istituzioni mediche. E gli animali che li hanno morsi devono essere portati all'istituto veterinario statale più vicino per un esame da parte di specialisti e una quarantena per 10 giorni.

Per prevenire la diffusione della rabbia è prevista la vaccinazione annuale obbligatoria di cani e gatti con vaccini antirabbici.

Attualmente, per l'importazione di animali in diversi paesi, è richiesto un documento che confermi la quantità di anticorpi validi contro il virus della rabbia. Per una protezione efficace contro la rabbia, il livello minimo di anticorpi neutralizzanti il virus nel sangue dovrebbe essere di almeno 0,5 UI / ml. Questo tipo di studio non è diagnostico e mira solo a determinare l'intensità dell'immunità contro la rabbia.
A Mosca, puoi donare il sangue per determinare il titolo degli anticorpi contro il virus della rabbia presso il Centro di diagnostica molecolare, situato sull'autostrada Zvenigorodskoye, 5. CDM ha ricevuto l'accreditamento internazionale per questo test e rilascia certificati internazionali validi per tutta la vita dell'animale, soggetti ai termini di rivaccinazione.

La determinazione dei titoli anticorpali viene effettuata non prima di 30 giorni dopo la vaccinazione. Pertanto, se prevedi di viaggiare con i tuoi animali domestici nell'UE o in altri paesi, devi occuparti in anticipo della vaccinazione e della donazione di sangue per questo test (i risultati vengono rilasciati entro 7-14 giorni).

Medico di laboratorio veterinario
"BioVetLab" Lazareva N.V.

Rabbia(La rabbia) è una malattia infettiva pericolosa per gli animali e l'uomo. Questa malattia si verifica in tutti i paesi del mondo. È caratterizzato da un risultato letale al 100%.

Virus “selvaggio” che circola in condizioni naturali ed è caratterizzato da elevata patogenicità per l’uomo e gli animali.
E "fissato", ottenuto in laboratorio, non patogeno per gli animali e per l'uomo se somministrato per via extraneurale.

dati epidemiologici.

Patogenesi .

Esistono 3 tipi di decorso della malattia.

Flusso classico a tre stadi o forma violenta. Inizialmente si verifica un cambiamento nel comportamento dell'animale (fase 1), diventa molto affettuoso o, al contrario, timido, poco socievole. Questa fase può durare da alcune ore a 4 giorni. Poi arriva la fase successiva: l'eccitazione (fase 2), che dura 1-4 giorni. Gli animali diventano aggressivi, inclini a movimenti erranti e ad attaccare animali e persone. Si sviluppano anoressia, ansia, salivazione. E 3-4 giorni prima della morte si sviluppa uno stadio paralitico o depressivo, caratterizzato da paralisi progressiva.
Forma paralitica o silente.È caratterizzato dallo sviluppo della paralisi senza una precedente fase di eccitazione. Con questa forma si notano salivazione, abbassamento della mascella inferiore, difficoltà di deglutizione, anoressia. Quindi si sviluppa la paralisi dei muscoli del tronco e degli arti. La morte dell'animale avviene in 3-4 giorni.
"Rabbia atipica". Questo è un decorso cronico subclinico (senza sviluppo di sintomi) della malattia, che può durare fino a 3 mesi.

Diagnosi.

Rilevamento dei corpi di Babes-Negri. Per diagnosticare la rabbia in laboratorio, viene effettuato un esame istologico del cervello di un animale deceduto. Si nota la presenza di noduli della rabbia nelle strutture del fondo del quarto ventricolo del cervello e la presenza di corpi di Babes-Negri (inclusioni eosinofile citoplasmatiche costituite da particelle del virus della rabbia) nel cervello. Si possono trovare nell'ippocampo, nelle strutture corticali e staminali del cervello, nel cervelletto e nei gangli dorsali del midollo spinale e nell'epitelio della cornea dell'occhio. Tuttavia, se non vengono rilevati corpi di Babesh-Negri, non si può escludere la rabbia.
Rilevazione dell'antigene mediante anticorpi fluorescenti (MFA) o mediante analisi immunofluorescente (ELISA). Oltre a queste reazioni, è attualmente in fase di sviluppo un nuovo metodo diagnostico nella reazione a catena della polimerasi (PCR).
Un test biologico con infezione di topi neonati con un virus proveniente da una sospensione del cervello, ghiandole salivari.

Per prevenire la diffusione della rabbia è prevista la vaccinazione annuale obbligatoria di cani e gatti con vaccini antirabbici.

Medico di laboratorio veterinario
"BioVetLab" Lazareva N.V.

ISTRUZIONI METODOLOGICHE
DIAGNOSI DI LABORATORIO DELLA RABIA

1. La diagnosi di rabbia viene effettuata sulla base di un complesso di dati epizootologici, clinici, patoanatomici e principalmente sulla base di test di laboratorio.

2. Per la ricerca, vengono inviati al laboratorio tramite corriere: un cadavere fresco o la testa di un cane (gatto, volpe, volpe artica, pecora, vitello, ecc.), di animali di grandi dimensioni - una testa o un cervello (fresco o in scatola in soluzione di glicerina al 30 - 50%). Solo i cervelli non conservati sono adatti per gli studi sierologici.

3. La diagnostica di laboratorio della rabbia consiste nell'esame microscopico del cervello (per rilevare i corpi di Babes-Negri), nell'esame sierologico (rilevamento di uno specifico antigene della rabbia), nonché nell'impostazione di un test biologico su topi bianchi o conigli .

Ordine di ricerca.

4. Dal cervello ricevuto per lo studio, vengono prima seminati su terreni nutritivi. Una parte del cervello viene immediatamente posta in frigorifero e conservata in caso di necessità di riesame. Il materiale viene prelevato dal resto del cervello per l'esame microscopico, le reazioni sierologiche e i campioni biologici.

Nota. L'autopsia, la rimozione del cervello e altri lavori vengono eseguiti in condizioni sterili nel rigoroso rispetto delle misure di prevenzione personale (forte fissazione della testa dell'animale, protezione delle mani con due paia di guanti: chirurgico e anatomico; vengono indossati occhiali protettivi proteggere gli occhi e coprire il naso e la bocca con una benda di garza).

I. STUDI MICROSCOPICI

5. Per l'esame microscopico, vengono effettuate impronte e strisci da diverse parti del cervello.

6. Per preparare un'impronta, pezzi di cervello (corno di Ammon, corteccia cerebrale, cervelletto, midollo allungato) vengono posizionati su carta da filtro piegata in 4-6 strati. La superficie tagliata viene toccata più volte (3 - 4) di seguito con un vetrino pulito, premendo leggermente per lasciare una sottile impronta sul vetro.

7. Gli strisci vengono effettuati dalle stesse aree del cervello. Per fare questo, pezzi di cervello vengono macinati in un mortaio di porcellana con un pestello o in una provetta con una bacchetta di vetro fino a formare una massa omogenea, dalla quale vengono realizzati strisci grossolani su un vetrino di vetro sgrassato.

Puoi fare le sbavature in un altro modo. Per fare questo, un piccolo pezzo di cervello viene posto sul bordo di un vetrino, schiacciato con un altro vetro e spalmato da un bordo all'altro, in modo da ottenere una sottile macchia uniforme sulla superficie del vetrino. bicchiere.

8. Le macchie o le stampe risultanti vengono macchiate in uno dei seguenti modi:

a) colorazione secondo Muromtsev. Gli strisci o le stampe realizzate, ancora umide, vengono immediatamente fissate in alcool etilico o metilico oppure in una miscela di alcool a metà con etere o acetone (chimicamente puro) per 1-2 ore e poi lavate con acqua. Il contenitore del fissativo deve essere ben chiuso per evitare l'evaporazione del liquido fissativo. Dopo il lavaggio con acqua, gli strisci bagnati vengono posti per 5-10 minuti in una soluzione di vernice Munson, diluita con acqua 1:40. Successivamente si fa scolare la vernice e subito si immergono gli strisci in una soluzione acquosa di tannino al 10% per 8-10 minuti fino alla comparsa di un colore bluastro. Successivamente gli strisci vengono lavati con acqua, asciugati con carta da filtro, fatti passare attraverso una miscela di parti uguali di alcool con acetone (chimicamente puro) o alcool con xilene e nuovamente asciugati con carta da filtro. Lo striscio colorato dovrebbe avere uno sfondo azzurro, mentre i nuclei delle cellule nervose sono colorati di blu, e i corpi di Babesh-Negri sono viola pallido con inclusioni scure;

b) Macchia dei venditori. Sulla stampa bagnata o sullo striscio preparato, applicare per 4 - s una miscela di reagente "A" (blu di metilene - 2 g, alcool metilico senza acetone - 100 ml) e reagente "B" (fucsina basica - 0,5 g, alcool etilico senza tracce di acetone - 100 ml). La soluzione di lavoro del colorante è composta da 15 ml di reagente "A", 2 - 4 ml di reagente "B" e 25 ml di alcol metilico. Dopo la colorazione il preparato viene lavato con acqua corrente ed asciugato. Nello striscio colorato, il citoplasma dei neuroni è blu brillante, i nucleoli sono blu scuro, gli eritrociti sono rosso mattone, i corpi di Babesh-Negri sono rosso porpora con una struttura basofila dei corpi chiaramente visibile;

c) colorazione secondo Mikhin. Le macchie o le impronte vengono fissate in una miscela di alcool ed etere (ugualmente) per 5-10 minuti, dopodiché vengono asciugate con carta da filtro e colorate per 30-40 minuti con vernice Giemsa (1-2 gocce per 1 ml di acqua distillata ), lavato rapidamente con alcool acidificato (1 goccia di acido acetico glaciale per 30 ml di alcool a 96°), e poi con acqua, asciugato con carta da filtro e sottoposto a ricerca. Se il materiale era in glicerina, viene pre-sciacquato bene in acqua e asciugato con carta da filtro.

In una preparazione colorata, all'esame microscopico, lo sfondo principale dovrebbe essere rosso con una sfumatura viola. Con la predominanza del tono blu, lo striscio viene nuovamente lavato con alcool acidificato e lavato con acqua. Le cellule nervose piramidali hanno un colore bluastro con un nucleo intensamente nero, mentre i corpi di Babesh-Negri sono rosa-rossi con inclusioni punteggiate di blu scuro;

d) colorazione secondo Bormann-Gainullina. Strisci o impronte sottili vengono fissati per 5 minuti in una miscela della seguente composizione: alcool ed etere (ugualmente) - 98 ml, acido acetico glaciale - 2 ml; dopo il fissaggio vengono immersi per 5 minuti in una soluzione di soda cristallina al 10%, quindi lavati con acqua ed essiccati all'aria. Gli strisci fissati vengono colorati per 2 minuti con la vernice preparata prima dell'uso (soluzione acquosa satura di blu di metilene - 3 gocce, soluzione basica satura di fucsina - 2 gocce, acqua di rubinetto - 20 ml). La soluzione di vernice viene versata su uno striscio, fissato sulla fiamma di un bruciatore, quindi la vernice viene lasciata per un altro minuto, dopodiché viene lavata con acqua e asciugata con carta da filtro. In uno striscio colorato, lo sfondo principale dovrebbe essere rosso vivo, il protoplasma delle cellule nervose è colorato di blu-rossastro e i loro nuclei sono blu scuro, i corpi di Babes-Negri sono colorati di rosso fragola con una struttura tipicamente granulare. Gli eritrociti sembrano cerchi non colorati.

II. STUDI SIEROLOGICI

9. Reazione di precipitazione diffusa in gel di agar. La reazione viene utilizzata per rilevare un antigene specifico della rabbia nel cervello non conservato di animali morti di rabbia stradale, nonché negli animali su cui è stato eseguito un test biologico. Per la reazione, puoi utilizzare un cervello stantio (fino a 1 mese).

La reazione viene condotta su vetrini scremati, sui quali vengono applicati 2,5 ml di gel di agar sciolto e raffreddato a 60°C, preparato secondo la prescrizione: agar-agar secco - 12 - 15 g; cloruro di sodio chimicamente puro - 8,6 g; Soluzione all'1% (filtrata) di arancio metilico su alcool a 50° - 5 - 10 ml; mertiolato - 0,01 g; acqua distillata - 1 l.

Nota. Per impostare la reazione è meglio usare l'agar-agar Difko, si dissolve completamente, non è necessaria la filtrazione del mezzo. Altre varietà di agar-agar richiedono un'attenta filtrazione.

Dopo che l'agar si è solidificato, vengono praticati dei fori utilizzando un tubo di metallo o di vetro a pareti sottili con un diametro interno di 4-5 mm, disponendoli secondo lo stencil (vedere Fig. -).

Per la reazione negli animali di grandi dimensioni vengono utilizzati pezzi di cervello: il corno di ammonio, la corteccia degli emisferi, il cervelletto, il midollo allungato; nei ratti, roditori, porcellini d'India, criceti, ecc. - tre parti qualsiasi del cervello; i topi hanno l'intero cervello.

Schema di installazione della microprecipitazione:
UN - corteccia (emisfero sinistro); IN- corteccia (emisfero destro); CON- corno di ammonio (a sinistra);
D- corno di ammonio (a destra); E- cervelletto; E- midollo;
1 , 2 , 3 , 4 - diluizioni di globuline rispettivamente 1:2, 1:4, 1:8, 1:16.

RP positivo con tutte le diluizioni di globulina
(corteccia cerebrale di pecora, rabbia di strada)

RP positivo con diluizioni di globulina 1:4; 1:8, 1:16
(corno di cane ammon, rabbia di strada)

RP positivo con diluizioni di globulina 1:16,
non sono presenti linee di precipitazione con diluizioni 1:2, 1:4,
(cane midollo allungato, rabbia di strada)

Il cervello viene macinato in un mortaio di porcellana con un pestello o nel cranio stesso fino a formare una "pasta", che viene riempita di pozzetti per l'antigene. I restanti pozzetti vengono riempiti con globulina antirabbica precipitante ad una diluizione di 1:2, 1:4, 1:8, 1:16. Il volume degli ingredienti utilizzati è 0,02 ml.

I controlli con antigeni positivi e negativi vengono posizionati contemporaneamente su un vetrino separato utilizzando lo stesso agar utilizzando lo stesso stencil.

Dopo aver posizionato gli ingredienti della reazione negli appositi pozzetti, i vetrini vengono trasferiti in una camera umida (piastre Petri con carta da filtro bagnata o cotone idrofilo) e posti in un termostato per 6 ore ad una temperatura di 37-38 °C. Le stoviglie vengono poi lasciate a temperatura ambiente per altre 18 ore.

La contabilizzazione della reazione viene effettuata 3, 6 e 24 ore dopo la sua presa. Per evitare che l'agar si secchi, i vetrini di reazione vengono posti nelle stesse piastre Petri contenenti cotone idrofilo inumidito dopo ogni osservazione.

Con una reazione di precipitazione su agar positiva, si possono formare una, due e molto raramente tre linee di precipitazione parallele tra i pozzetti con globulina e antigene. Le linee di precipitazione risultanti sono visivamente visibili quando gli occhiali sono illuminati con un illuminatore dal basso verso l'alto con un angolo di circa 45°.

Con indicazioni negative della reazione di precipitazione, viene effettuato un test biologico.

10. Reazione di immunofluorescenza. Si basa sulla rilevazione mediante microscopi speciali (ML-1, ML-2, ML-3, ecc.) di un antigene virale che ha reagito con uno specifico siero antirabbico marcato con un colorante fluorescente.

Per la reazione, vengono realizzate stampe sottili e a strati uguali su vetri accuratamente sgrassati di cervello fresco o appena congelato. Le impronte vengono preparate da pezzi di cervello (corno di Ammon, corteccia cerebrale, cervelletto, midollo allungato) allo stesso modo dell'esame microscopico. Da ogni pezzo di cervello vengono preparati almeno 4 preparati. Per il controllo, i farmaci vengono prodotti in modo simile dal cervello di un animale sano.

Dopo essiccamento all'aria, i preparati vengono fissati in acetone per 4 ore ad una temperatura non superiore a 4°C. Il contenitore del fissativo deve essere ben chiuso per evitare l'evaporazione del liquido fissativo. Dopo aver fissato con acetone, applicare sui preparati alcune gocce del coniugato (gammaglobuline antirabbica fluorescenti) in diluizione di lavoro. Successivamente vengono posti in una camera umida (piastra Petri o cuvetta smaltata chiusa con fondo inumidito) per 20 - 30 minuti ad una temperatura di 25 °C.

Successivamente, i preparati vengono lavati con acqua o soluzione tampone fosfato (pH 7,2 - 7,4) per 1 ora, quindi risciacquati con acqua distillata, essiccati all'aria e sottoposti a ricerca. Le preparazioni vengono visionate con il sistema ad immersione. Per l'immersione viene utilizzato olio non luminescente.

In una preparazione colorata, al microscopio a fluorescenza, il tessuto cerebrale diventa fluorescente (si illumina) con un colore giallo-grigiastro opaco. L'antigene del virus della rabbia viene rilevato nei preparati sotto forma di granuli di colore verde-giallastro o verde brillante di varie forme e dimensioni, da appena percettibili a con un diametro di 15-20 micron.

Nella preparazione di controllo non si osservano granuli giallo-verdi intensamente luminosi.

Nello studio con il metodo degli anticorpi fluorescenti, la diagnosi di rabbia è considerata stabilita se in diversi campi visivi del microscopio si trova un numero sufficiente (almeno 10) di granuli tipici con un bagliore verdastro brillante di varie dimensioni. Nel controllo di tali formazioni non dovrebbe essere.

In assenza di fluorescenza positiva, viene posizionato un campione biologico.

III. CAMPIONE BIOLOGICO

11. Un test biologico per la rabbia viene effettuato se si ottiene un risultato negativo durante l'esame microscopico (non vengono rilevati corpi di Babes-Negri), con reazioni sierologiche (non viene rilevato l'antigene specifico della rabbia), nonché quando vengono rilevate inclusioni atipiche. Il test biologico viene effettuato su topi bianchi o conigli.

12. Topi o conigli sperimentali vengono infettati con una sospensione al 10% del cervello testato in soluzione salina o brodo di carne e peptone con un pH compreso tra 7,2 e 7,4. Per preparare la sospensione vengono utilizzate le stesse parti del cervello da cui è stato prelevato il materiale per gli studi microscopici e sierologici.

Le aree escisse del cervello vengono raccolte in una provetta sterile e pesate, quindi macinate accuratamente in un mortaio con un pestello, dopodiché viene aggiunta soluzione salina fisiologica o brodo di carne e peptone per ottenere una sospensione al 10%. La sospensione risultante viene lasciata riposare per 10 minuti e il surnatante viene utilizzato per l'infezione.

Se il materiale patologico è stato contaminato, il surnatante viene versato in un altro recipiente (provetta) e vengono aggiunti 500-1000 UI di penicillina e streptomicina per 1 ml di liquido, dopo di che viene lasciato riposare per altri 30 minuti a temperatura ambiente e poi utilizzato per l'infezione. La sospensione deve essere preparata in condizioni sterili e nel rigoroso rispetto delle regole di prevenzione personale.

Test biologico su topi bianchi. Per l'infezione vengono utilizzati topi bianchi del peso di 8-10 g, per ogni studio vengono prelevati 6 topi, di cui 3 infetti nel cervello e 3 per via sottocutanea. Quando si infetta il cervello, l'ago viene inserito in un punto dietro la linea che collega gli angoli posteriori e leggermente lontano dalla linea che corre al centro della testa. Il sito dell'infezione viene pulito con alcol. La sospensione viene somministrata alla dose di 0,03 ml. Per impedire la penetrazione profonda dell'ago nel cervello, sulla punta viene posizionato un limitatore: un piccolo pezzo di tubo di gomma, che viene fissato a una distanza di 2-3 mm dall'estremità dell'ago. In caso di infezione sottocutanea, la sospensione viene iniettata nella regione della punta del naso (labbro superiore) alla dose di 0,05 ml. Si forma un piccolo gonfiore nel sito di iniezione. I topi infetti vengono posti in barattoli di vetro e osservati per 30 giorni. Con un risultato positivo di un test biologico sui topi, di solito tra il 7° e il 15° giorno dopo l'infezione, si sviluppa una clinica di rabbia paralitica.

Inizialmente si notano letargia, pelo arruffato e una sorta di gobba, oltre a una ridotta coordinazione dei movimenti. Poi arriva la paralisi degli arti posteriori e, successivamente, quella anteriore, che si trasforma in paralisi generale, che termina con la morte. La durata della malattia è di 2-3 giorni.

Con lo sviluppo della paralisi generale, i topi vengono sacrificati utilizzando l'anestesia con etere o cloroformio. Nei topi morti e uccisi, la cavità cranica viene aperta, il cervello viene inoculato su mezzi nutritivi, dopo di che il cervello viene rimosso, da cui vengono preparati i preparati per studi microscopici e immunobiologici.

In assenza di manifestazioni cliniche di rabbia nei topi infetti, vengono distrutti entro 30 giorni. I barattoli in cui erano conservati vengono accuratamente disinfettati.

Test biologico sui conigli. Per costituire un campione biologico vengono prelevati 4 conigli del peso di almeno 1,5 kg ciascuno. 2 conigli sono infetti al cervello e 2 per via intramuscolare nella zona della coscia. La sospensione viene somministrata per via intracerebrale alla dose di 0,2 ml e per via intramuscolare alla dose di 2 ml.

Con un risultato positivo del test biologico, i conigli si ammalano entro 16-21 giorni. La malattia della rabbia si manifesta nei conigli in forma paralitica silenziosa con esito fatale. Nei conigli morti, il cervello viene rimosso e vengono eseguite ulteriori ricerche allo stesso modo di quando si infettano i topi. I conigli vengono osservati per 45-50 giorni. Dopo il periodo specificato, i conigli vengono distrutti. Le gabbie in cui sono stati tenuti gli animali da esperimento vengono disinfettate.

IV. ESAME ISTOLOGICO 1

1 L'esame istologico viene utilizzato come metodo aggiuntivo

Per l'esame istologico, vengono prelevati pezzi di corno di Ammon, corteccia cerebrale, cervelletto, midollo allungato e fissati in una o due porzioni di acetone in modo che la durata della fissazione sia entro 6-18 ore.

È meglio lasciare il fissaggio in acetone durante la notte. Quindi il materiale patologico viene fatto passare attraverso due porzioni di xilene, trattenute per 30 minuti ciascuna, e attraverso due porzioni di paraffina - 1 ora ciascuna. Le sezioni pronte vengono deparaffinate con il metodo consueto e colorate secondo Lenz o Turevich:

La colorazione secondo Lenz. Le sezioni vengono colorate con una soluzione di eosina per 1-3 minuti (0,5 g di eosina vengono sciolti in 100 ml di alcol etilico al 60%). L'eosina viene rapidamente lavata via con acqua e colorata con blu di metilene di Lefleur per 1 minuto, lavata con acqua, asciugata accuratamente con carta da filtro e differenziata con una soluzione di unità. cui sodio in alcool assoluto (5 gocce di soda caustica per 30 ml di alcool) fino ad un colore rosa pallido. Sul preparato si versa una soluzione di acido acetico (1 goccia di acido acetico glaciale per 60 ml di alcool assoluto) e si mantiene fino alla comparsa di un tenue colore azzurro, si lava rapidamente con alcool e si chiarisce con xilene per 4-5 minuti. I corpi di Babesh-Negri sono colorati di rosso vivo con inclusioni blu, il citoplasma delle cellule gangliari è azzurro pallido;

Colorazione secondo Turevich. Le sezioni deparaffinate immediatamente dopo il passaggio attraverso alcoli e acqua distillata vengono colorate con ematossilina di Weigert o Ehrlich, lavate con acqua distillata. Quindi colorati con una soluzione acquosa all'1% di fucsina acida per 1 minuto e lavati accuratamente con acqua distillata fino alla comparsa di una tonalità rosa pallido. Dopo il lavaggio si tratta con una miscela (in parti uguali) di una soluzione acquosa satura di acido picrico (25-30 g di acido picrico per 1 litro di acqua distillata calda) e alcool al 96%. Durante la lavorazione si osserva la fuoriuscita di nuvole di vernice rossa e le sezioni acquisiscono una tinta gialla dopo 10-20 s. Le sezioni vengono sciacquate rapidamente in acqua e asciugate leggermente con carta da filtro. Poi, altrettanto velocemente, viene fatto passare attraverso alcol assoluto o 96°, carbol-xilene, xilene puro e posto in un balsamo. I corpi di Babesh-Negri sono rosso ciliegia, i nuclei delle cellule sono neri o blu, a seconda dell'ematossilina con cui sono colorati. La forma e le dimensioni dei corpi di Babesh-Negri sono molto diverse, si trovano nel citoplasma e nei processi delle cellule nervose sotto forma di numerose o singole copie. Più spesso, i corpi di Babes-Negri si trovano in grandi cellule gangliari e le cellule che li contengono non presentano segni pronunciati di degenerazione.

Spesso si trovano altre inclusioni che, a causa di una serie di caratteristiche simili, vengono talvolta scambiate per corpi di Negri. Va tenuto presente che il cervello dei gatti sani e dei topi bianchi talvolta contiene corpi inclusi acidofili non specifici. Questi corpi si differenziano dai corpi Negri per l'assenza di granuli interni e per l'omogeneità della sostanza principale.

La rabbia è caratterizzata anche da segni di encefalomielite acuta: prevalentemente intorno alle piccole vene si trovano infiltrati perivascolari, costituiti principalmente da cellule linfoidi che assomigliano a manicotti cellulari.

Nelle cellule gangliari del cervello possono verificarsi cromatolisi, vacuolizzazione e gonfiore acuto delle cellule, nonché la morte di singole cellule. Nell'area delle cellule nervose danneggiate, la reazione proliferativa della glia è abbastanza costante, assumendo la forma di una vera neuronofagia, seguita dalla sostituzione delle cellule nervose con elementi della glia moltiplicata. Un tale accumulo di cellule proliferanti nel sito di una cellula nervosa disintegrata è chiamato "nodulo della rabbia" - a volte il processo di sviluppo del nodulo può essere tracciato su un'area (1).

Rabbia - una malattia infettiva acuta che si manifesta con gravi danni al sistema nervoso, solitamente con esito fatale. Gli esseri umani e tutti i mammiferi sono sensibili.

La rabbia è onnipresente. L'agente eziologico dell'infezione viene trasmesso da cani, gatti, roditori selvatici e predatori, nonché da pipistrelli vampiri succhiatori di sangue.

La durata del periodo di incubazione dipende dalla posizione e dalla forza del morso, dalla quantità e dalla virulenza del virus entrato nella ferita e dalla resistenza dell'animale morso. Il periodo di incubazione dura da 1-3 settimane a un anno o anche di più.

La malattia sta correndo acutamente. I suoi segni clinici sono sostanzialmente gli stessi in tutti gli animali, ma sono più tipici nei cani, nei quali si può osservare un decorso della malattia sia violento che silenzioso (paralitico). Nei bovini la rabbia può manifestarsi in modo atipico (perdita dell'appetito, atonia del rumine, paralisi della faringe, salivazione). Potrebbe non esserci alcuno stadio di eccitazione.

Cambiamenti patologici non specifico. Nei mangiatori di carne (soprattutto cani), nello stomaco possono essere trovati corpi estranei.

Il virus della rabbia ha una neuroprobasia pronunciata. Penetrando dalla periferia (sito del morso) lungo i tronchi nervosi nel sistema nervoso centrale in modo centripeto, si diffonde nel corpo in modo centrifugo lungo i nervi periferici ed entra in vari organi, comprese le ghiandole salivari.

Si applica il virus alla famiglia Rhabdoviridae, Tipo Lyssavirus. I virioni sono a forma di bastoncello con l'estremità troncata. Virus virione - contenente RNA con una simmetria di tipo spirale, ha un guscio lipoproteico. Le basse temperature preservano il virus. Una temperatura di 60 ° C lo uccide in 5-10 minuti, la luce solare - in 5-7 giorni. Soluzioni di formalina, fenolo, acido cloridrico (5%) inattivano il virus in 5-10 minuti.

Il virione del virus della rabbia contiene antigeni glicoproteici (esterni) e nucleocapside (interni). L'antigene glicoproteico induce la formazione di anticorpi neutralizzanti il virus e l'antigene nucleocapside induce la formazione di anticorpi che fissano il complemento e precipitano.

Nel corpo, il virus è localizzato principalmente nel sistema nervoso centrale, così come nelle ghiandole salivari e nella saliva.

coltivato su topi, conigli, porcellini d'India e altri animali, nonché in colture cellulari primarie (reni di criceto, embrioni di pecora, vitelli, ecc.) e cellule trapiantate. La riproduzione del virus nelle colture cellulari non si manifesta sempre con la CPD. Anche gli embrioni di pollo sono sensibili al virus della rabbia dopo l'adattamento preliminare. Il virus induce la formazione di corpi inclusi citoplasmatici, che si trovano più spesso nelle cellule del corno di ammonio, del cervelletto e della corteccia cerebrale.

fonte di infezione sono animali malati. Trasmettono il virus quando mordono. I carnivori possono infettarsi mangiando il cervello e il midollo spinale di animali morti di rabbia. È stata dimostrata la possibilità di infezione da rabbia per via aerogena (in luoghi dove sono presenti pipistrelli). Fino agli anni '60, cani e gatti erano la principale fonte di rabbia, poi volpi, lupi, corsacchi e altri animali selvatici.

Diagnosi la rabbia viene valutata sulla base di dati epizootologici, clinici e dei risultati di studi di laboratorio, che sono di importanza decisiva.

Quando si lavora con animali malati e materiale infetto, è necessario osservare rigorosamente le misure di sicurezza personale: indossare guanti di gomma, camici con maniche lunghe, grembiule di gomma o polietilene, stivali di gomma, occhiali protettivi e una maschera facciale.

È vietato aprire sul campo animali sospettati di rabbia.

Ottenere materiale patologico. Per la ricerca sulla rabbia, vengono inviati al laboratorio cadaveri freschi di piccoli animali nel loro insieme e di animali di taglia grande e media: la testa con le prime due vertebre cervicali. I cadaveri di piccoli animali vengono trattati con insetticidi prima di essere inviati alla ricerca.

Il materiale patologico è confezionato in sacchetti di plastica, posti in scatole ermeticamente chiuse con un tampone assorbente imbevuto di disinfettante. Materiale e lettera di accompagnamento indicante il mittente e il suo indirizzo, tipologia di animale, dati anamnestici e giustificazione del sospetto che l'animale abbia la rabbia, data e firma del medico.

Diagnostica di laboratorio. Comprende: rilevamento dell'antigene virale in RIF e RDP, corpi di Babes-Negri e test biologici su topi bianchi.

Barriera corallina. Per questa reazione, la bioindustria produce una gammaglobulina antirabbica fluorescente.

Tecnica di impostazione del RIF . Su vetrini sgrassati vengono preparate impronte o strisci sottili provenienti da varie parti del cervello sui lati sinistro e destro (corno di Ammon, corteccia cerebrale, cervelletto, midollo allungato). Preparare almeno due preparati di ciascuna parte del cervello. Puoi anche esaminare il midollo spinale, le ghiandole sottomandibolari e salivari. Per il controllo, i preparati vengono preparati dal cervello di un animale sano (di solito un topo bianco).

I preparati vengono essiccati all'aria, fissati in acetone refrigerato (meno 20 °C da 4 a 12 ore), essiccati all'aria, viene applicata gammaglobulina fluorescente, posta in una camera umida a 37 °C per 25-30 minuti, quindi accuratamente lavato con soluzione salina o tampone fosfato a pH 7,4, risciacquato con acqua distillata, asciugato all'aria, applicato con un olio da immersione non fluorescente e osservato al microscopio a fluorescenza.

Nei preparati contenenti l'antigene del virus della rabbia appaiono in diverse dimensioni e forme granuli giallo-verdi fluorescenti nei neuroni ma più spesso fuori dalle celle.

Non dovrebbe esserci tale bagliore nel controllo, il tessuto nervoso di solito si illumina di un colore grigiastro o verdastro opaco. L'intensità del bagliore viene valutata in croci.

Il risultato è considerato negativo in assenza di fluorescenza specifica.

Il materiale proveniente da animali vaccinati contro la rabbia non può essere esaminato nel RIF per 3 mesi. dopo la vaccinazione, poiché potrebbe verificarsi fluorescenza dell'antigene del virus vaccinale.

Nel RIF, i tessuti conservati con glicerina, formalina, alcool e

ecc., nonché materiale che presenti segni di degrado anche lieve.

RDP in gel di agar . Il metodo si basa sulla capacità degli anticorpi e degli antigeni di diffondere in un gel di agar e, una volta incontrati, formare linee di precipitazione visivamente visibili (complesso antigene + anticorpo). Viene utilizzato per rilevare l'antigene nel cervello di animali morti a causa del virus della rabbia di strada o durante un'infezione sperimentale (test biologico).

totale:0
In contatto con 0
Google+ 0
OK 0
Facebook 0