Decifrare l'analisi con il metodo IF. Analisi ELISA: cos'è: metodi dei risultati

Saggio immunoassorbente collegato(o ELISA in breve) è un test di laboratorio che aiuta a fare una diagnosi accurata, identificare malattie nascoste, determinare la predisposizione a determinate malattie e anche monitorare l'efficacia della terapia prescritta. Durante lo studio, nel siero del paziente vengono rilevati antigeni caratteristici di specifici agenti patogeni e anticorpi contro di essi.

Qual è il punto

Per comprendere il principio dell'ELISA, è necessario ricordare come funziona il sistema immunitario del corpo, cosa sono gli "antigeni" e gli "anticorpi" e quali funzioni svolgono.

Un antigene è una molecola che trasporta determinate informazioni su una cellula. Se un antigene estraneo entra nel corpo, gli anticorpi (o immunoglobuline (Ig)), in risposta alla comparsa di un microrganismo estraneo nel corpo, si legano ad esso e riconoscono se è proprio o di qualcun altro. , gli anticorpi iniziano a distruggere un oggetto potenzialmente pericoloso. Tale interazione viene chiamata "antigene-anticorpo". complesso immunitario. Il metodo ELISA si basa su questo.

Indicazioni

L'analisi è ampiamente utilizzata per diagnosticare varie malattie. E ciò che è particolarmente prezioso è che questo studio diagnostica accuratamente le malattie che si verificano nel corpo in modo nascosto, senza sintomi.

Può essere utilizzato per identificare:

• malattie infettive a trasmissione sessuale (clamidia, ureaplasmosi, micoplasmosi, sifilide, herpes, HIV, ecc.);
• toxoplasmosi, tubercolosi, epatite, morbillo, ecc.;
• problemi autoimmuni;
• oncologia;
• ormoni sessuali;
• ormoni tiroidei;
• allergia.

L'ELISA può persino rilevare marcatori di malattie cardiache. Inoltre, è prescritto anche per valutare l'efficacia del ciclo di trattamento, nonché prima di alcuni tipi di interventi chirurgici.

Preparazione

Il sangue per la ricerca viene prelevato da una vena a stomaco vuoto, preferibilmente al mattino.

Alla vigilia dovresti astenervi dall'alcol, dalle bevande zuccherate, dal caffè e da una cena abbondante. Inoltre, i risultati degli indicatori possono essere influenzati dall'uso di alcuni farmaci, quindi è necessaria la consultazione con il medico.

È obbligatorio evitare di fumare 4 ore prima dell'evento.

Analisi del sangue ELISA in CLINICA

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Tra i vantaggi di questo metodo si può individuare il fatto che lo rileva già nelle prime fasi dello sviluppo della malattia. La sensibilità del test è del 90%. Lo studio mostra accuratamente la dinamica del processo infettivo, che consente allo specialista di monitorare l'efficacia della terapia. L'intero processo è completamente automatizzato, il che elimina l'influenza del cosiddetto "fattore umano".

Inoltre, le apparecchiature ad alta precisione consentono di ottenere risultati di ricerca affidabili nel più breve tempo possibile.

Puoi decifrare i risultati lo stesso giorno con il medico. Sulla base di essi, il medico sceglierà una tattica terapeutica adatta a te.

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Come è lo studio ELISA

meccanismo di reazione

Il test immunoenzimatico si basa sulla reazione immunitaria di un antigene con un anticorpo e l'attaccamento di un'etichetta enzimatica agli anticorpi consente di tenere conto del risultato della reazione antigene-anticorpo mediante la comparsa di attività enzimatica o un cambiamento nell'attività enzimatica. il suo livello. In forma semplificata, il meccanismo di reazione può essere rappresentato come segue:

	La prima reazione avviene tra l'Ig (Ab) rilevato e l'antigene patogeno purificato (Ag) fissato sulla superficie dei pozzetti della piastra immunologica
	Per identificare gli immunocomplessi formatisi, viene effettuata una seconda reazione immunologica, in cui le Ig specifiche legate agiscono come antigene, e agisce un coniugato che rappresenta le Ig (Ab) alle corrispondenti Ig umane, marcate con l'enzima -perossidasi (K). come anticorpi contro di esso.
	Successivamente avviene una reazione enzimatica, catalizzata dalla parte enzimatica della molecola coniugata.Il substrato di questa reazione è una sostanza incolore - un cromogeno, che durante la reazione forma una sostanza colorata. L'intensità del colore nel pozzetto dipende in un certo modo dalla quantità di immunoglobuline contenute nel campione.

Punteggio

Esecuzione del test immunoenzimatico

Per la sierodiagnosi vengono utilizzate piastre di polistirene da 96 pozzetti, sulle cui pareti cellulari viene preventivamente adsorbito l'antigene. Il siero del test viene aggiunto alla cella della compressa. In questo caso ad esso sono attaccati anticorpi omologhi all'antigene. Gli anticorpi non attaccati vengono rimossi mediante lavaggio. Successivamente, nelle cellule vengono introdotti anticorpi marcati con enzimi contro le immunoglobuline umane (anticorpi). Se nel siero del test erano presenti anticorpi rilevabili, in questa fase agiranno come antigeni con cui reagiranno gli anticorpi marcati. L'aggiunta di una sostanza cromogena (colorante) dopo il lavaggio consentirà di tenere conto della reazione sviluppando una colorazione nelle cellule. In questo caso, l'intensità del colore è proporzionale alla quantità di enzima, e quindi alla quantità di anticorpi.Quando si misura la densità ottica (OD) di un liquido in una cellula e lo si confronta con un campione di controllo, viene calcolata la concentrazione di anticorpi in unità di volume. I risultati più comunemente utilizzati sono calcolati in unità di densità ottica. Ogni sistema di test ha i propri indicatori di contabilità dei risultati e indicatori della norma e della patologia, che dovrebbero essere guidati nell'interpretazione dei risultati.

Quali infezioni possono essere rilevate mediante ELISA

Viene utilizzato principalmente nella venereologia moderna per la diagnosi della sifilide (in combinazione con altre reazioni), dell'infezione da HIV, dell'epatite virale. Ha un'importanza limitata per la diagnosi dell'infezione da clamidia, dell'infezione da citomegalovirus e di altre infezioni erpetiche. Il metodo ELISA è anche utilizzato per determinare gli anticorpi in varie malattie infettive, i livelli ormonali, gli autoanticorpi e vari marcatori tumorali.

Come interpretare i risultati ELISA

Lo studio della presenza e del livello di anticorpi di varie classi in alcuni casi aiuta a determinare le fasi del processo infettivo

Stadio della malattia	IgM	IgA	IgG
Fase primaria (2 settimane dall'infezione)
Fase primaria (2,5 - 3 settimane dall'infezione)
Fase primaria (3-4 settimane dall'infezione)
Esacerbazione della fase cronica (2 settimane dall'inizio della riacutizzazione)
fase cronica
Passato (infezione curata)
Recupero		diminuzione del titolo di 2-4 volte dopo il successo del trattamento	diminuzione del titolo di 4-8 volte in 1-1,5 mesi dopo il successo del trattamento
Risultato negativo

Sfortunatamente, un vantaggio così importante dell'ELISA come la determinazione quantitativa degli anticorpi non è di grande importanza nel lavoro pratico, ad es. non consente una diagnosi accurata e non influisce sul dosaggio e sui tempi di prescrizione dei farmaci.

Qual è il ruolo del metodo ELISA nella diagnosi della sifilide

Il metodo ELISA nella diagnosi della sifilide è stato utilizzato per la prima volta nel 1975. Attualmente è ampiamente utilizzato per la diagnosi sierologica della sifilide in Russia e viene utilizzato come test di conferma per la sifilide. Di solito viene effettuato uno studio che rileva la so- chiamati anticorpi totali contro gli antigeni del treponema pallidum (IgM e IgG), sebbene in alcuni casi sia possibile determinare solo gli anticorpi "precoci" della classe M. L'ELISA per la sifilide diventa positivo dopo 3 settimane dal momento dell'infezione e rimane positivo per un periodo piuttosto lungo molto tempo anche dopo il trattamento (a volte per tutta la vita). Pertanto, come test che conferma la cura della sifilide, l'ELISA non viene utilizzato. Nella maggior parte dei casi, viene effettuata solo una determinazione qualitativa dell'ELISA, cioè solo un risultato positivo o negativo, sebbene sia possibile anche la quantificazione.

Analisi ELISA: che cos'è? Il nome completo di questo metodo diagnostico si chiama dosaggio immunoenzimatico e si basa sulla determinazione nel sangue periferico degli anticorpi di varie classi, o immunoglobuline, prodotti dal corpo umano.

Nella pratica medica, l'analisi ELISA occupa un posto molto importante quando è necessario diagnosticare qualsiasi patologia infettiva. Questa analisi mostra non solo il fatto della presenza di una malattia infettiva, ma anche lo stadio del processo patologico. Inoltre, non solo in relazione all'agente patogeno, è indicato l'uso del metodo ELISA: viene utilizzato per diagnosticare condizioni allergiche. Questo test consente di identificare problemi nel sistema immunitario, con molte malattie del sistema emopoietico, autoimmuni e altri disturbi.

Perché è necessario l'ELISA?

Tutti i ricercatori sono propensi a credere che il nome «anticorpo» sia scelto troppo male. Tuttavia, riflette una caratteristica importante delle immunoglobuline: sono in grado di legare e neutralizzare le sostanze nocive, avvicinandosi ad esse come una "chiave" di una "serratura". La quantità di anticorpi nel sangue riflette non solo la capacità complessiva del corpo di difendersi dalle infezioni, ma anche la capacità di formare complessi immunitari circolanti, che possono verificarsi in varie malattie autoimmuni, come l’artrite reumatoide o la spondilite anchilosante.

I complessi di anticorpi con un antigene (un fattore dannoso di natura infettiva) sono il risultato della risposta del corpo all'introduzione di "estranei". Pertanto, il sistema immunitario impara a riconoscerli, con l'aiuto dei linfociti forma cellule immunocompetenti e queste sono in grado di produrre anticorpi altamente specifici. Pertanto, gli anticorpi contro il virus Epstein sono disposti in modo diverso rispetto agli anticorpi contro l'epatite virale C, o contro E. coli, e gli anti-HAV, o gli anticorpi contro il virus dell'epatite A, in modo diverso rispetto agli autoanticorpi contro il tessuto cartilagineo. È l'elevata specificità e la corrispondenza delle immunoglobuline con un agente patogeno infettivo che rende uno studio di laboratorio come un test immunoenzimatico del sangue di alto valore.

Dopo una forte connessione di anticorpi e antigeni in un unico complesso (antigene-anticorpo), i fattori dannosi perdono la loro capacità di danneggiare i tessuti corporei, e quindi questi complessi vengono neutralizzati o lisati mediante fagocitosi da parte dei neutrofili e, "digeriti", lasciano il corpo.

Un esame del sangue ELISA può mostrare quale specifico fattore patogeno si trova ad affrontare il nostro corpo, in quale fase si trova l'interazione del corpo con l'infezione. Dopo lo studio, il medico può fare una prognosi con un alto grado di certezza, prescrivere determinati tipi di trattamento e in alcuni casi può anche determinare l'aspettativa di vita del paziente, soprattutto nelle infezioni virali croniche, come l'epatite virale C.

Ma in alcuni casi, non ci sono agenti infettivi nel corpo e gli anticorpi "per errore" si avventano sui loro stessi organi e tessuti, poiché le cellule immunocompetenti hanno ricevuto false informazioni. Tali malattie sono chiamate autoimmuni e il test immunoenzimatico aiuta anche a riconoscere questa patologia cronica e aiuta nella diagnosi.

Maggiori informazioni sulle immunoglobuline

In totale, il corpo umano produce 5 classi conosciute di anticorpi, che sono designate Igg(che sta per immunoglobuline), che appartengono alle classi A, M, G, E e D. Tutte sono di grande importanza nell'interpretazione dei risultati dell'analisi ELISA. Naturalmente ci sono molti più complessi e non tutti sono ancora aperti. Ma nella diagnosi di varie malattie, i primi tre tipi di anticorpi sono più preziosi. Un esame del sangue ELISA utilizza il massimo delle informazioni: il momento in cui gli anticorpi compaiono nel sangue, la variazione della loro concentrazione in base al tempo, il momento della scomparsa e il tipo di anticorpi specifici.

Quindi, i partecipanti al processo infettivo primario e acuto sono le immunoglobuline di classe M, che indicano sempre una fase acuta, anche quando il decorso clinico della malattia viene cancellato. Un tipico esempio è la forma anitterica dell'epatite virale acuta B o C. Un test immunoassorbente enzimatico per l'epatite mostrerà che una persona ha un'epatite acuta e sintomi come dolore all'ipocondrio, secchezza delle fauci, dolori alle articolazioni e altri sintomi non-patologici. i sintomi specifici diventano facilmente comprensibili.

Alcune settimane dopo, questi anticorpi si trovano in concentrazioni sempre più evanescenti, cedendo alle immunoglobuline di classe G. Si determinano nel sangue per molti mesi e persino anni, e indicano o una guarigione, e poi possono rimanere per tutta la vita, formando un forte immunità. Ciò indica una potente difesa contro gli antigeni degli agenti patogeni. Quindi, sono gli anticorpi di questa classe che rendono una persona immune da casi ripetuti di antrace e peste. Ma ci sono casi in cui questi anticorpi non interferiscono con i loro effetti dannosi in presenza di antigeni. In questo caso, possiamo parlare di un aumento dell'attività di un processo cronico.

Prima di tutto, devi capire che non esiste un'analisi del genere: "solo sangue per ELISA". C'è un'analisi per l'epatite, a volte per l'ureaplasma o per la sifilide. Pertanto, la donazione del sangue per l'ELISA può essere solo mirata, "ordinando" la ricerca dell'infezione desiderata. È così incomprensibile il motivo per cui donare il sangue da una vena, senza sapere cosa cercare. Ecco perché il metodo di dosaggio immunoenzimatico è uno strumento potente e importante nella ricerca diagnostica. Solo un medico può prescrivere questa analisi, poiché cerca intenzionalmente un'infezione caratterizzata da questi sintomi. Una persona comune, ovviamente, può ordinare 150 esami del sangue ELISA per “tutte le infezioni”, ma questo sarebbe un approccio irragionevole e costoso alla diagnosi, facendo test per tutto.

L'appuntamento di queste analisi è più richiesto per le seguenti malattie e condizioni:

Varie infezioni microbiche e virali, sintomi di malattie infettive: eruzioni cutanee, febbre, ittero, linfonodi ingrossati, sindrome da diarrea, sospette malattie a trasmissione sessuale.

La tecnica ELISA aiuta nella determinazione dell'ureaplasma e del micoplasma, della sifilide e della clamidia, della tubercolosi e dell'infezione da citomegalovirus, dell'herpes, dell'epatite virale e del virus Epstein-Barr. Attualmente è possibile verificare circa 500 infezioni diverse utilizzando il metodo immunoenzimatico,

Se sospetti un'invasione elmintica e la presenza di sintomi come allergie, eosinofilia nel sangue, prurito, dispepsia e perdita di peso,

Quando si identificano gli allergeni che causano edema di Quincke, orticaria, mancanza di respiro e attacchi di soffocamento asmatico.

In questo caso vengono rilevate Ig E specifiche e ci sono interi pannelli allergici che aiuteranno a determinare con precisione l'allergene: calamari o gamberetti, cibo secco per pesci contenente dafnia, polvere domestica. Con la febbre da fieno, questo metodo consente di trovare esattamente il cereale, l'arbusto o l'albero che causa starnuti e lacrimazione primaverili,

• Questo metodo è indicato per sospette malattie autoimmuni trattate da reumatologi,
• Se si sospetta la crescita e l’attività del tumore,
• Nella complessa diagnostica degli stati di immunodeficienza e dell’infezione da HIV,
• Nelle malattie del sangue e nei trapianti, per una valutazione completa dell'immunità, ad esempio prima di un trapianto di fegato o di rene.

Ora sappiamo perché è necessario donare il sangue per l'ELISA. Scopriamo come viene condotta questa ricerca.

Come viene eseguita l'analisi?

Il materiale classico è il sangue venoso del paziente. Ma se necessario, puoi esaminare un'ampia varietà di fluidi e tessuti: muco, saliva, secrezione cervicale, liquido cerebrospinale, corpo vitreo dell'occhio, contenuto del cordone ombelicale e liquido amniotico. È importante ricordare che l'assunzione di vari farmaci, l'eccessiva attività fisica, l'abuso di alcol, possono falsare notevolmente i risultati dei test.

Esistono diversi metodi che consentono di effettuare questa analisi. Molto spesso nei laboratori clinici viene utilizzato il metodo fotometrico. In questo caso vengono utilizzate sostanze marcate con coloranti, dopo la cui reazione e la marcatura del complesso antigene-anticorpo, il loro colore cambia. Di conseguenza, cambia anche la densità ottica della soluzione e questo cambiamento è direttamente proporzionale alla concentrazione degli anticorpi rilevati. Gli spettrofotometri da laboratorio sono stati utilizzati con successo per misurare queste deviazioni.

Inoltre, per condurre l'ELISA, viene utilizzato un metodo fluorimetrico, la cui base è la fluorescenza. Anche qui viene calcolata l'intensità delle sostanze fluorescenti che si sono depositate sui campioni in studio.

Infine, nei test immunologici, vengono utilizzati metodi elettrochimici per determinare l'attività degli enzimi, che sono marcatori specifici per antigeni e anticorpi. Il metodo ELISA stesso prevede molto spesso l'uso di enzimi come la fosfatasi alcalina, la perossidasi di rafano e la galattosidasi. Questi enzimi sono in grado di legarsi ad anticorpi o antigeni e marcarli grazie alla loro attività.

Contro del metodo e suoi vantaggi

Gli ovvi "vantaggi" includono il costo democratico dell'analisi, la possibilità del suo utilizzo per lo screening in ampi gruppi di popolazione, ad esempio quando si esaminano le donne incinte per l'HIV. Il metodo immunoenzimatico è abbastanza specifico e può essere utilizzato per controllare la qualità del trattamento di molte malattie. È importante che l'analisi venga preparata rapidamente e sia semplice e sicura per il paziente.

Ci sono, tuttavia, molte insidie. Quindi, se le immunoglobuline non vengono rilevate, ciò non significa un'assenza del 100% della malattia. In effetti, sullo sfondo dell'immunodeficienza, il corpo semplicemente potrebbe non "essere forte" per la sintesi di anticorpi. Se il paziente ha una grave insufficienza epatica, il fegato semplicemente non è in grado di sintetizzare le proteine, il materiale da costruzione per gli anticorpi. In questo caso, il risultato è chiamato sieronegativo e la conferma dell'infezione è richiesta dal metodo di ricerca diretto e più avanzato: PCR o reazione a catena della polimerasi. A differenza del test immunoassorbente enzimatico, questo metodo non rivela la reazione del corpo al processo infettivo (che può essere difettoso o del tutto assente), la PCR determina direttamente il materiale ereditario o viene trovato l'agente patogeno stesso.

Nel laboratorio di emostasi MLC viene utilizzato un nuovo metodo ELISA altamente sensibile: ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), un test immunologico eterogeneo in fase solida. Durante lo studio viene determinata la presenza nel sangue del paziente di anticorpi contro agenti patogeni di varie malattie.

Costo dell'analisi ELISA*

Perché eseguire un test immunoenzimatico

ELISA è utilizzato in molte aree della medicina. Nelle persone con malattia coronarica, aterosclerosi e ipertensione, vengono rilevati anticorpi contro le proteine ​​del sistema emostatico - trombina, a2 macroglobulina e antitrombina 3, nonché contro i bioregolatori peptidici del sistema di coagulazione - angiotensina 2 e bradichinina.

L'ELISA ha dimostrato la sua efficacia nella diagnosi prenatale e nel determinare la fertilità: si tratta di un test AFP (diagnosi della spina bifida, trisomia nel feto), test per gli ormoni steroidei estradiolo, estriolo, progesterone.

Molteplici complicazioni della gravidanza, infertilità e tromboflebite provocano una grave malattia autoimmune: la sindrome da antifosfolipidi. La diagnosi di APS presso il Women's Medical Center viene effettuata anche mediante test immunoenzimatico: vengono determinati gli anticorpi contro la cardiolipina, la glicoproteina b2, la protrombina e l'annessina 5.