Tra le cause di infertilità, i fattori genetici e immunologici occupano un posto speciale. Speciali: perché non possono essere corretti o sono molto difficili da correggere. Queste stesse circostanze influenzano non solo la possibilità del concepimento, ma anche l'andamento della gravidanza e la salute del nascituro, diventando spesso causa di aborti spontanei o di malattie congenite. Pertanto, l’analisi del cariotipo di una coppia sposata e il cariotipo HLA sono studi necessari per identificare le cause dell’infertilità e minimizzare i rischi di anomalie genetiche.

Perché fare i test del cariotipo e dell'HLA?

I test del cariotipo e della tipizzazione HLA aiutano a determinare le cause genetiche e immunologiche dell'infertilità

Un cariotipo si riferisce alle caratteristiche dei cromosomi inerenti a un singolo organismo: forma, numero, struttura e altri. In alcuni casi, i cromosomi alterati, senza manifestarsi o influenzare il portatore, diventano la causa dell'infertilità, della comparsa di malattie genetiche nel bambino o della mancata gravidanza. Cariotipoè una procedura di analisi del sangue progettata per identificare riarrangiamenti cromosomici in entrambi i genitori, nonché cambiamenti nella posizione dei loro frammenti. L'analisi può essere eseguita senza aberrazioni o con aberrazioni. Nel secondo caso si tratta di uno studio esteso che permette di calcolare il numero di anomalie e identificarne l'impatto sul genoma.

Il secondo studio si chiama Tipizzazione HLA; si tratta della determinazione degli antigeni di istocompatibilità dei coniugi (antigeni dei leucociti umani), il cui insieme è anch'esso individuale per ogni persona. Grazie alle loro molecole, l'organismo distingue le cellule estranee e produce anticorpi specifici contro di esse. Se l'HLA dei futuri genitori è simile, possiamo parlare di: il corpo percepisce l'embrione come un corpo estraneo e lo rifiuta.

Costo in cliniche e laboratori a Mosca

La tabella mostra il costo approssimativo dei test in diversi laboratori di Mosca.

	Cariotipo	HLA-digitando	Appunti
Genomato, medico-geneticocentro	5400 rubli. (per ciascun coniuge)	6000 rubli. (per ciascun coniuge)
In vitro	Circa 7000 rubli.	5100 rubli.	Entrambe le analisi sono incluse nel programma di un esame genetico completo di una coppia, che costa da 73 a 82 mila rubli. per ciascuno dei coniugi.
Bio-Optima	5400 rubli.	5300 rubli.
C&R	Da 5900 (senza aberrazioni) a 9750 (con aberrazioni) rubli	5550 rubli.	In caso di pagamento dei test online, la clinica offre uno sconto fino al 30%.
Istituto di Genetica RAMS	5000 r.	5000 r.
NT im. Kulakova	5000 rubli.	3500 rubli.
Centro medicoimmunocorrezione	Da 2900 a 5800 (con aberrazioni)	2900 – un'analisi, 5800 – tipizzazione in coppia

Notiamo alcune caratteristiche dei test in queste cliniche:

1. Lo studio del cariotipo è piuttosto lungo: 21-23 giorni. La tipizzazione HLA richiede 5-7 giorni.
2. La maggior parte delle cliniche offre anche test genetici completi volti a diagnosticare la probabilità di alcune malattie in un bambino (ad esempio fibrosi cistica, autismo e altre).
3. Il prezzo è indicato senza il costo del prelievo di sangue (200-300 rubli) e della consultazione con un genetista (da 1500 rubli)

Solo un medico dovrebbe interpretare i risultati della ricerca! Non costituiscono una diagnosi né una base per l’automedicazione!

Indicazioni per la ricerca

Entrambe le analisi sono facoltative. Di norma, sono prescritti nei seguenti casi:

1. Donne che pianificano una gravidanza di età superiore ai 35 anni.
2. Coniugi che hanno già avuto figli con malattie congenite.
3. Donne con aborti ricorrenti.
4. Famiglie in cui si sono verificati casi ripetuti di aborti precoci.
5. Coppie che soffrono di infertilità.
6. Nel caso in cui un'ecografia rivelasse anomalie nello sviluppo del feto.
7. Come parte dell'esame prima

Nomi alternativi: tipizzazione genetica secondo HLA-B27, inglese: antigene di istocompatibilità della spondilite anchilosante.

La determinazione del marcatore immunogenetico HLA-B27 è un metodo di ricerca genetica molecolare, che consiste nell'identificare la presenza o l'assenza nel genotipo dell'allele specifico 27 ​​del locus B. Il gene con questo allele è responsabile della sintesi di uno dei antigeni di istocompatibilità, caratteristici di alcune malattie autoimmuni, vale a dire le spondiloartropatie (patologie dello scheletro assile).

Casi particolari di tali malattie sono:

1. La malattia di Bechterew.
2. La sindrome di Reiter.
3. Artrite reumatoide giovanile.
4. Artrite psoriasica.

Molto spesso, questo allele viene rilevato nelle cosiddette varianti "sieronegative" di queste malattie, quando è impossibile confermarle con altri metodi, cioè i test tipici per il fattore reumatoide e gli autoanticorpi danno un risultato negativo.

I geni HLA si trovano sul braccio corto del cromosoma VI. Sono caratterizzati da un alto grado di polimorfismo: la presenza di un gran numero di varianti alleliche. Esistono 136 alleli identificati specificamente per l'HLA-B, molti dei quali si trovano solo nelle persone di una determinata razza o etnia.

Materiale per la ricerca: sangue venoso in un volume di 5 ml.

Metodo di ricerca: PCR – reazione a catena della polimerasi.

Per l'analisi non è richiesta alcuna preparazione particolare. Non è consigliabile fumare immediatamente prima di donare il sangue.

Indicazioni per determinare i livelli di HLA-B27

L'analisi viene utilizzata per la diagnosi differenziale della cosiddetta sindrome articolare, che comprende i seguenti sintomi:

• oligoartrite asimmetrica (sono interessate una o due articolazioni su un lato);
• dolore nella regione lombare;
• rigidità articolare mattutina per più di 1 ora;
• entesite: dolore nei punti in cui i legamenti sono attaccati alle ossa.

Si consiglia di prescrivere l'analisi per l'artrite reumatoide.

Nella pratica diffusa, il metodo viene utilizzato per lo screening, la diagnosi primaria e la valutazione della prognosi della spondilite anchilosante.

Valori di riferimento e interpretazione dei risultati

L'analisi è di natura qualitativa, ovvero un determinato allele viene rilevato o meno.

Un risultato negativo si osserva nella maggior parte delle persone e indica un rischio relativamente basso di sviluppare spondiloartropatie, sebbene non escluda completamente la possibilità del loro sviluppo.

Un risultato positivo nelle persone con sindrome articolare indica la presenza di una delle spondiloartropatie autoimmuni. In caso di risultato positivo allo screening in una persona sana, si ritiene che il rischio di sviluppare le malattie sopra menzionate sia circa 20 volte maggiore. Un risultato positivo nelle persone sane si verifica nel 7-8% della popolazione. Tuttavia, ciò non significa che una persona si ammalerà sicuramente.

Informazioni aggiuntive

Risultati falsi positivi si verificano quando i linfociti nel campione di sangue vengono distrutti, quindi il test deve essere eseguito entro 24 ore dal prelievo del sangue.

La tipizzazione HLA-B27 è molto importante nella diagnosi precoce della spondilite anchilosante. Dal momento in cui compaiono i primi segni della malattia fino alla comparsa di un quadro clinico dettagliato, che consente di formulare una diagnosi senza dubbi, passano dai 5 ai 10 anni. Ciò è dovuto al fatto che il criterio principale per la diagnosi sono i segni radiologici di sacroileite (infiammazione a lungo termine delle articolazioni sacroiliache).

La presenza del solo dolore alla schiena costringe questi pazienti a sottoporsi a cure a lungo termine da parte di neurologi senza consultare un reumatologo. La prescrizione del test HLA-B27 in una situazione del genere può essere motivo sufficiente per indirizzare successivamente il paziente a un reumatologo. Ciò consentirà di iniziare una terapia specifica in una fase precoce della malattia e di ridurre la probabilità di disabilità. Ciò è particolarmente importante nella diagnosi di tali malattie nei bambini.

Letteratura:

1. Lapin S.V., Mazina A.V., Bulgakova T.V. e altri Linee guida metodologiche per la diagnosi di laboratorio delle malattie autoimmuni. San Pietroburgo, ed. Università medica statale di San Pietroburgo, 2011.
2. McHugh K, Bowness P. Il collegamento tra HLA-B27 e SpA: nuove idee su un vecchio problema. Reumatologia (Oxford). 2012 settembre;51(9):1529-39.

Metodo di determinazione PCR in tempo reale.

Materiale in studio Sangue intero (con EDTA)

Disponibile visita a domicilio

Non viene rilasciato il parere di un genetista

Loci DRB1, DQA1, DQB1.

La tipizzazione genetica HLA di classe II è un test obbligatorio per la selezione di un donatore per il trapianto di organi. Inoltre, alcune varianti alleliche dei geni HLA di classe II sono associate ad un aumento del rischio di numerose malattie (diabete mellito di tipo I, malattie reumatoidi, tiroidite autoimmune, suscettibilità alle malattie infettive, ecc.). La tipizzazione genetica HLA di classe II viene utilizzata per diagnosticare alcune forme di infertilità e aborto spontaneo.

Gli alleli analizzati dei geni DRB1, DQB1 e DQA1 del sistema HLA di classe II sono presentati nella tabella:

Gruppi allelici del gene DRB1	Gruppi allelici del gene DQB1	Gruppi allelici del gene DQA1
DRB1*01	DQB1*02	DQA1*0101
DRB1*03	DQB1*0301	DQA1*0102
DRB1*04	DQB1*0302	DQA1*0103
DRB1*07	DQB1*0303	DQA1*0201
DRB1*08	DQB1*0304	DQA1*0301
DRB1*09	DQB1*0305	DQA1*0401
DRB1*10	DQB1*0401/*0402	DQA1*0501
DRB1*11	DQB1*0501	DQA1*0601
DRB1*12	DQB1*0502/*0504
DRB1*13	DQB1*0503
DRB1*14	DQB1*0601
DRB1*1403	DQB1*0602-8
DRB1*15
DRB1*16

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Rischio di sviluppare malattie multifattoriali Disturbi metabolici Salute riproduttiva Salute riproduttiva delle donne I geni HLA di classe II (antigeni leucocitari umani) comprendono 24 geni caratterizzati da un polimorfismo pronunciato. I geni HLA di classe II sono espressi nei linfociti B, nei linfociti T attivati, nei monociti, nei macrofagi e nelle cellule dendritiche. I prodotti proteici codificati dai geni HLA di classe II, che hanno potenti proprietà antigeniche, appartengono al complesso maggiore di istocompatibilità (abbreviazione inglese: MHC - major histocompability complex), svolgono un ruolo importante nella regolazione del riconoscimento di agenti estranei e sono un partecipante necessario in molti reazioni immunologiche. Di tutti i geni HLA di classe II, 3 geni sono di massima importanza nella pratica clinica: DRB1 (più di 400 varianti alleliche), DQA1 (25 varianti alleliche), DQB1 (57 varianti alleliche). Lo studio dei marcatori genetici consente di identificare gruppi a diverso rischio di sviluppare il diabete, il che determina diverse tattiche per la diagnosi preclinica precoce della malattia. Inoltre, lo studio dei marcatori genetici aumenta significativamente il valore prognostico degli studi immunologici e ormonali. Il diabete mellito di tipo I è una malattia con predisposizione ereditaria, determinata da una combinazione sfavorevole di geni normali, la maggior parte dei quali controlla varie parti dei processi autoimmuni. Nelle famiglie dei pazienti, il rischio di sviluppare il diabete mellito è: nei figli di padri malati - 4 - 5%; nei bambini di madri malate - 2 - 3%; tra i fratelli - circa il 4%. Il rischio di sviluppare il diabete dipende dal numero dei familiari malati: se ci sono 2 persone con diabete (2 figli o genitore-figlio), il rischio per un bambino sano va dal 10 al 12%, e se entrambi i genitori hanno la malattia di tipo 1 diabete, è superiore al 30%. Il rischio di sviluppare il diabete per i parenti dipende anche dall'età in cui si manifesta la malattia negli altri membri della famiglia: quanto prima inizia il diabete, tanto maggiore è il rischio del suo sviluppo nelle persone sane. Pertanto, quando il diabete si manifesta tra 0 e 20 anni, il rischio che si sviluppi tra fratelli è del 6,5%, mentre quando si manifesta tra 20 e 40 anni è solo dell'1,2%. Il diabete mellito di tipo 1 e 2 sono malattie geneticamente e nosologicamente indipendenti, quindi la presenza del diabete di tipo 2 nei parenti non influenza il rischio di sviluppare il diabete di tipo 1 nei familiari. I geni che determinano la suscettibilità al diabete di tipo 1 si trovano su cromosomi diversi. Attualmente sono noti più di 15 di questi sistemi genetici. Di questi, i più studiati, e presumibilmente i più significativi, sono i geni di classe 2 della regione HLA, situata sul braccio corto del cromosoma 6. Il rischio di sviluppare il diabete nei fratelli può essere valutato anche dal grado di identità HLA con la persona con diabete: se sono completamente identici il rischio è massimo ed è circa del 18%, per fratelli semiidentici il rischio è del 3% e per quelli completamente diversi - meno dell'1%. Lo studio dei marcatori genetici consente di identificare gruppi a diverso rischio di sviluppare il diabete, il che determina diverse tattiche per la diagnosi preclinica precoce della malattia. Inoltre, lo studio dei marcatori genetici aumenta significativamente il valore prognostico degli studi immunologici e ormonali.

Letteratura

1. SÌ. Chistyakov, I.I. Dedov “Locus della predisposizione genetica al diabete di tipo 1 (Messaggio 1) “Diabete mellito” N. 3, 1999.
2. Boldyreva M.N. “HLA (classe II) e selezione naturale. Genotipo “funzionale”, ipotesi del vantaggio dell’eterozigosità “funzionale”. Tesi di Dottorato in Scienze Mediche, 2007
3. Caratteristiche dell'esordio e della prognosi delle complicanze vascolari nei pazienti con diabete adulto a progressione lenta (Latent Autoimmune Diabetes in Adults - LADA). Un manuale per i medici / A cura del direttore del Centro di ricerca dell'Accademia russa delle scienze mediche, accademico dell'Accademia russa delle scienze mediche Professore I. I. Dedov. - Mosca - 2003. - 38 p.
4. Banca dati OMIM *608547 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/dispomim.cgi?id=608547.

Genotipizzazione di una coppia sposata (HLA classe II)- uno studio genetico che determini le varietà HLA di classe II in entrambi i coniugi. L'analisi aiuta a identificare i fattori immunologici dell'aborto spontaneo.

Sistema HLA (antigene leucocitario umano)- determina l'istocompatibilità dei tessuti e rappresenta un insieme di diversi tipi di proteine ​​presenti sulla superficie delle cellule. Ogni persona ha il proprio set di antigeni HLA.

I geni che codificano per le proteine ​​del sistema HLA si trovano sul braccio corto del cromosoma 6.

Esistono due classi di antigeni HLA: HLA classe I e HLA classe II. Gli antigeni della prima classe del sistema si trovano sulla superficie di tutte le cellule del corpo. I geni che li codificano sono localizzati in tre loci A, B e C; sono caratterizzati da un elevato grado di polimorfismo. I geni HLA II sono rappresentati da loci nella regione D: HLA-DQ, -DP e -DR. Gli antigeni sono presenti sulla superficie delle cellule del sistema immunitario: linfociti, monociti, macrofagi, cellule epiteliali.

Per una gravidanza normale, la mancanza di compatibilità HLA di classe II è fondamentale.

Durante la gravidanza, il nascituro eredita due alleli di ciascun gene HLA: uno dalla madre, uno dal padre. Per il corpo materno, gli antigeni paterni del feto sono estranei. Il corpo femminile produce anticorpi protettivi che si legano agli antigeni HLA paterni del feto e li proteggono. Ciò contribuisce al normale sviluppo del feto e al corso della gravidanza.

Nel caso in cui i genitori abbiano corrispondenze per 3 o più antigeni HLA di classe II, la formazione di anticorpi protettivi è nettamente ridotta o non si verifica. Per il sistema immunitario della madre, il feto in via di sviluppo diventa estraneo e vengono avviati meccanismi volti alla sua eliminazione. Si verificano rigetto dell'embrione e aborto spontaneo.

Maggiore è il numero di corrispondenze antigeniche, maggiore è il rischio di una risposta immunitaria anomala dalla madre al feto durante la gravidanza.

Indicazioni:

• aborto ricorrente;
• tentativi di fecondazione in vitro falliti.

Preparazione
Non è richiesta alcuna preparazione speciale. Si consiglia di prelevare il sangue non prima che siano trascorse 4 ore dall'ultimo pasto.

Il sangue viene prelevato da entrambi i coniugi contemporaneamente.

Interpretazione dei risultati
La risposta è fornita in un formato di alta qualità. Per entrambi i coniugi sono indicati il ​​genotipo e il fenotipo.
Viene emessa una conclusione sulla presenza di partite.
Si ritiene che la presenza di tre o più corrispondenze possa aumentare il rischio di aborto spontaneo immunitario. La condizione richiede la consultazione con un immunologo.
L'assenza di coincidenze indica che la gravidanza procede senza cambiamenti.

Tipizzazione HLA dei coniugi

Tipizzazione HLA dei coniugi

La tipizzazione HLA dei coniugi è uno dei metodi per determinare le cause dell'infertilità, che si basa sullo studio delle caratteristiche immunologiche degli organismi di un uomo e di una donna. L'essenza della tecnica è determinare la "compatibilità" dei partner.

Caratteristiche di compatibilità HLA

Gli antigeni HLA sono marcatori speciali presenti assolutamente in tutte le cellule di un organismo vivente. Sono rappresentati da un insieme unico di diverse sequenze di molecole proteiche che differiscono da persona a persona.

Queste strutture esistono nel corpo per identificare le cellule “sé” e “estranee”. Normalmente, dopo la penetrazione di microrganismi estranei (virus, batteri) o il trapianto di organi di donatori, vengono immediatamente innescate reazioni immunitarie, che si manifestano con la distruzione delle cellule corrispondenti.

Se nel caso di virus e microbi patogeni ciò è positivo, durante il trapianto i pazienti devono utilizzare immunosoppressori per il normale funzionamento del nuovo organo o parte del corpo. La difesa antitumorale del corpo funziona allo stesso modo. Le cellule mutanti vengono immediatamente riconosciute e distrutte.

In caso di gravidanza (il suo decorso normale), il feto è per metà “estraneo” al corpo della madre, poiché ha ricevuto il 50% del materiale genetico dal padre. Il bambino non viene rifiutato grazie al meccanismo di sintesi di anticorpi bloccanti che ne impediscono la morte. Tuttavia, se i set di antigeni nei coniugi sono troppo simili, questo processo viene interrotto.

Se l'analisi della tipizzazione HLA rivela troppe somiglianze nelle sequenze corrispondenti di un uomo e di una donna, questo potrebbe essere un fattore importante nell'incapacità di avere un feto. Il motivo è che il corpo della madre non produce abbastanza anticorpi bloccanti. Di conseguenza, egli vede il bambino non nel ruolo di un “estraneo protetto”, ma nella forma di propri tessuti alterati che devono essere distrutti.

Come viene eseguito il test HLA?

La compatibilità HLA viene studiata in numerose situazioni. Le indicazioni per lo studio sono:

• Infertilità di origine sconosciuta.
• Aborto abituale.

Alcuni medici in tali situazioni offrono ai loro pazienti di sottoporsi alla tipizzazione HLA. La decodifica dei risultati finali rivelerà la “compatibilità” degli sposi. Tuttavia, questo metodo non è l'unico modo per determinare la causa della patologia. Inoltre, presenta una serie di gravi svantaggi.

Il processo di studio del polimorfismo dell'antigene HLA può essere effettuato in due modi:

1. Classico (sierologico). In questo caso, sulla base di un test microlinfocitotossico, viene effettuata un'analisi per la presenza di anticorpi specifici, che consentono di stabilire somiglianze o differenze nei corrispondenti insiemi di molecole proteiche dei coniugi.
2. Genetica molecolare. In questo caso viene utilizzata la reazione a catena della polimerasi (PCR), che consente una valutazione più accurata della presenza di geni specifici che codificano la comparsa degli antigeni HLA.

La tipizzazione genetica molecolare HLA rimane la migliore e la più popolare. I risultati di tale studio sono più accurati. I risultati falsi positivi e falsi negativi sono molto meno comuni.

HLA e fecondazione in vitro

Se in precedenza si sono verificati tentativi di fecondazione in vitro falliti o aborti ricorrenti, i medici a volte consigliano di eseguire un test HLA per determinare la compatibilità dei coniugi. Ciò ti consentirà di stabilire la presenza di un problema specifico e di scegliere il giusto metodo di preparazione per la procedura appropriata. Fondamentalmente si decide di iniziare la terapia immunomodulante, che evita il rigetto del feto da parte del corpo materno.

Un test di tipizzazione HLA può essere sostenuto in numerose cliniche riproduttive che si occupano di infertilità. Sulla base dello studio di 5-9 geni, viene effettuata un'analisi della compatibilità dei complessi corrispondenti nei coniugi. Tali centri offrono ai loro pazienti la tipizzazione HLA. Decifrare i risultati molto spesso richiede solo pochi giorni.

Svantaggi dello studio

La tipizzazione HLA dei coniugi, il cui prezzo a volte può essere piuttosto elevato (a seconda della clinica specifica), ha diverse proprietà molto importanti che lo rendono uno studio poco informativo. I principali sono:

• Studiando solo 5-9 geni durante il processo di tipizzazione. Considerando che più di 100 geni sono responsabili della formazione del complesso HLA, è ovvio che tale diagnosi non è affidabile.
• Il costo di un servizio come la tipizzazione HLA. Il prezzo per ogni singolo set di geni è diverso. Per un esame completo, a volte devi pagare circa 20 mila rubli.
• Esiste un numero relativamente piccolo di cliniche in cui è possibile sottoporsi alla tipizzazione HLA. Mosca e altre grandi città offrono questo servizio ai propri pazienti, ma nella maggior parte delle città non è disponibile.

I medici di VitroClinic ritengono inappropriato sottoporsi ad un test di tipizzazione HLA. Il suo costo è significativamente superiore al contenuto informativo effettivo. Nella maggior parte dei casi, è ancora necessario prescrivere metodi aggiuntivi per esaminare i coniugi, poiché la tipizzazione HLA non consente di determinare in modo inequivocabile la causa dell'infertilità.