ARGOMENTO DELLA LEZIONE: Laboratorio batteriologico e regole di lavoro in esso. Classificazione dei microrganismi. Morfologia dei batteri. Metodi per determinare il tipo di microbi. metodo batterioscopico. Tecnica microscopica con sistema ad immersione.
OBIETTIVO DI APPRENDIMENTO: Acquisire familiarità con il dispositivo del laboratorio batteriologico e le regole di lavoro in esso contenute. Familiarizzare con i principi di classificazione dei microrganismi. Studiare le caratteristiche morfologiche dei batteri e i metodi per determinare il tipo di microbi. Padroneggiare il metodo di ricerca batterioscopico e la tecnica della microscopia con un sistema ad immersione.
OBIETTIVI DELLA LEZIONE:
1. Familiarizzare con la struttura del laboratorio batteriologico e le regole di lavoro al suo interno.
2. Conoscere i principi di classificazione dei microrganismi.
3. Studiare le caratteristiche morfologiche dei batteri e i metodi per determinare il tipo di microbi.
4. Padroneggia la tecnica della microscopia con un sistema ad immersione.
Dispositivo da laboratorio batteriologico
Il laboratorio batteriologico è progettato per studiare materiali contenenti agenti patogeni di infezioni batteriche, per determinare indicatori sanitari e microbiologici, controllare lo stato e l'intensità dell'immunità specifica e altri studi microbiologici. Il laboratorio batteriologico dovrebbe essere situato in locali isolati dagli altri laboratori dotati delle attrezzature e dei mobili necessari. Il laboratorio dovrebbe avere un ingresso separato, guardaroba e bagno con doccia. Il laboratorio batteriologico dovrebbe includere i seguenti locali:
Spazio per la ricezione e la registrazione dei materiali;
Locali scatolati per ricerche microbiologiche;
Autoclave;
lavaggio;
Vivaio.
Le sale per la ricerca microbiologica sono dotate di termostati, frigoriferi, centrifughe, bilance, bagnomaria e agitatori elettromagnetici. Sui tavoli viene posizionata l'attrezzatura necessaria. Il lavoro con materiale infetto viene effettuato in boxe Con pre-boxer. All'ingresso del box dovrà essere presente un tappetino imbevuto di disinfettante. Nella scatola, i campioni ricevuti vengono smontati, le impronte vengono preparate e fissate, le inoculazioni di microrganismi vengono effettuate su terreni nutritivi. Pertanto, nella scatola vengono posizionati dei tavoli su cui sono posizionati gli strumenti necessari per il lavoro: contenitori con disinfettanti per piatti usati, rack per provette, provette e piastre Petri con terreni nutritivi, pipette sterili, mortai, ecc. , tappi, mascherine, e anche nello spogliatoio dovrebbero esserci scarpe sostituibili. L'anticamera può ospitare termostati, frigoriferi, centrifughe e altre apparecchiature. Nei box e prebox vengono effettuate quotidianamente per 30-40 minuti prima e dopo il lavoro la pulizia con acqua, la disinfezione e l'irradiazione con lampade battericide.
IN autoclavatoè necessario disporre di due autoclavi: un'autoclave per materiali puliti (per la sterilizzazione di vetreria, mezzi nutritivi, strumenti); un'altra autoclave per materiali infetti (per lo smaltimento di strumenti e materiali infetti).
lavaggio progettato per lavare i piatti. Piatti, pipette e strumenti contaminati con materiale infetto devono essere lavati solo dopo la sterilizzazione. Dispone di armadi di asciugatura.
vivaio si riferisce ai locali utilizzati per la custodia degli animali da laboratorio. In un vivaio è necessario disporre di un reparto di quarantena, locali per animali sperimentali e sani, locali per lavare e disinfettare le gabbie, inventario e tute, una cucina per la preparazione del cibo, una dispensa, un foraggio e un inceneritore. Tutte le stanze del vivaio dovrebbero essere isolate l'una dall'altra.
Un laboratorio batteriologico è un'istituzione scientifica e pratica che esegue studi immunologici e altri studi microbiologici. Ci sono laboratori medici, veterinari e batteriologici industriali.
I laboratori medici batteriologici sono organizzati nelle stazioni sanitarie ed epidemiologiche, ecc. Per condurre ricerche al fine di chiarire le diagnosi e il controllo sanitario ed epidemiologico. Presso il laboratorio batteriologico sono presenti: un impianto medio, un lavello, una sala di preparazione, una sala di sterilizzazione, ecc. I dispositivi e le attrezzature dei laboratori batteriologici devono essere adattati per eseguire ricerche in condizioni sterili, garantendo il personale da possibili infezioni. La stanza del laboratorio batteriologico dovrebbe essere luminosa e spaziosa. È necessario escludere la possibilità di bozze. Un posto speciale è riservato ai preparati per la colorazione.
L'attrezzatura obbligatoria sul posto di lavoro del batteriologo è un bruciatore, un barattolo con una soluzione di acido carbolico per pipette usate, un recipiente chiudibile, supporti per provette e un'ansa batterica, cuvette smaltate, pinzette, forbici, bisturi, vetrini e coprioggetto . Il laboratorio batteriologico dovrebbe disporre di vassoi metallici per piastre Petri, secchi zincati o serbatoi per lo scarto delle piastre usate. Oltre alla normale vetreria da laboratorio, i laboratori batteriologici vengono forniti con tipi speciali di vetreria: per la coltivazione su terreni densi, materassi batterici, ecc. Sono necessari anche bulbi di gomma per aspirare materiale particolarmente pericoloso nelle pipette. I batteriologici devono essere lavati accuratamente, sterilizzati mediante trattamento termico e chiusi con tamponi di cotone sterili. Non utilizzare prodotti chimici sui piatti, poiché le loro tracce possono influenzare lo sviluppo dei microbi. I più importanti per un laboratorio batteriologico sono i dispositivi per la semina dei microrganismi (anse batteriche, pipette Pasteur, spatole di vetro e platino). Per condurre le colture in condizioni asettiche, i laboratori batteriologici sono dotati di speciali scatole vetrate dotate di lampade ultraviolette (vedi).
Il laboratorio batteriologico necessita di: un frigorifero per la conservazione dei sieri e di altri substrati biologici; microscopio con illuminatore; centrifuga; o una stanza termostatica per la crescita dei batteri; apparecchi per agitare varie miscele; , sterilizzatore ad aria secca (forno Pasteur) per la sterilizzazione, stoviglie e sterilizzatori elettrici. I locali di servizio per il lavoro con animali da laboratorio, per il lavaggio e l'asciugatura delle stoviglie, per la distribuzione dei mezzi nutritivi, ecc. devono essere adeguatamente attrezzati.
Quando si lavora in un laboratorio batteriologico, in particolare con microrganismi patogeni, è necessario osservare le seguenti regole.
1. Tutte le persone nel laboratorio batteriologico devono indossare una tuta.
2. In camera è vietato mangiare e fumare.
3. Ogni dipendente dovrebbe utilizzare solo il proprio posto di lavoro.
4. Tutte le operazioni devono essere eseguite nel rispetto delle regole di sterilità: tutti i raccolti vengono effettuati vicino alla fiamma del bruciatore, la trasfusione di liquidi infetti viene effettuata su un vassoio con una soluzione disinfettante, ecc.
5. Tutto l'inventario che è stato in contatto con materiale infetto è soggetto a sterilizzazione o distruzione.
6. Tutte le colture, così come gli animali infetti, vengono registrate e registrate in un giornale utilizzando un modulo speciale.
Un laboratorio batteriologico è un'istituzione scientifica e pratica che esegue ricerche microbiologiche. I laboratori batteriologici clinici e diagnostici presso gli ospedali, a seconda del profilo di questi ultimi, conducono gli studi necessari per stabilire o chiarire la diagnosi. I laboratori batteriologici nelle stazioni sanitarie ed epidemiologiche effettuano esami preventivi della popolazione ed esami sanitari e batteriologici dei prodotti alimentari. I laboratori batteriologici che svolgono funzioni di controllo sono altamente specializzati, ad esempio, nelle aziende che producono preparati batterici. Oltre ai laboratori medici, esiste una rete di laboratori batteriologici veterinari che eseguono studi diagnostici e preventivi sugli animali e laboratori batteriologici specializzati che soddisfano le esigenze dell'industria alimentare, dell'agricoltura, ecc. I laboratori batteriologici presso gli istituti di ricerca competenti eseguono vari compiti di ricerca.
La struttura di un grande laboratorio batteriologico comprende: il laboratorio vero e proprio, i supporti impiantistici, i lavaggi, i preparativi, la sterilizzazione e il vivaio. La stanza del laboratorio batteriologico dovrebbe essere luminosa e spaziosa. Sopra il lavandino è fissata una bottiglia con una soluzione per la disinfezione delle mani. I tavoli da lavoro sono rivestiti in linoleum o vetro. Un bruciatore a gas o alcool, un barattolo per pipette usate con una soluzione al 3% di acido fenico, un contenitore per cotone idrofilo, un'ansa batterica, una serie di standard batterici, portaprovette, cuvette, pinzette, forbici, bisturi, vetrini e i vetrini vengono posizionati sul tavolo. Il laboratorio batteriologico dovrebbe essere dotato di serbatoi per lo scarto dei piatti infetti. Di solito, in un laboratorio batteriologico, è attrezzato un tavolo speciale per i preparati coloranti.
Riso. 1. Piastre di Petri.
Riso. 2. Materasso per la crescita dei batteri.
Riso. 3. Pipette Pasteur.
In un laboratorio batteriologico, oltre alla normale vetreria chimica, è necessaria vetreria speciale: piastre Petri in vetro (Fig. 1) per la coltivazione di batteri su supporti solidi; materassi batterici (Fig. 2) per ottenere grandi quantità di massa microbica; Tubi Roux con restringimento per la crescita di batteri su banchi di patate; Provette Wasserman lunghe 90 mm e diametro interno. 9 - 10 mm per impostare RSK e reazione di agglutinazione; tubi di precipitazione lunghi 90 mm e dia. 3-5mm; Provette batteriche per la coltivazione di batteri su mezzi nutritivi liquidi e solidi; Pipette Pasteur (Fig. 3); Pipette Mohr per la semina di materiale liquido infetto; pipette automatiche o pipette a pere, esclusa l'aspirazione del materiale con la bocca. La vetreria utilizzata in un laboratorio batteriologico deve essere lisciviata in una soluzione di HCl all'1-2% e sterilizzata ad alta temperatura. Le vaccinazioni su terreni nutritivi solidi vengono effettuate utilizzando spatole di vetro (Fig. 4) e un'ansa batterica (Fig. 5). Coltiva i batteri nei termostati o nelle stanze termostatiche.
Riso. 4. Spatole di vetro.
Riso. 5. Ansa batterica.
Un laboratorio batteriologico impegnato nello studio dei batteri anaerobici deve essere dotato di anaerostati, pompe a vuoto, che vengono utilizzate anche per la filtrazione e l'ultrafiltrazione. Per mantenere la sterilità quando si lavora con colture batteriche, i laboratori batteriologici sono dotati di speciali scatole vetrate. Tutti i terreni nutritivi, le colture batteriche e i sieri vengono conservati in frigorifero.
Ogni laboratorio batteriologico dovrebbe essere dotato di una centrifuga, di un agitatore (Fig. 6) e di un microscopio. Per la maggior parte degli studi viene utilizzato un microscopio MBI-1 con un illuminatore OI-7 e un dispositivo a contrasto di fase.
Riso. 6. Apparecchio per l'agitazione (apparecchio shuttle).
Il laboratorio batteriologico deve essere dotato di apparecchiature per la sterilizzazione: autoclave, apparecchio Koch, forno Pasteur, apparecchio per la coagulazione del siero. Per la sterilizzazione di substrati liquidi utilizzare filtri batterici (vedi). I laboratori batteriologici dovrebbero disporre di dispositivi per versare i mezzi (Fig. 7), kit di reagenti per eseguire alcune analisi chimiche, nonché un comparatore di Michaelis o un potenziometro per determinare il pH del mezzo.
Riso. 7. Dispositivo per versare i media.
Il lavoro con gli animali nel laboratorio batteriologico viene effettuato solo in un vivaio (vedi).
Durante il lavoro in un laboratorio batteriologico è necessario osservare le seguenti regole: 1) tutti nel laboratorio devono indossare una tuta; 2) ogni dipendente deve avere un posto di lavoro; 3) è vietato mangiare e fumare nel laboratorio batteriologico; 4) quando si lavora con materiale infetto, è necessario utilizzare strumenti; gli strumenti che sono entrati in contatto con materiale infetto devono essere sterilizzati; 5) nell'aspirazione di materiale liquido si consiglia di utilizzare le pere; tutte le pipette devono essere tappate con cotone; 6) la trasfusione dei liquidi infetti viene eseguita su un vaso con una soluzione disinfettante; 7) il lavoro con materiale infetto viene effettuato presso il bruciatore, bruciando i bordi della provetta, anse, spatole, ecc.; 8) i piatti con materiale infetto devono essere iscritti con il nome della coltura, il numero e la data; 9) se il materiale infetto viene a contatto con gli oggetti circostanti, viene eseguita la disinfezione: questo luogo viene versato con una soluzione disinfettante e bruciato con un tampone con alcool in fiamme; 10) i materiali infetti, le stoviglie vengono registrati, messi in vasche e sterilizzati lo stesso giorno; 11) le colture vengono conservate in colonne di agar in provette sigillate con etichette; 12) la registrazione di tutte le colture, nonché degli animali infetti, viene effettuata in un giornale in una forma speciale.
Attrezzature per microbiologia clinica
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L'attrezzatura di un laboratorio microbiologico dovrebbe essere pienamente conforme ai moderni standard di qualità, producibilità e sicurezza e aiutare il ricercatore a risolvere i compiti nel modo più efficiente possibile. Dovrebbero esserci anche strumenti e dispositivi specializzati nel laboratorio di microbiologia attrezzature generali di laboratorio per migliorare la qualità e la produttività dell’assistente di laboratorio.
Moderne attrezzature di laboratorio generali necessarie per il funzionamento di un laboratorio microbiologico
Il lavoro di un microbiologo viene svolto in condizioni di rigorosa sterilità, che consente di evitare contaminazioni microbiche ed errori diagnostici. Mantenere condizioni sterili e proteggere il personale di laboratorio e gli oggetti nella coltura in studio dalla contaminazione microbica Questo tipo è un elemento integrante delle apparecchiature di laboratorio microbiologico, garantendo condizioni di lavoro estremamente pulite. Uno degli strumenti essenziali in un laboratorio microbiologico è , utilizzato per separare soluzioni e miscele liquide in frazioni di diversa densità. Le attrezzature di laboratorio per uso generale comprendono anche la conservazione dei reagenti e il mantenimento delle temperature operative. Utilizzo frigoriferi a bassa temperatura consente il congelamento e la conservazione sicura di campioni biologici a temperature fino a -150°C.
Attrezzature generali di laboratorio analitiche e ausiliarie
Ampliare la funzionalità del laboratorio microbiologico consente l'uso di strumenti analitici attrezzature generali di laboratorio . È possibile caratterizzare qualitativamente e quantitativamente la composizione dei campioni studiati con l'aiuto di , che aumentano la produttività e la comodità del lavoro negli studi di routine.
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SBEI SPO "Kislovodsk Medical College" del Ministero della Salute russo
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" Dispositivo"
Preparato da:
studente del gruppo 1 SD - 314
Blokhina Natalia
Controllato da: Ulyanova N.M.
Kislovodsk
Organizzazione del laboratorio
Gli studi microbiologici vengono condotti in locali speciali chiamati laboratorio microbiologico.
Il laboratorio microbiologico comprende diversi locali:
Sala laboratorio per la ricerca;
Spazio per la preparazione dei terreni nutritivi;
Locale per lavare i piatti (lavatoio);
Locale per la sterilizzazione di stoviglie, mezzi nutritivi (sala di sterilizzazione);
La boxe è una stanza isolata per il lavoro che richiede un maggiore grado di sterilità. Per fare ciò, prima del lavoro, l'aria e gli altri oggetti in essa contenuti vengono disinfettati.
Regole del lavoro V laboratorio microbiologico regime speciale
Prima di entrare nel laboratorio, tutti i dipendenti si tolgono i capispalla nello spogliatoio e nella stanza accanto con gli armadi individuali - il resto dei vestiti e della biancheria intima, indossano il pigiama, un camice medico, una sciarpa e calzini. Quando lavorano in una stanza componibile, indossano una tuta anti-peste, una seconda vestaglia componibile, un elmetto, una maschera di garza di cotone e guanti di gomma.
Attrezzatura laboratorio microbiologico
Le attrezzature di laboratorio microbiologico comprendono: dispositivi ottici (microscopi, lenti di ingrandimento), dispositivi termici (termostati, autoclavi, apparecchi Koch, armadi di essiccazione, frigoriferi, strumenti microbiologici (aghi batteriologici, anse, spatole) e chirurgici (bisturi, pinzette, supporti, forbici) , nonché provette, piastre Petri, vetrini e vetrini, provette di vetro, contagocce con coloranti. Il laboratorio richiede terreni nutritivi (agar nutriente secco, terreno Kessler, terreno Endo), agar-agar, gelatina, coloranti analitici (magenta, viola genziana , blu di metilene, blu di metilene), acidi vari, alcali, soda.
Me microbiologico ricerca
Per studiare i microrganismi vengono utilizzati diversi metodi specifici. I principali tipi di studi microbiologici sono:
batterioscopico (microscopico): lo studio della forma e della struttura dei microrganismi al microscopio;
batteriologico: lo studio delle colture di microrganismi mediante coltivazione, ad es. crescere su mezzi nutritivi artificiali;
sperimentale - determinazione dei microrganismi e dei loro veleni infettando animali da esperimento (topi, ratti bianchi, porcellini d'India). Molto spesso utilizzato per identificare l'agente eziologico dell'intossicazione alimentare;
sierologico: determinazione dei microrganismi utilizzando siero sanguigno contenente anticorpi. Questo metodo è ampiamente utilizzato nella microbiologia medica.
Il metodo di ricerca batteriologica determina le caratteristiche culturali (dimensione, forma, struttura, colore, lucentezza, profilo di una singola colonia) e le caratteristiche biochimiche dei microrganismi (la capacità di fermentare una sostanza che fa parte di vari mezzi nutritivi). Nell'esame batterioscopico vengono determinate le caratteristiche morfologiche (dimensione, forma, ecc.) dei singoli microrganismi e la loro capacità di macchiarsi con vari coloranti. Poiché in natura esistono molti microbi gemelli che sono simili tra loro nell'aspetto, quindi una batterioscopia di solito non è sufficiente per determinare il tipo di microrganismi, è necessario utilizzare il metodo di ricerca batteriologica.
P regole di lavoro nel laboratorio di microbiologia
Il lavoro nei laboratori microbiologici dovrebbe essere svolto in condizioni sterili, che è la principale regola di sicurezza. L'esecuzione del lavoro microbiologico in condizioni sterili dovrebbe garantire la prevenzione sia della contaminazione dell'ambiente esterno e del personale di lavoro con microbi provenienti dal materiale di prova, sia delle stesse colture pure isolate da parte di microrganismi estranei dall'ambiente.
Quando si lavora in un laboratorio microbiologico, è necessario osservare le seguenti regole:
essere in laboratorio e lavorarci necessariamente in vestaglia;
utilizzare un posto di lavoro permanente;
mantenere l'ordine sul posto di lavoro, non conservare su di esso oggetti estranei;
pinzette, spatole, anse e aghi microbiologici, pipette dopo aver lavorato con microrganismi, bruciare nella fiamma di una lampada ad alcool o immergere in un recipiente con una soluzione disinfettante (cloramina, disolo, acido carbolico);
tutti i materiali usati con microrganismi - preparati usati da colture vive, preparati temporanei, ecc. - devono essere prima neutralizzati mediante sterilizzazione o disinfezione e solo successivamente lavati;
alla fine delle lezioni pulire il posto di lavoro, togliere gli accappatoi e poi lavarsi le mani.
Nel laboratorio proibito:
indossare cappelli e capispalla;
lavorare senza accappatoio;
mangiare, bere acqua, fumare;
mettere oggetti estranei sui tavoli;
toccati il viso con le mani non lavate;
evitare camminate inutili, movimenti improvvisi, correnti d'aria che contribuiscono alla contaminazione del materiale di prova con microflora estranea.
A edificio del laboratorio microbiologico
I microbiologi si occupano di popolazioni (colture) di microrganismi, costituite da milioni di individui. Viene chiamata una coltura contenente microrganismi della stessa specie pulito. Se la coltura contiene più di un tipo di microrganismi, si chiama mista. Nella pratica microbiologica vengono utilizzate principalmente colture pure di microrganismi. A causa del fatto che nell'aria e sulla superficie degli oggetti (su tavoli, strumenti, vestiti), nonché su mani, capelli, ecc. Poiché è sempre presente un gran numero di microrganismi diversi, è necessario prestare attenzione a mantenere la purezza delle colture studiate. Il requisito della purezza delle colture determina in larga misura le specificità della struttura del laboratorio microbiologico e le regole di lavoro del microbiologo.
Il laboratorio microbiologico comprende una serie di stanze in cui viene svolto il lavoro con i microrganismi o la relativa preparazione. Le stanze più luminose e spaziose sono destinate alle sale laboratorio, la cui illuminazione naturale dovrebbe essere di almeno 110 lux. La superficie dei tavoli e il pavimento di tutti i locali del laboratorio sono rivestiti con un materiale facilmente lavabile - plastica o linoleum, e le pareti sono dipinte con colori chiari fino ad un'altezza di 170 cm dal pavimento. L'area di lavoro principale è dotata di tavoli, armadi e scaffali di tipo laboratorio per riporre attrezzature, utensili e reagenti. I tavoli sono alimentati elettricamente e dotati di fuochi a gas.
Oltre alla sala di lavoro principale, il laboratorio dispone di una sala di sterilizzazione, dove si trovano autoclavi e armadi di essiccazione, una sala termostatata per la coltivazione di microrganismi, una sala per la conservazione delle colture di microrganismi, un locale frigorifero, un locale lavaggio, ecc. I trasferimenti di microrganismi vengono effettuati in scatole di vario design, da stanze isolate a camere da tavolo (laminare), la purezza dell'atmosfera dell'ambiente di lavoro in cui è assicurata dalla circolazione di un flusso d'aria sterile all'interno della camera.
LavoroVscatola laminare. Il design della scatola laminare consente il lavoro sterile con microrganismi in una stanza non sterile. Scatole laminari esistono due gradi di protezione: classe I e classe P. I laminari di classe I sono dotati di ventilazione forzata dell'aria non sterile dalla stanza e dell'uscita di quest'aria nella stessa stanza dopo la filtrazione (protezione contro gli aerosol microbici) e nel senso stretto del termine non sono adatti al lavoro sterile. I laminari con protezione di classe II (Fig. 2.1) formano all'interno della scatola un flusso di aria sterile, che viene prelevata dall'ambiente e che viene sterilizzata passando attraverso filtri batterici. Pertanto, le superfici interne della scatola rimangono sterili. Il design consente inoltre la semina sterile di microrganismi in un flusso di aria sterile che è passata attraverso filtri batterici e distribuita all'interno del laminare sotto forma di flusso laminare (senza turbolenza). Il lavoro in laminare, invece, comporta l'utilizzo di una tecnica asettica (lavorare vicino alla fiamma di un bruciatore).
Prima di iniziare il lavoro, il laminare deve essere lavato con soluzioni detergenti neutre e tutte le superfici interne accessibili devono essere sterilizzate con disinfettanti chimici (etanolo al 70%). Durante il funzionamento il laminare deve essere lavato una volta al mese, rimuovendo le parti superficiali rimovibili e pulendo lo spazio sottostante. Dopo il lavaggio i cruscotti vengono nuovamente sterilizzati con etanolo.
I filtri laminari batterici devono essere sottoposti ad un processo di disinfezione chimica una volta ogni 1 o 2 mesi, a seconda dell'intensità di utilizzo. La disinfezione chimica della superficie interna del laminare e soprattutto dei suoi filtri viene effettuata con vapori di formaldeide. A tale scopo, 50 ml di una soluzione al 37% di formaldeide (formalina) vengono versati in una tazza di porcellana, posta su un supporto, e la tazza viene riscaldata per l'evaporazione lenta (30 minuti) della formaldeide. Allo stesso tempo, la pompa d'aria laminare deve essere accesa per una distribuzione uniforme dei vapori disinfettanti in tutto il volume interno della camera, la serranda di uscita dell'aria deve essere chiusa, così come il coperchio anteriore del dispositivo. Quando si sterilizza un laminare, le persone devono lasciare la stanza. Dopo che la formalina è completamente evaporata, il riscaldatore e la pompa dell'aria vengono spenti, il laminare viene lasciato per un giorno per la disinfezione e quindi viene ventilato dai resti di vapori di formaldeide. Per fare ciò, aprire il coperchio anteriore del dispositivo, accendere la pompa dell'aria e aprire la serranda di uscita dell'aria. Il dispositivo viene lasciato funzionante per 15-20 minuti, quindi è pronto per l'uso. Quando si elimina il dispositivo dai vapori di formaldeide, la stanza deve essere ben ventilata e le persone devono lasciarla per questo periodo.
Preparazione del laboratorio microbiologico per il lavoro
Il laboratorio microbiologico deve essere mantenuto pulito. Non dovrebbe contenere oggetti aggiuntivi. Le strutture del laboratorio dovrebbero essere pulite regolarmente. È molto difficile e non sempre necessario garantire la completa sterilità del laboratorio, ma è possibile ridurre significativamente il numero di microrganismi nell'aria e sulle varie superfici dei locali del laboratorio. Per fare ciò, vengono utilizzati vari metodi di disinfezione. La parola "disinfezione" significa disinfezione, cioè la distruzione di agenti patogeni di malattie infettive negli oggetti ambientali. Tuttavia, il trattamento di disinfezione uccide non solo i batteri patogeni, ma anche quelli saprotrofi. A volte il processo di disinfezione ha un effetto sterilizzante.
Elaborazione della stanza laboratorio microbiologico
Pavimento, pareti E mobilia nel laboratorio microbiologico vengono aspirati e puliti con una soluzione di vari disinfettanti. L'aspirazione garantisce che gli oggetti siano privi di polvere e che venga rimossa una quantità significativa di microrganismi. È stato stabilito che con una passata di 4 volte della spazzola di un aspirapolvere sulla superficie di un oggetto, circa il 47% dei microrganismi viene rimosso da esso e con 12 volte fino al 97%. Come soluzioni disinfettanti, viene spesso utilizzata una soluzione di soda al 2 - 3% (bicarbonato di sodio), una soluzione acquosa al 3 - 5% di fenolo (acido carbolico) o lisolo (preparazione di fenolo con l'aggiunta di sapone verde), una soluzione acquosa allo 0,5 - - 3%. soluzione di cloramina e alcuni altri disinfettanti.
Aria V laboratori pulire arieggiando: questo è il modo più semplice. Una ventilazione prolungata della stanza attraverso la finestra (almeno 30 - 60 minuti) riduce drasticamente il numero di microrganismi presenti nell'aria, soprattutto in caso di notevole differenza di temperatura tra l'aria esterna e l'aria della stanza. Un metodo di disinfezione dell'aria più efficace e più comunemente utilizzato è l'irradiazione ultravioletta con raggi con una lunghezza d'onda di 260 nm. Questi raggi hanno un'elevata attività antimicrobica e possono causare la morte non solo delle cellule vegetative, ma anche delle spore di microrganismi.
L'esposizione ai raggi ultravioletti dovrebbe essere immediata e prolungata. Ciò è dovuto principalmente al fatto che i raggi ultravioletti hanno un debole potere penetrante. Ad esempio, non passano attraverso il vetro normale e vengono facilmente assorbiti dalle particelle di polvere. Inoltre, fogli di carta bianca, lastre di alluminio e cromate e oggetti realizzati con essi possono riflettere notevolmente i raggi ultravioletti. Pertanto, a seconda del grado di inquinamento atmosferico, la sua sterilizzazione richiede un'irradiazione da 30 minuti a diverse ore.
utilizzato come fonte di radiazioni ultraviolette. lampade battericide. L'emettitore in essi è un arco elettrico che si verifica nel vapore di mercurio a bassa pressione. Più dell'80% dello spettro da loro emesso cade sulla lunghezza d'onda di 254 nm. Tipicamente, le lampade battericide sono tubi di vario diametro e lunghezza, realizzati in vetro speciale che trasmette radiazioni con una lunghezza d'onda di 254 nm. Ogni tubo è montato su un supporto e può essere dotato di un riflettore. Va tenuto presente che i raggi ultravioletti possono causare gravi danni agli occhi, pertanto, quando si lavora con lampade germicide, è necessario assicurarsi rigorosamente che né i raggi ultravioletti diretti né quelli riflessi entrino negli occhi. È impossibile stare in stanze piccole con la lampada battericida accesa. Va inoltre tenuto presente che con un funzionamento continuo prolungato della lampada battericida, l'intensità della radiazione diminuisce. In questi casi, è consigliabile condurre l'irradiazione in modo intermittente.
Posto di lavoro, dove si lavora direttamente con colture di microrganismi, è necessaria un'elaborazione particolarmente attenta. Il desktop deve essere disinfettato non solo prima dell'inizio del lavoro, ma anche dopo il suo completamento. Per pulire la superficie del tavolo, è possibile utilizzare soluzioni di lisolo e cloramina, nonché soluzioni al 70% (in volume) di alcol isopropilico o etilico. Gli alcoli sono molto efficaci contro le forme vegetative dei microrganismi. Questi alcoli possono essere utilizzati anche per la disinfezione delle mani. Nei casi in cui la superficie del tavolo ha un rivestimento idrorepellente, Lysol è particolarmente conveniente. La superficie del desktop può essere disinfettata anche con raggi ultravioletti. In questo caso, va tenuto presente che l'effetto battericida dei raggi è tanto maggiore quanto più vicina è la superficie irradiata alla sorgente di radiazioni.
Non è consentito fumare, conservare e consumare cibi, bevande, gomme da masticare nel laboratorio. Dovrebbe funzionare in accappatoio.
Conservazione dei registri di laboratorio
Il registro dei lavori di laboratorio è un documento che consente di controllare la correttezza dei risultati ottenuti. Dovrebbe contenere informazioni rilevanti per l'esecuzione di questo lavoro. La registrazione deve essere mantenuta in modo chiaro, accurato e in un certo ordine, ad esempio:
Il nome dell'esperimento e il suo scopo, la data di impostazione e completamento.
Oggetto di studio.
Condizioni per l'esperimento.
Il principio base del metodo di analisi utilizzato.
Risultati.
Il materiale digitale è riportato in tabelle. Se necessario, crea grafici, diagrammi, disegni. Ogni lavoro di laboratorio dovrebbe terminare con le proprie osservazioni e conclusioni registrate in un diario. Il diario è di proprietà del laboratorio in cui è stato svolto il lavoro ed è sempre conservato nel laboratorio.
Regole per lavorare con colture di microrganismi
In laboratorio, i microrganismi vengono coltivati su terreni nutritivi solidi e liquidi, che vengono versati in provette, boccette, materassi e piastre Petri (Fig. 2.2). Piatti e terreni di coltura sono pre-sterilizzati.
Si chiama l'introduzione di microrganismi in un ambiente sterile semina, O inoculazione. L'inoculazione dei microrganismi richiede il rispetto di alcune regole per proteggere la coltura in esame dalla contaminazione da parte di microrganismi estranei. Prima della semina, il nome del microrganismo e la data di semina devono essere accuratamente scritti sulla provetta (pallone o capsula di Petri).
Vengono prelevate cellule di microrganismi per l'inoculazione o la preparazione di preparati ciclo batteriologico O ago(Fig. 2.3), se i microrganismi vengono coltivati su un terreno denso. Nel caso in cui i microrganismi vengano coltivati in un mezzo nutritivo liquido, è meglio utilizzare una pipetta sterile anziché un'ansa. Anse e aghi batteriologici sono realizzati utilizzando un sottile filo di tungsteno o nicromo, fissato in un supporto di metallo o vetro. Diametro di un cappio batteriologico - 4 - 5 mm.
L'ansa batteriologica (ago) viene sterilizzata prima di prelevare le cellule dei microrganismi. Per fare ciò, il filo viene riscaldato rovente nella fiamma di un bruciatore e contemporaneamente viene bruciata la parte del supporto adiacente all'ansa, che verrà inserita nel recipiente contenente i microrganismi. Si consiglia di mantenere l'anello nella fiamma del bruciatore quasi verticalmente in modo che il filo venga riscaldato uniformemente. Durante l'accensione è necessario tenere presente che la temperatura più alta si sviluppa nella parte superiore e periferica della fiamma (Fig. 2.4), quindi non si deve abbassare il circuito direttamente sul bruciatore. Immediatamente dopo la sterilizzazione, l'anello (ago) viene inserito in un recipiente con microrganismi. Per non danneggiare le cellule dei microrganismi, l'ansa (ago) viene prima raffreddata toccandola con la superficie interna del vaso o con un mezzo nutritivo privo di cellule microbiche, e solo dopo viene catturata una piccola quantità di massa microbica .
Preparazione dei preparativi
farmaco per l'elaborazione microbiologica del laboratorio
I preparati vengono preparati, di regola, su vetrini, il cui spessore non deve superare 1,2–1,4 mm. I vetri più spessi non consentono di ottenere un'immagine nitida dei bordi del diaframma dell'illuminatore nel piano di preparazione, poiché si trova nello spessore del vetro, e questo disturba la messa a fuoco del condensatore e riduce drasticamente la chiarezza dell'immagine. I vetrini spessi sono inaccettabili quando si lavora con un obiettivo ad immersione quando è richiesto il pieno utilizzo dell'apertura numerica del sistema.
Un punto essenziale è la preparazione della superficie dei vetrini, che è particolarmente importante nella produzione di preparazioni fisse. La superficie del vetro deve essere accuratamente pulita e sgrassata in modo che una goccia di liquido si distribuisca uniformemente sul vetro e non si raccolga in goccioline convesse che si asciugano lentamente. Il metodo di sgrassaggio più affidabile è il trattamento dei vetri con una miscela di cromo, seguito dal risciacquo con acqua e alcool.
Nel lavoro quotidiano, invece, è sufficiente strofinare accuratamente il vetro asciutto con sapone e poi asciugarlo con un panno di cotone pulito. Un buon sgrassaggio si ottiene pulendo il vetro lavato e asciugato con un batuffolo di cotone inumidito con etere (dopodiché non è necessario il risciacquo con acqua), oppure bruciando la superficie del vetro con la fiamma di un bruciatore (il grasso brucia). È vietato far bollire i bicchieri in soluzioni alcaline, compresi i detersivi, nonché mantenere i bicchieri in tali soluzioni per lungo tempo, poiché gli alcali corrodono il vetro, rendendone opaca la superficie. È possibile conservare i vetrini puliti e senza grassi allo stato asciutto o in etanolo.
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condurre lavori con microrganismi dei gruppi III - IV di patogenicità
Tabella 1
| 1 | 2 | 3 |
| 1. | | almeno 12 |
| 2. | semina | |
| 3. | Spazio alle ricerche sul gruppo delle infezioni intestinali | 6 per 1 posto di lavoro, ma non meno di 12 |
| 4. | Spazio per la tipizzazione dei fagi | almeno 12 |
| 5. | Locali per condurre ricerche sulla batteriologia sanitaria: |
|
| 1) | per i medici | 6 per 1 posto di lavoro, ma non meno di 12 |
| 2) | per gli assistenti di laboratorio | 6 per 1 posto di lavoro, ma non meno di 12 |
| 3) | scatola con prebox | almeno 12 |
| 6. | Spazio alla ricerca sulle infezioni da gocciolamento: |
|
| 1) | per i medici | 6 per 1 posto di lavoro, ma non meno di 12 |
| 2) | per gli assistenti di laboratorio | 6 per 1 posto di lavoro, ma non meno di 12 |
| 3) | scatola con prebox | almeno 12 |
| 4) | sala test sierologici | almeno 14 |
| 5) | scatola con prebox per test di sterilità | almeno 12 |
| 6) | lavaggio | almeno 18 |
| 7) | preparatorio | 6 per 1 posto di lavoro, ma non meno di 10 |
| 8) | sterilizzazione | almeno 15 per 2 cabine di sterilizzazione, per ogni cabina aggiuntiva almeno 5 |
| 7. | Locali termali: |
|
| 1) | per testare le infezioni intestinali | almeno 6 |
| 2) | per la ricerca sulla batteriologia sanitaria | almeno 6 |
| 3) | con regime di temperatura più 43 0 C | almeno 6 |
| 8. | camera di raffreddamento | almeno 6 |
| 9. | Autoclave per la decontaminazione del materiale infetto esaurito e la sterilizzazione di terreni e utensili | almeno 10 per 1 autoclave, Per ogni ulteriore almeno 5 |
| 10. | Locali per la preparazione dei terreni nutritivi: |
|
| 1) | cottura media | almeno 12 |
| 2) | scatola con prebox per il versamento dei media | almeno 10 |
| 11. | Magazzini: |
|
| 1) | vetreria da laboratorio sterile | almeno 12 |
| 2) | vetreria da laboratorio non sterile | almeno 12 |
| 12. | Passaporto del personale sanitario: |
|
| 1) | guardaroba di capispalla | 0,4 per armadio, ma non inferiore a 6 |
| 2) | doccia per 1 griglia | almeno 1 |
| 3) | | 0,4 per armadio, ma non inferiore a 6 |
| 4) | WC per 1 WC | non inferiore a 0,85 |
| 13. | stanza del personale | almeno 8 |
| 14. | Registrazione e rilascio dei risultati dei test | almeno 6 |
| 1) | sala di campionamento | almeno 6 |
| 15. | WC per 1 WC | non inferiore a 0,85 |
| 16. | sala studio | 4 per 1 posto, ma non inferiore a 30 |
Nota: nei laboratori con una piccola quantità di lavoro, l'insieme delle stanze dipende dalla nomenclatura degli studi eseguiti. È consentito collocare nello stesso locale: preparazione e sterilizzazione (18 m 2), cassette per batteriologia sanitaria e cassette per infezioni da caduta (6 m 2).
^ Un insieme di locali e aree di un laboratorio batteriologico che lavora con microrganismi dei gruppi di patogenicità I-II
Tavolo 2
| 1 | 2 | 3 |
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| 1. | La zona pulita comprende: |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1) | guardaroba di capispalla | 0,4 per armadio, ma non inferiore a 6 |
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| 2) | armadio per abiti speciali | 0,4 per armadio, ma non inferiore a 6 |
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| 3) | ufficio del direttore del laboratorio | almeno 12 |
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| 4) | locali per lavori amministrativi | almeno 12 |
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| 2. | La zona condizionatamente pulita prevede: |
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| 1) | locale con scatola per la preparazione e il riempimento dei terreni di coltura | almeno 12 |
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| 2) | autoclave per 1 autoclave | almeno 10 per ciascuno Ulteriori - almeno 5 |
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| 3) | sterilizzazione preparatoria | almeno 18 |
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| 4) | lavaggio | almeno 18 |
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| 5) | dispensa | almeno 12 |
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| 6) | WC per 1 WC | non inferiore a 0,85 |
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| 3. | La zona infettiva comprende: |
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| 1) | 5-6 box con prebox | almeno 9 Almeno 3 |
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| 2) | spazio per la diagnostica rapida | almeno 12 |
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| 3) | autoclave per 1 autoclave | almeno 10 per ciascuno Nota: i locali della zona condizionatamente pulita sono separati dai locali della zona pulita da un punto di controllo sanitario. ^ Insieme di stanze e quadrati laboratorio di virologia Tabella 3
Nota: il lavoro sull'infezione della coltura dei tessuti, la ricerca sulla virologia sanitaria e il lavoro con i ceppi di riferimento possono essere eseguiti nella stessa scatola con il prebox quando sono installate scatole di sicurezza biologica separate. Tabella 4
^ Insieme dei locali e delle aree del laboratorio chimico-sanitario e laboratori per la determinazione dei residui pesticidi e nitrati Tabella 5
^ Sala e area del laboratorio di tossicologia polimeri e altri prodotti chimici Tabella 6
^ Insieme di stanze e aree di laboratorio elettromagnetico campi e altri fattori fisici Tabella 7
^ Insieme di stanze e quadrati laboratorio radiologico Tabella8
_____________________________ Appendice 2 Ai laboratori» Requisiti per l'uso di una tuta protettiva 1. A seconda della natura del lavoro svolto, vengono utilizzati i seguenti tipi di tute protettive: 1) Tipo 1 - pigiama o tuta, pantofole mediche, berretto medico, grande sciarpa (cappuccio), camice antipeste, cappuccio respiratore a pressione positiva, maschera di garza di cotone (respiratore antipolvere, maschera antigas filtrante o isolante per l'ossigeno), occhiali, guanti di gomma, asciugamano, calzini, pantofole, stivali di gomma; 2) 2 tipi: pigiama o tuta, pantofole mediche, berretto medico, grande sciarpa (cappuccio), camice anti-peste, maschera di garza di cotone, guanti di gomma, asciugamano, calzini, pantofole, stivali di gomma; 3) 3 tipi: pigiama, berretto medico, sciarpa larga, camice antipeste, guanti di gomma, asciugamano, calzini, pantofole, galosce; 4) 4 tipologie: pigiama, cappello (foulard), camice anti-peste (chirurgico), calzini, pantofole. 2. La tuta e il pigiama devono essere realizzati in tessuto denso (calicò grosso o lino), davanti con una chiusura cieca con bottoni. 3. Un camice antipeste è cucito come un camice chirurgico, ma molto più lungo (fino al terzo inferiore della gamba), mentre i suoi pavimenti devono penetrare l'uno nell'altro; la cintura e i lacci al colletto dovrebbero essere costituiti da due parti, ciascuna cucita in un campo separato, un lungo nastro è cucito per legare le maniche. 4. Viene realizzata una sciarpa anti-peste delle dimensioni di 90x90x125 cm. 5. Una maschera di garza di cotone è composta da un pezzo di garza lungo 125 cm e largo 50 cm, un pezzo di garza viene tagliato lungo una lunghezza di 50 cm da entrambi i lati al centro dalle estremità esterne, quindi uno strato continuo e uniforme Nella parte centrale della garza in senso longitudinale, si dispone un batuffolo di cotone lungo 25 cm e largo cm 17. I bordi di una garza sono sovrapposti. 6. Gli occhiali vengono utilizzati "da volo" con un bordo ampio e aderente, vetro curvo o qualsiasi altro disegno che ne garantisca la tenuta. 7. Prima di entrare nella stanza in cui si lavora con materiale infetto viene indossata una tuta antipeste nella seguente sequenza: pigiama (tuta), calzini, pantofole, berretto medico, cappuccio (sciarpa grande), camice antipeste e stivali. I nastri sul colletto della veste e sulla cintura della veste sono legati davanti sul lato sinistro con un cappio, dopo di che i nastri sono fissati sulle maniche. Il respiratore (maschera) deve coprire la bocca e il naso, i nastri superiori della maschera sono legati con un cappio nella parte posteriore della testa, quelli inferiori sulla corona e ai lati delle ali del respiratore vengono posizionati dei tamponi di cotone naso. Gli occhiali dovrebbero adattarsi bene e controllare la filtrazione dell'aria. 8. Per disinfettare il costume, vengono forniti contenitori separati con una soluzione disinfettante per la lavorazione: stivali o galosce, mani guantate nel processo di rimozione del costume, maschere di garza di cotone, vestaglia, sciarpa (cappuccio), asciugamani, guanti . I bicchieri vengono immersi in alcool a 70°. 9. Una volta decontaminata mediante autoclavaggio, bollitura o in una camera di disinfezione, la tuta viene piegata rispettivamente in bixes, sacchetti doppi. 10. La tuta viene rimossa nel seguente ordine, immergendo le mani guantate nella soluzione disinfettante dopo aver rimosso ciascuna parte della tuta: 1) gli stivali o le galosce vengono puliti dall'alto verso il basso con tamponi abbondantemente inumiditi con una soluzione disinfettante, si toglie un asciugamano; 2) pulire con un batuffolo di cotone inumidito con una soluzione disinfettante, togliere il grembiule, se è nella tuta, piegandolo con il lato esterno verso l'interno; 3) togliere le maniche ed il secondo paio di guanti, se necessari durante il lavoro; 4) togliere gli occhiali, tirandoli in avanti, in alto e indietro dietro la testa con entrambe le mani; 5) la maschera di garza di cotone viene slacciata e rimossa senza toccare il viso con la sua parte esterna; 6) sciogliere i lacci del colletto della veste, della cintura e abbassando il bordo superiore dei guanti, sciogliere i lacci delle maniche, togliere la veste, avvolgendone la parte esterna all'interno; 7) togliere la sciarpa, raccogliendo con cura tutte le sue estremità in una mano dietro la testa; 8) rimuovere i guanti (se si sospetta una violazione dell'integrità dei guanti, vengono controllati in una soluzione disinfettante (ma non con aria); 9) togliersi gli stivali; 10) dopo aver tolto la tuta protettiva, le mani vengono trattate con alcool a 70°, quindi lavate abbondantemente con sapone. _________________________ Allegato 3 Alle norme sanitarie "Sanitarie Requisiti epidemiologici Ai laboratori» ^
AUTORIZZAZIONE Rilasciato dal laboratorio __________________________________________________________ (nome dell'azienda) Condurre ________________________________________________________ (tipologie di lavoro: diagnostico, sperimentale, produttivo) Con microrganismi ____________________ gruppi di patogenicità, inclusi (nome dei microrganismi) __________________________________________________________________ Basato: ____________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ "____" ______________ 20____ Valido per ___________________________________ anni (anno) dalla data di rilascio Presidente Commissione di regime _________________________ Appendice 4 Alle norme sanitarie "Sanitarie Requisiti epidemiologici Ai laboratori» ^ Classificazione dei microrganismi Gruppi di patogenicità I-IV | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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