Regole per il prelievo di sangue per la determinazione di mutazioni nei geni umani Diagnostica PCR
Sangue per la diagnostica PCR. Il sangue viene prelevato a stomaco vuoto dalla vena cubitale con un ago monouso (diametro 0,8-1,1 mm) in una siringa monouso con un volume di 2-5 ml e trasferito in una provetta con EDTA o uno speciale sistema a vuoto della “ Tipo Veccuette” (con EDTA con tappo lilla), il tubo è chiuso con un tappo e rigira più volte (per la miscelazione con l'anticoagulante).
La provetta con il sangue viene conservata in frigorifero a +4°C fino al momento dello studio. — +8°С. Durata di conservazione massima: sangue raccolto in una provetta EDTA per determinare le mutazioni nei geniBRCA1/2, può essere memorizzato in+4°С — +8°С 2 giorni.
Regole per il prelievo di sangue per la determinazione della PCR - studi sulle infezioni
Per ottenere il plasma, il sangue viene prelevato a stomaco vuoto o 3 ore dopo un pasto dalla vena cubitale con un ago monouso (diametro 0,8-1,1 mm) in uno speciale sistema di vuoto (tappi lilla - 6% EDTA). La provetta viene chiusa con un coperchio e capovolta delicatamente più volte in modo che il sangue nella provetta sia completamente miscelato con l'anticoagulante (altrimenti il sangue si coagulerà e l'isolamento del DNA/RNA diventerà impossibile).
L’eparina non dovrebbe essere usata come anticoagulante!
Condizioni per la conservazione e il trasporto del materiale e dei campioni pretrattati
Campioni di sangue intero: - a una temperatura di 20-25ºС - entro 2 ore; - ad una temperatura di 2-8ºС - entro 6 ore dal momento del prelievo del materiale per la determinazione quantitativa degli acidi nucleici; entro 12 ore - per la determinazione qualitativa degli acidi nucleici;
Non congelare i campioni di sangue intero!
Campionamento di materiale per PCR infezioni da HPV
Per la ricerca sull'HPV è necessario un numero sufficiente di cellule epiteliali, perché. il virus è un agente intracellulare. È accettabile una moderata presenza di impurità sotto forma di muco cervicale e sangue. In alcuni casi, è possibile prelevare materiale utilizzando una sonda ginecologica universale, tuttavia, in questo caso, il volume dello scarico raschiante sarà inferiore e il numero di cellule potrebbe essere insufficiente.
Il muco e le secrezioni vaginali vengono rimossi dalla superficie della cervice con un tampone di garza sterile, la parte operativa del citospazzola viene inserita nel canale cervicale e vengono eseguiti due o tre giri completi in senso orario. Il citobrush viene rimosso e la sua parte operativa contenente il materiale prelevato viene posta in una provetta con un mezzo di trasporto. La parte operativa del Cytobrush viene staccata per non più di 1 cm dalla base in plastica del Cytobrush e lasciata in una provetta con un mezzo di trasporto.
Se è impossibile rompere la parte operativa del citospazzola o della sonda universale, il materiale clinico deve essere lavato via il più completamente possibile dalla loro parte operante in una provetta con un mezzo di trasporto, premendolo contro il lato interno della provetta e ruotandolo 5-10 volte in senso orario e antiorario.
Non è accettabile utilizzare forbici riutilizzabili per tagliare la parte operativa del citospazzola o della sonda universale: ciò può portare alla contaminazione incrociata con materiale clinico e, di conseguenza, a risultati falsi positivi.
Le provette con materiale biologico vengono conservate in un congelatore a -16°C fino allo studio.
Campionamento di materiale per la diagnostica PCR negli uomini
raschiando (sbavatura). Il materiale viene prelevato con una sonda universale dall'uretra. Se necessario, il materiale per la ricerca viene prelevato dalle ulcere genitali (studio per HSV-II). La parte operativa della sonda contenente il materiale da testare viene tagliata o spezzata e inserita in una provetta Eppendorf usa e getta con una soluzione conservante o mescolata accuratamente con un movimento rotatorio, spremere il liquido rimanente sulla sonda contro le pareti della provetta , rimuovere la sonda (gettarla in un contenitore con una soluzione disinfettante).
Le provette con materiale biologico vengono conservate in un congelatore a -18°C fino allo studio.
Sperma. Raccolto in un tubo asciutto usa e getta tipo "Eppendorf". La durata massima è di 1 giorno in frigorifero alla temperatura di +4°C - +8°C; a -18°С - -20°С non più di 2 settimane.
succo di prostata . Dopo il massaggio della ghiandola prostatica, il succo nella quantità di 0,5-1 ml viene raccolto in una provetta secca usa e getta del tipo Eppendorf. Se è impossibile ottenere il succo, subito dopo il massaggio, la prima porzione di urina (che contiene succo di prostata) viene raccolta in una quantità di 10 ml.
La durata massima è di 1 giorno in frigorifero alla temperatura di +4°C - +8°C; a -18°С - -20°С non più di 2 settimane.
Un esempio di procedura operativa standard per ricevere un biomateriale in un laboratorio medico.
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NOME DELL'ISTITUZIONE |
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Tipo di documento |
Procedura operativa standard (SOP) |
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Iscrizione nel Registro unificato della documentazione di laboratorio |
SOP-PA-01-2014 |
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esempio |
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Numero totale di pagine |
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Mettere in azione |
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Validità |
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Nome del documento |
Regole per l'accettazione e la registrazione del biomateriale in laboratorio. |
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Titolo di lavoro |
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Progettato da: |
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Controllato: |
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Concordato: |
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Nome |
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Area di applicazione |
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Organizzazione del processo di trasporto del biomateriale tramite corriere |
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Accettazione del biomateriale in laboratorio |
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Trasferimento del biomateriale e deferimenti ai dipartimenti competenti laboratori |
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Registrazione dei moduli d'ordine da parte degli operatori. |
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Appendice n. 1 Diagramma di flusso |
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Allegato n.2 Tipologie di non conformità e loro eliminazione |
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Appendice n. 3 Macchina con sensore di temperatura del frigorifero |
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Appendice n. 4 Forma-direzione |
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Appendice n. 5 Foglio di familiarizzazione per i dipendenti con SOP |
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1 zona di utilizzo
Questa procedura operativa standard (di seguito denominata SOP) determina la procedura per ricevere, registrare il biomateriale che entra nel laboratorio dalla sala procedurale NOME DELL'ISTITUZIONE e da altre istituzioni servite dal laboratorio, nonché identificare le incoerenze ed eliminarle.
Questa POS è destinata all'assistente di laboratorio e all'operatore di laboratorio.
- Raccomandazioni metodologiche "Organizzazione della fase preanalitica nella centralizzazione degli esami del sangue di laboratorio" (Approvato alla conferenza scientifica e pratica tutta russa "Servizi di laboratorio diagnostici clinici reali: il grado di conformità agli standard della medicina di laboratorio, qualità, costi e prezzo " (Mosca, 2-4 ottobre 2012)
- GOST R 53079.4─2008. “Tecnologie di laboratorio medico. Garantire la qualità della ricerca clinica di laboratorio. Parte 4. Regole per la conduzione della fase preanalitica. È entrato in vigore il 1° gennaio 2010.
- ISO 15189:2012 Laboratori medici. Requisiti di qualità e competenza"
3. Organizzazione del processo di trasporto del biomateriale tramite corriere e responsabilità del corriere.
3.1. La temperatura nel frigorifero, indicata sul display nell'abitacolo dell'auto, è registrata dal corriere nel diario "Giornale contabile per il regime di temperatura nei frigoriferi delle automobili", e anche in questo diario il corriere indica il suo nome completo, la targa dell'auto e l'orario di partenza dell'auto per il biomateriale immediatamente prima di recarsi agli istituti. Questa rivista si trova nell'ufficio numero ___. (Una foto del sensore di temperatura e una foto del modulo di registro sono riportate nell'Appendice n. 3).
3.2. Il corriere, giunto presso la struttura sanitaria, si reca presso l'anagrafe di tale istituto, dove ritira i contenitori con vari biomateriali. Ogni contenitore è contrassegnato con il nome dell'istituto e la tipologia del biomateriale (sangue, urina, feci, vetrini con tamponi, raschiati). Il corriere posiziona i contenitori in posizione orizzontale nel frigorifero della macchina, come mostrato in foto.
3.3. Il corriere è responsabile dell'integrità dei contenitori, della loro sicurezza, di garantire la corretta temperatura nel frigorifero dell'auto (+4 - +8°C), nonché della sicurezza del biomateriale consegnato dalle istituzioni al laboratorio . Durante il viaggio il corriere monitora la temperatura nel frigorifero dell'auto, che viene visualizzata sul display installato nell'auto.
4. Accettazione del biomateriale in laboratorio.
4.1. La temperatura, indicata sul display del frigorifero dell'auto al momento della rimozione dei contenitori, il corriere annota nel giornale "Diario di bordo del regime di temperatura nei frigoriferi delle auto" nella colonna corrispondente al numero di stato dell'auto. E sempre nello stesso registro l'autista indica l'orario di arrivo dell'auto con il biomateriale proveniente dalle istituzioni.
4.2. Il corriere consegna i contenitori etichettati con campioni di sangue, strisci e raschiati al paramedico-assistente di laboratorio nella stanza n. ___.
4.3. Il corriere consegna i contenitori contrassegnati con urina e feci al paramedico-assistente di laboratorio nell'ufficio n. ___.
4.4. Nell'ufficio n. ___, il paramedico apre il coperchio del contenitore ed estrae provette con sangue, vetrini con strisci e raschiati, cartelle con indicazioni per la ricerca.
4.5. Il paramedico classifica le provette del sangue separatamente in rack, in base al tipo di provette (biochimica, ematologica e coagulologica) e ai nomi delle istituzioni indicate sui rack.
4.6. Nella stanza #____, l'assistente di laboratorio preleva i campioni dal contenitore con urina, feci e referti.
5. Trasferimento del biomateriale e deferimenti ai dipartimenti competenti del laboratorio.
5.1 Nell'ufficio n. ____, il paramedico-assistente di laboratorio mette i rack con provette per studi biochimici, immunologici, coagulologici in contenitori contrassegnati "per il trasferimento di biomateriale" e li porta nella stanza n. ___ per la centrifugazione.
5.2 L'assistente di laboratorio paramedico chiama i reparti di ematologia e PCR affinché gli assistenti di laboratorio paramedici dei rispettivi reparti prelevino il biomateriale dalla stanza n. ___
5.3. Il paramedico-assistente di laboratorio invia le indicazioni per la ricerca dalla stanza n. ___ agli operatori della stanza n. ____ per la registrazione.
5.4 Nell'ufficio n. ___ il paramedico-assistente di laboratorio trasmette le indicazioni agli operatori, che depositano la modulistica nello stesso ufficio.
6. Registrazione dei moduli d'ordine da parte degli operatori.
6.1. Gli operatori dell'ufficio n. ___, ricevuti i moduli di segnalazione dall'assistente di laboratorio dell'ufficio n. ___, li registrano nel sistema informativo del laboratorio.
Procedura di registrazione:
L'operatore legge il codice a barre con uno scanner incollato sul modulo - direzione;
Successivamente l'operatore inserisce nel LIS i dati del passaporto del paziente: nome completo, data di nascita, indirizzo di residenza e altri dati: fonte dell'ordine (assicurazione sanitaria obbligatoria, VHI, contanti, visita medica), numero di istituto, dipartimento, nome completo del medico che ha ordinato lo studio, diagnosi, codice MES (standard medico – economico).
Successivamente, l'operatore inserisce nel LIS gli indicatori prescritti dal medico curante e salva l'ordine generato nel LIS. La direzione del modulo è presentata nell'Appendice n. 4.
Domanda n. 2
IN tipologie di non conformità e loro eliminazione
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Tipologia di non conformità |
Descrizione delle azioni |
Esecutore |
Responsabile |
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Violazione dell'integrità del contenitore |
Segnalalo all'assistente di laboratorio senior |
assistente di laboratorio |
Assistente maggiore |
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Mancanza di riferimenti per la ricerca nel contenitore |
Il paramedico-assistente di laboratorio segnala il fatto all'assistente di laboratorio senior, che deve contattare telefonicamente l'ufficiale medico senior. Sorella di questa istituzione |
assistente di laboratorio |
Assistente maggiore |
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Sversamento di materiale biologico in un contenitore |
1. Segnalarlo all'assistente di laboratorio senior del laboratorio 2. Rimuovere con attenzione tutto il contenuto dal contenitore 3. Disinfettare il contenitore stesso e l'intero contenuto del contenitore entrato in contatto con il biomateriale fuoriuscito. |
assistente di laboratorio |
Assistente maggiore |
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Direzione della forma danneggiata (strappata, contenuto del contenitore versato, ecc.) |
1. Il paramedico-assistente di laboratorio, se la direzione è leggibile, trasferisce tutte le informazioni in un nuovo modulo. 2. In caso di illeggibilità dell'indicazione, il paramedico - assistente di laboratorio informa l'assistente di laboratorio più anziano, che contatta gli anziani del miele. Sorella dell'istituzione. |
assistente di laboratorio |
Assistente maggiore |
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Vetrino/i rotto/i in un contenitore |
Il paramedico-assistente di laboratorio segnala il fatto all'assistente di laboratorio senior, che deve contattare telefonicamente l'ufficiale medico senior. Sorella di questa istituzione e segnala questa discrepanza |
assistente di laboratorio |
Assistente maggiore |
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Nessun codice a barre sul tubo |
1. Il paramedico-assistente di laboratorio segnala l'accaduto all'assistente di laboratorio senior, il quale deve contattare telefonicamente l'ufficiale medico senior. Sorella di questa istituzione e segnala questa incoerenza. 2. Questa discrepanza viene inserita dall'assistente paramedico-laboratorio nel registro "Registrazione del matrimonio" |
assistente di laboratorio |
Assistente maggiore |
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Direzione del modulo, emessa nella forma sbagliata |
1. Il paramedico-assistente di laboratorio segnala l'accaduto all'assistente di laboratorio senior, il quale deve contattare telefonicamente l'ufficiale medico senior. Sorella di questa istituzione 2. L'assistente paramedico-laboratorio inserisce questa discrepanza nel registro "Registrazione del matrimonio" 3. Il giorno successivo, l'assistente medico-assistente di laboratorio invia questa richiesta all'istituzione da cui proviene, affinché il medico riscriva il modulo di richiesta in una forma leggibile. |
assistente di laboratorio |
Assistente maggiore |
Domanda n. 3
sensore di temperatura del frigorifero della macchina
In questo allegato è utile anche fornire un modulo di registro che l'autista dovrà compilare.
Negli allegati successivi è riportata la forma del modulo di rinvio, ecc.
Dipartimento di Diagnostica Clinica di Laboratorio con il corso di FPC e PC
L'elenco delle sezioni relative alla disciplina della diagnostica clinica di laboratorio per preparare lo svolgimento delle prove in aula nella sessione invernale di esami di laboratorio da parte degli studenti del 6° anno della didattica a distanza.
1. Struttura organizzativa del laboratorio diagnostico clinico.
2. Studi clinici generali di laboratorio.
3. Studi di laboratorio ematologici.
4. Metodi di laboratorio per la valutazione dell'emostasi.
5. Ricerca di laboratorio biochimica.
6. Controllo di qualità della ricerca di laboratorio.
L'elenco dei quesiti di controllo sulla disciplina della diagnostica clinica di laboratorio per preparare allo svolgimento delle prove in aula nella sessione invernale di esami di laboratorio da parte degli studenti del 6° anno della didattica a distanza.
Organizzazione strutturale del laboratorio diagnostico clinico.
Documenti normativi e ordini del Ministero della Salute della Repubblica di Bielorussia, che regolano il lavoro del laboratorio diagnostico clinico.
Attrezzature di laboratorio diagnostico clinico.
Le principali apparecchiature di misurazione e analisi del laboratorio diagnostico clinico.
Fondamenti di precauzioni di sicurezza e regole del regime sanitario ed epidemiologico quando si lavora in un laboratorio diagnostico clinico.
Regole per il prelievo, la consegna, la ricezione, la lavorazione e la registrazione del materiale biologico.
Ricerca clinica generale di laboratorio.
Preparazione del paziente per lo studio, raccolta, conservazione ed elaborazione del materiale per un esame generale delle urine.
Proprietà fisiche dell'urina: colore, trasparenza, odore, pH, densità relativa dell'urina.
Proprietà chimiche dell'urina, metodi per determinare le proteine totali (metodi qualitativi e quantitativi, metodi di "chimica secca").
Determinazione del glucosio nelle urine mediante cartina indicatrice e metodo della glucosio ossidasi.
Regole per la preparazione di un preparato nativo di sedimento urinario.
Determinazione quantitativa degli elementi del sedimento urinario organizzato.
Determinazione degli elementi di sedimento non organizzato.
Tipi di precipitazioni non organizzate.
Analisi clinica generale del sangue.
Caratteristiche dei metodi per determinare la VES, concentrazione di emoglobina, conteggio del numero di eritrociti, indice di colore, leucociti e formula leucocitaria.
Regole per la preparazione di un paziente, campionamento, conservazione e lavorazione del materiale per un esame del sangue clinico generale.
Valori normali e limiti delle fluttuazioni fisiologiche del livello di eritrociti e leucociti nel sangue periferico.
Regole per preparare la preparazione e il conteggio nella camera di Goryaev.
Metodo per la determinazione dell'emoglobina nel sangue mediante il metodo del cianuro di emoglobina.
Concetto moderno di emopoiesi del midollo osseo.
Percentuale di leucociti nel sangue periferico. Valore diagnostico della formula leucocitaria.
Studi di laboratorio che caratterizzano il sistema di coagulazione del sangue.
Il concetto di sistema di coagulazione del sangue.
emostasi primaria. Metodi di laboratorio per lo studio dell'emostasi primaria.
Fasi dell'emostasi della coagulazione.
fibrinolisi.
sistema anticoagulante.
Metodi di laboratorio per la valutazione dell'emostasi secondaria.
Studi di laboratorio che caratterizzano i parametri biochimici del sangue.
Indicatori di laboratorio che caratterizzano il metabolismo proteico. Determinazione delle proteine totali nel siero sanguigno mediante il metodo del biureto.
Azoto residuo e suoi componenti. Metodi per la determinazione dell'urea, della creatinina, dell'acido urico.
Metodi per lo studio degli enzimi. Valore clinico e diagnostico della determinazione dell'attività degli enzimi.
Il ruolo biologico dei carboidrati. Determinazione del contenuto di glucosio mediante metodo enzimatico.
Lipoproteine plasmatiche. Indicatori di laboratorio del metabolismo lipidico.
Formazione e metabolismo dei pigmenti biliari. Significato clinico e diagnostico dello studio degli indicatori del metabolismo dei pigmenti.
Affidabilità analitica e controllo di qualità degli studi clinici di laboratorio.
Valutazione analitica dei risultati di laboratorio. Tipi di errori, loro caratteristiche.
Controllo di qualità intralaboratorio. Metodi per monitorare la riproducibilità dei risultati della ricerca. Controllo della correttezza dei risultati dello studio.
Clasciando una conclusione analitica di laboratorio.
La conclusione analitica del laboratorio viene elaborata in base alle condizioni del problema situazionale.
Sulla base della loro analisi dei dati di laboratorio proposti, si dovrebbe rispondere alle seguenti domande:
Il principio alla base del metodo analizzato;
Equipaggiamento necessario;
Regole per la preparazione del materiale di prova e principali fonti di errori possibili durante l'esecuzione di questo metodo;
Unità;
Il concetto di valori di riferimento. Valore clinico e diagnostico del metodo analizzato.
Abilità pratiche:
Organizzazione del posto di lavoro per la ricerca di laboratorio;
Preparazione dei reagenti nella concentrazione richiesta;
Ricevimento, etichettatura e stoccaggio del materiale biologico;
Esecuzione di un esame del sangue generale;
Esecuzione di un'analisi generale delle urine;
Esecuzione di uno studio emostasiologico;
Esecuzione di studi biochimici;
Registrazione dei risultati delle ricerche di laboratorio;
Regole per il prelievo, lo stoccaggio e il trasporto del biomateriale
Per la rilevazione di agenti patogeni mediante PCR
1.1.1. Il biomateriale viene prelevato dall'habitat previsto dei microrganismi e dallo sviluppo dell'infezione.
1.1.2. La quantità di materiale raccolto dovrebbe essere piccola. Scariche eccessive, muco e pu influiscono negativamente sulla qualità dell'estrazione del DNA e contribuiscono alla degradazione del DNA durante la conservazione e il trasporto.
1.1.3. Quando si introduce un biomateriale prelevato da un paziente con una sonda con un batuffolo di cotone o una spazzola in una provetta Eppendorf con una soluzione tampone, è necessario:
Osservare la sterilità;
Prima di immergere nella soluzione il biomateriale raccolto sul tampone (pennello), spalmarlo sulla parete asciutta della provetta, quindi inumidire il tampone (pennello) nella soluzione e, ruotando la sonda, lavare accuratamente tutto il materiale dalla parete della provetta e del tampone (spazzolino);
Se possibile, premere il tampone contro la parete della provetta, rimuovere la sonda con il tampone (spazzolino) e chiudere la provetta.
Metodi per prelevare biomateriale per la ricerca mediante PCR
1.2.1. Raschiature. Per i raschiamenti vengono utilizzate sonde sterili usa e getta dotate di un batuffolo di cotone con maggiore assorbimento o "spazzole", meno spesso cucchiai Volkmann, cucchiaini auricolari o strumenti simili con bordi leggermente smussati. Movimenti di raschiamento per raccogliere materiale. Il materiale da testare deve contenere il maggior numero possibile di cellule epiteliali e una quantità minima di impurità di muco, sangue ed essudato. Trasferire il materiale in una provetta Eppendorf sterile con soluzione tampone (vedere sezione 1.1.).
Raschiamento dal canale cervicale: prima di fare un raschiamento, è necessario rimuovere il muco in eccesso con un batuffolo di cotone sterile, trattare la cervice con soluzione salina sterile. Inserire la sonda nel canale cervicale per una profondità di 0,5-1,5 cm, evitando il contatto con le pareti della vagina, e raccogliere il materiale con un movimento di raschiamento (non al sangue). Un piccolo numero di globuli rossi nel campione non influisce sul risultato dell'analisi. In presenza di erosione cervicale, il materiale viene prelevato dal confine del tessuto sano e alterato.
Raschiamento dall'uretra: inserire la sonda nell'uretra (negli uomini - ad una profondità di 2-4 cm) e raccogliere il materiale con diversi movimenti rotatori. La vigilia prima di prendere il materiale è consentita la provocazione (cibo piccante, alcol, ecc.). Si consiglia di astenersi dall'urinare per 1-2 ore prima del prelievo. In presenza di abbondanti secrezioni purulente, i raschiamenti devono essere effettuati entro e non oltre 15 minuti dalla minzione.
Raschiando dalla congiuntiva assumere, dopo aver precedentemente anestetizzato l'occhio con una soluzione di dicaina allo 0,5%. Dopo aver girato la palpebra, utilizzare una sonda con un batuffolo di cotone (o un bisturi oculare) per raccogliere le cellule epiteliali dalla congiuntiva.
Raschiamento dal retto: inserire la sonda nell'ano per una profondità di 3-4 cm e raccogliere il materiale con un movimento rotatorio.
1.2.2. Colpi. Utilizzando una sonda sterile monouso con un batuffolo di cotone o uno spazzolino, prelevare una piccola quantità di secrezione (dalle volte vaginali, dalla faringe, dal rinofaringe, ecc.) e trasferirla in una provetta Eppendorf sterile con una soluzione tampone (vedi sezione 1.1.).
1.2.3. Sangue. Per i test PCR, il sangue deve essere nativo(non rannicchiato).
Raccogliere il sangue in modo asettico, mediante puntura venosa, in una provetta marchiata (2-3 ml) con anticoagulante EDTA ( l'eparina non deve essere utilizzata come anticoagulante!), mescolare delicatamente capovolgendo delicatamente la provetta.
Il sangue con EDTA è un biomateriale per i seguenti gruppi di ricerca:
- ricerca genetica(il momento del prelievo di sangue non ha importanza).
- rilevamento di agenti infettivi(I più informativi sono i campioni prelevati durante i brividi, la temperatura elevata, cioè presumibilmente durante la viremia o la batteriemia).
1.2.4. Urina. Raccogliere in un contenitore sterile vuoto con tappo a vite ermetico la prima porzione o la porzione media delle urine del mattino in una quantità di almeno 10 ml. Se il campionamento delle urine viene effettuato durante il giorno, prima il paziente non deve urinare per 1,5-3 ore.
1.2.5. Espettorato. Al mattino igienizzare bocca e gola (sciacquare con una soluzione di bicarbonato di sodio). Raccogliere l'espettorato in una fiala sterile vuota a bocca larga.
1.2.6. Biopsia. Il materiale deve essere prelevato dalla zona di presunta localizzazione dell'agente infettivo, dal tessuto danneggiato o dalla zona limitrofa al danno. Posizionare la biopsia in una provetta Eppendorf sterile con soluzione tampone.
1.2.7. Saliva, succo gastrico, liquido cerebrospinale, liquido sinoviale. Saliva (1-5 ml), succo gastrico (1-5 ml), liquido cerebrospinale (1-1,5 ml) - collocare in una provetta sterile vuota (contenitore).
1.2.8. Succo di prostata. Dopo il massaggio prostatico, il succo viene raccolto in una quantità di 0,5-1 ml in una provetta sterile vuota (contenitore). Se è impossibile ottenere il succo, subito dopo il massaggio, la prima porzione di urina viene raccolta in una quantità non superiore a 10 ml (questa porzione contiene succo di prostata).
1.2.9. Washouts, lavaggio broncoalveolare (BAL). Con un batuffolo di cotone sterile e 5-7 ml di soluzione salina si effettua un lavaggio, ad esempio, dalla punta di un endoscopio o di un broncoscopio e 0,5-5 ml di lavaggio vengono posti in una provetta sterile vuota (contenitore).
1.2.10. Feci. Una sonda con un batuffolo di cotone viene posizionata all'interno delle feci e ruotata leggermente, catturando una piccola quantità di materiale. Quindi il materiale viene posto in una provetta Eppendorf sterile con una soluzione tampone.
Il momento ottimale per un esame del sangue è compreso tra 1 e 4 ore dopo l'assunzione.Tra 5 e 30 minuti si verifica un adattamento temporaneo delle piastrine all'anticoagulante e la loro aggregazione, che può portare ad una falsa diminuzione del loro numero. il campione di sangue.
Non è auspicabile esaminare il sangue dopo 8 ore dall'assunzione, perché. alcune caratteristiche delle cellule cambiano: il volume dei leucociti diminuisce, il volume degli eritrociti aumenta, il che alla fine porta a risultati di misurazione errati e ad un'interpretazione errata dei risultati. Solo la concentrazione di emoglobina e il numero di piastrine rimangono stabili durante il giorno di conservazione del sangue.
Il sangue non può essere congelato. Il sangue capillare con K 2 EDTA deve essere conservato a temperatura ambiente e analizzato entro 4 ore dal prelievo.
Se è necessario effettuare un'analisi ritardata (trasporto su lunghe distanze, malfunzionamento tecnico del dispositivo, ecc.), i campioni di sangue vengono conservati in frigorifero (4 o - 8 o C) ed esaminati entro 24 ore. Tuttavia, bisogna tenere conto del fatto che le cellule si gonfiano e i parametri associati al loro volume cambiano. Nelle persone praticamente sane questi cambiamenti non sono critici e non influenzano i parametri quantitativi, ma in presenza di cellule patologiche queste ultime possono modificarsi o addirittura collassare entro poche ore dal momento del prelievo di sangue.
Immediatamente prima dello studio, il sangue deve essere accuratamente miscelato per diversi minuti per diluire l'anticoagulante e distribuire uniformemente gli elementi formati nel plasma. Non è consigliabile miscelare costantemente i campioni a lungo termine fino al momento della loro ricerca a causa di possibili lesioni e decadimento delle cellule patologiche.
Un esame del sangue su un analizzatore automatico viene eseguito a temperatura ambiente. Il sangue conservato in frigorifero deve prima essere riscaldato a temperatura ambiente, poiché la viscosità del sangue aumenta a basse temperature e le cellule del sangue tendono ad aderire tra loro, il che a sua volta porta ad una miscelazione alterata e ad una lisi incompleta. Lo studio del sangue freddo può provocare la comparsa di “segnali d'allarme” dovuti alla compressione dell'istogramma leucocitario.
Quando si eseguono studi ematologici a notevole distanza dal luogo del prelievo di sangue, sorgono inevitabilmente problemi associati a condizioni di trasporto sfavorevoli. L'impatto di fattori meccanici (agitazione, vibrazione, miscelazione, ecc.), condizioni di temperatura, probabilità di fuoriuscita e contaminazione dei campioni possono influenzare la qualità delle analisi. Per eliminare questi motivi, quando si trasportano provette per sangue, si consiglia di utilizzare provette di plastica sigillate ermeticamente e speciali contenitori di trasporto isotermici. Durante il trasporto, non è consentito il contatto del campione (con materiale nativo) e del modulo di riferimento, in conformità con le norme di sicurezza biologica.
^ 4.3. Ricezione e registrazione del materiale biologico
Le provette con campioni di sangue venoso vengono consegnate al laboratorio il giorno del prelievo in rack in apposite buste per la consegna di materiale biologico, in cui le provette devono essere in posizione verticale, e quando trasportate a distanza - in contenitori speciali .
L'addetto al laboratorio che riceve il materiale deve verificare:
La correttezza dell'invio: il modulo di riferimento indica i dati del soggetto (cognome, nome e patronimico, età, anamnesi o numero di tessera ambulatoriale, reparto, diagnosi, terapia);
Etichettatura delle provette con i campioni di sangue (devono essere contrassegnate con il codice o cognome del paziente, identico al codice e cognome presente nel modulo per l'invio del materiale per lo studio). L'assistente di laboratorio deve registrare il materiale consegnato, annotare il numero di provette.
^ 4.4 Calcolo della composizione cellulare del sangue su un analizzatore ematologico
Il calcolo della composizione cellulare del sangue su un analizzatore ematologico deve essere effettuato in stretta conformità con le istruzioni del dispositivo.
Quando si lavora su un analizzatore ematologico, è necessario:
Utilizzare sangue stabilizzato con K-2 EDTA nella proporzione consigliata per il sale specifico e provette ematologiche monouso (semplici o sottovuoto);
Prima dell'analisi, mescolare accuratamente ma accuratamente la provetta con il sangue (a questo scopo si consiglia di utilizzare un dispositivo per miscelare i campioni di sangue - rotomix);
Utilizzare i reagenti registrati nel modo prescritto; quando si cambiano i reagenti con prodotti di un altro produttore, controllare e impostare la calibrazione dello strumento;
Avviare il dispositivo, osservando tutte le fasi del lavaggio, ottenendo valori zero (di fondo) degli indicatori per tutti i canali;
Prestare attenzione ai messaggi dello strumento relativi a possibili errori sistematici: ricordare che un aumento di MCHC sopra i valori normali è solitamente il risultato di un errore di misurazione;
Se viene rilevato un errore, è imperativo eliminare la causa, non lavorare su un dispositivo difettoso;
Eseguire la procedura di controllo qualità secondo il programma appropriato. con una valutazione del risultato;
Lavorare in modo significativo, confrontando i risultati ottenuti con le caratteristiche cliniche dei campioni del paziente;
Al termine delle misurazioni, sciacquare accuratamente l'analizzatore;
In caso di fermo prolungato del dispositivo è obbligatorio eseguire tutte le procedure di conservazione (se possibile insieme a un tecnico dell'assistenza);
In caso di problemi tecnici è opportuno avvalersi dell'aiuto di un tecnico dell'assistenza di un'azienda dotata di licenza per la manutenzione; Non affidare il lavoro a personale non addestrato.
Quando si inizia a lavorare su un analizzatore ematologico, è necessario tenere conto dei limiti di linearità della misurazione dei parametri analizzati. La valutazione di campioni con valori dei parametri analizzati che superano il limite di linearità della misurazione può portare a risultati errati. Nella maggior parte dei casi, quando si analizzano campioni con ipercitosi, l'analizzatore visualizza una "D" (diluito) invece del valore del parametro misurato, che indica la necessità di diluire il campione e ripetere la misurazione. La diluizione deve essere effettuata fino ad ottenere risultati finali simili con le due diluizioni successive.
^ PRI me R ─ Nella tabella è presentata l'analisi di un campione di un paziente con iperleucocitosi su tre diversi analizzatori ematologici.
Tabella 3
¦Risultati del conteggio dell'iperleucocitosi eseguiti su tre diversi analizzatori ematologici
| ^ Analizzatori ematologici | Tasso di diluizione del campione | Valore finale |
|||
| ^ Sangue intero | 1:1 | 1:3 | 1:4 | WBC |
|
| 1 | D | 274,5 | 274,5 | 143,1 | 715,5 |
| 2 | 322,6 | 253,2 | 177,7 | 141,8 | 709,0 |
| 3 | D | D | 168,3 | 139,1 | 695,5 |
La tabella mostra che durante l'analisi del sangue intero, solo un analizzatore (2°) ha fornito un valore digitale per il numero di leucociti, gli altri due hanno indicato la necessità di diluire il campione. La successiva misurazione passo passo del campione in tre diluizioni ha permesso di ottenere risultati finali simili su tutti i dispositivi solo con una diluizione di 1:3 e 1:4. Pertanto, il numero totale di leucociti era 700,0 - 710,0 x 10 9 /l, ovvero più di 2 volte superiore al valore iniziale ottenuto nel sangue intero sul 2° analizzatore e 1,5 - con una diluizione di 1:1 sul 1° e 1° analizzatore. 2° analizzatori.
^ Calibrazione degli analizzatori ematologici
Che raggiunge l'uguaglianza a zero della componente sistematica dell'errore (zero bias) o conferma che il bias è zero, tenendo conto dell'errore di calibrazione. La calibrazione degli analizzatori ematologici può essere eseguita in due modi principali:
Per sangue intero;
Basato su campioni di sangue stabilizzato con valori certificati.
^ 5.1 Calibrazione su sangue intero
La calibrazione del sangue intero può essere eseguita confrontando un analizzatore di riferimento, la cui calibrazione è stata verificata e può essere considerata come originale.
Per la calibrazione mediante confronto con l'analizzatore di riferimento vengono utilizzati 20 campioni di sangue venoso dei pazienti, selezionati casualmente dal programma di ricerca giornaliero del laboratorio che dispone dell'analizzatore di riferimento. Il sangue deve essere prelevato in provette sottovuoto con anticoagulante K 2 EDTA. Dopo l'analisi sull'analizzatore di riferimento, le provette per sangue vengono consegnate al laboratorio per l'analisi sul dispositivo da calibrare. L'intervallo tra le misurazioni sull'analizzatore di riferimento e su quello calibrato non deve superare le 4 ore. L'analisi dei campioni di calibrazione sullo strumento da calibrare deve essere eseguita allo stesso modo dell'analisi dei campioni dei pazienti. I risultati ottenuti vengono inseriti in una tabella nel modulo riportato nell'Appendice 1. Questi risultati vengono utilizzati per determinare i corrispondenti fattori di calibrazione, che sono numericamente uguali ai coefficienti della pendenza delle rette di calibrazione passanti per l'origine sul grafico.
I fattori di calibrazione vengono calcolati su un computer utilizzando il programma EXCEL incluso nel pacchetto Microsoft OFFICE di qualsiasi versione. Per calcolare i fattori di calibrazione in questo programma, viene costruito un grafico a dispersione, in cui i valori misurati sono tracciati lungo l'asse X, i valori di riferimento sono tracciati lungo l'asse Y e una linea di regressione è impostata attraverso l'origine. Il programma disegna una linea di calibrazione e ne determina la pendenza, che è il fattore di calibrazione desiderato. Se vengono rilevati errori grossolani - punti che sono significativamente separati dalla linea di calibrazione sul grafico, devono essere rimossi dal calcolo (eliminare l'intera linea nella tabella EXCEL). Il fattore di calibrazione risultante viene inserito nella tabella dell'Appendice 1 e viene utilizzato per regolare manualmente la calibrazione del dispositivo in conformità con le sue istruzioni operative.
^ Calibrazione rispetto a campioni di sangue stabilizzato con valori certificati
Quando possibile, dovrebbero essere utilizzati calibratori specificatamente progettati dal produttore per calibrare un particolare tipo di analizzatore. Gli errori di setpoint nei moderni calibratori ematologici generalmente soddisfano i requisiti medici. Tuttavia, non tutti i tipi di analizzatori dispongono di tali calibratori. Inoltre, a causa della durata di conservazione limitata (solitamente non superiore a 45 giorni), non è sempre possibile ottenere campioni non scaduti.
I materiali di controllo non sono destinati dal produttore a scopi di calibrazione: le tolleranze sui valori sono molto più ampie, i metodi di validazione e controllo della produzione non sono così rigidi come per i calibratori. Durante la calibrazione, i materiali di controllo possono essere utilizzati solo come una delle fonti di informazioni sulle proprietà metrologiche del dispositivo.
Tuttavia, va tenuto presente che quando a scopo di calibrazione vengono utilizzati sia materiali di controllo che calibratori, le caratteristiche della preparazione del campione e il funzionamento degli analizzatori hanno un impatto significativo sulle componenti dell'errore sistematico. Questi fattori d'influenza non possono essere presi in considerazione durante la calibrazione con materiali commerciali. Di conseguenza, in tutti i casi, la calibrazione effettuata deve essere verificata analizzando le statistiche dei risultati ottenuti nei campioni dei pazienti (indici eritrocitari, intervalli di valori normali).
5.2.1 Intervalli di calibrazione per analizzatori ematologici
I requisiti dell'intervallo di calibrazione si trovano solitamente nel manuale di istruzioni dell'analizzatore. Di norma, la calibrazione è necessaria dopo una riparazione o quando viene rilevata una deviazione significativa nelle procedure di controllo qualità interne.
5.2.2 Procedura di calibrazione
La procedura di calibrazione viene eseguita in conformità con il manuale di istruzioni dell'analizzatore.
5.2.3 Controllo del risultato della calibrazione
Questo controllo consiste nell'analisi del campione di calibrazione immediatamente dopo la calibrazione. La calibrazione eseguita viene accettata se i risultati dell'analisi corrispondono ai valori di calibrazione, tenendo conto della variazione analitica dell'analizzatore.
5.2.4 Verifica della calibrazione mediante indici RBC
Questo metodo di verifica e perfezionamento della calibrazione sfrutta il fatto che i valori medi degli indici eritrocitari - MCHC, MCH e MCV per i pazienti presentano una variazione piuttosto piccola e pertanto possono essere efficacemente utilizzati per il controllo della calibrazione e un ulteriore controllo di qualità. Il numero consigliato di campioni per la media è 20. Qualsiasi campione di paziente può essere utilizzato per determinare l'MCHC medio, mentre i pazienti con anemia devono essere esclusi dalla media MCHC e MCV.
Molti moderni analizzatori ematologici dispongono di programmi integrati per il calcolo delle medie attuali, il che semplifica notevolmente l'elaborazione dei dati.
I valori target degli indici eritrocitari, mediati su 20 campioni di pazienti di età compresa tra 18 e 60 anni, indipendentemente dal sesso, sono mostrati nella Tabella 4.
Tabella 4
Valori target degli indici eritrocitari
Se i valori medi ottenuti sono al di fuori della tolleranza di controllo, significa che è necessario correggere la calibrazione MCV o Hgb o RBC.
Nel determinare le ragioni di una calibrazione insoddisfacente sulla base dei risultati dello studio dei parametri eritrocitari quando si utilizzano materiali di calibrazione/controllo commerciali, si dovrebbe tenere conto della seguente valutazione dell'affidabilità dei valori certificati dei materiali:
Il parametro più accurato e stabile nel tempo è la concentrazione degli eritrociti;
L'Hgb è un parametro stabile, ma può dipendere dai reagenti utilizzati (ad esempio, cianuro o esente da cianuro);
Il parametro più instabile è MCV. Il valore MCV tende a cambiare durante l'intera durata di conservazione del materiale in un intervallo di valori abbastanza ampio. Nell'affinare la calibrazione MCV, i dati ottenuti dall'analisi delle medie degli indici eritrocitari hanno la precedenza sui valori certificati nei campioni di sangue stabilizzato.
Ritenendo corretta la calibrazione RBC, la Tabella 5 indica le possibili ragioni per cui i valori medi degli indici vanno oltre la tolleranza di controllo.
Tabella 5
Ragioni per andare oltre i valori medi degli indici eritrocitari
| Indici eritrocitari | Valore medio dell'indice | Valore medio dell'indice | Valore medio dell'indice | Valore medio dell'indice |
| MCHC | Sotto il confine | Sopra il confine | Sopra il confine | Sotto il confine |
| MCH | entro la tolleranza | entro la tolleranza | Sopra il confine | Sotto il confine |
| MCV | Sopra il confine | Sotto il confine | entro la tolleranza | entro la tolleranza |
| Causa | MCV troppo caro | MCV discreto | Hgb alta | Hgb basso |
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